凉血活血复方对体外培养HaCaT、ECV304细胞端粒酶活性的影响

目的观察凉血活血复方水醇粗提液对人永生化表皮细胞株(HaCaT)和人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)端粒酶活性的影响,探讨该复方治疗银屑病可能的作用机制。方法将不同浓度的凉血活血复方水醇粗提液分别地作用于体外培养的HaCaT和ECV304细胞株,应用端粒重复序列扩增-酶联吸附(TRAP-ELAISA)试剂盒检测两株细胞的端粒酶活性。结果凉血活血复方分别作用两株细胞48h,细胞端粒酶活性在所测定实验浓度范围内,随浓度的增加对细胞的端粒酶活性的下调作用逐渐增强。各加药组与对照组在统计学上有显著性差异,且各加药组之间差异亦有统计学意义(P0.01)。结论凉血活血复方以剂量依赖性抑制端粒酶活性。     

凉血消沱汤对角质形成细胞凋亡的影响

目的研究自拟方剂凉血消疕汤对角质形成细胞株HaCaT的增殖凋亡及细胞周期的影响作用。方法用MTT法和Annexin-V/PI双标流式细胞术分别检测自拟方剂凉血消疕汤的水提取液对HaCaT细胞株增殖、凋亡的影响;PI单标流式细胞术测该方的水提取液对HaCaT细胞株细胞DNA分布的影响。结果自拟方剂凉血消疕汤对角质形成细胞株HaCaT具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈量效关系。凉血消疕汤作用48h可诱导HaCaT细胞凋亡,10mg/mL作用48h时HaCaT细胞凋亡率达(31.77±5.88)%。凉血消疕汤处理组HaCaT细胞株细胞周期发生变化,细胞周期G_1期增加,S期缩短。结论自拟方剂凉血消疕汤可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制HaCaT细胞株细胞增殖。     

喜树碱抑制HaCaT细胞增殖、诱导凋亡及对端粒酶活性的影响

目的探讨喜树碱对HaCaT细胞抑制增殖、诱导凋亡的作用及对端粒酶活性的影响。方法将不同浓度的喜树碱作用于HaCaT细胞24,48和72 h,用MTT法、光镜、电镜和流式细胞仪检测其对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;TRAP-ELISA法检测其对细胞端粒酶活性的影响。结果喜树碱能以时间和浓度依赖性的方式抑制HaCaT细胞增殖,作用24,48,72 h的最大抑制率分别为85.1%,94.3%,98.6%;且能以浓度依赖性的方式诱导HaCaT细胞凋亡,将细胞阻止于S期,并使细胞表现出典型的凋亡形态学特征,在诱导凋亡和低于诱导凋亡的浓度下均可抑制细胞端粒酶活性。结论喜树碱抗银屑病的机制与抑制角质形成细胞增殖、诱导凋亡有关,其作用可能是通过抑制端粒酶活性来实现的。     

凉血活血胶囊对皮肤角质形成细胞凋亡的研究

目的 观察凉血活血胶囊对体外角质形成细胞株凋亡的影响,初步探讨其治疗银屑病的机制。方法 以TUNEL法检测银屑病患者皮损细胞凋亡、PCNA检测增殖细胞核抗原,并以碘化丙啶法和膜联蛋白V法在流式细胞仪上检测凉血活血胶囊对体外角质形成细胞凋亡作用的影响。结果 银屑病皮损中基底层和棘细胞中下层角质形成细胞增殖和凋亡较正常皮肤均有所增加。凉血活血胶囊可诱导培养的角质形成细胞凋亡,在1、5、10 mg/mL时分别为24.67±5.07、50.33±10.04、66.20±6.91,随着浓度增加,细胞凋亡率增加,与正常对照组比较差异有显著性,与试验对照复方青黛胶囊组比较差异无显著性。结论 银屑病皮损中角质形成细胞增殖和凋亡发生紊乱,两者在较高水平保持相对平衡。凉血活血胶囊可以诱导细胞凋亡,从而达到治疗银屑病的目的。     

依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响.方法: 采用MTT比色法检测依曲替酸和黄芪对HaCaT细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡并于透射电镜下观察凋亡细胞形态.结果: 依曲替酸和黄芪均对HaCaT细胞增殖有明显的抑制作用;在一定浓度范围内其抑制率呈时间和剂量依赖性,但黄芪的抑制率较依曲替酸为低.细胞明显阻滞于G1期,有明显的凋亡峰出现,电镜下见典型的凋亡细胞形态学特征.结论: 依曲替酸和黄芪均可抑制HaCaT细胞的增殖并诱导其凋亡,提示二者治疗银屑病机制可能与此有关.     

中药清热利湿饮对HaCaT细胞周期的影响

目的 探讨中药清热利湿饮水提液对经肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导活化的人永生化角质形成细胞（HaCaT）细胞周期的影响.方法 采用MTT法检测TNF-α对HaCaT细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测清热利湿饮提取液对HaCaT细胞周期的影响.结果 经2.5×10^5 u/L的TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖率比对照组增加了（14.11±2.97）％,12.5g/L和15 g/L清热利湿饮可使HaCaT细胞阻滞于S期,与TNF-α对照组相比,S期比率分别增加了10.63％和21.55％.结论 TNF-α可使HaCaT细胞活化及过度增殖,一定浓度的清热利湿饮以浓度依赖的方式干扰正常的HaCaT细胞周期,通过阻滞细胞的周期时相而抑制HaCaT细胞的分裂和过度增殖.     

贝伐珠单抗对HaCaT细胞凋亡及周期的影响

目的:评价贝伐珠单抗对HaCaT细胞凋亡的影响。方法:体外培养HaCaT细胞,不同浓度贝伐珠单抗分别作用:HaCaT细胞48 h后,Hoechst 33258荧光染色法观察贝伐珠单抗诱导HaCaT细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测贝伐珠单抗HaCaT细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:贝伐珠单抗处理HaCaT细胞48 h后,Hoechst 33258荧光染色显示细胞核染色质凝聚、边集、核裂解;流式细胞术检测结果显示细胞凋亡增加,G0/G1期细胞的比例增加。结论:贝伐珠单抗可诱导HaCaT细胞凋亡,同时可有效阻滞HaCaT细胞的周期进程,细胞周期被阻滞在G0/G1期。     

复方青黛饮含药血清对体外HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察复方青黛饮大鼠含药血清对人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法根据中药血清药理学方法,用SD大鼠制备实验血清,采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光Hoechst染色,观察含药血清对细胞生长抑制率、凋亡率、细胞周期分布及细胞形态学的影响。结果体外培养HaCaT细胞24h和48h后,复方青黛饮高、中、低三个剂量不同浓度的含药血清组,对HaCaT细胞的生长均有不同程度的抑制,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中高剂量组抑制作用最明显。复方青黛饮含药血清组细胞凋亡率和G0/G1比例明显增加,与空白血清组相比,差异有统计学意义(P<0.05),在镜下呈现凋亡的特征性形态改变。结论复方青黛饮大鼠含药血清对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,并对细胞周期有一定的影响。     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度重组TNF-α（0、1、5、10、25、50、100 ng/ml）、姜黄素20 μmol/L对HaCaT细胞增殖的影响。蛋白印迹实验检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞PCNA、 Notch-1 的蛋白表达。使用Annexin-V/PI试剂盒在流式细胞仪上检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞早期凋亡情况。结果 TNF-α呈浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖基本达到最大,20 μmol/L姜黄素有效抑制25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞无明显促凋亡作用,而20 μmol/L姜黄素有效促进HaCaT细胞发生凋亡,并可激发25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的凋亡诱导作用。 结论 姜黄素可激发TNF-α对HaCaT细胞的促凋亡作用,同时抑制TNF-α对HaCaT细胞促增殖作用。     

喜树碱抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的研究喜树碱对舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的作用.方法将不同浓度的喜树碱分别作用于Tca8113细胞24、48、72 h.分别用MTT法、光镜和电镜观察,流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法检测细胞增殖和凋亡状况.结果喜树碱对Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度依赖性.最佳浓度范围为0.016～8μg/mL.镜下可见典型的凋亡细胞形态学特征.流式细胞术检测,喜树碱浓度≥1μg/mL,作用48 h,可引起细胞凋亡,细胞阻滞于S期.琼脂糖凝胶电泳呈凋亡特征性梯状带.结论喜树碱对Tca8113细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用,其抗肿瘤机制与诱导凋亡有关.     

凉血活血复方治疗进展期银屑病疗效及安全性评价

目的评价凉血活血复方治疗进展期银屑病的疗效与安全性。方法随机、双盲、安慰剂对照的实验设计,治疗进展期银屑病62例,凉血活血复方治疗组35例,安慰剂对照组27例,疗程8周,比较其疗效和不良反应。结果凉血活血复方治疗组的有效率57.6%,明显高于安慰剂对照组的24.0%,差异有统计学意义(P0.05)。凉血活血复方治疗组的不良反应率17.14%,未见毒副作用。结论凉血活血复方治疗进展期银屑病疗效确切,不良反应少,安全性好。     

角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系。方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响。结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P<0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P<0.05),集落形成率较对照组增加(P<0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富。结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子。     

他克莫司对UVA照射后HaCaT细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度他克莫司(TM)对不同强度长波紫外线(UVA)照射HaCaT细胞24h和48h后细胞增殖活性的影响。方法将培养的HaCaT细胞分别行2,4和8J/cm2的UVA照射,且照射前1h分别加入50,500和5000pg/mL的TM,对照组分别加入50,500和5000pg/mL的TM,但不行UVA照射。各剂量组分别照射24h和48h后在倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HaCaT细胞经UVA照射24h后,细胞连接松散,细胞折光性较未照射组差,部分细胞死亡、脱壁;与未经UVA照射组相比,细胞增殖受到抑制(P<0.05),加入TM组无明显变化(P>0.05);照射48h后细胞虽有大量增殖,但体积较小;与未经UVA照射组相比,细胞增殖明显(P<0.05),加入TM组细胞增殖受到抑制(P<0.05)。结论TM可抑制UVA照射HaCaT细胞引起的过度增殖,对UVA照射后的HaCaT细胞有保护作用。     

银屑病患者真皮间充质干细胞对HaCaT细胞的作用

目的 研究分析不同浓度银屑病患者真皮间充质干细胞（Dennis mesenchymal stem cells,DMSCs）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的作用.方法 取银屑病患者和正常人的真皮,获得纯度高的DMSCs,将HaCaT在Transwell小室下室接种,同时按照第5代DMSCs与HaCaT细胞之间的比例（1：1、5：1、10：1）将DMSCs分3组接种在Transwell上室,并设正常对照组和自然增殖组,采用实时细胞分析系统（RTCA）对HaCaT细胞进行增殖检测,培养74 h后用细胞计数法检测HaCaT细胞的数量.结果 共培养组较自然增殖组HaCaT细胞计数减少,与健康对照组相比,银屑病患者组HaCaT细胞计数减少不明显,以银屑病患者DMSC与HaCaT细胞按照1：1共培养组为著.结论 ①DMSCs对HaCaT细胞增殖有抑制作用.②与正常对照组、自然增殖组和其他比例组相比银屑病患者DMSCs与HaCaT 1：1共培养组对HaCaT细胞增殖抑制作用减弱更显著.     

中药消银汤药物血清对EGF诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响

目的探讨中药消银汤药物血清对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响。方法HaCaT细胞株为靶细胞.观察中药消银汤药物血清对10ng/mL EGF信号刺激下HaCaT细胞生长曲线的影响;用MTT法检测细胞增殖情况:用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率变化。结果中药消银汤药物血清影响EGF信号刺激下HaCaT细胞的生长状态并抑制其生长速度;不同浓度消银汤处理的HaCaT细胞,48h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;高浓度组,48h和72h时的抑制率分别为59.47%和73.76%。与对照组相比,经消银汤作用48h后,细胞G_1期比例显著增加,S期与G_2期比例则显著下降,并可抑制G_1/G_2期转换。结论消银汤具有抑制表皮生长因子诱导的HaCaT细胞增殖及诱导其分化的作用     

sprouty4蛋白对角质形成细胞增殖及分化的影响

 目的:探证sprouty4(SPRY4)蛋白对角质形成细胞增殖及分化的影响。方法：以人永生化表皮细胞株HaCaT细胞作为实验对象,实验组HaCaT细胞采用基因敲降技术进行SPRY4蛋白抑制物的转染,对照组HaCaT细胞不作任何处理。运用实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）检测实验组与对照组中sprouty4蛋白对HaCaT细胞分化指标Involucrin、CK1与CK10的影响,运用CCK-8实验检测HaCaT细胞的增殖功能。结果：RT-qPCR结果显示,实验组HaCaT细胞中SPRY4基因敲降成功,敲降率约为94.75%。与对照组相比,实验组HaCaT细胞中分化指标Involucrin、CK1与CK10表达水平降低;CCK-8实验结果显示,与对照组相比,实验组HaCaT细胞增殖能力增强。结论：SPRY4蛋白表达下降对细胞增殖起到促进作用,对细胞分化起到抑制作用。     

18β-甘草次酸新衍生物对HaCaT细胞增殖的影响

目的：明确18β-甘草次酸新衍生物3-O-(5-甲基吡嗪-2-甲酰)-甘草次酸（GA2）对角质形成细胞增殖的影响。方法：体外培养HaCaT细胞,分为DMSO空白对照组,不同浓度GA2(31.2、62.5、125 μM)组,CCK8、EdU法、细胞克隆、流式细胞术检查各组HaCaT细胞的增殖情况,Caspase 3活性检测法检测HaCaT细胞中Caspase 3表达水平。结果：不同浓度GA2作用HaCaT细胞24 h后,细胞抑制率和凋亡率随浓度的增加而升高;细胞克隆及细胞增殖随浓度的增加而减少;Caspase 3的表达水平随着GA2浓度的升高而增加。结论：GA2对HaCaT细胞有增殖抑制作用,该作用可能与激活Caspase 3有关。     

miR-34a-5p对HaCaT细胞增殖及其靶基因Notch1表达的影响

目的: 检测miR-34a-5p对人角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖及其靶基因Notch1 mRNA表达的影响。方法: HaCaT细胞体外培养,优化转染浓度,分为4组进行转染：miR-34a-5p 模拟物组（minic 组）,阴性对照组（NC组）,miR-34a-5p 抑制物组（inhibitor组）,抑制物阴性对照组（inhibitor NC组）。MTT检测细胞增殖情况; RT-qPCR检测Notch1的mRNA表达情况。结果: 转染后48小时minic 组、inhibitor组细胞增殖活力分别为39.7%和15.7%,minic 组、inhibitor组与NC组（21.3%）相比,差异有统计学意义(Ps<0.05)。HaCaT细胞转染后,minic 组和inhibitor组Notch1表达量分别为2.78±1.30和0.37±0.46,与NC组(1.0±0.06)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-34a-5p促进HaCaT细胞体外增殖,机制可能与Notch1 mRNA表达上调有关。