乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素8及13含量的影响

[目的]观察乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素(IL)-8、IL-13的影响.[方法]84只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,柳氮磺胺吡啶( SASP)组,乌梅丸大、中、小剂量组,每组14只;除正常组外,其他各组大鼠采用2.4-二硝基氯苯(DNCB)加醋酸复合法制备溃疡性结肠炎模型;采用双抗体夹心ELISA法检测各组大鼠结肠组织IL-8、IL-13的含量.[结果]模型组大鼠结肠组织中IL-8含量较正常组显著增高(P＜0.01),乌梅丸各剂量组、SASP组则较模型组明显降低(P＜0.01或P＜0.05);模型组大鼠结肠组织IL-13含量较正常组显著降低(P＜0.01),乌梅丸各剂量组、SASP组较模型组明显升高(P＜0.01或P＜0.05).乌梅丸大剂量组降低IL-8、升高IL-13的效果最显著,其IL-8、IL-13的含量与正常组比较差异无统计学意义.[结论]IL-8、IL-13参与了UC的发生、发展,乌梅丸能通过降低溃疡性结肠炎大鼠结肠组织IL-8的含量、升高IL-13的含量,从而起到治疗UC的作用.     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠肠组织核转录因子-κB及细胞间黏附分子1的影响

[目的]探讨乌梅丸对大鼠溃疡性结肠炎（UC）结肠组织核转录因子-κB（NF-κB）及细胞间黏附分子1（ICAM-1）表达的影响机制。[方法]采用2，4-二硝基氯苯（DNCB）加醋酸复合法制备大鼠UC模型。84只SD大鼠随机分为正常对照（正常）组、模型组、柳氮磺胺吡啶（SASP）组和乌梅丸大、中、小剂量组。采用免疫组织化学染色法检测结肠组织NF-κB、ICAM-1的表达。[结果]与正常组相比，模型组大鼠结肠组织中NF-κB、ICAM-1表达显著增高（P〈0．01），而乌梅丸各剂量组、SASP组较模型组明显降低（P〈O．01）。[结论]NF-κB、ICAM-1可能参与了UC的发生、发展。乌梅丸可能通过抑制NF-κB、ICAM-1的表达，从而起到治疗UC的作用。     

青黛颗粒对溃疡性结肠炎实验大鼠血清白细胞介素6和10水平的影响

[目的]观察青黛颗粒对溃疡性结肠炎（UC）实验大鼠血清白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素10（IL-10）水平的影响,探讨其治疗UC可能的作用机制。[方法]将52只SD大鼠采用三硝基苯磺酸（TNBS）法制备UC大鼠模型。造模结束后第2天取4只大鼠处死确定造模成功,余48只随机均分为6组：正常组,模型组,柳氮磺胺嘧啶（SASP）阳性药物治疗（SASP）组,青黛颗粒低、中、高剂量组,各8只。造模后第3天开始各组动物灌胃给药,连续给药10 d,实验第14天通过腹主动脉采血取血清,用ELISA法测定血清IL-6、IL-10水平。[结果]青黛颗粒低、中、高3个剂量组与模型组比较,血清IL-6水平显著降低,IL-10水平升高（P〈0.01）;青黛颗粒高剂量组血清IL-6I、L-10水平变化与SASP组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]青黛颗粒治疗实验性UC的作用机制可能与降低IL-6水平,升高IL-10水平有关。     

乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织黏附分子-44的影响

[目的]探讨乌梅丸对大鼠溃疡性结肠炎(UC)结肠组织黏附分子-44(CD44)表达的影响.[方法]采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)加醋酸复合法制备大鼠UC模型.84只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组和乌梅丸大、中、小剂量组6组.采用免疫组织化学染色法检测结肠组织CD44的表达.[结果]与正常组相比,模型组大鼠结肠组织中CD44的表达显著增高(P＜0.01),而乌梅丸各剂量组、SASP组则较模型组明显降低(P＜0.01).[结论]CD44参与了UC的发生、发展.乌梅丸可能是通过抑制CD44的表达,达到治疗UC的作用.     

中药清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠白细胞介素4及10 mRNA表达的影响

[目的]研究中药清肠栓对实验性溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)mRNA表达的影响。[方法]用三硝基苯磺酸(TNBS)复制实验性大鼠UC模型,将之随机分为清肠栓大、小剂量组,醋酸泼尼松组,空白对照组,模型对照组,并设正常对照组。观察大鼠结肠组织病理改变,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测模型大鼠结肠组织IL-4、IL-10 mRNA的表达。[结果]①模型组和空白对照组结肠组织IL-4、IL-10 mRNA表达较正常组显著降低(P<0.05)。②清肠栓大、小剂量组,醋酸泼尼松组结肠组织IL-4、IL-10 mRNA表达较模型组和空白对照组明显升高(P<0.05)。[结论]清肠栓能促进结肠组织抑炎细胞因子IL-4、IL-10 mRNA的表达。     

甘草酸二铵对溃疡性结肠炎大鼠促炎细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α的影响

目的建立溃疡性结肠炎（UC）大鼠模型，研究甘草酸二铵（DG）对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及对肿瘤坏死因子（TNF—α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）产生和表达的影响。方法30只雌性SD大鼠随机分为实验组、模型组和对照组各10只，建立UC急性期模型，实验组给予DG干预治疗。观察疾病活动指数（DAI）、结肠大体形态损伤、组织学变化；ELISA法测定血清TNF—α、IL-6、IL-8水平。结果与模型组相比，实验组的DAI、结肠大体形态损伤、组织学变化显著改善（P均〈0．01），血清TNF-α、IL-6、IL-8水平显著降低（P均〈0．01）。结论DG对大鼠UC有显著的治疗作用，抑制促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8的产生和表达可能是其，治疗机制之一。     

清肠栓对大鼠溃疡性结肠炎白细胞介素受体表达的影响

[目的]从白细胞介素受体(IL-R)角度探讨中药清肠栓防治溃疡性结肠炎(UC)的作用机制.[方法]三硝基苯磺酸(TNBS)诱导建立大鼠UC模型;41只雄性SD大鼠随机分成6组(正常组,模型组,5-氨基水杨酸栓组,清肠栓大剂量、中剂量、小剂量组),治疗组均分别予肠道给药;1周后处死,ELISA法检测血清、结肠组织可溶性IL-R(sIL-R)2,4、6水平;RT-PCR半定量法检测结肠黏膜IL-2R、IL-4R、IL-6R mRNA的表达.[结果]清肠栓各剂量组sIL-2R、sIL-6R的水平降低,与模型组比较P＜0.01,中、大剂量组IL-2R、IL-6R mRNA表达降低,与模型组比较P＜0.01或＜0.05,清肠栓各剂量组皆有降低IL-4R mRNA表达的趋势,与模型组比较P＞0.05.[结论]清肠栓有效防治UC,其作用机制与降低slL-2R、sIL-6R水平,下调IL-2R、IL-6R mRNA表达,抑制T淋巴细胞活化增殖,减少炎症递质产生有关.     

溃肠宁对TNBS模型大鼠肠形态、血清及结肠组织IL-6和IL-10影响的观察

[目的]观察中药溃肠宁对三硝基苯磺酸（TNBS）致溃疡性结肠炎（UC）大鼠模型肠黏膜形态、大鼠血清及结肠黏膜组织中白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）表达的影响,探讨溃肠宁抗UC的相关作用机制以及疗效.[方法]采用TNBS复合50％乙醇法复制UC大鼠模型,分别采用中药溃肠宁和柳氮磺胺毗啶（SASP）作为阳性对照组进行治疗,对比模型组和空白对照组采用ELISA法对各组大鼠肠血清以及肠黏膜中IL-6、IL-10进行检测,并对其检测结果进行分析.[结果]模型组大鼠结肠和血清中的IL-6含量明显高于正常组（P＜0.01）,IL-10的含量则明显低于正常组（P＜0.01）;SASP组结肠及血清中IL-6、IL-10含量与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;中药组和模型组相比,结肠和血清中IL-6含量明显低于模型组（P＜0.01）,IL-10的含量则明显高于模型组（P＜0.01）;中药组与西药SASP组比较,中药组结肠和血清中IL-6含量低于西药组,IL-10的含量高于西药组,可见2组之间差异有统计学意义（P＜0.01）.[结论]溃肠宁对TNBS复合50％乙醇法UC大鼠疗效显著,其作用机制可能与调节机体的免疫有关.     

防御素在溃疡性结肠炎结肠组织中的表达及意义

目的研究防御素（HNP13）、白细胞介素-8（IL-8）在溃疡性结肠炎（UC）结肠组织中的表达分布以及与UC病变范围和病变程度的关系，探讨其在UC发病机制中的作用；明确IL-8与HNP1-3的相关性。方法用免疫组化法检测36例活动期UC及30例正常对照石蜡包埋组织中HNP1-3及IL-8的表达情况。结果UC组HNP1-3及IL-8均为阳性表达。对照组均为阴性或弱阳性表达。两者在UC组的表达与对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．01）。UC病变范围越广、程度越重，HNP13及IL-8表达的阳性率越高。UC患者受累黏膜的HNP1-3和IL-8水平明显高于未受累黏膜。且HNP1-3和IL-8表达具有明显的相关性（rs=0．957，P〈0．01）。结论HNP1-3的表达与IL-8呈正相关且均参与了UC的发生和发展；HNP1-3可能在UC局部结肠组织破坏和病理变化中起了更重要的作用；HNP1-3、IL-8反映了疾病的炎症程度，并且可作为病情严重程度评定的指标。     

清肠泡腾栓对溃疡性结肠炎模型大鼠肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-13的影响

[目的]探讨中药肠道泡腾栓剂治疗溃疡性结肠炎(UC)的免疫学机制.[方法]实验分设正常对照、模型对照、空白泡腾栓、清肠泡腾栓、清肠栓、柳氮磺胺吡啶(SASP)栓共6组,ELLESA法检测血清、结肠上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-13(IL-13).[结果]模型组血清、结肠上清TNF-α较正常对照组升高,IL-13分别轻度降低和升高;清肠泡腾栓组明显降低结肠上清TNF-α含量,与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]①模型组TNF-α、Ⅱ-13较正常组升高或降低,提示UC免疫学发病机制的可能性;②清肠泡腾栓组下调UC模型大鼠TNF-α,对IL-13的调控作用则不甚明显,提示清肠泡腾栓可能在抑制促炎细胞因子方面具有更为确切的优势.     

理肠四方治疗大鼠溃疡性结肠炎疗效观察

目的:观察理肠四方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠不同的组织形态学变化,比较四方疗效大小,并分析其中医病机.方法:应用2,4-二硝基氯苯免疫加醋酸局部灌肠法建立UC大鼠模型,将98只健康SD大鼠(雌雄各半),按雌雄随机分为7组[乌梅丸组、白头翁汤组、参苓白术散组、痛泻要方组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、模型组和正常组],每组14只,分别观察治疗后大鼠一般情况变化、结肠组织损伤评分、结肠粘膜病理及超微病理变化.结果:经理肠四方治疗后,其组织学呈不同的病理变化.结论:乌梅丸疗效最好,白头翁汤、参苓白术散、痛泻要方与SASP疗效相当.     

健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎的临床疗效及对血清白细胞介素4和白细胞介素8的影响

[目的]探讨健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎(UC)患者的临床疗效及对血清白细胞介素4(IL-4)I、L-8的影响。[方法]72例UC患者随机分为2组,治疗组和对照组各36例,治疗组口服中药健脾灵片加苦参槐花合剂保留灌肠治疗,对照组单纯口服艾迪莎治疗。采用双抗体夹心ELISA法测定2组患者治疗前后血清IL-4I、L-8水平,並与30例健康志愿者(志愿组)对照。[结果]治疗组临床治愈率为66.7%,显效率为91.7%,对照组分别为38.9%、69.4%,2组治愈率和显效率比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前2组IL-4水平均明显低于志愿组(P<0.01),IL-8明显高于志愿组(P<0.01)。治疗组治疗后IL-4水平明显上升,IL-8水平明显下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01),2者水平与志愿组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组治疗后IL-4水平有所上升,但与治疗前比较P>0.05,IL-8水平有明显下降,与治疗前比较P<0.01,IL-4上升幅度和IL-8下降幅度均不如治疗组显著(P<0.01)。[结论]健脾清肠法(中药健脾灵片加苦参槐花合剂)治疗UC的疗效明显优于西药艾迪莎,其机制可能与上调IL-4和下调IL-8水平,使机体免疫功能重新恢复平衡有关。     

加味白头翁汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠细胞因子及黏附因子的影响

[目的]探讨加味白头翁汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠细胞因子及黏附分子的影响。[方法]将84只SD健康大鼠随机分为6组,采用复合法造模后,分别给予加味白头翁汤大、中、小剂量煎液、柳氮磺吡啶(SASP)混悬液及蒸馏水2 m1灌胃,连续15 d。取结肠组织,免疫组化处理并进行图文分析,记录阳性细胞吸光度平均值,并进行统计学处理。[结果]造模是成功的;各中药治疗组、SASP组治疗均有效,其中,白头翁汤大剂量组疗效最好(P0.01),白头翁汤中剂量组与SASP组疗效相当(P0.05)。[结论]加味白头翁汤对UC大鼠具有良好的疗效,其机制可能是调节细胞因子网络平衡,从而使免疫功能恢复正常,控制持续扩大的炎症反应。     

自身免疫性肝炎小鼠模型差异表达基因的筛查及柴胡皂苷D对部分差异表达基因表达的影响

目的对自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型的差异表达基因进行基因芯片筛查,并观察柴胡皂苷D(SS-d)对部分差异表达基因表达的影响,探讨AIH的发病机制及SS-d对该病的治疗作用机制。方法健康、雌性SPF级C57BL/6小鼠40只[体质量(20±2)g],分为基因芯片组(n=8)和SS-d治疗组(n=32)。基因芯片组小鼠又分为正常对照组(n=4)和模型组(n=4),正常对照组常规饲养,模型组小鼠按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A),12 h后处死并提取肝组织,按Agilent芯片说明书进行差异表达基因的筛选,采用荧光定量PCR技术对部分差异表达基因进行验证。SS-d治疗组小鼠随机分为正常组(常规饲养)、模型组(按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)、SS-d低剂量组和SS-d高剂量组(分别按2.5 mg/kg和5.0 mg/kg剂量给予腹腔注射SS-d预处理,8 h后按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)(每组8只)。12 h后收集各组小鼠静脉血,ELISA法检测血清ALT、AST。无菌条件下提取小鼠肝组织,部分多聚甲醛固定后切片,并进行HE染色;部分肝组织用于提取RNA,采用荧光定量PCR技术检测部分差异表达基因(IFNγ、IL-4、IL-5、IL-13和IL-17)的mRNA水平变化。多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法检验;两组间比较采用t检验。结果基因芯片组小鼠共筛查差异表达基因11512个,其中上调5189个,下调6323个,显著富集于138条信号通路;荧光定量PCR验证结果显示,与正常对照组比较,模型组小鼠IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达升高(P值均<0.01),而IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达下调(P值均<0.01),与芯片筛查结果一致。在SS-d治疗组中,与正常对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST水平均升高(P值均<0.01);肝组织内可见大量淋巴细胞浸润;IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达水平明显升高(P值均<0.05),而IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达水平明显降低(P值均<0.05)。与模型组比较,SS-d低剂量组和SS-d高剂量组小鼠血清ALT、AST水平均降低(P值均<0.05),肝组织内淋巴细胞浸润程度减轻;IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达水平均降低(P值均<0.05),IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达水平均升高(P值均<0.05),上述基因的含量变化差异在SS-d高剂量组与SS-d低剂量组之间具有统计学意义(P<0.05)。结论AIH的发生发展系大量基因异常表达的共同作用结果。其中IFNγ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17与AIH的发病密切相关,同时也是SS-d发挥免疫调节及肝损伤保护作用的生物学靶点。     

Type 1 T-helper cell predominance in granulomas of Crohn's disease

OBJECTIVE: The pathogenesis of Crohn's disease (CD) is thought to be associated with production of several cytokines, especially type-1 cytokines. To elucidate the in situ cytokine profiles in CD, cytokine-containing cells were localized by immunohistochemistry, with special attention to noncaseating granulomas. The results were compared with those from studies of ulcerative colitis (UC). METHODS: We adopted the biotin-streptavidin-peroxidase method on frozen sections obtained at surgery from patients with CD or UC, and we immunohistochemically examined the expression of several cytokines (interferon-gamma, interleukin-2, -4, -10, and -12). RESULTS: In normal colonic tissue, expression of these cytokines was rare except for interleukin-4. In actively inflamed areas of CD, increased expression of all cytokines by mononuclear cells was observed. In contrast, granulomas in CD involved interferon-gamma+ lymphocytes and interleukin-12+ macrophage-lineage cells (epithelioid cells and multinucleated giant cells) but few interleukin-4+ or -10+ cells. Actively inflamed areas of UC also showed an increase in the number of cytokine-containing cells; however, quantitative analysis revealed that there was more expression of interferon-gamma and interleukin-12, and less of interleukin-10, in CD than in UC, indicating the presence of more type 1 T-helper cells in CD tissue than in UC. CONCLUSIONS: The findings of the present study suggest that granulomas of CD are coupled with type 1 T-helper responses; these responses may contribute to the pathogenesis of this disease.     

NCB-02 （standardized Curcumin preparation） protects dinitrochlorobenzene-induced colitis through down-regulation of NFκ-B and iNOS

AIM: To evaluate the efficacy and mechanism of action of NCB 02, a standardized Curcumin preparation, against 2, 4 dinitrochlorobenzene (DNCB) induced ulcerative colitis in rats. METHODS: Ulcerative colitis was induced in male rats by sensitizing with topical application of DNCB in acetone for 14 d and intra-colonol challenge with DNCB on day 15. A separate group of animals with vehicle treatment in similar fashion served as control group. Colitis rats were divided into different groups and treated with NCB-02 at doses of 25, 50 and 100 mg/kg b.wt p.o. for 10 d. Sulfasalazine at a dose of 100 mg/kg b.wt for 10 d served as a reference group. On day 10 after respective assigned treatment, all the animals were euthanized and the length of the colon, weight of entire colon and distal 8 cm of the colon were recorded. The distal part of the colon was immediately observed under a stereomicroscope and the degree of damage was scored. Further distal 8 cm of the colon was subject to the determination of colonic myeloperoxidase (MPO), lipid peroxidation (LPO) and alkaline phosphatase (ALP) activities. A small piece of the sample from distal colon of each animal was fixed in 10% neutral buffered formalin and embedded in paraffin wax and sectioned for immunohistochemical examination of NFkappa-B and iNOS expression. RESULTS: NCB-02 showed a dose dependent protection against DNCB-induced alteration in colon length and weight. NCB-02 treatment also showed a dose dependent protection against the elevated levels of MPO, LPO and ALP, induced by DNCB. NCB-02 demonstrated a significant effect at a dose of 100 mg/kg b.wt., which was almost equipotent to 100 mg/kg b.wt. of sulfasalazine. Treatment with sulfasalazine and curcumin at a dose of 100 mg/kg b.wt. inhibited the DNCB-induced overexpression of NFkappa-B and iNOS in the colon. CONCLUSION: Curcumin treatment ameliorates colonic damage in DNCB induced colitic rats, an effect associated with an improvement in intestinal oxidative stress and downregulation of colonic NFkappa-B and iNOS expression.