PAX6对肝癌细胞HNF1α基因表达的调控作用

背景：前期研究显示肝细胞核因子1α（HNF1α）在人肝细胞癌（HCC）中表达下调,上调HNF1α表达可显著抑制HCC细胞增殖和小鼠肝脏原位移植瘤生长。然而HNF1α在HCC中表达下调的机制仍有待明确。目的：探讨HCC细胞中HNF1α基因表达调控的分子机制。方法：应用JASPAR软件预测HNF1α启动子上潜在的转录因子结合位点。联合应用含HNF1α启动子的报告基因系统荧光素酶活性检测和点突变技术,研究JASPAR软件预测的配对盒基因6（PAX6）对HNF1α启动子转录活性的影响;以染色质免疫共沉淀实验检测PAX6与HNF1α启动子的相互作用,实时荧光定量RT—PCR（qRT—PCR）和蛋白质印迹法验证PAX6对HepG2细胞内源性HNF1α表达的影响;qRT—PCR检测PAX6、HNF1α在人HCC组织样本中的表达,并以Spearman等级相关系数分析两者间的相关性。结果：PAX6可直接结合至HNF1α的启动子区域,在转录水平促进HNF1α表达。人HCC组织中PAX6表达明显降低,并与HNF1α表达呈显著正相关（rs=0．7530,P〈0．0001）。结论：PAX6可调控HCC细胞中的HNF1α基因表达,其表达下凋可能与HCC的发生、发展有关。     

抑制MET对RAS突变型结肠癌细胞的抗肿瘤作用

目的探讨抑制MET对于RAS突变结肠癌的体内体外抗肿瘤作用。 方法选取4种常见RAS突变型结肠癌细胞（HCT-116、DLD-1、Lovo和HCT-15）,采用siRNA敲除MET蛋白表达,或者加入特异性MET抑制剂PHA-665752,采用MTT及集落形成实验观察抑制MET对结肠癌细胞增殖抑制的作用,应用Western Blotting检测PHA-665752对MET/AKT/ERK信号通路的作用。另外,应用HCT-116细胞系构建裸鼠皮下成瘤模型,给予PHA-665752腹腔注射,观察MET抑制剂对体内肿瘤的抑制作用。 结果RAS突变的4种结肠癌细胞系均有MET蛋白表达。应用siRNA敲除MET蛋白表达对HCT-116和Lovo细胞的增殖抑制作用分别为19.6±4.5%和27.8±5.8%,而应用MET特异性抑制剂PHA-665752对两种细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性,细胞克隆形成实验证实PHA-665752可有效抑制细胞克隆形成。另外,应用HCT-116细胞构建裸鼠皮下成瘤模型,给予PHA-665752单药证实MET抑制剂可明显抑制HCT-116细胞的皮下移植瘤（第四周肿瘤体积：PHA-665752组为300±72 mm³,对照组为608±59 mm³,t=5.731,P=0.005）。Western Blotting证实应用PHA-665752预处理能明显抑制HGF激活的p-MET、p-AKT和p-ERK。 结论抑制MET对于RAS突变型结肠癌具有抗肿瘤作用,靶向MET可能成为RAS突变型结肠癌的有效治疗。     

SAMHD1抗肿瘤的作用机制

目的通过测定结肠癌中SAMHD1(109aa-626aa)相关突变体的表达情况探索其在抗肿瘤方面的作用。方法选择SAMHD1(109aa-626aa)在结肠癌中的5个典型突变体检测它们的表达量、活力大小及被Vpx降解的情况。结果所选择的SAMHD1(109aa-626aa)的5种突变体在结肠癌中的表达量、活力大小均有统计学差异(P<0.05)。结论与野生型相比SAMHD1(109aa-626aa)在结肠癌中的表达量下调、活力降低,更有利于肿瘤的发生。     

肝素及其衍生物的抗肿瘤作用研究进展

未分级肝素(UFH)和低分子量肝素(LMWH)已被广泛用于各种情况下的抗凝治疗.UFH和LMWH通过激活生理性的凝血抑制剂抗凝血酶,抵消许多参与凝血的丝氨酸蛋白酶,尤其是活化的凝血因子X和凝血酶发挥其抗凝血作用.UFH和LWMH还有其他广泛的生物学活性,如抗肿瘤、抗血管生成及抗炎作用.     

褪黑素抗肿瘤作用及其机制的研究进展

褪黑素(MT)是人体内的一种神经内分泌激素,研究表明MT对恶性肿瘤具有明显抑制作用,其抗瘤机制复杂而广泛。此文就近年来对MT的抗肿瘤机制及其临床试验研究作一综述。     

胸腺肽α1对肝癌细胞株HepG2相关基因表达的影响

将对数生长期的人肝癌细胞株HepG2（3×10^4／ml）随机分为1、2、3、4组,1、2、3组分别加入胸腺肽使终浓度为400、200、100μg／ml,4组用相同体积RPMI-1640培养液处理。RT—PCR法检测各组HepG2中N—ras、c—myc、p53、nm23-H1mRNA的相对表达,用Westernblot方法检测N—ras、c—myc、p53、nm23-H1蛋白表达。结果1组N—rasmRNA及蛋白表达均显著低于4组（P均〈0．05）,p53、nm23-H1mRNA及蛋白表达均显著高于4组（P均〈0．05）。认为大剂量胸腺肽α1对肝癌的发生和转移有-定抑制作用,可能机制为增强p53、nm23-H1mRNA及蛋白表达．减弱N—rasmRNA及蛋白表达。     

miR-16通过靶向调控YAP1基因表达影响肺癌细胞的增殖

目的探讨miR-16通过靶向调控Yes相关蛋白(YAP) 1基因表达影响肺癌细胞的增殖。方法采用RT-PCR法检测miR-16在不同肺癌细胞株及人正常胚肺细胞中的表达。脂质体LipofectamineTM3000将miR-16 mimics和miR-16NC转入肺癌细胞中,RT-PCR检测miR-16表达,MTT法检测细胞活力,软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆数目,Ho-echst33258检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western印迹检测细胞中YAP1蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果 miR-16在A549、H1050、H1299、NCI-H520、NCI H596及MIRC-5中的表达分别为(0. 38±0. 03)、(1. 35±0. 01)、(1. 10±0. 11)、(1. 43±0. 14)、(1. 56±0. 15)、(2. 38±0. 25);与MIRC-5比较,肺癌细胞中miR-16表达量下调(P<0. 01),且在A549细胞中表达量最低,因此选为后续实验研究对象。与miR-16 NC组比较,miR-16 mimics组miR-16表达量显著提高(P<0. 01);且转染24、48、72 h后,细胞活力均下降(P<0. 01);转染48 h后,细胞克隆形成数目减少(P<0. 01),细胞凋亡率提高(P<0. 01),细胞周期阻滞于G1期(P<0. 01);同时,miR-16 mimics能够靶向调控YAP1,下调YAP1蛋白及mRNA表达(P<0. 01)。结论 miR-16 mimics通过靶向下调YAP1表达进而抑制A549细胞增殖。     

刚地弓形虫抗肿瘤作用及其机制研究进展

刚地弓形虫是一种重要的机会致病性原虫,严重威胁着人类健康,但弓形虫虫体、培养上清/排泄分泌抗原、裂解抗原、分泌蛋白均被证实具有显著的抗肿瘤作用。其中,诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤组织新生血管生成以及增强宿主自身免疫细胞功能的机制在弓形虫抗肿瘤过程中发挥着关键作用。本文综述了弓形虫抗肿瘤作用的研究进展,以及虫体及其相关组分抗肿瘤作用的相关机制。     

穿心莲内酯抗肿瘤的作用及其机制研究进展

穿心莲内酯是自穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物,是穿心莲的主要活性成分之一。最近的研究表明,穿心莲内酯在抗肿瘤方面有巨大潜力,包括抑制肿瘤细胞活性,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞周期进展、癌细胞转移和侵袭特性、生长因子信号传导调节,抑制细胞迁移和血管生成等,是一种新型抗肿瘤药物。该文就穿心莲内酯对不同癌症的作用及其机制的研究进展作一综述。     

Egr-1基因表达及其在射线诱导的肝癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Egr-1基因的表达在放射诱导的细胞凋亡中的作用．方法:选择肝癌细胞系HepG2,SMMC-7721和正常肝细胞系HL-7702培养;培养细胞接受4Gy X射线照射;收获受照前和受照后1,2,4, 6,12和24 h的细胞,采用荧光定量PCR(FQ- PCR)检测0,1,2和4 h Egr-1基因的表达,采用流式细胞术(FCM)检测0,6,12和24 h细胞周期和细胞凋亡．结果:随HepG2,SMMC-7721和HL-7702在4GY X射线照射后1 h即诱导了Egr-1基因表达增高,4 h均未达峰值,分别为ΔEgrHepG2(12．9629±1．0649)、ΔEgr7702(0．0096±0．0008)和ΔEgr7721(0．0017±0．0003),HepG2显著高于HL-7702和SMMC-7721(P<0．01)．照射后6 h射线诱导的3株细胞凋亡均不明显,但在12 h均诱导了明显的细胞凋亡,而且HepG2(41．16％)和HL-7702(27．45％)已达峰值; SMMC-7721诱导的细胞凋亡水平较低,24 h仅为24．94％,且未达峰值．在射线诱导的细胞周期变化中,HepG2和SMMC-7721 S期的变化与细胞凋亡变化在6-12 h走势相反．结论:在HepG2,SMMC-7721和HL-7702细胞中,射线通过诱导Egr-1基因表达而诱导了细胞周期和细胞凋亡的变化;射线诱导的Egr-1基因表达水平可能与射线诱导的细胞凋亡成正相关;S期肿瘤细胞可能易发生射线诱导的细胞凋亡．     

土槿皮乙酸的抗肿瘤作用及其分子机制

土槿皮乙酸（pseudolaric acid B,PAB）是松科植物金钱松的近根树皮或根皮中提取出来的一种新型二萜类酸,分子式为C23H28O8,因其具有杀真菌、抗生育、止血等疗效应用于中医治疗.近年来研究发现,PAB还能抑制肿瘤生长、阻滞细胞周期及诱导肿瘤凋亡,而且能够逆转肿瘤细胞的多药耐药.     

FTY720抗肿瘤作用及其机制的研究进展

FTY720是一种由冬虫夏草培养液多球壳菌素合成的鞘氨醇类似物,作为一种新型的免疫抑制剂广泛应用于临床复发型多发性硬化症的治疗。近年研究发现FTY720还能诱导多种肿瘤细胞凋亡、增强化疗敏感性、抑制肿瘤转移。本文就FTY720抗肿瘤作用及其机制的研究进展作一综述。     

树突细胞与NCI-H460肺癌细胞融合体诱导抗肿瘤作用的实验研究

目的研究树突细胞(DC)与NC I-H460细胞融合体诱导的抗肿瘤作用。方法(1)从人外周血单核细胞诱导DC并与NC I-H460细胞融合。设融合细胞(FC)组、冲击细胞(PC)组及T细胞(TC)组,分别以融合细胞活化的T细胞、抗原冲击DC活化的T细胞及未活化T细胞为效应细胞,用乳酸脱氢酶法测定3种效应细胞对NC I-H460细胞的杀伤作用。(2)皮下注射NC I-H460细胞制备荷瘤裸鼠,将18只荷瘤裸鼠随机分为FC组、PC组及TC组,每组6只,接种上述3种T细胞,比较3组裸鼠肿瘤体积和重量。结果(1)对NC I-H460细胞的杀伤率,FC组为43.54%,PC组26.57%,TC组3.25%,3组杀伤作用比较,差异有统计学意义(F=5.47,P<0.05)。(2)FC组肿瘤体积明显小于PC组和TC组。FC组肿瘤重量为(1 129±123)mg,PC组为(1 709±160)mg,TC组为(3 344±288)mg,3组差异有统计学意义(F=37.05,P<0.01)。结论DC与NC I-H460细胞融合体可有效诱导抗肿瘤免疫,作用优于细胞抗原冲击的DC。     

Stathmin对肝癌细胞HCCLM3增殖及其肿瘤相关基因表达的影响

目的 探讨人stathmin基因在肝癌发生、发展过程中的作用及其机制.方法 化学合成stathmin序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌细胞株HCCLM3细胞.采用RT-PCR和Western blot技术检测stathmin的RNA干扰效率;用细胞计数试剂检测干扰细胞的生长增殖情况;用膜联蛋白V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测细胞凋亡;并用荧光定量PCR检测肿瘤增殖凋亡的相关基因.均数两两比较用配对t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 RNA干扰HCCLM3细胞后,stathmin的表达被显著抑制(P＜0.05),抑制率达90%;在RNA干扰24、48 h和72 h时,HCCLM3细胞的增殖抑制率分别为13.04%±0.10%、28.10%±0.41%和37.36%±2.1 5%(F=4.21,P＜0.05); RNA干扰后,细胞凋亡比例从9.20%±0.64%上升至25.11%±1.62%(F=44.67,P＜0.01);且RNA干扰组细胞癌基因c-myc、c-fos和增殖相关基因ki-67的mRNA表达水平明显下降,促凋亡基因caspase-3、bax和p53的mRNA表达水平升高(P值均＜0.05).结论 stathmin可能通过调节肿瘤增殖相关基因的表达水平来促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,参与肝癌的发生和发展进程.     

肝癌抑制基因-1肿瘤靶向性表及其特异性抗肿瘤作用

目的 建立肝癌抑制基因-1(HCCS1)肿瘤靶向性表达载体,提高肿瘤治疗的安全性.方法 活细胞计数试剂盒测定HCCS1高表达对正常细胞和肿瘤细胞的影响,荧光素酶试验检测肿瘤特异性启动子PEG-3p在正常肝细胞和肝癌细胞中的相对转录活性,AdEasyTM系统包装并利用PCR鉴定重组腺病毒Ad-PEG-3p-HCCS1,Western blot检测重组腺病毒感染后HCCS1在正常细胞和肿瘤细胞中的表达情况,结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验观察该重组腺病毒体外抗肿瘤的靶向性. 结果 HCCS1高表达对肿瘤细胞株BEL-7404和SW-620的生长抑制作用明显超过正常细胞株L02和正常人肺成纤维细胞,96 h抑制率达60%.荧光素酶试验显示,PEG-3p在BEL-7404、BEL-7405、QGY-7703中的相对转录活性分别为L02的3.9、4.7、1.5倍.成功构建了新抑癌基因HCCS1肿瘤靶向性表达的重组腺病毒Ad-PEG-3p-HCCS1,Western blot检测结果显示,在BEL7404和QGY-7703中,HCCS1表达高于在L02中的表达.结晶紫试验和四甲基偶氮唑盐试验显示,Ad-PEG-3p-HCCS1与Ad-CMV-HCCS1相比,在不降低对肿瘤抑制效果的前提下,明显降低了对正常细胞的杀伤作用. 结论 肿瘤细胞对HCCS1的生长抑制作用更为敏感,PEG-3p在肝癌细胞中也具有肿瘤特异性,Ad-PEG-3p-HCCS1可特异性地在肿瘤细胞中表达HCCS1,从而提高HCCS1基因治疗的安全性.     

肠黏膜屏障及其在炎症性肠病中的作用

炎症性肠病(IBD)是一种以慢性炎性反应和胃肠道上皮损伤为特征的自身免疫性肠道疾病,其与肠黏膜屏障有密切的关系,具体发病机制尚不明确。肠黏膜屏障是肠道能够防止肠内的微生物及其相关产物穿过肠黏膜进入人体内的结构和功能的总和,分为机械屏障、化学屏障、生物屏障以及免疫屏障。肠黏膜屏障功能的完整性能防止微生物引发的过度免疫反应,后者被认为是IBD的主要发病机制。该文就肠黏膜屏障及其在IBD中的作用作一综述。     

反义RNA对胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭性的抑制作用

目的:膜研究膜型-1基质金属蛋白酶(MT1- MMP)反义RNA对人胃癌细胞BGC823靶基因表达和侵袭特性的影响方法:利用基因重组技术构建人MT1-MMP反义RNA真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC823,应用RT-PCR、MTT、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察人胃癌细胞BGC823转染前后,MT1-MMP mRNA表达水平、细胞生长、明教酶A活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化.结果:成功构建了MT1-MMP反义RNA真核表达载体pasMMP14,将其转染胃癌细胞BGC823后,与阴性对照组相比,实验组MT1- MMP mRNA表达水平降低,抑制率为36%.转染48 h,明教酶A的活化受到了明显抑制.转染72 h,细胞增殖明显受抑(t=2.358,P<0.01 vs空白组:t=2.727 P<0.01 vs阴性组).实验组的穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(t=5.744,P<0.01;t=5.695,P<0.01).结论:反义RNA对人胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭能力具有明显的抑制作用,MT1-MMP基因可作为胃癌抗侵袭治疗的分子靶点.     

香菇C91-3发酵液蛋白的初步分离及其体外抗肿瘤作用检测

目的探讨香菇C91-3发酵液蛋白（LFP91-3）的有效抗肿瘤成分及抗肿瘤作用。方法根据分子量对LFP91-3进行分组,分别测定各组的抗肿瘤活性,并检测效应组对细胞凋亡的影响。结果LFP91-3分为A、B、C三组,三组蛋白浓度分别为131.25、75.96、435.05mg/ml。各组均有抗肿瘤活性,C组活性最强,并可诱导H22细胞凋亡。结论LFP91-3在体外有良好的抗肿瘤作用。     

重组人MCP-1对胃癌细胞作用的研究

很多研究表明,肿瘤组织周围浸润的炎性细胞,尤其是巨噬细胞,对恶性肿瘤的生长,免疫,转移等生物学特性有着重要的作用。为更进一步研究利用这些作用,研究者们开始关注具有趋化活性的细胞因子在肿瘤治疗中应用的可能性。在本实验中,我们利用重组产物人MCP-1,将其与肿瘤细胞共同接种,并直接注射了肿瘤局部、观察对肿瘤生长过程的影响,从而探讨这一产物在胃癌治疗中应用的前景。