家兔皮肤成纤维细胞体外成骨潜能的研究

作者将家兔皮肤的中厚皮片制备成小皮块后，作体外培养，在倒置相差显微镜下观察，并作扫描电镜检查，结果显示成纤维细胞自皮块游出，不断增多，开始汇合，细胞呈现鳞片形状，具树枝样分叉，并形成多层结构，成纤维细胞开始分泌众多微小颗粒，堆集在细胞的表面及周围，以后在细胞表面出现细针结晶。结晶及颗粒结合在一起，不断增大，成为结节，成纤维细胞以辐射状排列在结节的四周。相邻的结节联在一起，形成小梁状的组织，用新生骨     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞体外增殖活性的研究

目的研究类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)的体外增殖活性。方法收集行关节腔镜术或关节置换术的RA、骨关节炎(OA)、关节创伤患者的膝关节滑膜组织标本各3例,应用酶消化法进行FLS的分离培养,采用MTT法比较三种来源细胞的体外增殖活性。结果 RA-FLS在体外培养第3、4、5天时OD值较OA、关节创伤来源者增高(P值均小于0.05)。结论 RA-FLS细胞增殖程度较OA、关节创伤来源者增高。     

iRGD-外泌体-阿霉素抑制成纤维细胞体外增殖的研究

目的探讨应用iRGD-外泌体-阿霉素抑制成纤维细胞体外增殖的有效性及靶向性。方法体外转染iRGD,提取外泌体,通过电穿孔包裹阿霉素,利用流式细胞仪检测iRGD-外泌体-阿霉素对成纤维细胞的亲和力,并对iRGD-外泌体-阿霉素抑制成纤维细胞的增殖能力进行分析。结果iRGD-外泌体-阿霉素对成纤维细胞的亲合力高于空白转染-外泌体-阿霉素;iRGD-外泌体-阿霉素可明显抑制成纤维细胞的增殖,空白转染-外泌体-阿霉素无明显的抑制作用。结论iRGD-外泌体-阿霉素能通过靶向作用于成纤维细胞,以抑制成纤维细胞的增殖,可应用于瘢痕疙瘩的治疗研究。     

冰蜜生肌膏对兔成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的:观察冰蜜生肌膏促进体外培养兔成纤维细胞增殖的影响。方法:采用消化分离法进行兔成纤维细胞的原代培养,通过形态学和免疫组织化学的方法鉴定成纤维细胞。第3代纯化的成纤维细胞分为5组,空白对照组每孔加入等量的PBS,实验组每孔分别加入125、62·5、31·25、15·625mg/ml的冰蜜生肌膏提取液进行培养,培养24、48、72h后分别行MTT法检测每孔的光吸收值(OD值)。结果:冰蜜生肌膏提取液加入到成纤维细胞中培养24、48、72h后,经MTT法检测,不同浓度(浓度分别为125、62·5、31·25、15·625mg/ml)冰蜜生肌膏与对照组OD值比较差异有显著性统计学意义(P<0·05)。结论:15·625mg/ml浓度冰蜜生肌膏对成纤维细胞的生长有明显促进作用(P<0·05),药物浓度在15·625~62·5mg/ml时其作用随药物浓度升高而增加,并在浓度为62·5mg/ml时达到最大效应值(P<0·01),当药物浓度大于62·5mg/ml时则作用趋向于饱和,提示一定浓度范围内的冰蜜生肌膏药液能明显增加成纤维细胞数量,且促进作用和浓度呈显著依赖性。     

冰蜜生肌膏对兔成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的:观察冰蜜生肌膏促进体外培养兔成纤维细胞增殖的影响。方法:采用消化分离法进行兔成纤维细胞的原代培养,通过形态学和免疫组织化学的方法鉴定成纤维细胞。第3代纯化的成纤维细胞分为5组,空白对照组每孔加入等量的PBS,实验组每孔分别加入125、62·5、31·25、15·625mg/ml的冰蜜生肌膏提取液进行培养,培养24、48、72h后分别行MTT法检测每孔的光吸收值（OD值）。结果:冰蜜生肌膏提取液加入到成纤维细胞中培养24、48、72h后,经MTT法检测,不同浓度（浓度分别为125、62·5、31·25、15·625mg/ml）冰蜜生肌膏与对照组OD值比较差异有显著性统计学意义（P<0·05）。结论:15·625mg/ml浓度冰蜜生肌膏对成纤维细胞的生长有明显促进作用（P<0·05）,药物浓度在15·625⁶2·5mg/ml时其作用随药物浓度升高而增加,并在浓度为62·5mg/ml时达到最大效应值（P<0·01）,当药物浓度大于62·5mg/ml时则作用趋向于饱和,提示一定浓度范围内的冰蜜生肌膏药液能明显增加成纤维细胞数量,且促进作用和浓度呈显著依赖性。     

人真皮成纤维细胞体外构建组织工程化软骨的初步探索

目的 利用软骨细胞提供的体外软骨诱导微环境,探讨人真皮成纤维细胞在体外构建软骨的可行性.方法 分别培养猪的软骨细胞与人真皮成纤维细胞,将2种细胞按1:1(软骨细胞:成纤维细胞)比例混匀,以5.0×10~7/ml的终浓度接种于聚羟基乙酸支架(PGA,直径9 mm,高2mm)作为共培养组,相同终浓度的单纯软骨细胞和单纯成纤维细胞分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照.每组各接种3个标本,每个接种细胞悬液200 μl.全部标本均于体外培养8周后取材,通过大体观察、湿重测定、组织学及免疫组化等相关检测对构建软骨进行评价.结果 软骨细胞组(阳性对照组)基本保持了复合物初始的大小和形状,组织周边和中央均有较均质的软骨陷窝样结构形成,表达软骨特异性细胞外基质;共培养组的组织稍有缩小,组织周边也有软骨陷窝样结构形成,表达软骨特异性细胞外基质,但组织内大部分区域形成了纤维样组织,特别是通过人核抗原免疫组化和对应的Safranin O染色结果,可以看到少量人核抗原阳性的细胞形成了较成熟的陷窝样结构,表达软骨特异性基质.单纯成纤维细胞组(阴性对照组)在体外培养过程中逐渐皱缩变形,未形成软骨样组织.结论 软骨细胞共培养体系可以有效地诱导人真皮成纤维细胞中一定比例的细胞向软骨分化,并能在体外构建软骨样组织.     

凝血酶对人皮肤成纤维细胞增殖作用的研究

目的：观察不同浓度的凝血酶对成纤维细胞的刺激作用,以及阿加曲班对这种刺激的抑制作用。方法：采用贴壁法进行人皮肤成纤维细胞原代培养,并传代、鉴定。用MTT法检测不同浓度凝血酶刺激后的成纤维细胞活力。用氯胺T法检测不同浓度凝血酶刺激后的细胞上清中羟脯氨酸含量。用免疫组化的方法检测凝血酶刺激后的成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况。在培养液中加入阿加曲班后重复上述检测。结果：①培养的细胞为典型的成纤维细胞形态,波形蛋白单克隆抗体免疫组化染色呈阳性;②加入不同浓度凝血酶的各组吸光值均高于不加凝血酶组（A组）（P〈0.01）,加入阿加曲班和凝血酶的各组吸光值与A组无显著性差异（P〉0.05）;③加入不同浓度凝血酶的各组细胞上清中羟脯氨酸含量均高于不加凝血酶组（A组）（P〈0.01）,加入阿加曲班和凝血酶的各组上清中羟脯氨酸含量与A组相比无统计学差异（P〉0.05）;④凝血酶刺激后的成纤维细胞中有α-SMA的表达,加入阿加曲班后此种表达被抑制。结论：凝血酶能诱导成纤维细胞增殖、胶原分泌量增加,能刺激成纤维细胞表达α-SMA,使成纤维细胞转变为肌成纤维细胞。阿加曲班能抑制凝血酶的这种作用。     

人皮肤成纤维细胞体外转染Brgl基因的实验研究

目的探讨重组Brgl基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性,以及转染对细胞增殖和活性的影响。方法体外重组Brgl基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人皮肤成纤维细胞;通过流式细胞仪检测报告基因表达,并确定细胞转染效率：应用ReahimePCR比较转染前后BrglmRNA的表达;MTT法检测Brgl基因对细胞增殖能力的影响。结果Brgl基因转染后,（73．0±6．7）％的被转染细胞表达报告基因;BrglmRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为（6．23±1．18）、（1．11±0．22）和（1．52±0．12）,转染组BrglmRNA相对表达量较未转染组及转染空载体组明显增高（P〈0．01）;细胞的增殖能力在Brgl基因转染前后无显著差异。结论人皮肤成纤维细胞可作为Brgl转染的靶细胞．转染Brgl基因对人成纤维细胞的增殖能力无显著影响。     

成纤维细胞体外传代对遗传性状的影响

目的注射移植自体成纤维细胞为面部微小凹陷和皱纹的治疗提供了一种新方法。探讨在对细胞存活性研究的基础上,成纤维细胞在体外环境传代下的遗传性状的安全问题。方法采用核型分析和流式细胞仪计数,对5例女性、3例男性的第5代和第10代细胞的遗传性状进行了研究。结果第5代和第10代成纤维细胞均呈正常的二倍体核型,无异常核型的改变;细胞周期分析,均呈良好的同步性,未出现细胞凋亡现象。结论人皮肤成纤维细胞体外传代在10代以内,无遗传性状的改变,作为移植的种子细胞是安全的。     

UVB诱导人皮肤成纤维细胞中beta-catenin基因的变化研究

目的：观察中波紫外线（UVB）诱导人皮肤成纤维细胞中β-catenin及其下游基因c-myc的变化,探讨其在紫外线诱导光老化和肿瘤发生中的作用。方法：使用组织块法分离培养原代成纤维细胞,使用第2～8代人皮肤成纤维细胞进行紫外线处理,倒置荧光显微镜观察其形态学改变,β-gal半乳糖苷酶细胞衰老试剂盒染色衰老细胞、western blot检测衰老相关蛋白P16的表达,western blot检测紫外线处理人皮肤成纤维细胞各时相点β-catenin、c-myc蛋白表达水平,RT-PCR检测紫外线处理人皮肤成纤维细胞各时像点β-catenin、c-mycmRNA水平的表达变化。结果：40mJ/cm2UVB单次照射后可以诱导人皮肤成纤维细胞衰老,β-gal衰老染色阳性率达到约90%,衰老相关基因P16蛋白表达明显升高,β-catenin、c-myc蛋白表达水平和mRNA水平照射后较未照射组均明显降低。结论：紫外线UVB处理人皮肤成纤维细胞可以诱导其发生衰老改变,衰老细胞中β-catenin、c-myc表达水平明显降低,这些结果与皮肤黑色素细胞瘤相关基因改变的研究相近,为以后皮肤恶性肿瘤的研究提供了线索。     

正常皮肤提取物对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 探讨自体成纤维细胞注射移植后是否出现过度增殖和胶原异常分泌.方法 按照Engel-Catchpole程序制备正常皮肤提取物,在浓度分别为0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.0000 mg/mlDMEM培养基下,观察对正常成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.结果 正常皮肤提取物抑制正常皮肤成纤维细胞的增殖,细胞外胶原的分泌也受一定的影响,受抑制的程度与培养基中皮肤提取物的浓度呈正相关.结论 正常皮肤内存在成纤维细胞增殖和胶原分泌功能的负调节机制,有可能在进行自体成纤维细胞注射移植时发挥作用.     

人皮肤成纤维细胞体外转染Brg1基因的实验研究

目的 探讨重组Brg1基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性,以及转染对细胞增殖和活性的影响.方法 体外重组Brg1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人皮肤成纤维细胞;通过流式细胞仪检测报告基因表达,并确定细胞转染效率;应用Realtime PCR比较转染前后Brg1 mRNA的表达;MTT法检测Brg1基因对细胞增殖能力的影响.结果 Brg1基因转染后,(73.0±6.7)％的被转染细胞表达报告基因;Brg1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为(6.23±1.18)、(1.11±0.22)和(1.52±0.12),转染组Brg1 mRNA相对表达量较未转染组及转染空载体组明显增高(P＜0.01);细胞的增殖能力在Brg1基因转染前后无显著差异.结论 人皮肤成纤维细胞可作为Brg1转染的靶细胞,转染Brg1基因对人成纤维细胞的增殖能力无显著影响.     

稳定表达人骨形成蛋白-2基因的成纤维细胞体内诱导成骨作用

目的 探讨稳定表达人骨形成蛋白—2(hBMP—2)基因的成纤维细胞是否具有体内诱导成骨能力。方法 构建置组真核表达载体pcDNA3—hBMP—2，在脂质体介导下，将其导入NIH3T3细胞，通过G418馈选获得阳性克随，并继续培养4周，用细胞原位杂交和免疫组织化学方法观察hBMP—2基因在NIH3T3细胞内的稳定表达，并观察了稳定表达hBMP—2的成纤维细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的变化，将稳定表达hBMP—2的成纤维细胞植入裸鼠肌袋内观察其体内诱导成骨作用。结果 成功构建重组真核表达载体pcDNA3—hBMP—2，经细胞原位杂交和免疫组织化学证实，转染pcDNA3—hBMP—2后的NIH3T3细胞内有大量hBMP—2mRNA的转录及其蛋白的稳定表达，稳定表达hBMP—2的成纤维细胞ALP活性显著上升，植入裸鼠肌袋内4周有大量软骨形成。结论 稳定表达hBMP—2的成纤维细胞具有体内诱导成骨能力。     

芦荟生肌膏精提液对内毒素刺激的成纤维细胞增殖的影响

目的:观察芦荟生肌膏精提液对内毒素刺激的成纤维细胞增殖的影响。方法:在不同浓度的芦荟生肌膏精提液的作用下,通过MTT法检测芦荟生肌膏精提液对内毒素(LPS)刺激的成纤维细胞增殖的影响,并在光镜下观察各组细胞的形态学改变。结果:与对照组比,LPS刺激组形态学观察有明显改变,LPS显著抑制成纤维细胞的增殖(P0.001);与LPS刺激组相比,加入不同浓度中药精制提取液后,可以不同程度地减轻LPS的抑制作用,成纤维细胞的增殖恢复,各组形态学观察也有相应程度的改变,其中以大剂量组最为明显(P0.01)。结论:内毒素(LPS)可以显著抑制体外成纤维细胞的增殖,镜下表现为细胞稀疏,生长减慢,细胞形态拉长。芦荟生肌膏精提液对LPS刺激的成纤维细胞增殖有保护作用,可以拮抗LPS的抑制作用,恢复成纤维细胞的增殖,提示芦荟生肌膏可以通过促进成纤维细胞的增殖而促进直肠创面组织的愈合。     

黄芪甲苷对人皮肤成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芪甲苷对体外培养的有皱纹、无皱纹中老年人皮肤成纤维细胞生物学特性的影响.为黄芪甲苷用于延缓皮肤衰老和皱纹形成提供细胞水平的客观依据,为进一步探讨皮肤衰老机制和开发抗衰老护肤品提供新思路.方法体外培养中年人眼角皱纹与眼角无皱纹皮肤深处成纤维细胞;老年人面颊皮肤成纤维细胞.加入不同浓度的黄芪甲苷,干预24、72、120 h后,检测黄芪甲苷对这3例皮肤成纤维细胞系增殖活性、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、弹性蛋白合成和凋亡率的影响.结果黄芪甲苷在较低浓度（5～20μg/ml）时可促进皱纹和无皱纹皮肤成纤维细胞增殖,促进皱纹、无皱纹和老年皮肤成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成,降低皱纹和无皱纹皮肤成纤维细胞凋亡率（P＜0.01）.结论黄芪甲苷在较低浓度时具有改善皱纹和非皱纹皮肤成纤维细胞生物学特性的作用.     

高三尖杉酯碱对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响

观察高三尖杉酯碱对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。利用ＭＴＴ比色分析法及流式细胞术检测不同浓度ＨＨ作用不同时间对体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响。当ＨＨ浓度为０．１２μｇ／ｍｌ时即可抑制体外培养的人皮肤瘢痕组织成纤维细胞的生长,０．６６μｇ／ｍｌ时即可产生５０％的抑制效应,１０μｇ／ｍｌ时可完全抑制成纤维细胞的生长,且抑制率随时间的延长而增强,而对正常皮肤组织的成纤维细胞无作用。     

雌激素对人皮肤成纤维细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨雌激素(17β-estrogen,17β-E2)对人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFB)增殖与迁移的影响.方法 分离培养HSFB,传至第4代;(1)四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度17β-E2和17β-E2+雌激素β受体(estrogen β receptor,ER-β)拮抗剂ICI-182780干预24、48、72、96h后HSFB增殖活力;(2)流式细胞仪检测17β-E2和ICI-182780对HSFB周期分布的影响;(3)建立细胞划痕(Scratch-Wound)模型,24、48、72 h后观察HSFB在不同浓度17β-E2和17β-E2+ ICI-182780干预下的迁移情况.结果 (1)MTT显示,48、72、96 h时,10-8、10-9、10-10、10-11、10-12mol/L浓度范围内,均以10-10 mol/L 17β-E2促增殖效应最强;并且10-10mol/L 17β-E2组(A组)细胞增殖效应强于ICI-182780+ 10-10 mol/L 17β-E2组(B组)与空白组(C组,P＜0.01);(2)A组处于S期的细胞比例多于B、C组(P＜0.01),处于G0/G1期的细胞比例则少于B、C组(P＜0.01);(3)48 h时,10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 mol/L浓度范围内,10-8 mol/L 17β-E2促细胞迁移效应最强(P＜0.01);24、48、72 h时,10-8 mol/L 17β-E2组(D组)细胞迁移距离均大于10-8 mol/L 17β-E2+ ICI-182780组(E组)及空白组(F组)(P＜0.01).结论 10-10 mol/L浓度雌激素促HSFB增殖效应最强;10-8 mol/L浓度促HSFB迁移效应最强;ICI-182780有效减弱上述2种效应.     

β-氨基丙晴对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞增殖的影响

目的 观察β－氨基丙晴（ＢＡＰＮ）对人皮肤瘢痕组织成纤维细胞的影响。方法 利用ＭＴＴ比色分析法及流式细胞术检测ＢＡＰＮ不同浓度（ｍｇ／ｍｌ）不同时间对体外培养的人皮肤成纤维细胞增殖的影响。结果 ＢＡＰＮ２４,４８,７２ｈ对瘢痕组织成纤维细胞均有抑制作用,且抑制率随浓度的增加和时间的延长而增强,而对正常皮肤组织的成纤维细胞无作用。其ＩＤ５０为２．５３ｍｇ／ｍｌ。结论 ＢＡＰＮ可抑制体外瘢痕组织成纤维     

MTT法检测国产PGA支架对人成纤维细胞增殖的影响

目的 检测国产PGA支架对瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞增殖的影响.方法 体外培养人瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞,取第二代细胞接种到96 孔板,以不同浓度的国产PGA支架浸提液培养,用MTT法检测成纤维细胞在国产PGA上的增殖情况.结果 不同浸提液培养的瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞的生长曲线均无明显差异.结论 国产PGA支架对瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞的增殖无明显影响,该材料可以用于以成纤维细胞为种子的组织构建.     

机械应力作用皮肤成纤维细胞增殖的相关研究

目的研究机械应力作用皮肤成纤维细胞增殖效应.方法自行设计一种新的机械牵拉细胞培养模型,原代培养皮肤成纤维细胞,取3～5代的成纤维细胞种植在模型的弹性膜上,待细胞达到75%～80%融合度时,实施40%延长度的机械牵拉,检测实验组及对照组12、24、36、48、72 h时间点的细胞数,利用MTT法检测不同时间点细胞的增殖变化,同时利用流式细胞仪检测不同时间点的细胞增殖周期.结果采用40%延长度的机械牵拉可以明显导致细胞增殖,同时,代表细胞增殖特性的S期也随机械牵拉发生改变.结论 40%延长度的机械牵拉可以改变细胞的增殖周期,导致细胞增殖.