188Re-7E11C5.3抑制前列腺癌细胞增殖

目的：探讨铼-188（188Re）标记前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3（188Re-7E11C5.3）对前列腺癌细胞系LNCaP的体外抑制作用。方法：采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物，纸层析法测定标记率和放化纯度，直线回归外推法测定免疫活性分数。四唑盐（MTT）法测定其体外细胞毒作用。结果：188Re-7E11C5.3的标记率为（93.16±2.18）%，放化纯度为（95.62±0.48）%，免疫活性分数为（74.86±1.86）%。188Re-7E11C5.3对LNCaP细胞的生长抑制作用明显强于188Re标记的正常鼠IgG（mIgG）和游离188ReO^-₄，其半数有效抑制浓度（IC₅₀）分别为（23.38±3.73）×10⁷ Bq/L，（59.21±8.02）×10⁷ Bq/L和（68.89±10.91）×10⁷ Bq/L。结论：188Re-7E11C5.3能有效抑制体外培养LNCaP细胞的增殖，可用于前列腺癌的放射免疫治疗。     

E-选择素及其配体sLex对胚泡粘附和着床的影响

目的 :探讨E 选择素及其配体sLex 在胚胎粘附和着床中的作用。方法 :体外观察了E 选择素及其抗sLex 抗体对胚泡粘附的影响 ,并通过体内研究观察了抗sLex 抗体对胚泡着床的影响。结果 :体外培养胚泡时 ,培养皿上包被E 选择素浓度为 2 5ng ml、5 0ng ml时胚泡的粘附率为 88 0 %、87 2 % ,明显高于对照组 74 0 % (P <0 0 5 )。将不同浓度的sLex 抗体加入培养液 ,观察胚泡在包被 2 5 μg mlE 选择素培养皿上的粘附情况 ,发现当sLex 抗体浓度为 10 0、10 0 0ng ml时 ,胚胎的粘附率明显下降。给孕 2～ 4天的小鼠宫腔注射sLex 抗体 ,当抗sLex 抗体剂量为 10 μg 只时 ,胚胎着床数为 5 2± 2 7,明显低于对照组 11 3± 3 1(P <0 0 5 )。结论 :适当浓度的E 选择素可以促进胚胎的粘附 ,其作用可能是通过与配体sLex 介导的。阻断E 选择素与配体的sLex 的结合可以部分阻断胚胎的粘附和着床。     

血管紧张素Ⅱ对心房颤动患者外向钾电流的作用

目的：研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心房颤动(AF)患者心房肌外向钾电流的作用及其受体机制。方法: 采用急性酶解法获取游离心房肌细胞，应用膜片钳全细胞技术记录外向钾电流。结果: (1) 在钳制电位-10 mV~+50 mV时, AF组瞬时外向钾电流(I_to1)密度明显低于窦性心律(SR)组（P<0.01），而持续性外向钾电流（I_sus）密度与SR组无明显差异。(2) 以0.1 μmol/L AngⅡ灌流后，在钳制电位0 mV~+50 mV时，SR患者的Ito1密度明显低于灌流前（P<0.01），其动力学特性没有改变，AngⅡ对AF组I_to1的抑制作用明显低于SR组 (P<0.01)。0.1 μmol/L AngⅡ对两组I_sus没有影响。(3) AngⅡ对Ito1的抑制作用可逆，10 μmol/L缬沙坦（valsartan）以及1 μmol/L沙拉新(saralasin)均能完全消除0.1 μmol/L AngⅡ对Ito1的抑制，以10 μmol/L valsartan灌流后，膜电位+50 mV时I_to1的电流密度增加（22.46±4.30）%。结论: AngⅡ通过Ⅰ型受体（AT₁R）介导，明显抑制心房肌细胞膜I_to1，是AF患者心房肌瞬时外向钾通道电重构的机制之一。     

肾上腺髓质素2对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响

目的：研究肾上腺髓质素2（AM2）对大鼠脑微血管内皮细胞增殖的影响。 方法： 分离并培养SD大鼠脑微血管内皮细胞，经Ⅷ因子相关抗原的抗体鉴定和常规处理后，随机分为对照、AM2（10^-7 mol/L、10^-8 mol/L和10-9 mol/L）、ADM、ADM+AM2、10%胎牛血清和10％胎牛血清＋AM2 10-7 mol/L等8组，以［3H］-TdR掺入法测定MEC增殖反应。 结果： 10^-7-10^-9 mol/L各浓度AM2、ADM以及AM2和ADM合用对于静止状态的脑微血管内皮细胞［3H］-TdR掺入与对照组比较均无明显差异（均P>0.05）。10%胎牛血清刺激组脑微血管内皮细胞［3H］-TdR掺入比对照组高87.5%（P<0.05），10^-7mol/L AM2抑制胎牛血清诱导的脑微血管内皮细胞［3H］-TdR掺入增加（P<0.05）。 结论： AM2抑制血清诱导的脑微血管内皮细胞增殖。     

CCKB受体诱发的小鼠神经元蛋白质磷酸化的研究

目的：从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度初步勾勒出CCK_B型受体介导的胞内信号转导途径。方法:培养的小鼠大脑皮质神经元分为实验组、对照组和受体拮抗剂组，在无磷培养基加入 ［32P］-NaH₂PO₄标记细胞中的磷蛋白后，刺激组给予CCK₈（10^-7 mol/L），对照组加入等量的无磷培养基，受体拮抗剂组在分别加入CCK_A型、CCK_B型受体拮抗剂L364 718、L365 260以及L364 718＋L365 260，浓度均为10^-8 mol/L，孵育10 min后，再加入10^-7 mol/L CCK₈，37 ℃作用60 min，液氮中终止磷酸化反应。裂解细胞提取蛋白质，双向电泳分离，放射自显影7d后，获得磷酸化蛋白的放射自显影双向电泳图谱。采用PDQuest 2D分析软件对图谱进行差异分析，并在Swiss-Prot蛋白质数据库和自建磷蛋白数据库中查询定性。结果:CCK₈作用60 min后，小鼠神经元CCK₈信号转导相关磷酸化蛋白有：多种蛋白激酶、细胞信号分子、生长因子受体、转录因子等。加入L364 718后，神经元中PKCδ、P55G等的磷酸化水平降低，加入L365 260后， PKCα、PKGβ、OGFR、EGFR等的磷酸化水平呈现不同程度的降低，表明皮质神经元中CCK_B受体介导的信号转导更复杂。结论:CCK_A型、GGK_B型受体均可介导CCK₈在神经元的信号转导，但CCK_B型受体可能发挥了更重要的作用，其介导的信号途径可能包括：肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径、JNK途径、PI3K-PKB途径和cGMP-PKG途径。     

15-HETE对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶苏氨酸495位点（eNOS Thr495）磷酸化的影响

目的： 探讨15-羟化二十烷四烯酸（15-HETE）对肺动脉内皮细胞（pulmanory artery endothelial cells, PAECs）一氧化氮合酶（endothelia nitric oxide synthase, eNOS）活性的影响。 方法： 通过测定大鼠离体肺动脉环张力，比较去血管内皮、eNOS抑制剂L-NAME对15-HETE收缩肺动脉的影响；通过免疫沉淀和免疫印迹方法测定牛PAECs经2×10-6 mol/L 15-HETE作用后，eNOS Thr 495磷酸化情况；用免疫印迹方法测定15-HETE对牛PAECs eNOS总蛋白表达的影响；用Greiss法检测15-HETE及15-脂氧酶（15-LO）抑制剂CDC和NDGA对牛肺动脉内皮细胞一氧化氮（NO）产量的影响。 结果： (1)除去肺动脉内皮后, 15-HETE收缩血管作用明显增强（P＜0.01）。（2）抑制剂L-NAME 10-4 mol/L 可使15-HETE收缩肺动脉的作用明显增强（P＜0.05）。(3)牛PAECs经2×10-6 mol/L 15-HETE作用后，eNOS Thr 495位点磷酸化水平增强（P＜0.01）。（4）10-6 mol/L 15-HETE可抑制亚硝酸盐（NO-2/NO-3）的产生(P＜0.05)，抑制内源性15-HETE可明显增加NO-2/NO-3的产量，和对照组相比 10-5 mol/L CDC组P＜0.05，10-4 mol/L NDGA组P＜0.01。 结论： 肺动脉内皮细胞eNOS/NO通路参与抑制15-HETE收缩大鼠肺动脉，15-HETE抑制肺动脉内皮细胞eNOS活性，使NO产量（NO-2/NO-3）下降。     

抗心绞痛药-尼可地尔强化异丙肾上腺素引起大鼠主动脉松驰作用:与cGMP抑制性cAMP磷酸二酯酶的关联

作者观察了尼可地尔对异丙肾上腺素(ISO)引起的大鼠主动脉环松弛作用的影响;发现:ISO(10~(-9)～3×10~(-6)mol/L)可以使苯肾上腺素(3×10~(-7)mol/L)引起收缩的大鼠主动脉环松弛。用尼可地尔(3×10~(-7)mol/L～3×10~(-6)mol/L)进行预处理,ISO的作用被强化,而克罗卡林则无此作用。尼可地尔亦能加强佛司可林(3×10~(-9)mol/L～10~(-6)mol/L)及双丁酰环磷腺苷(3×10~(-6)mol/L,3×10~(-4)mol/L)的血管     

不同年龄段大鼠血清对大鼠骨髓内皮祖细胞活力的影响

目的：观察不同年龄段大鼠血清对大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs) 活力的影响。方法：PBS冲洗出1-2月龄、19-26月龄SD大鼠股骨和胫骨骨髓，Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞(MNCs), 应用含10%FBS的DMEM/F12培养基（含内皮细胞生长添加剂100 mg/L、肝素100 mg/L、青霉素1×10⁵ U/L、链霉素1×10⁵ U/L）差速贴壁法进行体外培养，以Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染，直接或间接荧光标记CD31 及vWF分别通过流式和免疫组化进行鉴定。制备1-2月龄、19-26月龄大鼠血清，将培养的EPCs分A （老年大鼠EPCs+老年大鼠血清）、B（老年大鼠EPCs+年轻大鼠血清）、C （年轻大鼠EPCs +老年大鼠血清）、D （年轻大鼠EPCs+年轻大鼠血清）4组， EPCs经含10%不同年龄段大鼠血清的DMEM/F12培养基（不含胎牛血清）培养后，激光共聚焦检测EPCs吞噬Dil-ac-LDL后平均荧光强度，改良Boyden 小室和黏附能力测定实验分别观察EPCs迁移和黏附能力，MTT法检测细胞增殖活性。结果：年轻大鼠血清显著促进老年大鼠EPCs吞噬Dil-ac-LDL能力（P<0.01）及增强其迁移（P<0.01）、黏附（P<0.05）和增殖能力（P<0.01），而老年大鼠血清显著抑制年轻大鼠EPCs迁移（P<0.05）和黏附能力（P<0.05）。结论：年轻大鼠血清显著增强老年大鼠EPCs的细胞活力，而老年大鼠血清可部分抑制年轻大鼠EPCs功能活性。     

PPARs激动剂上调内皮细胞表达eNOS并增加NO生成

目的： 观察PPARα激动剂非诺贝特及PPARγ激动剂赛格列酮对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）抑制NO生成的作用。 方法： 体外培养HUVECs，用1×10-7-1×10-4mol/L赛格列酮和10-5、10-4mol/L非诺贝特预处理HUVECs 24 h，再与10-6mol/L AngⅡ 共同孵育12 h，通过RT-PCR和Western blotting分别检测eNOS mRNA和蛋白表达水平；通过Griees反应测定NO2－/NO3－浓度。 结果： 与对照组相比，10-7mol/L AngⅡ刺激HUVEC 12 h下调eNOS mRNA（0.38±0.19 vs 0.13±0.18，P<0.01）和蛋白（35.90±3.18 vs 6.95±2.19，P<0.01）表达，减少NO生成（50.21 μmol/L vs 21.33 μmol/L，P<0.01）。用10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L赛格列酮预处理24 h，上调eNOS mRNA表达（分别为0.36±0.03、0.36±0.14、0.37±0.16、0.43±0.06，与AngⅡ组比较，均P<0.01）和蛋白表达（分别为11.60±3.31、11.78±5.45、13.93±2.46、22.93±3.17，与AngⅡ组相比，均P<0.01），增加细胞培养液NO2-/NO3-浓度。非诺贝特也上调eNOS mRNA和蛋白表达，增加细胞培养液NO2-/NO3-浓度（P<0.01）。 结论： AngⅡ减少eNOS表达，从而减少NO生成。赛格列酮和非诺贝特预处理24 h，可拮抗AngⅡ对HUVECs eNOS mRNA和蛋白表达的抑制作用，增加NO的释放。     

维生素E对氧化低密度脂蛋白诱导的单核细胞/内皮细胞粘附的干预作用

目的:观察ox-LDL在体外对兔单核细胞与血管内皮细胞粘附的影响及维生素E的干预作用,初步探讨其机制。方法:培养兔主动脉内皮细胞。密度梯度离心法分离健康兔单核细胞。沉淀法制备人LDL,硫酸铜氧化制备ox-LDL。用Kim等^[1]方法并略加改良观察ox-LDL对内皮细胞/单核细胞粘附的影响及维生素E的干预。Northernblot检测内皮细胞VCAM-1mRNA的表达。结果:ox-LDL浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L时,每个视野粘附的单核细胞数分别为132.8±20.2、350.0±37.2、502.6±78.8,而正常对照组为51.2±7.7,相差非常显著(P＜0.01)。在加ox-LDL(10mg/L)前加维生素E干预,当维生素E浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L时,粘附单核细胞数分别为422.3±32.2、298.0±21.7、205.2±36.6,均低于ox-LDL对照组的502.6±78.8,维生素E浓度为10μmol/L组与对照组相差不显著(P＞0.05),其余两组与ox-LDL对照组相差非常显著(P＜0.01)。ox-LDL对照组内皮细胞VCAM-1mRNA表达高于维生素E(40μmol/L)干预组(0.49±0.09vs0.33±0.10,P＜0.05)。结论:ox-LDL促进兔主动脉内皮细胞与单核细胞的粘附,其机制与其促进内皮细胞表达VCAM-1有关。维生素E能抑制ox-LDL的上述作用。     

Ox-LDL通过LOX-1双重调节血管内皮细胞炎性分子的表达

目的： 探讨LOX-1/PPARγ信号途径对Ox-LDL诱导血管内皮细胞炎性分子表达的影响。方法： 用聚肌苷酸［poly(I)］、卡拉胶（carrageenan）、15脱氧前列腺素J₂（15d-PGJ₂）以及Ox-LDL与脐静脉内皮细胞（HUVECs）作用，用realtime RT-PCR测定LOX-1和PPARγ、RT-PCR测定ICAM-1和E-selectin的mRNA的表达；用Western blotting测定PPARγ、ICAM-1和E-selectin蛋白的表达。结果： Ox-LDL可以显著上调PPARγ mRNA和蛋白的表达（P<0.01），并呈明显的剂量效应关系，poly(I) 和 carrageenan可以显著抑制Ox-LDL对PPARγ的上调作用。在HUVECs中预先单独加入15 d-PGJ₂或与polyinosonic acid一起预先作用，然后再加入Ox-LDL。15d-PGJ₂可以降低Ox-LDL诱导的ICAM-1、E-selectin和LOX-1的表达；PPARγ的受体激动剂与LOX-1的受体阻断剂联合作用，其降低ICAM-1和E-selectin表达的作用比单独使用15d-PGJ₂或polyinosonic acid要显著。结论： Ox-LDL一方面引起血管内皮细胞的炎性损伤，另一方面启动细胞抗炎作用，在炎性反应过程中呈现双重的调节作用。     

VEGF诱导血管内皮细胞产生H2O2及其促增殖作用

目的： 研究VEGF诱导血管内皮细胞产生细胞外H₂O₂及其在VEGF促血管内皮细胞增殖功能中的作用。方法: ① 以H₂DCFDA为H₂O₂指示剂，检测 500 μg/L VEGF刺激下，血管内皮细胞H₂O₂的产生；② 以MTT法检测3×10⁶ U/L过氧化氢酶（CAT），及外源性加入5-20 mmol/L H₂O₂对VEGF促增殖功能的影响。结果: ① 在VEGF刺激血管内皮细胞 15 min 后，细胞内开始出现逐渐增强的荧光，且随时间逐渐增强，至 45 min 左右最强，随后逐渐减弱；而同时加入过氧化氢酶组的细胞则仅有微弱荧光产生，且荧光强度不随时间变化；② 3×10⁶ U/L过氧化氢酶对VEGF的促增殖功能有明显的抑制作用（P<0.01）；③ 外源性加入5-10 mmol/L H₂O₂ 时对血管内皮细胞有明显促增殖作用（P<0.01），但其对VEGF的促增殖功能却有显著抑制作用（P<0.01）。结论: VEGF可刺激血管内皮细胞产生细胞外H₂O₂，在促细胞增殖中可能具有重要作用。而外源性H₂O₂对VEGF的生理功能可能具有抑制作用。     

补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响

目的:探讨补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响及机理。方法:以培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)或在试验体系中加入灌服补肾宁心方的兔血清,以孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定人单核细胞系U937与HUVECs的粘附,并用流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)以及E-选择素的表达。结果:ox-LDL显著增强单核U937细胞与内皮细胞之间的相互粘附,如在试验体系中加入灌服补肾宁心方的动物血清,则粘附率明显降低(P＜0.01)。流式细胞仪分析结果显示ox-LDL能明显促进内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达,补肾宁心方中药灌服血清可显著下调内皮细胞表面ICAM-1、VCAM-1以及E-选择素的表达(P＜0.01)。结论:补肾宁心方含药血清可能通过下调内皮细胞表面粘附分子的表达抑制单核-血管内皮细胞粘附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

重组可溶性人CD40L诱导人脐静脉内皮细胞损伤

目的:探讨重组可溶性人CD40L(rsh CD40L)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤作用及其在动脉粥样硬化中的作用。方法:应用rsh CD40L刺激人脐静脉内皮细胞12 h;MTS法观察HUVECs的生存活性,ELISA法测内皮细胞E-选择素(E-selectin)、细胞间黏附分子(ICAM)-1、组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)表达的变化,比色法测脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与正常组比较,不同浓度的rsh CD40L(0.5、1、2、3 mg/L)对内皮细胞的生存活性无明显影响;0.5 mg/L rsh CD40L即可增加内皮细胞E-selectin、s ICAM-1、TF、TFPI的分泌,差异有统计学意义(P0.01),同时增加内皮细胞MDA的含量、降低SOD活性(P0.05)。结论:0.5~3 mg/L rsh CD40L对内皮细胞生存活性无明显影响,但已经引起内皮细胞功能障碍,增加内皮细胞炎症和外源性凝血反应,诱导内皮细胞脂质过氧化物损,使其抗氧化能力下降。     

青藤碱抑制TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达

目的： 研究青藤碱（SN）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导脐静脉内皮细胞（HUVECs ）VCAM-1表达的影响。方法： 从新鲜脐带中分离培养HUVECs。用TNF-α诱导HUVECs表达VCAM-1，实验组加入不同浓度的SN(0.25、0.5和1.0 mol/L)或地塞米松（1.0×10^-6 mol/L）进行干预，培养12 h后收获细胞，用实时定量PCR检测VCAM-1 mRNA的表达，用流式细胞仪检测细胞表面VCAM-1表达。结果： TNF-α可诱导VCAM-1 mRNA和VCAM-1的表达。进行药物干预后，各干预组相对VCAM-1 mRNA表达有不同程度下降(P<0.05)。SN（1.0 mol/L）和SN（0.5 mol/L）干预组细胞表面VCAM-1表达下降(P<0.05)。SN（0.25 mol/L）和地塞米松（1.0×10^-6 mol/L）干预组未显示对TNF-α 诱导的VCAM-1表达有抑制作用。结论： SN可抑制TNF-α诱导的脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达。     

氯化高铁血红素对血管内皮细胞Erk1/2磷酸化的诱导及维持作用研究

目的： 探讨氯化高铁血红素（hemin）是否可诱导人脐静脉内皮细胞Erk1/2的磷酸化，以及对磷酸化Erk1/2的维持时间。 方法： 人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分别给予不同浓度的氯化高铁血红素或100 μmol/L H₂O₂刺激，收集不同时段的细胞，采用Western blotting测定细胞中总Erk1/2和磷酸化Erk1/2的表达。 结果： 氯化高铁血红素在1-10 μmol/L浓度范围内可诱导HUVECs Erk1/2的磷酸化，且可长时间维持Erk1/2的磷酸化，然而当氯化高铁血红素浓度≥25 μmol/L时，对HUVECs Erk1/2的磷酸化作用减弱甚至消失。H₂O₂对照组作用于HUVECs时仅引起Erk1/2短暂的磷酸化。 结论： 氯化高铁血红素可诱导并维持HUVECs Erk1/2长时间的磷酸化，提示对 Erk1/2 的磷酸化可能是氯化高铁血红素的作用机制之一。     

Expression of leukocyte-endothelial cell adhesion molecules on monocyte adhesion to human endothelial cells on plasma treated PET and PTFE in vitro

We used a coculture model to evaluate the inflammatory potential of ammonia gas plasma modified PET and PTFE by flow cytometry and immunohistochemistry. In these studies, human endothelial cells from umbilical cord (HUVEC) and promonocytic U937 cells were used. HUVECs grown on polystyrene tissue culture coverslips and HUVECs stimulated with tumour necrosis factor (TNF-) were used as controls. U937 adhesion to endothelium on each surface was evaluated at day 1 and day 7. To further investigate the role of leukocyte–endothelial cell adhesion molecules (CAMs) in cell-to-cell interaction on material surfaces, the expression of the leukocyte–endothelial CAMs: ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1, and E-selectin on HUVECs were evaluated after U937 cell adhesion. The results demonstrated that plasma treated PET (T-PET) and treated PTFE (T-PTFE) did not increase U937 cell adhesion compared to the negative control. Maximal adhesion of U937 cells to HUVEC was observed on TNF- stimulated endothelium with significant differences between day 1 and day 7, which is consistent with our prior observation that T-PET and T-PTFE did not cause HUVECs to increase the expression of adhesion molecules. After U937 cell adhesion, the expression of ICAM-1 and VCAM-1 of HUVECs were not different on T-PET and T-PTFE compared with the negative control. However, the expression of E-selectin was reduced on day 1, but not on day 7. The effects of plasma treated PET and PTFE on HUVEC adhesion and proliferation were also studied. On day 1 there were slight increases in the growth of HUVECs on both of T-PET and T-PTFE but this was not statistically significant. On day 7, the cell number increased significantly on the surfaces compared to the negative control. The results demonstrate that the plasma treatment of PET and PTFE with ammonia improves the adhesion and growth of endothelial cells and these surfaces do not exhibit a direct inflammatory effect in terms of monocyte adhesion and expression of leukocyte–endothelial CAMs. The monocyte adhesion to endothelial cells on surfaces can be used as a tool for the evaluation of material surface modification and further to study the mechanisms of cell-to-cell interactions in response to surfaces.     

植物雌激素α-玉米赤霉醇对HUVEC低氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇（ZAL）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）低氧/复氧损伤的保护作用及其机制。 方法:低氧(93%N₂-5%CO₂-2%O₂)环境中培养HUVECs 3 h后再恢复正常氧供应1 h。用MTT法检测细胞存活率, 分光光度法测定细胞培养上清液中LDH、SOD活性及MDA含量。 结果:HUVECs经低氧/复氧处理后,细胞存活率及SOD活性显著低于对照(P<0.01), LDH活性及MDA含量显著高于对照(P<0.01)；经不同浓度(10-9-10-6 mol/L)的ZAL或雌二醇（E₂）预处理后, 均可显著缓解上述改变，此作用为剂量依赖性，同浓度ZAL与E2的作用无显著差异。 结论:ZAL对低氧/复氧损伤的HUVECs可产生与E2类似的保护作用, 机制可能与促进自由基清除而减轻细胞氧化应激损伤有关。     

Expression of leukocyte adhesion molecules by endothelial cells seeded on various polymer surfaces

Although endothelial cell seeding in small-diameter vascular prostheses significantly improves graft survival, the detachment of adherent endothelial cells after the restoration of circulation remains one of the major obstacles. Because in vivo experiments indicate that leukocyte infiltration is involved in endothelial cell loss, we hypothesize that seeded endothelial cells become activated and express leukocyte adhesion molecules and cytokines because of an interaction with the underlying polymer surface. The aim of this study was to investigate the expression of the leukocyte adhesion molecules ICAM-1, VCAM-1, PECAM-1, and E-selectin by cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and human adipose microvascular endothelial cells (HAMVECs). The cells were seeded on tissue culture poly(styrene) and the vascular graft materials Dacron and Teflon. The results of this study indicate that the expression of leukocyte adhesion molecules by cultured endothelial cells is mainly affected by the endothelial cell origin, that is, umbilical vein or adipose tissue. Expressions of both ICAM-1 and E-selectin by HUVECs and HAMVECs are characterized by the presence of two cell populations with distinct levels of expression. With respect to endothelial cell seeding in vascular prostheses, the increased expression of E-selectin by microvascular endothelial cells deserves further attention.     

Lymphocyte-facilitated tumour cell adhesion to endothelial cells: the role of high affinity leucocyte integrins

AIM: Lymphocytes transiently express an active form of the beta_2 integrin LFA-1 (LFA-1Af) which has conformational changes in extracellular domains enabling higher affinity binding to the ligand ICAM-1. In this study, we investigated the role of lymphocytes bearing LFA-1Af as potential mediators of binding of ICAM-1-positive tumour cells to endothelium. METHODS: LFA-1 expression on 51Cr-PBLs was modulated in order to express high affinity LFA-1Af and conjugates were formed with 35S-labelled COLO526. The binding of the conjugates to resting or IL-1beta-stimulated human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) was then assessed via a modified radioactive HUVEC binding assay. In addition, the binding of PBL-COLO526 conjugates to HUVECs was demonstrated by confocal microscopy. RESULTS: The binding of COLO526 to endothelial cells did not change significantly between unstimulated and stimulated HUVECs. In addition, pre-incubating the COLO526 with fresh PBLs did not significantly alter the binding of COLO526 to resting or activated HUVECs; whereas, in the presence of PBLs with LFA-1Af, the COLO526 conjugate binding dramatically increased from basal levels to 41% on resting HUVECs and 81% on stimulated HUVECs. COLO526-PBL(LFA-1Af) conjugate adhesion to stimulated HUVECs was inhibited by blocking antibody to LFA-1 (50%), VLA-4 (32%) or L-selectin (40%). Antibodies to the HUVEC adhesion molecules ICAM-1, VCAM-1 and E-selectin also inhibited COLO526-PBL(LFA-1Af) conjugate binding to activated HUVECs by 79, 60 and 73%, respectively. CONCLUSIONS: PBLs bearing LFA-1Af can enhance COLO526 adhesion to both resting and activated HUVECs. Furthermore, blocking studies demonstrate that a range of pathways are involved in this phenomenon (LFA-1/ICAM-1, VLA4/VCAM-1, L-selectin/E-selectin). These studies have identified a novel alternative pathway for lymphocyte-facilitated tumour cell adhesion to endothelial cells.