高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织颗粒酶b表达的影响

目的 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织颗粒酶b的表达及高压氧(HBO)的治疗作用.方法 110只7 d龄SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、HIBD组(n=50)及HBO治疗组(n=50).采用经典的Rice法制作缺氧缺血性脑损伤模型.应用免疫组织化学法检测颗粒酶b表达变化及应用Epics XL流式细胞仪检测伤侧脑组织细胞凋亡情况.结果 缺氧缺血后6 h,HIBD组和HBO组伤侧脑组织颗粒酶b表达水平和细胞凋亡率即明显升高,于1 d达到峰值后开始下降,至7 d仍明显高于假手术组(P<0.05).HBO组伤侧大脑中颗粒酶b表达水平及细胞凋亡率在缺氧缺血后12 h和1、3、7 d均明显低于HIBD组(P<0.05).结论 新生大鼠HIBD后颗粒酶b表达增加;HBO可抑制新生大鼠HIBD后颗粒酶b的表达,减少缺氧缺血后神经元凋亡的发生,发挥脑保护作用.     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠细胞凋亡及Caspase-3 mRNA表达的影响

目的　探讨高压氧 (HBO)对缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生大鼠细胞凋亡及半胱天冬酶 -3m RNA(Caspase- 3m RNA)表达的影响 ,并探讨其可能的机制。方法　健康新生 7d龄 SD大鼠随机分为正常对照组 (CON组 ,n=8) ,左颈总动脉结扎 HIBD组 (n=8)及 HIBD+HBO治疗组 (简称 HBO组 ,n=8)。用免疫组化及原位杂交方法检测各组细胞凋亡及 Caspase- 3m RNA的表达情况。结果　TU NEL 免疫组化结果显示 :CON组的左脑及 HIBD组的右脑未见或偶见阳性细胞 ,HIBD组大鼠左脑组织各个部位均可见到阳性凋亡细胞 ,经 HBO治疗者左脑阳性细胞比未治疗者减少 [(2 5 2 .96± 6 8.5 9)vs(342 .2 4± 74 .16 ) ],差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。Caspase- 3m RNA原位杂交检测结果显示 :CON组无或仅少量阳性细胞出现 ,HIBD组和 HBO组脑皮质、纹状体及海马均可见 Caspase- 3m RNA阳性细胞表达 ,但 HBO组信号明显减少。结论　与 CON组比较 ,HIBD组病变侧脑组织阳性凋亡细胞数增多及Caspase- 3m RNA的表达增强 ;经 HBO治疗后 ,与不经 HBO治疗的 HIBD组比较 ,病变侧脑组织阳性凋亡细胞明显减少 ,Caspase- 3m RNA的表达明显减弱 ,提示 HBO可能通过抑制 Caspase- 3m RNA的表达 ,起到减少细胞凋亡、保护神经元的作用。     

盐酸纳美芬对大鼠颅脑创伤后Survivin表达的影响

目的观察盐酸纳美芬对大鼠颅脑创伤后生存素(Survivin)表达的影响,探讨其脑保护机制。方法 78只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=6)、颅脑创伤组(n=36)及纳美芬治疗组(n=36)。采用自由落体法建立大鼠颅脑创伤模型,应用Epics XL流式细胞仪检测细胞凋亡情况并应用免疫组织化学法检测Survivin和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达变化。结果与假手术组相比,颅脑创伤组细胞凋亡率及Survivin、Caspase-3蛋白表达水平明显升高。盐酸纳美芬可促进Survivin表达,并通过相关性分析,其表达水平和Caspase-3表达具有负相关性。结论盐酸纳美芬可能通过增加抗凋亡蛋白Survivin表达来抑制Caspase-3激活,减少颅脑创伤后细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

Survivin和Caspase-3在大鼠颅脑损伤中的作用

目的：探讨大鼠颅脑损伤后Survivin蛋白表达和Caspase-3活性变化的规律和意义。方法：42只Wistar大鼠随机分为对照组（n=6）与损伤组（n=36）。采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型，分别于伤后不同时间点，应用免疫组织化学法检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化，利用分光光度法测定Caspase-3活性变化，应用流式细胞仪检测神经细胞凋亡情况。结果：与对照组相比，Caspase-3活性、细胞凋亡率及Caspase-3、Survivin蛋白表达在大鼠脑损伤后均显著升高（P〈0．01）。通过相关性分析，大鼠脑损伤后脑组织Caspase-3的活性与细胞凋亡率具有正相关性（P〈0．01），而和Survivin表达具有负相关性（P〈0．01）。结论：大鼠颅脑损伤后，Survivin表达增加可下调Caspase-3的活性，减少细胞凋亡。     

不同时间窗高压氧联合鸢尾素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB信号通路的影响

目的分析不同时间窗高压氧(HBO)联合鸢尾素治疗对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马神经元细胞凋亡及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)信号通路的影响。方法选取7日龄新生SD大鼠36只, 采用随机数字表法分为H0、H1、H2、H3、H4、H5组, 每组各6只, 除H0组外均建立HIBD模型, 其中H2、H3、H4、H5组分别在HIBD后6、24、48、72 h予以HBO联合鸢尾素治疗。分别采用苏木精-伊红染色(HE)、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)观察海马组织形态和神经元细胞凋亡率, 采用逆转录聚合酶链反应及Western blotting法分别测定BDNF和TrkB的基因及蛋白表达水平。结果与H0组比较, 其余各组海马神经元细胞受损较严重, 大量神经元细胞发生凋亡, 其中H1组损伤最明显;H2组神经元细胞凋亡率高于H0组, 但低于H1、H3、H4、H5组;H4、H5组神经元细胞凋亡率高于H0、H2、H3组, 低于H1组, 差异均有统计学意义(P<0.05)。H2组BDNF和TrkB的基因及蛋白表达水平均高于H1、H3、H...     

神经细胞凋亡与缺氧缺血性脑损伤

为加强对神经细胞凋亡及凋亡相关因子在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的认识,作者查阅了近年来27篇相关文献,对神经细胞凋亡与HIBD,凋亡相关因子(Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白家族、Caspase-3与Bcl-2、Bax的关系)、神经细胞凋亡的机制(钙超载、线粒体损伤、氧自由基和兴奋性氮基酸的毒性作用)作了介绍。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及炎性因子的影响

目的 探讨高压氧对缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)大鼠神经细胞凋亡以及炎性细胞因子水平的影响.方法 成年雄性SD大鼠42只,随机分为对照组(6只)、空气加压组(18只)和高压氧(hyperbaric oxyen,HBO)治疗组(18只).采用Pulsineli法制作脑缺血大鼠模型.HBO治疗组第1、3、5天分别给予HBO治疗,1次/d.应用TUNEL染色检测大鼠海马神经元数量,同时检测大鼠细胞因子TNF、IL-1β和IL-6水平.结果 HBO治疗能有效抑制脑缺血引起的细胞因子TNF、IL-1β、IL-6释放(P<0.05或0.01),并减轻大鼠海马区神经元损伤,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 HBO治疗可以有效抑制炎性细胞因子的释放,从而保护脑缺血后神经细胞.     

NF-kB抑制与X射线诱导的人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨NF-kB p65对X射线诱导人非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法 以NF-kB p65抑制剂quinazoline (QNZ)处理人NHL细胞.将NHL细胞株Namalwa、Ramos和Raji细胞分为空白对照组、单纯照射组(IR)和X射线+QNZ实验组( IR+ QNZ),采用Annexin-V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用Western blot方法检测各细胞株中Survivin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3的表达水平;应用实时定量PCR方法检测Survivin mRNA水平.结果 应用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,结果显示,QNZ处理后进行照射与单纯照射组相比凋亡细胞明显增加,且具有药物浓度依赖性(t=2.93～12.52,P＜0.05),Western blot法检测结果显示,电离辐射可显著增加人NHL细胞中Survivin蛋白的表达.而应用1、10和50 nmol/L QNZ处理人NHL细胞24 h后进行照射,可显著下调电离辐射所诱导的NHL细胞中的Survivin蛋白表达.随药物浓度增加其作用更为明显(t=3.29～ 16.72,P＜0.05).同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低,而Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比,差异有统计学意义(t =6.20 ～9.91,P＜0.05).预处理QNZ后射线诱导的3种NHL细胞Survivin mRNA均不同程度下降.结论 抑制NF-kB能够增加X射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平及对凋亡相关蛋白Bcl-2家族的调节有关.     

新生儿缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡及其核素显像实验研究进展

细胞凋亡在新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的发病机制中起着独特的作用。动物实验研究表明,运用核素凋亡显像可以探测HIBD过程中神经元细胞凋亡情况,提示它在神经元凋亡无刨性诊断、治疗评价和预后估计等有着重要的应用前景。     

单次化疗后肿瘤99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Survivin、Caspase-3蛋白表达的相关性研究

目的 评价99Tcm-重组人膜联蛋白Ⅴ(rh-Annexin Ⅴ)显像检测单次化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性,探讨其在肿瘤组织的分布与凋亡调控蛋白Survivin、Caspase-3表达的相关性.方法 采用99Tcm直接标记法标记rh-Annexin Ⅴ,作为核素凋亡显像剂.将小鼠肝癌细胞Hca-F25接种于小鼠右腋窝皮下;区组随机化分为A(对照组,9只)和B(化疗组,10只)组,肿瘤生长至直径约1 cm时,B组一次性接受环磷酰胺腹腔内注射,剂量为按体质量150 mr,/kg,A组注射同体积生理盐水;20 h后2组同时由鼠尾静脉注入99Tcm-rh-AnnexinⅤ;4 h后行SPECT显像并处死、取肿瘤组织,用井型γ闪烁计数器检测荷瘤小鼠肿瘤组织内放射性分布,以每克组织百分注射剂量率(%ID/g)表示.采用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡;采用免疫组织化学SP法检测标本中Survivin、Caspase-3蛋白表达.采用SPSS 10.0软件对数据进行统计学处理.结果 单次化疗后B组肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布[(0.478±0.123)%ID/g]、TUNEL检测阳性细胞数[(18.030±5.600)个/视野]及caspase-3蛋白表达[(3.266±0.482)%]均明显高于A组[分别为(0.332±0.061)%ID/g,(6.744±2.325)个/视野,(2.387±0.387)%],A组Survivin蛋白表达[(4.227±0.636)%]明显高于B组[(3.407±0.519)%],差异有统计学意义(F值依次为10.502,31.507,18.971,9.560,P均＜0.01).相关性研究表明,肿瘤组织的放射性摄取(%ID/g)与TUNEL阳性细胞数呈明显正相关(r=0.858,P=0.000);肿瘤组织内Survivin蛋白表达与Caspase-3蛋白表达呈明显负相关(r=-0.818,P=0.000);肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ分布与Caspase-3蛋白表达呈明显正相关,与Survivin蛋白表达呈明显负相关(P＜0.01).结论 肿瘤组织内99Tcm-rh-AnnexinⅤ的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及Survivin、Caspase-3表达水平的变化.     

急性一氧化碳中毒大鼠脑组织Fas和caspase-3蛋白表达及高压氧的干预作用

目的 观察急性一氧化碳(CO)中毒后大鼠脑组织Fas和caspase-3蛋白表达的改变,为急性CO中毒后迟发性脑病delayed neuropathological sequelae,DNS)的发病机制提供新的证据.方法 50只SD雄性大鼠按数字表法随机分为对照组,染毒后1、3、7 组和高压氧(HBO)治疗7 d组,每组10只.采用HE染色、免疫组织化学染色及Western blot方法,观察染毒后各时间点大鼠脑组织损伤及Fas、caspase-3蛋白表达情况.结果 对照组Fas和caspase-3均表达极低,染毒后1 d,Fas和caspase-3蛋白表达均迅速增加,染毒后3 d达到高峰,3 d与7 d组表达无明显差别,HBO治疗组Fas和caspase-3蛋白表达均较染毒后7 d组显著减少(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05).Fas和caspase-3蛋白表达改变与脑组织损伤程度呈一致变化.结论 Fas蛋白表达和细胞凋亡是CO中毒后DNS的发生机制之一,HBO可能通过减少Fas蛋白表达和抑制细胞凋亡而减轻脑组织的损伤.

Abstract：

Objective To investigate changes in the expression of Fas and caspase-3 in the brain of rats with acute CO poisoning and also to provide new evidence for pathogenic mechanism of delayed neuropathological sequelae (DNS) after CO exposure.Methods Fifty SD male rats were randomly assigned to the control group, the 1, 3, and 7 d CO exposure groups and the 7 d HBO treatment group, each consisting of 10 rats. HE, immunohistochemical staining and Western blot were performed to study the expression of Fas and caspase-3 in the brain tissue, following intoxication at various time points.Results The expression of both Fas and caspase-3 were very low in the control group. One day after CO exposure, the expression of both Fas and caspase-3 increased quickly and reached peak 3 days after exposure. No significant differences in both Fas and caspase-3 expressions could be noted between the 3 d and the 7 d exposure groups. For the HBO treatment group, the expression of both Fas and caspase-3 decreased more significantly (P<0.01) as compared with that of the 7 d exposure group, but was still higher than that of the control group(P<0.05). Changes in the expression of Fas and caspase-3 were closely correlated with the severity of brain injury.Conclusions The expression of Fas and apoptosis might be involved in the mechanism of DNS following CO poisoning. HBO seemed to play an important role in the alleviation of brain damage via decreasing the expression of Fas and inhibiting the apoptosis of cells.     

高压氧预处理对新生大鼠脑缺血损伤的保护作用

目的 观察高压氧预处理后缺氧缺血型脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)新生大鼠脑组织神经干细胞增殖变化以及后期脑发育和功能.方法 将6日龄新生大鼠进行0.25 MPa高压氧预处理150 min,24 h后制作HIBD模型,然后暴露于8%氧、92%氮的混合气中90 min.观察皮层和海马神经干细胞的增殖情况、损伤后大鼠体质量增长率和成年后脑形态,水迷宫检测学习记忆功能.结果 高压氧预处理组神经干细胞增殖显著,发育情况、脑形态和学习记忆功能与HIBD组有显著差异.结论 高压氧预处理可能通过促进神经干细胞增殖发挥对新生大鼠HIBD的保护作用并影响后期脑发育.     

高压氧对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨高压氧对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠32只,分为模型对照组、高压氧暴露组,2组再各分4小组,分别为脑缺血1 h冉灌注后12、24 h,3、5 d组,每组4只.应用线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞再灌注模型(MCAO),并进行高压氧暴露,应用HE染色和细胞凋亡检测,观察神经细胞病理变化和细胞凋亡分布.结果 脑缺血再灌注后12 h即出现神经细胞凋亡表达,随着时间的延长凋亡细胞的数量逐渐增加,至24 h达高峰,以后逐渐减弱,至5 d仍有表达;高压氧暴露组凋亡细胞的数量相对较少,其变化规律与对照组相似,但是同一时间点比较均明显低于对照组.结论 高压氧可以抑制脑神经元细胞凋亡,保护脑神经细胞,有利于促进神经功能恢复.     

高压氧对大鼠脊髓损伤后Fas/Fas1及Caspase-3表达与细胞凋亡的影响

目的 观察高压氧对大鼠脊髓损伤后Fas/Fas1、Caspase-3和凋亡细胞的影响,探讨高压氧治疗脊髓损伤的机制.方法 按照Allen's打击法制备SD大鼠脊髓损伤模型,将20只大鼠损伤后随机分为高压氧组、常氧高压氮组、常压吸氧组和常压空气组,于损伤后6 h开始治疗;1、2、 3、 7、和11 d取材.采用凋亡细胞检测法检测凋亡细胞,免疫组化法检测Fas/Fas1和Caspase-3表达,光镜下观察并计数分析.结果 Fas/Fas1、Caspase-3和凋亡细胞于损伤后1 d即升高,Fas/Fas1和Caspase-3于伤后2 d即达到高峰,细胞凋亡高峰出现在第3天,高压氧组与各组比较,峰值降低且差异有统计学意义(P<0.01).结论 高压氧对大鼠继发性脊髓损伤有保护作用,其作用与下调Fas/Fas1的表达,减少Caspase-3,从而抑制细胞凋亡有关.     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑皮质线粒体生物合成的影响

 目的 观察高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑皮质线粒体生物合成的影响及其相关信号通路。方法 新生7日龄Wistar大鼠48只随机分为假手术组(Sham,16只),HIBD模型组(HIBD,16只)和高压氧治疗HIBD组(HBO+HIBD,16只)。结扎左侧颈总动脉后暴露于92% 氮气和8%氧气缺氧环境中2 h 制备HIBD 模型。HIBD +HBO 组在缺氧缺血后给予高压氧干预,每次持续90 min,每日1次,连续7 d。末次高压氧干预后24 h,每组动物随机抽取8只处死,检测脑皮质COXⅣ、PGC-1α、Tfam和NRF1表达。剩余动物饲养至40日龄进行Morris水迷宫检测。结果 HBO+HIBD组与HIBD组比较,逃避潜伏期显著缩短[(21.49 ±3.77)s vs (42.50±6.46)s,P<0.01],穿越平台次数、COXⅣ、PGC-1α、Tfam和NRF1表达均显著升高[分别为(7.41±1.13)次 vs (5.26±0.78)次,(82.15±14.84)kPa vs (62.83±11.02)kPa,(112.19±18.41)kPa vs (67.26±10.40)kPa,(92.15±13.99)kPa vs (76.40±9.32)kPa和(72.29±12.88)kPa vs (49.28±7.14)kPa,P<0.05~0.01]。结论 高压氧可通过上调PGC-1过-NRF1/Tfam通路促进脑皮质线粒体生物合成,从而改善大鼠HIBD后空间学习记忆能力。     

高压氧对大鼠早期脓毒症膈肌p38促分裂素原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的 观察高压氧对大鼠脓毒症膈肌p38促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路的影响,以探讨其对脓毒症膈肌损伤的保护作用。方法 SPF级成年雄性SD大鼠30只,采用数字表法随机分为A组（假手术组,n=10）、B组(脓毒症组,n=10)及C组（高压氧治疗组,n=10）。其中A组在给予水合氯醛麻醉成功后,从正中线剪开大鼠腹部,然后缝合伤口。B组和C组在麻醉成功后,使用盲肠结扎穿刺(cecal ligation and puncture,CLP)模型将大鼠制成脓毒症动物模型,并且C组在术后立即行高压氧治疗。所有大鼠在术后16 h处死,取左侧膈肌检测肌条收缩力,右侧膈肌检测膈肌肌细胞凋亡率及p38 MAPK蛋白表达。结果 B组与A组比较,膈肌肌细胞凋亡率及p38 MAPK蛋白表达明显上升,肌条收缩力明显下降,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。给予高压氧治疗后,膈肌细胞凋亡率、p38 MAPK蛋白表达及肌条收缩力较脓毒症组明显恢复,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 高压氧能够有效抑制脓毒症时p38 MAPK蛋白的表达,减少膈肌肌细胞凋亡率,从而减轻脓毒症膈肌损伤。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制

目的探讨白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞周期分布：免疫组化法检测Survivin及Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。经白藜芦醇处理Hela细胞后,FCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2／M期细胞比例减少,凋亡率明显高于对照组,并呈剂量依赖性（P〈0．01）;各实验组Heal细胞Survivin的表达均低于对照组,而Caspase-3的表达均高于对照组（P〈0．01）。结论白藜芦醇能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制Survivin的表达、上调Caspase-3的表达有关。     

经鼻腔给予IGF-1对缺血缺氧性脑损伤大鼠caspase-3表达和细胞凋亡的影响

目的探讨经鼻腔给予IGF-1对缺血缺氧性脑损伤大鼠caspase-3表达和细胞凋亡的影响。方法取30只7日龄SD大鼠随机分为3组：假手术组、模型组和实验组,10只／组。模型组和实验组大鼠制成脑缺血缺氧模型;实验组在造模1h后经鼻腔给予50μgIGF-1,模型组和假手术组在造模1h后给予等体积的PBS。1周后处死大鼠,免疫组织化学方法测定caspase-3的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果假手术组大鼠caspase-3阳性细胞显著少于模型组和实验组（P〈0．05）,且实验组caspase-3阳性细胞显著少于模型组（P〈0．05）;假手术组大鼠脑内凋亡细胞显著少于模型组和实验组（P〈0．05）,且实验组凋亡细胞显著少于模型组（P〈0．05）。结论IGF-1经鼻腔给药可以抑制缺血缺氧大鼠脑组织caspase-3的表达,减少神经细胞凋亡,对缺血缺氧性脑损伤具有明显的保护性作用。