重症肌无力伴胸腺瘤患者胸腺组织蛋白4.1R mRNA的表达研究

目的探讨蛋白4.1R在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)伴胸腺瘤患者胸腺组织中的表达情况。方法运用半定量RT-PCR方法检测7例胸腺瘤MG与7例正常对照组胸腺组织中蛋白4.1R的表达。结果胸腺瘤MG组胸腺组织中蛋白4.1R mRNA的相对表达水平为0.84±0.46,与对照组0.43±3.69相比明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论蛋白4.1R在胸腺瘤MG患者胸腺组织中mRNA水平表达异常,可能干扰胸腺细胞的信号传导,从而影响胸腺细胞的增殖和活化,参与了MG的发生。     

重症肌无力P9—ZFD基因片段表达蛋白的研究

目的:探讨P9-ZFD基因片段在人骨骼肌中表达的蛋白质。方法:以MG骨骼肌RNA为模板,扩增编码P9-ZFD片段的cDNA,构建pFT24a-P9-ZFD表达载体,经BL21(DE3)诱导表达P9-ZFD蛋白和组氨酸亲和层析法进行纯化,并制备P9-ZFD抗体。Western blot鉴定MG和对照组骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白组分。结果:骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白质相对分子质量约40000,在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显高于对照组(P<0.001)。结论:骨骼肌中40 000的蛋白是P9-ZFD基因片段的编码产物,该蛋白在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显上调,可能具有重要的病理生理意义。     

细胞周期抑制蛋白P16、P27表达与垂体腺瘤增殖细胞核抗原的关系

目的:探讨P16、P27与增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的关系。方法:应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连结法(SP法)检测43例侵袭性垂体腺瘤和37例非侵袭性腺瘤的P16、P27和PCNA蛋白表达水平,分析P16、P27蛋白表达水平与PCNA蛋白表达之间的相关性。结果:垂体侵袭腺瘤P16、P27蛋白表达较非侵袭组明显减低;复发组P16蛋白表达的阳性率与非复发组之间差异无统计学意义,P27蛋白表达非复发组减低,差异有统计学意义。结果提示在垂体腺瘤发生过程中三者的表达水平可能具有一定程度的相关性。结论:P16、P27蛋白表达异常与侵袭性垂体腺瘤的PCNA有关。     

100例脑肿瘤中p53基因突变与P53蛋白积聚的研究

目的:研究不同类型脑肿瘤中的p53基因突变与P53蛋白积聚及其相关性。方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析及免疫组化法检测100例脑肿瘤p53基因突变及蛋白表达。结果:p53基因突变率为11%(11/100),其中高恶度胶质瘤为37.5%(6/16),低恶度胶质瘤4.3%(1/23),脑膜瘤6.9%(2/29),转移瘤40.0%(2/5)。P53蛋白表达阳性率为22%(22/100),其中高恶度胶质瘤为62.5%(10/16),低恶度胶质瘤为26.1%(6/23),脑膜瘤10.3%(3/29),转移瘤60%(3/5);其他肿瘤均未发现p53基因突变或蛋白表达。P53蛋白表达阳性的22例中伴有p53基因突变者11例,多见于高恶度肿瘤。结论:p53基因失活在脑肿瘤恶性进展过程中起重要作用。p53基因突变与P53蛋白积聚相关,但并非唯一因素。     

重症肌无力胸腺和外周血抗原特异性单个核细胞IFN-γ、IL-4的转录及表达

目的为了解重症肌无力(MG)胸腺细胞免疫状态,对10例行胸腺摘除(Tx)的MG患者及4例先天性心脏病行开胸手术患者的胸腺和外周血单个核细胞经特异性抗原乙酰胆碱受体(AChR)刺激后,其细胞IFN-γ和IL-4的mRNA转录和细胞培养上清液中的蛋白表达情况进行了检测.方法采用RT-PCR结合狭缝印迹杂交检测IFN-γ、IL-4 mRNA转录,采用ELISA检测IFN-γ和IL-4的表达情况.结果 10例MG患者的胸腺和外周血单个核细胞经AChR刺激后IFN-γ和IL-4的mRNA转录增高,其中8例胸腺增生者胸腺细胞和外周血细胞的IFN-γ mRNA转录、外周血细胞的IFN-γ表达均高于健康对照组(P＜0.05);胸腺细胞IL-4 mRNA转录和表达均高于健康对照,差异有显著性(分别为P＜0.01和P＜0.05),而外周血细胞IL-4 mRNA转录和表达与健康对照差异无显著性(P＞0.05);另2例伴胸腺瘤者,此两种细胞因子无论mRNA转录还是蛋白表达均很低.外周血细胞与胸腺细胞IL-4 mRNA转录有一定的相关性,基本反映胸腺的免疫学变化.结论胸腺增生MG患者的细胞免疫(Th1和Th2)高度活跃,PBMC的有些免疫学参数能反映MG患者胸腺的免疫学改变,但有待进一步累积更多资料.伴胸腺增生与伴胸腺瘤的MG发病机制可能不同,Tx是必要的.     

胸腺瘤患者胸腺淋巴细胞Fas表达与重症肌无力的相关性

目的 探讨胸腺瘤患者发生重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的机制及Fas基因在MG发病中的作用.方法 收集131例胸腺瘤患者,按是否合并MG分为合并MG组(70例)和不合并MG组(61例)两组.应用免疫组织化学、蛋白电泳、聚合酶链反应和酶联免疫吸附等方法检测两组患者胸腺淋巴细胞Fas蛋白表达和血清可溶性Fas(sFas)水平,应用DNA测序技术检测Fas基因结构变异.结果 胸腺瘤合并MG组患者胸腺淋巴细胞Fas表达水平明显低于胸腺瘤不合并MG组,sFas含量[(3879.06±706.51) pg/mL]明显高于胸腺瘤不合并MG组[(1868.18±391.46) pg/mL] (P＜0.01);胸腺瘤合并MG组胸腺淋巴细胞Fas基因第6外显子16和21位点T→G置换突变发生率分别为65％和75％,明显高于胸腺瘤不合并MG组(两位点均为5％)(P＜0.05).结论 胸腺淋巴细胞Fas基因外显子6某些位点发生突变,所编码的Fas蛋白跨膜区变异或缺乏跨膜区而导致Fas结构和功能的改变可能是MG发生的主要原因.     

T细胞活化核因子5与胸腺瘤合并重症肌无力的相关性研究

目的 T细胞活化核因子5(NFAT5)具有促进T细胞发育和激活T细胞作用,通过诱导不同靶基因实现免疫调节功能。该研究旨在探讨NFAT5与胸腺瘤合并重症肌无力(MG)的相关性及其作用机制。方法免疫组织化学(IHC)检测NFAT5在胸腺瘤中蛋白表达与是否合并MG有关。通过生物信息网站预测NFAT5的微小RNA(miRNA)及下游靶基因,应用RT-q PCR与IHC在临床病理样本中对miRNA和靶基因进行验证。结果应用IHC在56例胸腺瘤石蜡标本中检测NFAT5,NFAT5在单一胸腺瘤组(T组,32例)阳性率高于伴MG胸腺瘤组(MT组,24例),差异具有统计学意义(P=0.006)。通过生物信息网站预测NFAT5的microRNA和下游基因,得出NFAT5的下游基因为CD4,miRNA-17-5p靶向调控NFAT5。在10例胸腺瘤石蜡标本中(T组5例;MT组5例),通过RT-q PCR检测miRNA-17-5p,结果显示miRNA-17-5p在T组表达低于MT组,差异有统计学意义(P=0.033)。在56例胸腺瘤石蜡标本中,应用IHC检测到CD4在T组阳性率高于MT组,差异有统计学意义(P=0.034)。在T组和MT组中,NFAT5与CD4表达均呈正相关(P0.05)。结论 NFAT5在T组中的表达高于MT组,说明NFAT5在胸腺瘤中对MG发病起到一定抑制作用。miRNA-17-5p可能在胸腺瘤微环境中靶向抑制NFAT5,从而抑制CD4+T细胞表面的CD4,减少CD4+T细胞反应,促进MG的发生。     

P16与P53蛋白在脑胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨P16与P53蛋白在人脑胶质瘤中的表达及与病理分级的关系。方法:采用免疫组化方法检测52例胶质瘤手术标本及2株人脑胶质瘤细胞系中P16与P53蛋白的表达状况,并分析其与该类肿瘤病理级别的关系。结果:随胶质瘤病理级别的升高P16蛋白的表达率逐渐降低,Ⅰ～Ⅳ级阳性率分别为75.0％、64.7％、42.8％和33.3％,低度恶性组(Ⅰ～Ⅱ级)与高度恶性组(Ⅲ～Ⅳ级)间有显著差异(P<0.05)。P53蛋白表达率随胶质瘤病理级别的升高有上升趋势。结论:P16及P53基因表达在胶质瘤恶性演变中有重要意义。     

全身型重症肌无力患者异常胸腺microRNA表达谱的初步研究

目的比较全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)患者异常胸腺(胸腺瘤、胸腺增生)与正常胸腺microRNA(miRNA)表达谱的差异,以探讨胸腺miRNA在重症肌无力发病机制中的作用。方法应用RiboArrayTMmiRNA芯片检测技术分别比较GMG伴胸腺瘤(4例)、胸腺增生(4例)患者胸腺与正常对照(4例)胸腺miRNA表达谱的差异,并利用生物信息学预测可能受其调控的靶基因。结果 GMG胸腺瘤组、GMG胸腺增生组与正常对照组之间胸腺miRNA聚类分析树状图差异明显;GMG胸腺瘤组较正常对照组显著差异表达的胸腺miRNA共有16个,其中14个下调,下调最显著的为hsa-miR-362-3p,2个上调,上调最显著的为hsa-miR-125a-5p;GMG胸腺增生组较正常对照组显著差异表达的miRNA共有38个,其中下调者37个,下调最显著的为hsa-miR-548av-3p,上调者1个,为hsa-miR-4442。结论异常表达的胸腺miRNA可能在重症肌无力发病中起作用。     

血清AChRab、PsMab和CAEab检测在胸腺异常患者中的诊断意义

目的探讨血清抗乙酰胆碱受体抗体(AChRab)、抗突触前膜抗体(PsMab)和柠檬酸提取物相关抗体(CAEab)在胸腺异常患者中的诊断价值。方法回顾性收集2009—2016年作者医院收治的经病理检查证实存在胸腺异常的患者152例,同时收集健康体检者45名(NC组)和其他神经系统疾病患者35例(OND组)作为对照组。采用ELISA方法检测各组AChRab、PsMab和CAEab水平,比较各组不同抗体阳性率的差异,并进一步比较不同胸腺异常者间各抗体阳性率差异。结果 (1)胸腺瘤、胸腺增生组血清AChRab、PsMab和CAEab阳性率明显高于NC及OND组(均P0.01),且胸腺瘤组上述3种抗体阳性率高于胸腺囊肿组(P0.01或P0.05)。胸腺囊肿组与NC及OND组各抗体阳性率比较无统计学差异(P0.05)。CAEab对胸腺瘤患者诊断灵敏度为60.6%,特异度为88.8%。(2)重症肌无力合并胸腺瘤(MGT)组PsMab阳性率高于非合并MG胸腺瘤(NMGT)组(P0.05),而其AChRab及CAEab阳性率与NMGT组比较无统计学差异(P0.05)。(3)MGT组中,MGT-全身型组血清AChRab阳性率较MGT-眼肌型组增高(P0.05)。(4)胸腺瘤不同病理分型患者间各抗体阳性率比较无统计学差异(均P0.05)。结论 (1)CAEab检测结合CT检查可作为临床可疑胸腺瘤、胸腺增生患者术前辅助诊断指标之一。(2)AChRab阳性可能与MGT患者重症肌无力严重程度有关,PsMab阳性可能跟MGT患者致病有关。     

P53蛋白在脑胶质细胞瘤中的表达

用SP免疫组化方法检测79例脑胶质细胞瘤中P53蛋白的表达,总阳性率为21.52%.其中星形细胞瘤及室管膜瘤阳性率分别为26%及25%,且Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率及表达量均显著高于Ⅰ、Ⅱ级肿瘤.表明P53蛋白的表达与这两型肿瘤的恶性程度密切相关.但临床上恶性程度很高的髓母细胞瘤反而未见表达.     

脑肿瘤中P53蛋白的表达及Ki－67LI的相关性研究

利用突变型Ｐ５３蛋白的单抗及Ｋｉ－６７单抗对５０例冰冻标本进行检测，结果发现，脑肿瘤中突变型Ｐ５３蛋白的表达阳性率为４６％。低恶度胶质瘤、高恶度胶质瘤及转移癌中Ｐ５３蛋白表达的阳性率不同，分别为１８．２％、５３．８％及１００％。Ｐ５３蛋白表达阳性的肿瘤中高Ｋｉ－６７ＬＩ比例为７０％，其中位数及均数为１４．３％、２０．７６±１８．３（％），而无Ｐ５３蛋白表达的脑瘤中，ｋｉ－６７ＬＩ中位数及均数分别为１．３９及５．１９±９．０（％）。结果表明，突变型Ｐ５３蛋白的表达与脑肿瘤的组织类型，分化程度及细胞的增殖有关，而它的高表达又可能是肿瘤恶性表型或转移的标志之一。     

人脑胶质瘤P53、Bax蛋白表达变化及其与病人预后的关系

目的 探讨人脑胶质瘤组织P53、Bax蛋白变化及其与病人预后的关系。方法 选取2016年4月~2018年4月术后病理确诊的脑胶质瘤组织94例,选取同期颅脑损伤内减压术切除正常脑组织90例为对照组。采用免疫组化染色检测P53、Bax蛋白表达水平。随访2年记录总生存率。结果 脑胶质瘤组织P53蛋白表达阳性率（62.77%,59/94）明显高于对照组（15.56%,14/90;P<0.05）,而Bax蛋白表达阳性率（28.72%,27/94）明显低于对照组（68.89%,62/90;P<0.05）。低级别胶质瘤P53蛋白表达阳性率（40.0%,18/45）明显低于高级别胶质瘤（83.67%,41/49;P<0.05）,而Bax蛋白表达阳性率（55.56%,25/45）明显高于高级别胶质瘤（16.33%,8/49;P<0.05）。P53蛋白与胶质瘤病理级别呈正相关（r=0.745,P<0.05）,而Bax蛋白与胶质瘤病理级别呈负相关（r=-0.787,P<0.05）。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示P53表达阳性、Bax表达阴性是胶质瘤病人生存期较短的独立危险因素（P<0.05）。P53阳性表达胶质瘤病人2年累积生存率（69.49%,41/59）明显低于阴性表达组（88.57%,31/35;P<0.05）,Bax阳性表达胶质瘤病人2年累积生存率（92.59%,25/27）明显高于阴性表达组（70.15%,47/67;P<0.05）。结论 脑胶质瘤P53呈高表达,Bax呈低表达,二者与脑胶质瘤恶性程度有关,对脑胶质瘤预后评估有重要意义。     

胶质瘤中P53、EGFR、Ki-67及MGMT 的表达及临床意义

目的 探讨不同级别胶质瘤中P53、EGFR、Ki-67 及MGMT 的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测152 例胶质瘤中P53、EGFR、Ki-67 及MGMT 表达,统计分析上述蛋白的表达差异.结果 P53 在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为71.4%,73.1%和60.0%.95 例EGFR 阳性,其阳性表达率与染色强度均与病理级别呈正相关(P ＜0.01).Ki-67 均为阳性表达,Ki-67LI 在高级别胶质瘤中明显高于其在低级别胶质瘤中的表达水平(P ＜0.01).MGMT 阳性84 例,阴性68 例,在低级别胶质瘤和高级别胶质瘤之间的MGMT 表达无明显差异(P ＞0.05).结论 EGFR 和Ki-67 表达与肿瘤病理级别呈正相关,与胶质瘤恶性进展及预后差密切相关.P53 和MGMT 与肿瘤病理级别无明显相关性.检测有助于评估胶质瘤侵袭能力、增殖性,预测胶质瘤对放、化疗敏感性及判断分子靶向药物治疗是否有效.     

胸腺瘤组织发生学分类研究

目的　研究M櫣ｌｌｅｒ Hermelink组织发生学分类及其临床意义。方法　 76例胸腺瘤采用M櫣ｌｌｅｒ Hermelink分类方法进行分类 ,分析胸腺瘤类型与伴发重症肌无力、浸润性及患者预后关系。结果　髓质型和混合型胸腺瘤大多包膜完整 (72 % ) ,仅少数病例 (2 8% )浸润包膜或周围脂肪组织 ;皮质为主型胸腺瘤中度浸润 ;皮质型胸腺瘤和分化良好胸腺癌浸润性较大 ,56 %浸润周围器官 ,2 0 %浸润包膜或周围脂肪组织 ,仅 2 4 %包膜完整 ;其它类型胸腺癌均浸润周围器官、胸腔内或淋巴转移。皮质型胸腺瘤和分化良好胸腺癌较髓质型和混合型更易伴发重症肌无力 (分别为 92 %和 32 % ,P <0 0 5)。髓质型和混合型患者生存期较皮质型胸腺瘤和分化良好胸腺癌明显长 (5年生存率分别为 87 5%和 54 5% ,P <0 0 5)。结论　胸腺瘤类型与肿瘤浸润、伴发重症肌无力和预后明显相关。     

视网膜母细胞瘤中MDM2、P16和P53的表达及其意义

目的 研究P16、P53和癌基因MDM2在视网膜母细胞瘤的表达作用。方法 对已明确诊断的42例视网膜母细胞瘤标本采用免疫组织化学方法检测P16、P53和MDM2表达。结果 42例标本中P16、P53和MDM2阳性检出率分别是35．7％、69．1％和38．1％，P53和MDM2的共表达率为23．8％。结论 P16、P53和MDM2在视网膜母细胞瘤的产生和发展过程中起重要作用。     

Correlation between histological grade and MIB-1 and p53 immunoreactivity in meningiomas

OBJECTIVE: Meningiomas for the most part are slow-growing benign tumors, but complete removal can be difficult and recurrence is an issue. The aim of this study was to re-evaluate tumors diagnosed as meningioma previously in our hospital, according to the latest World Health Organization classification. We also examined the relationships among parameters such as brain invasion, histological grade and Ki-67 and p53 expression in these tumors. MATERIALS AND METHODS: Meningioma biopsy specimens numbering 60 (48 grade I, 11 grade II, and 1 grade III tumors) were examined immunohistochemically using monoclonal antibodies for Ki-67 (MIB-1) and p53 protein. The MIB-1 labeling index (LI) for each tumor was calculated as a percentage based on the number of stained cells per total cells counted. The level of p53 expression in each sample was semiquantatively evaluated as < 1%, 1 - 10%, 10 - 70%, or > 70%. Any value > 1% was accepted as presence of p53 expression. RESULTS: Of the 60 meningiomas, 7 (11.7%) exhibited brain invasion. The mean MIB-1 LI values for the grade I and grade II tumors were 1.1% and 2.3%, respectively. The corresponding levels of p53 protein expression in these groups were 54.1% and 72.7%. The MIB-1 LI and the level of p53 expression in the one grade III meningioma were 6.7% and 10 - 70%, respectively. Histological grade was significantly correlated with MIB-1 LI and with p53 expression (p < 0.01 for both). Brain invasion was not correlated with histological grade, MIB-1 LI, or p53 expression. CONCLUSION: The results indicate that MIB-1 LI and p53 protein expression are good indicators of histological grade in meningioma and may be particularly valuable for distinguishing borderline atypical meningiomas. The number of cases was limited, but the findings also suggest that brain invasion is a prognostic parameter independent of grade, MIB-1 LI and p53 expression.     

p53 protein alterations in adult astrocytic tumors and oligodendrogliomas

BACKGROUND: p53 is a tumor suppressor gene implicated in the genesis of a variety of malignancies including brain tumors. Overexpression of the p53 protein is often used as a surrogate indicator of alterations in the p53 gene. AIMS: In this study, data is presented on p53 protein expression in adult cases (>15 years of age) of astrocytic (n=152) and oligodendroglial (n=28) tumors of all grades. Of the astrocytic tumors, 86% were supratentorial in location while remaining 14% were located infratentorially - 8 in the the cerebellum and 13 in the brainstem. All the oligodendrogliomas were supratentorial. MATERIALS AND METHODS: p53 protein expression was evaluated on formalin-fixed paraffin-embedded sections using streptavidin biotin immunoperoxidase technique after high temperature antigen retrieval. RESULTS: Overall 52% of supratentorial astrocytic tumors showed p53 immunopositivity with no correlation to the histological grade. Thus, 58.8% of diffuse astrocytomas (WHO Grade II), 53.8% of anaplastic astrocytomas (WHO Grade III) and 50% of glioblastomas (WHO Grade IV) were p53 protein positive. In contrast, all the infratentorial tumors were p53 negative except for one brainstem glioblastoma. Similarly, pilocytic astrocytomas were uniformly p53 negative irrespective of the location. Among oligodendroglial tumors, the overall frequency of p53 immunopositivity was lower (only 28%), though a trend of positive correlation with the tumor grade was noted - 25% in Grade II and 31.5% in grade III (anaplastic oligodendroglioma). Interestingly, p53 labeling index (p53 LI) did not correlate with the histopathological grade in both astrocytic and oligodendroglial tumors. CONCLUSIONS: Thus, this study gives an insight into the genetic and hence biological heterogeneity of gliomas, not only between astrocytic tumors vs. oligodendrogliomas but also within astrocytic tumors with regard to their grade and location. With p53 gene therapy trials in progress, this will possibly have future therapeutic implications.