抗人tPA单克隆抗体的制备

目的：制备抗ｔＰＡ单克隆抗体，用于建立ＥＬＩＳＡ方法和研究ｔＰＡ与肿瘤转移的关系。方法：用基因重组的组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔＰＡ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，按常规法作细胞融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选出阳性反应的杂交瘤细胞克隆。结果：获得一株杂交瘤细胞株（２Ｂ７）；其免疫球蛋白亚类为ＩｇＧ１；经ＥＬＩＳＡ法和免疫印迹技术证明，此单抗能特异性识别ｔＰＡ。结论：用２Ｂ７ＭｃＡｂ特异性强，用其建立的夹心ＥＬＩＳＡ检测ｔＰＡ的方法线性较好，灵敏度可达１ｎｇ／ｍｌ。２Ｂ７ＭｃＡｂ可望用于ｔＰＡ与肿瘤转移关系及导向溶栓的研究。     

抗脆弱类杆菌单克隆抗体的研制与鉴定

目的：为了获得高效价和高特异性的抗Ｂｆ抗体。方法：以脆弱类杆菌的标准株免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,采用杂交瘤技术选择能稳定分泌抗脆弱类杆菌的杂交瘤细胞株。结果：建立了３株稳定的杂交瘤细胞株,ＥＬＩＳＡ法测定腹水ＭｃＡｂ效价分别为１：６０００,１：６０００和１：１２０００,敏感性为１０＾２～１０＾３ｃｆｕ,与其它杆菌、梭菌无交叉反应,竞争抑制试验表明３株ＭｃＡｂ作用于细胞表面不同的抗原决定簇。将３株单克隆     

河豚毒素单克隆抗体的制备及特性

河豚毒素（ＴＴＸ）与角孔ｑｉ血蓝蛋白（ＫＬＨ）结合生成完全抗原，用此抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠（５～６周龄），取２只小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ骨髓瘤细胞融合，ＥＬＩＳＡ法检测阳性克隆，共检出５株高效价抗ＴＴＸ阳性克隆细胞，对此抗ＴＴＸ单克隆抗体分析结果表明：（１）单抗对ＴＴＸ有很高的抑制作用。１０＾－９水平的毒素就可抑制单抗５０％左右的Ａ值。（２）抗体属ＩｇＧ１亚类，ＩＣ５０为２．５～５μｍｏｌ／Ｌ。（     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立鼠粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的杂交瘤细胞系。方法将ＳＰ２／０小鼠骨央瘤细胞和用Ｇ－ＣＳＦ免疫的Ｂａｌｂ／ｃＩＨ ＶＮＵＮＥＲＴＦＸＬＥＱＤ 宜５００ＷＴ 进行融合，用ＥＬＩＳＡ进行克隆化筛选并对杂交瘤细胞分泌的单抗滴度进行检测。     

血清肌酸激酶同功酶BB和神经元特异性烯醇酶用于小细胞肺癌的临床价值

用层析荧光法和ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测了２０例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ），３０例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ），２５例良性肺疾病和３０例正常对照者血清中肌酸激酶同功酶ＢＢ（ＣＫ－ＢＢ）和神经元特异性烯醇酶（ＮＳＥ）。结果表明：ＳＣＬＣ组血清ＣＫ－ＢＢ和ＮＳＥ含量高于其它３组（Ｐ＜０．００１）；４组血清的ＣＫ－ＢＢ均值分别为３０．２、８．４、６．３和４．３ＩＵ／Ｌ，ＮＳＥ分别为５２．２、１２．７、１０．３、和９．２ｎｇ／ｍｌ．以９．５ＩＵ／Ｌ（ＣＫ－ＢＢ）和２０．８ｎｇ／ｍｌ（ＮＳＥ）为正常值上限，ＳＣＬＣ组的阳性率分别是７０％（ＣＫ－ＢＢ）和８０％（ＮＳＥ），高于ＮＳＣＬＣ组（Ｐ＜０．００５）。ＳＣＬＣ血清ＣＫ－ＢＢ和ＮＳＥ显著相关（ｒ＝０．７９３４，Ｐ＜０．００１），联合检测可使敏感性提高到９０％，特异性提高到９４％。因此，作者认为血清ＣＫ－ＢＢ和ＮＳＥ可以作为ＳＣＬＣ的诊断指标，联合检测可提高临床应用价值。     

CD23单克隆抗体的研制及其鉴定

目的：制备高度特异性和高纯度的抗ＣＤ２３单克隆抗体（ＣＤ２３ＭｃＡｂ）。方法：用ＥＢＶ感染的人Ｂ淋巴细胞（ＲＰＭＩ－８８６６）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,采用杂交瘤技术,细胞ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ等方法制备、纯化和鉴定了ＣＤ２３ＭｃＡｂ。结果：筛选出了强分泌抗Ｂ细胞膜ＣＤ２３分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（２Ｂ６）。结论：该单抗对Ｍｒ４５×１０３的ＣＤ２３分子反应具有高度特异性。     

膀胱癌患者血清可溶性白细胞介素—3受体及外周血T淋巴细胞…

本文对３４例膀胱癌术前患者应用单抗ＥＬＩＳＡ夹心法检测血清ＳＩＬ２Ｒ，ＡＰＡＡＰ桥联法检测外周血Ｔ淋巴细胞亚群。结果表明：膀胱癌患者血清中ＳＩＬ－２Ｒ含量显著高于正常对照组。春Ｔ淋巴细胞亚群与正常组比较，ＣＤ４细胞显著降低，ＣＤ５细胞则显著增高，ＣＤ４／ＣＤ５比值显著降低。     

卵巢癌抗独特型单链抗体诱导特异性体液免疫应答的动物实验研究

目的：用卵巢癌抗独特型单链抗体６Ｂ１１ｓｃＦｖ代替肿瘤抗原免疫动物，观察是否诱导动物产生特异性体液免疫反应。方法：将６Ｂ１１ｓｃＦｖ交联钥孔虫戚虫血蓝素，辅以弗氏佐剂反复免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗血清。采用间接法ＥＬＩＳＡ，竞争抑制ＥＬＩＳＡ及免疫流式细胞法分析抗血清特性。结果：经ＥＬＩＳＡ检测显示，由６Ｂ１１ｓｃＦｖ刺激产生的抗抗独特型单链抗体（Ａｂ３）能与６Ｂ１１ｓｃＦｖ和卵巢癌组织抗原ＯＣ１６６９特异性结合。竞争抑制ＥＬＩＳＡ表明，Ａｂ３能有效抑制卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６９（Ａｂ１）与ＯＣ１６６９的特异性结合。免疫流式分析结果可见，Ａｂ３能与表达卵巢癌抗原的人卵巢癌细胞系ＯＶ１细胞表面结合而不能与无卵巢癌抗原表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ细胞表面结合。从以上结果可以证明Ａｂ３与Ａｂ１的抗原结合特性相同。结论：６Ｂ１１ｓｃＦｖ能代替卵巢癌抗原诱导动物产生特异性体液免疫反应，具有模拟抗原的作用，为６Ｂ１１ｓｃＦｖ作为卵巢癌抗独特型单链抗体疫苗的实际应用提供依据     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

猪囊尾蚴副肌球蛋白核酸疫苗的免疫保护性研究

研究猪囊蚴副肌球蛋白核酸疫苗诱的免疫应答。方法将ｐｃＤＮＡ３－ＡｇＢ核酸疫苗肌注４－６周龄的昆明种小鼠,从２周后开始用ＥＬＩＳＡ方法小鼠体内ＩｇＧ和ＩｇＧ２ａ的水平。另外将该核酸疫苗注射Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,体外培养小鼠脾细胞,用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和特异性抗原刺激,ＥＬＩＳＡ试剂盒检测细胞因子ＩＬ－２和ＩＬ－４的水平,并观察脾淋巴细胞增殖反应。另外,将该核酸疫苗肌注瘦型仔猪进行攻击实验,计算组对     

HER2/neu抗体对SKBR3乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响(摘要)

研究抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ胞外区的特异性抗体对ＳＫＢＲ３乳腺癌细胞株酪氨酸磷酸化及细胞增殖的影响。方法Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法及抗体介导的特异性细胞增殖试验;筛选乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ的ＥＬＩＳＡ方法。结果试验发现单抗ｃｎｅｕ５对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化有明显促进作用,但对细胞增殖的影响不明显;而单抗ｃｎｅｕ２对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化及细胞增殖均有明显作用。在此基础上,收集乳腺癌病人血清１４份,分离纯化其血清ＩｇＧ,并经ＥＬＩＳＡ方法筛选出５份乳腺癌病人抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体阳性血清ＩｇＧ。细胞增殖试验发现该５份标本中有３份对ＳＫＢＲ３细胞增殖有显抑制作用。选其中１份抑制增殖的阳性血清ＩｇＧ进一步研究其对ＳＫＢＲ３细胞ｐ１８５酪氨酸磷酸化的影响,结果发现该病人血清ＩｇＧ对细胞酪氨酸磷酸化也有抑制作用。结论抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ的特导性抗体可能通过抑制细胞的信号传递系统而抑制肿瘤生长。     

抗胆固醇酯转运蛋白单克隆抗体的制备及其应用

目的：自行制备胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），建立人血清ＣＥＴＰ的酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），调查中国人群ＣＥＴＰ参考值及临床意义。方法：应用杂交瘤技术制备ＣＥＴＰＭｃＡｂ。用棋盘试验确定ＥＬＩＳＡ法的反应条件；进行灵敏度、精密度、回收率、特异性试验。结果：制备出一株特异性好、反应性强的ＣＥＴＰＭｃＡｂ。筛选出ＥＬＩＳＡ法最佳反应条件，样本稀释２０００倍，可检测０．２８～４．５２ｍｇ／Ｌ的血清ＣＥＴＰ水平；平均批内ＣＶ为４．９％，平均批间ＣＶ为１０．２％；平均回收率为９２．５％～９７．２％；特异性高。检测结果同国外实验室ＥＬＩＳＡ法高度相关。１１２８例参考人群血清ＣＥＴＰ浓度为１．８４±１．５５ｍｇ／Ｌ，女性高于男性；随着年龄增高，ＣＥＴＰ浓度降低。冠心病患者ＣＥＴＰ浓度为２．６６±２．０８ｍｇ／Ｌ，较相应对照组显著升高（Ｐ＜０．０１）。结论：该法具有方便、快速、准确、特异等优点，对了解ＣＥＴＰ在动脉粥样硬化发生中的作用有着十分重要的意义。     

PVC薄膜SPA—ELISA诊断包虫病的应用研究

本文以纯化的人肝棘球蚴囊液致敏ＰＶＣ薄膜板，液体的ＨＲＰ－ＳＰＡ为第二抗体，敏感无毒的ＴＭＢ做底物，建立了ＰＶＣ薄膜ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ法，检测７２例手术证实的包虫病患者血清抗体，阳性符合率为９１．１７％（６６／７２），４５例临床确诊的非包虫病人２例呈阳性，６０例健康人均阴性，假阳性率为１．８３％（２／１０５），结果表明该法即保持了经典ＥＬＩＳＡ敏感性高，特异性强的优点，而且操作简单，快速，无毒，省     

抗肺炎衣原体种特异性单抗制备及初步鉴定

以纯化的肺炎衣原体ＡＴＣＣＶＲ１３１０原体兔疫８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，并于第１４天加强免疫，第２４天将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合。杂交瘤细胞进行细胞与克隆的直接选择，在淘汰与沙眼衣原体Ｌ１、Ｌ２、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ鹦鹉热衣原体ＥＡＥ以及未感染的ＢＧＭＫ细胞有交叉反应的克隆后，最终获得２株分泌抗肺炎衣原体种特异性单克隆抗体（ＭＡｂ９）杂交瘤（Ｐ１７Ｃ２和Ｐ３３Ｃ），其免疫球蛋白类型均为ＩｇＧ２ａ。Ｗｅｓｔｅｍ印迹发现两株ＭＡｂｓ均与三个种的衣原体主要外膜蛋白反应，但ｍｉｃｒｏ－ＩＦ显示它们系肺炎衣原体种特异性单抗其腹水ＭＡｂｓ滴度＞１：２５６００。     

CELISA法的建立及其在免疫导向药物制备过程中的应用

用细胞ＥＬＩＳＡ（ＣＥＬＩＳＡ）法测定了导向药物Ｂ１５９－表阿霉素结合物和Ｂ１５９－阿霉素结合物制备过程中含单抗Ｂ１５９腹水、Ｂ１５９纯化物和结合物的抗体活性。结果表明，ＣＥＬＩＳＡ法较活细胞免疫荧光法有更高的敏感性，是导向药物制备过程中鉴定免疫活性的一种稳定、实用、经济而简单的方法。     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

递呈BAC5单抗识别位点的M13噬菌体克隆系的建立

目的：获得可递呈抗低分化和未分化癌细胞单克隆抗体（ＢＡＣ５单抗）抗原表位的Ｍ１３噬体克隆系。方法：以ＢＡＣ５单抗为靶抗体，对由Ｍ１３噬菌体构建的随机１２肽文库进行生物淘洗。用抗体竞争方法从阳性克隆中选出与ＢＡＣ５单抗结合率较高的克隆系。通过ＥＬＩＳＡ方法检测ＢＡＣ５单抗对上述克隆的选择性识别。结果：经过３轮淘洗，获得的阳性克隆率为７７％（３５／４５）。来自Ｃ２、Ｃ１７和Ｃ２９号克隆的噬菌体对外加Ｂ     

肠道腺病毒41型（F亚群）单克隆抗体制备及其鉴定

为了建立一种简便快速的检测肠道腺病毒４１型ＥＬＩＳＡ方法，利用纯化Ａｄ４１抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，将该小鼠脾细胞和ＳＰ２／０细胞融合，通过对阳性克隆株进行筛选、检测和克隆化等，成功地合成了４株Ａｄ４１杂交瘤，并对该杂交瘤进行了系列鉴定。在特异性方面，该杂交瘤株产生的抗体与Ａｄ４１发生阳性反应，在与Ａｄ４０发生部分交叉反应，与对照组的轮状病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒３、７、２１型等病毒无反应。     

抗破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应的研究

采用破伤风类毒素（ＴＴ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇（ＰＥＧ）ＷＭ４０００作用下进行配合，克隆化，通过ＥＬＩＳＡ法及毒素中和新价的检测获得两株（５Ｇ８，６Ｄ９）及多株亚株（５Ｇ８Ａ１０，５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１，５Ｇ８Ｂ９Ｅ１等）有保护作用的细胞株，其中一株经过液氯冻存，复苏仍能正常分泌抗体。     

分泌抗人原发性肝癌单克隆抗体杂交瘤的制备及专一性分析

研制抗人原发性肝癌特异性单抗，为肝癌的导向诊断与治疗奠定基础。用人ＰＨＣ细胞系ＨｅｐＧ２免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，聚其脾细胞与同源骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经间接免疫荧光染色加流式细胞仪筛选及专一性鉴定，单抗经ＰｒｏｔｅｉｎＡ法纯化。用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度测定。