慢性压迫性脊髓损伤神经细胞的变化

目的：观察在慢性压迫性脊髓损伤时，脊髓的一般组织病理变化及脊髓内神经元和神经胶质细胞的凋亡情况。方法：健康家兔16只，随机分为3组：A组为正常对照组；B组为手术对照组；C组为慢性压迫组。采用慢性泛影葡胺胶囊逐级压迫建立慢性脊髓压迫动物模型，造成家兔第2腰髓节段的慢性压迫。用Nissl染色法观察脊髓的一般组织病理学变化，用原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡情况。结果：C组在Nissl染色下白质中神经胶质细胞增生，以后索最明显；灰质中神经元尼氏体淡染或消失，神经元萎缩。灰质中标记细胞主要存在于Ⅰ，Ⅱ板层，压迫区明显，其相邻的首尾端次之。A,B两组的表现正常。结论：慢性压迫性脊髓损伤是导致脊髓一般组织发生病理变化及神经细胞凋亡的重要原因。     

慢性压迫性脊髓损伤神经细胞的变化

①目的观察在慢性压迫性脊髓损伤时，脊髓的一般组织病理变化及脊髓内神经元和神经胶质细胞的凋亡情况。②方法健康家免16只，随机分为3组：A组为正常对照组；B组为手术对照组；C组为慢性压迫组。采用慢性泛影葡胺胶囊逐级压迫建立慢性脊髓压迫动物模型，造成家兔第2腰髓节段的慢性压迫。用Nissl染色法观察脊髓的一般组织病理学变化，用原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡情况。③结果C组在Nissl染色下白质中神经胶质细胞增生，以后索最明显；灰质中神经元尼氏体淡染或消失，神经元萎缩、脱失，以Ⅸ板层最明显。TUNEL标记的阳性细胞为神经胶质细胞，白质中各索均有，以后索和外侧索明显。灰质中标记细胞主要存在于Ⅰ，Ⅱ板层，压迫区明显，其相邻的首尾端次之。A，B两组的表现正常。④结论慢性压迫性脊髓损伤是导致脊髓一般组织发生病理变化及神经细胞凋亡的重要原因。     

坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠相应脊髓背角神经元KATP通道表达的变化

目的 探讨脊髓背角神经元KATP通道(ATP-sensitive potassium channel)在慢性神经病理性疼痛所致机械痛觉超敏中的作用.方法 雄性SD大鼠(体重250～350 g),随机分为两组:坐骨神经慢性压迫性损伤组(chronic constriction injury,CCI组)6只,假手术组(sham组)6只.在术前1 d、术后1、5、10、14 d分别测量各组大鼠机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)的变化,于第14天行灌注固定,取腰段脊髓切片后行KATP通道的免疫组织化学染色,观察各组大鼠腰段脊髓背角神经元KATP通道免疫组织化学染色后积分光密度(IOD)值的变化.结果 坐骨神经慢性压迫性损伤模型大鼠自术后第5天起出现明显的机械性异常性疼痛,持续到术后14 d;而假手术组无明显痛觉过敏表现.术后14 d,坐骨神经慢性压迫性损伤模型组大鼠腰段脊髓背角神经元KATP通道IOD值与假手术组比较明显下降,差异有统计学意义.结论 KATP通道在脊髓背角神经元表达的改变可能与神经病理性疼痛所致机械痛觉超敏的发生机制相关,KATP通道可能成为治疗这类疼痛的靶点.     

慢性压迫性脊髓损伤减压后骨骼肌的变化

目的 :观察慢性压迫性脊髓损伤减压后骨骼肌的微观形态学、凋亡相关蛋白 (Fas,Caspase8)表达及钙泵活性的变化 .方法 :80只Wistar雌性大鼠 ,随机分为正常组、慢性压迫组和减压组 .慢性压迫组及减压组置入平头塑料螺钉对大鼠脊髓进行后路渐进性压迫 ,于 2mo后压迫到 6 0 %左右程度 .慢性压迫组处死大鼠后取腓肠肌作为标本 ;减压组彻底减压后分别于 5 ,10 ,15 ,2 0 ,2 5及 30d取材 .且各组在取材前对大鼠进行运动功能测定 .所有标本做HE染色和Fas,Caspase8免疫组化染色及钙泵活性测定 .并用图像分析仪测定肌细胞直径及截面积和Fas,Caspase8灰度值 .结果 :压迫组的大鼠腓肠肌细胞萎缩、直径变细 (9 9± 1 1μmvs 18 8± 2 7) μm](P <0 0 1)及截面积变小 [(4 6 3± 6 1) μm2 vs (894± 84 )μm2 ](P <0 0 1) ,肌细胞Fas表达增高 (0 0 9± 0 0 2vs0 0 2± 0 0 1) (P <0 0 1) ,Caspase8表达增高 (0 0 7± 0 0 2vs0 0 1± 0 0 1) (P <0 0 1) ,钙泵活性降低 [(0 0 8± 0 0 3)kat·g-1vs (0 16± 0 0 5 )kat·g-1](P <0 0 1) ;而减压后则有明显的恢复 .结论 :慢性压迫性脊髓损伤所导致的骨骼肌退变在减压后有明显的恢复 ,并且与脊髓功能的恢复情况相一致     

大鼠脊髓压迫性损伤后神经细胞的死亡方式

目的：观察实验性脊髓损伤后神经细胞死亡方式。方法：应用凋亡细胞原位末端标记法，ＨＥ染色，对脊髓组织进行定量形态学分析，结果；在脊髓损伤区及相邻区域中发现少量神经元以大量胶质细胞凋亡，结论：脊髓损伤后的神经细胞的凋亡是继发损伤期的重要病理变化。     

大鼠坐骨神经损伤后脊髓P2X3受体变化

目的 研究大鼠坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)后脊髓背角神经元P2X3受体的变化,以探讨P2X3受体在初级中枢中的作用.方法 雄性SD大鼠20只,随机分为正常组、CCI后3、7和14 d组.采用von Frey细丝法检测大鼠机械痛敏压力阈值变化,采用免疫组化技术检测不同时间段大鼠脊髓背角P2X3受体表达的变化.结果 CCI 7和14 d组大鼠术侧足底机械痛阈(PWPT)明显降低;CCI 7和14 d组大鼠术侧腰4～腰5(L4～L5)节段脊髓背角P2X3受体免疫反应阳性显著上升.结论 坐骨神经损伤后L4～L5节段脊髓背角P2X3受体免疫阳性的增加与机械痛敏的增强一致.在神经损伤的病理情况下.P2X3受体可能参与了脊髓中枢疼痛信息的调节.     

Shh mRNA在成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后的表达及其意义

目的:观察成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后与发育相关的重要分子Shh mRNA的表达,探讨其在神经再生过程中的作用.方法:将30只同龄Wistar大鼠置入后路渐进式压迫装置,制作成慢性压迫性脊髓损伤模型.随机分为对照组(5只)和慢性脊髓损伤组(25只).应用原位杂交检测方法,于脊髓损伤后1,3,7,14,28 d对损伤区行Shh mRNA检测.结果:脊髓损伤后7 d,Shh mRNA表达水平达到最大值,在损伤区至远端10 mm处的灰质和白质中均有表达,这种高水平的表达至少维持到损伤后28 d.Shh mRNA在室管膜细胞的表达远远低于在灰质和白质中的表达,其在室管膜区域的表达仅限于损伤区域周围5 mm范围内,分布范围远远小于在灰质和白质中的表达.结论:慢性压迫性脊髓损伤可激活Shh mRNA的表达,其表达对脊髓损伤后神经细胞再生的意义值得进一步探讨.     

坐骨神经脉冲射频对慢性坐骨神经压迫损伤模型大鼠脊髓背角胶质细胞活化水平的影响及其镇痛作用

目的：观察坐骨神经结扎处脉冲射频（PRF）对慢性坐骨神经压迫损伤（CCI）模型大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的影响,探讨坐骨神经PRF镇痛机制与脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞活化水平的关系。方法：雄性SPF级SD大鼠40只随机分为CCI假造模PRF假治疗组（SS组）、CCI假造模PRF治疗组（SP组）、CCI造模PRF假治疗组（CS组）和CCI造模PRF治疗组（CP组）,每组10只。CCI造模成功后4 d行PRF治疗,在坐骨神经结扎处行标准PRF （120s、42℃）。于CCI造模前1d （D₀）及造模后1、3、5和7 d （D₁、D₃、D₅和D₇）测定大鼠患侧机械缩足反射阈（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。疼痛行为学测试完成后（D₇）取患侧L3~5脊髓背角,Western blotting法检测脊髓背角小胶质细胞特异性蛋白（Iba-1）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的蛋白表达水平。结果：与SS组比较,CCI造模后不同时间点CS组大鼠患侧出现足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学表现,MWT和TWL均明显下降（P<0.01）,脊髓背角Iba-1和GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与CS组比较,CP组大鼠（D₅和D₇） PRF后足外翻、跛行、脚趾弯曲聚拢和行走时抬足等行为学变化明显缓解,MWT和TWL值明显升高（P<0.01）,脊髓背角Iba-1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,GFAP蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：坐骨神经PRF能有效缓解CCI模型大鼠的神经病理性疼痛（NP）,坐骨神经PRF可抑制脊髓背角小胶质细胞活化水平,其镇痛机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞活化有关。     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后神经营养素的表达

目的　观察神经营养素在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达变化 .方法　同龄 Wistar大鼠 6 0只 ,设 A组正常对照组、B组行后路渐进式慢性压迫、C组减压组、D组手术组 ,应用免疫组化方法观察各组脑源性神经营养因子、(BD-NF ) ,胶质源性神经营养因子 (GDNF) ,神经营养素 - 3(NT-3) ,神经营养因子 (NGF)及其受体 Trk A,Trk B,Trk C表达的变化 .结果　行慢性压迫后及减压后神经营养素及其受体表达变化明显 ,各组差异有显著性意义 .与正常组与假伤组比较 ,慢性压迫后 1d的标记指数 BDNF(32 .4± 1.6 ) vs(4.8± 1.0 ) ,GDNF(2 1.2± 3.8) vs(3.7± 1.1) ,NT- 3(2 6 .2±2 .8) vs (5 .5± 0 .6 ) ,NGF (9.2± 0 .9) vs(1.7± 0 .4 ) ,Trk A(2 3.7± 1.7) vs (0 .6± 0 .5 ) ,Trk B (34.3± 3.3) vs(3.2± 0 .5 ) ,Trk C(30 .1± 3.9) vs(1.2± 0 .4 ) (P<0 .0 5 ) .与正常组与压迫 30 d组比较 ,减压后 1d的标记指数 BDNF(30 .2± 1.6 ) vs(5 .8± 1.8) ,GDNF (2 0 .0± 3.6 ) vs(3.6± 1.1) ,NT- 3(2 5 .8± 2 .3) vs(5 .6± 0 .5 ) ,NGF(8.7± 0 .7) vs(1.7± 0 .4 ) ,Trk A(2 1.4± 4 .2 ) vs(0 .7± 0 .4 ) ,Trk B(32 .7± 3.3) vs(3.5± 0 .5 ) ,Trk C (2 8.7± 3.8) vs (1.2± 0 .6 ) (P<0 .0 5 ) .结     

大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后病理与后肢肌力的变化

目的 观察大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后脊髓病理与后肢运动功能的变化.方法 构建大鼠T9脊髓慢性压迫性损伤模型,30只Wistar大鼠按完全随机法分组:假手术对照组(5只)、慢性压迫组(5只)、减压组(20只),减压组分为减压后1周、2周、4周、6周,采用斜板试验,观察大鼠后肢功能;利用HE染色、NissⅠ染色和TUNEL染色方法,观察受压部位脊髓及临近上下节段的脊髓前角病理变化和细胞凋亡现象.结果 慢性压迫组大鼠斜板试验角度明显低于对照组(P＜0.01),脊髓减压后第1周,斜板角度显著提高(P＜0.01),随着时间延长后肢肌力逐渐增强;受压部位脊髓减压后早期病理变化无明显改变,减压后第2周细胞凋亡指数仍较高,为(24.31±4.73)％,与慢性压迫组差异无统计学意义(P＞0.05);临近上下节段脊髓减压后早期病理恢复可见,细胞凋亡率于减压后1周显著下降(P＜0.05),分别为(15.21±4.81)％和(16.21±3.98)％,以后继续降低.结论 大鼠脊髓慢性压迫性损伤减压后,其早期的后肢运动功能恢复,可能主要因受压部位临近上下节段脊髓功能代偿所致.     

脊髓爆震伤后早期脊髓前角运动神经元的形态学变化

目的:建立脊髓爆震伤动物实验模型,探讨脊髓爆震伤后早期脊髓前角运动神经元形态学变化. 方法:将36只家兔随机分为对照组(A组,n=12) ,6 h实验组(B组,n=12)及24 h实验组(C组,n=12),采用0.9 g单质金属炸药黑索金(RDX)将B,C组家兔炸伤,分别于伤后6 h及24 h两个时间点取材,进行HE染色、甲苯胺蓝染色及银浸染色,观察脊髓神经元形态学改变. 结果:脊髓爆震伤后6 h脊髓运动神经元发生可逆性改变,部分神经元坏死,死亡均数为12.58±2.23,而伤后24 h脊髓运动神经元大量坏死,死亡均数达到了31.52±2.69,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01). 结论:脊髓爆震伤后6 h内脊髓运动神经元以可逆性改变为主,提出早期发现和治疗的重要性.     

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角Sirt1与miR-34b表达的变化

目的研究Sirt1与miR-34b在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角中表达变化的临床意义。方法将14只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）和坐骨神经慢性压迫性损伤组（CCI组）,每组7只。于模型建立前1d及术后第7、14天,测定大鼠机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）。术后第14天取大鼠L4~5节段脊髓进行病理学检查,HE染色后观察脊髓背角运动神经元的数量变化。real-timePCR检测脊髓背角内Sirt1与miR-34b的表达,Westernblot测定大鼠脊髓背角内Sirt1、脑源性神经营养因子（BDNF）和环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的表达。结果经MWT和TWL验证,大鼠CCI神经病理性疼痛模型建立成功。HE染色显示,与Sham组比较,CCI组大鼠在手术后7、14d脊髓背角神经元数量显著减少（均P＜0.05）。real-timePCR结果显示,与Sham组相比,CCI组Sirt1表达降低,miR-34b表达升高（均P＜0.05）。Westernblot显示Sirt1与CREB表达降低,pCREB与BDNF表达增加。结论Sirt1与miR-34b的表达变化可能参与坐骨神经慢性压迫性损伤导致的神经病理性疼痛的形成和维持。     

Differential expression of alpha-adrenoceptor subtypes in rat dorsal root ganglion after chronic constriction injury

Summary： mRNAs of alpha-adrenoceptor （α-AR） subtypes are found in neurons in dorsal root ganglion （DRG） and change after peripheral nerve injury. In this study, the distribution of α-AR subtype proteins was studied in L5 DRG of normal rats and rats with chronic constriction injury of sciatic nerve （CCI）. Using immunofluorescence technique, it was found that α1A-, α1B-, and α2A-AR proteins were expressed in large, medium, and small size neurons in normal DRG, and significantly increased in all size neurons 14 days after CCI. α1D- and α2C-AR was also expressed in all size neurons in normal DRG. However, α1D-AR was significantly increased and α2C-AR was decreased in small size neurons 14 days post CCI. α2B-AR neurons were not detectable in normal and CCI DRG. Co-expression of α1A- and α2A-AR in the same neuron was observed in normal DRG and increased post CCI. Collectively, these results indicated that there is distinct distribution of α-AR subtypes in DRG neurons, and the distribution and levels of expression of α-AR subtypes change differently after CCI. The up-regulation of α-AR subtypes in DRG neurons may play an important role in the process of generating and transmitting neuropathic pain.     

大鼠慢性压迫性脊髓损伤后EphA2在脊髓前角运动神经元中的表达

目的 探讨慢性脊髓损伤后红细胞生成素诱导肝癌细胞株受体A2(EphA2)在脊髓中的变化规律,寻找脊髓损伤后治疗的靶点.方法 将40只Wistar大鼠分为假手术组、轻度压迫组(CR 20%)、中度压迫组(ca 40%)、重度压迫组(ca 60%)4组.T10水平脊髓背侧加压,压迫方法采用塑料螺钉渐进性加压,分次完成手术.对大鼠进行后肢运动功能评分及所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓前角EphA2阳性细胞率进行统计分析,比较各组之间的差异.结果 EphA2阳性细胞主要存在于压迫远端脊髓灰质中,其中以脊髓前角运动神经元为著.假手术组有很少量EphA2阳性细胞,压迫组EphA2阳性细胞明显升高(P<0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P<0.05).中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 慢性压迫性脊髓损伤后脊髓前角运动神经元EphA2表达升高.慢性脊髓压迫可以诱发脊髓EphA2表达升高,对脊髓损伤是一个保护性因素.     

大鼠SNI神经痛模型不同时相脊髓背角 p-p38MAPK和p-ATF2表达的变化

目的观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)模型大鼠不同时间点术侧腰段L4~L6脊髓背角神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)和磷酸化活化转录因子2(p-ATF2)的表达情况,探讨脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2在神经病理性痛模型不同阶段中的作用。方法健康雄性SD大鼠36只,完全随机分为空白对照组、假手术组和手术组,各12只。通过结扎腓总神经及切断胫神经,保留腓肠神经的方法建立SNI大鼠模型。观察造模前、造模后3天和14天术侧足跖缩足阈值(PWT);免疫荧光法检测造模后3天和14天术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达情况。结果选模后3天和14天,手术组大鼠术侧足跖PWT较假手术组与空白对照组明显降低(P0.01),假手术组大鼠与空白对照组大鼠比较差异无统计学意义(P0.05)。造模后3天和14天,手术组大鼠术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达率较假手术组和空白对照组均明显升高(P0.01),假手术组和空白对照组SNI模型大鼠造模后各时间点,术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2阳性细胞表达率差异均无统计学意义(P0.05)。结论 SNI模型神经病理痛的产生和维持可能与术侧腰段脊髓背角p-p38MAPK和p-ATF2表达上调有关。     

Effect of Touch-stimulus on the Expression of C-fos and TrkA in Spinal Cord Following Chronic Constriction Injury of the Sciatic Nerve in Rats

Central sensitization is a key mechanism in thedevelopment and maintenance of the chronic pain.Previous studies show that NGF triggers long last ing plasticity of central nociception, and the specif ic receptor of NGF TrkA is up regulated in thechronic inflammatory pain in the primary sensoryneurons[1], but their mechanisms are not fully un derstood so far. In order to examine the effect ofTrkA on the chronic pain, in this study, the C fosgene was used as a marker of neur…     

骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂调节自噬抑制谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经组织细胞凋亡

目的 探讨过表达骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(BMP and activin membrane-boundinhibitor,BAMBI)对谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞凋亡的影响.方法 原代培养新生Wistar大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞,将细胞分为6组:正常对照组,谷氨酸组,空载组,BAMBI过表达组,siRNA对照组和BAMBI沉默组.Western blot检测各组细胞中BAMBI的表达,流式检测细胞凋亡,Western blot检测自噬标志分子微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein lightchain 3,LC3),Beclin1和p62的表达,荧光显微镜检测GFP-LC3的含量,最后Western blot检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1 β),裂解后的半胱天冬酶(cleaved-Caspase3)的表达.结果 与对照组相比,谷氨酸诱导的细胞凋亡增加,LC3-Ⅰ的表达降低,LC3-Ⅱ,Beclin1和p62的表达增加,GFP-LC3的含量增加,TNF-α、IL-1 β和cleaved-Caspase3的表达增加(P＜0.05);与谷氨酸组相比,转染pcDNA-BAMBI的细胞凋亡减少,LC3和Beclin1的表达显著增加,LC3-Ⅰ和p62的表达降低,细胞内可见大量的GFP-LC3堆积,TNF-α、IL-1β和cleaved-Caspase3的表达显著下降(P＜0.05).BAMBI沉默组的结果与过表达组相反.结论 过表达BAMBI可增强自噬,抑制谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞凋亡.     

大鼠坐骨神经慢性挤压性损伤后痛阈和血清IL-6的变化及相关性研究

目的:通过大鼠坐骨神经慢性挤压伤(CCI)神经性疼痛模型的热敏变化及血清中IL-6含量的变化,探讨血清IL-6在神经性疼痛形成中的作用及可能机制.方法:36只250～300g的健康雄性Wistar大鼠,在戊巴比妥钠麻醉下于大腿中部暴露坐骨神经并作结扎,取对侧大腿坐骨神经暴露作为模拟对照(B组).术后1,3,5,7,9,11,13,15 d测定大鼠(n=12)两侧后爪对热敏阈值的变化.于术后第15 d处死大鼠,取血清,ELISA法测定IL-6浓度.结果:大鼠双侧后爪(CCI和B)的收缩潜伏期在术后第3,5,7,9,11,13,15 d有显著差异;CCI组血清IL-6与对照组比较有显著差异.结论:IL-6与大鼠坐骨神经慢性挤压性损伤后出现的神经源性疼痛过敏有关.