缺氧缺血性脑病新生儿血浆肾上腺髓质素/内皮素-1值与血清神经元特异性烯醇化酶的相关性

目的 探讨缺氧缺血性脑病(HIE)足月新生儿血浆肾上腺髓质素(AM)/内皮素-1(ET-1)值的变化对血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的影响.方法 2005年1-12月收治HIE新生儿32例.按照HIE的诊断标准分为轻度组18例,中重度组14例.本院同期出生的30例健康新生儿(生后24 h)为健康对照组.采用放射免疫法动态测定HIE新生儿生后1、3、7 d及健康新生儿生后1 d血浆AM、ET-1和血清NSE水平.均数比较采用方差分析及S-N-K检验,双变量资料采用直线相关分析.结果 1.轻、中重度HIE组血浆AM、ET-1水平生后1、3、7 d均增高,与健康对照组比较,轻度组至3、7 d已无显著性差异(Pa＞0.05);中重度组至7 d仍有显著性差异(Pa<0.05).AM/ET-1值在3个时间点均较健康对照组减低,但仅中重度组生后1、3 d与健康对照组比较有统计学意义(Pa<0.05).2.HIE患儿血清NSE水平生后1、3 d增高,与健康对照组比较,仅中重度组有显著性差异(Pa<0.05);7 d,轻度组下降至健康对照组水平(P＞0.05),中重度组与健康对照组比较有显著性差异(P<0.05).且与AM/ET-1值呈显著负相关(r=-0.53 P<0.05).结论 AM和 ET-1共同参与HIE调节局部脑血流量及血脑脊液屏障功能的维护,AM/ET-1值测定对了解不同时期HIE患儿脑血流变化和脑损伤程度有重要意义.     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤S-100 NSE mRNA和蛋白水平变化

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后血和脑脊液中S-100蛋白(S-100)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平的变化及其与脑细胞死亡数的相关性,并探讨这些蛋白质水平变化的机制。方法 采用7 d龄SD大鼠HIBD模型,应用放射免疫方法动态观察HIBD血液和脑脊液中S-100,NSE水平的变化,用RT-PCR的技术和免疫组织化学的方法动态观察HIBD后不同时间点脑组织中S-100,NSE mRNA和蛋白水平表达的变化。结果 HI后血液中24 h,48 h S-100分别为(1.205±0.183) μg/L和(1.235±0.097) μg/L,NSE分别为(3.97±0.228) ηg/ml和(3.76±0.234) ηg/ml,对照组S-100和NSE分别为(0.645±0.05) μg/L和(3.15±0.164) ηg/ml。脑脊液中24 h,48 h S-100分别为(1.28±0.031) μg/L,(1.32±0.097) μg/L,NSE分别为(7.15±0.717) ηg/ml,(4.29±0.144) ηg/ml,对照组S-100和NSE分别为(0.68±0.059) μg/L和(3.42±0.322) ηg/ml。血液和脑脊液中S-100,NSE在24～48 h与各自对照组比较都有明显增加(P<0.01),同时其水平的变化和脑细胞死亡数呈正相关。NSE mRNA转录高峰出现在缺氧缺血后24 h,而S-100 mRNA高峰在48 h。HIBD后不同时间点脑组织S-100蛋白的表达阳性面积的变化是随时间变化逐渐增加(12～96 h)。NSE表达的阳性面积随HIBD时间延长呈进行性减少(P<0.01)。结论 S-100,NSE能作为缺氧缺血性脑损伤的标志物,在缺氧缺血后24～48 h为取标本合适时间。血液和脑脊液中S-100水平的升高,不单纯是脑组织损伤时漏出所致,还与转录和翻译水平的增加有关;而血和脑脊液NSE水平的升高主要是由脑组织损伤漏出。     

发育中的海马神经元缺氧后N-甲基-D-门冬氨酸受体通道电流变化及腺苷干预作用

目的研究缺氧对发育中的海马神经元N-甲基-D门冬氨酸（NMDA）受体通道电流的影响及腺苷干预作用的离子通道机制。方法应用膜片箝技术分别对培养日龄为6、16d的海马神经元缺氧前、后NMDA受体通道电流进行全细胞记录，测定其电流的最大幅值并研究腺苷对其干预作用。结果在缺氧状态下，培养日龄为6d的海马神经元，其NMDA受体通道电流最大幅值与正常对照组相比显著升高（P〈0．05）。培养日龄为16d的海马神经元，其NMDA受体通道电流最大幅值与正常对照组相比亦显著升高（P〈0．001）。予腺苷干预则使缺氧状态下培养日龄为6d的海马神经元NMDA受体通道电流最大幅值显著降低（P〈0．01）。而培养日龄为16d的海马神经元，腺苷干预后其NMDA受体通道电流最大幅值无明显变化。绪论缺氧使海马神经元NMDA受体通道电流幅值升高。腺苷通过降低NMDA受体通道电流幅值，对来成熟的海马神经元缺氧性损伤有一定的保护作用。     

新生儿细菌感染时血清 TNF-α和 IL-10水平变化

为了解血清TNF－α和IL-10的水平与新生儿感染状态和预后的关系，将2000年1月－2002年1月新生儿病房收治的足月儿207例，分为败血症组82例，一般感染组98例，非感染组27例，用ELISA法检测血清TNF－α和IL-10水平。结果显示，败血症组的TNF－α，IL-10水平显著高于无感染组的和一段感染组；血培养阳性和血培养阴性的败血症组之间TNF－α和IL-10水平差异无显著性；IL－10的水平和IL－10／TNF－α的比值在恶化或死亡的感染病例中显著升高。提示TNF－α和IL-10水平可能更敏感地反映机体感染的情况及预测预后。     

不同类型脑膜炎患儿脑脊液14-3-3蛋白变化的意义

目的 检测脑脊液14-3-3蛋白在不同类型脑膜炎中的变化及在判断脑损伤程度中的价值.方法 收集2009年7月至2010年6月深圳市儿童医院诊断的22例病毒性脑膜炎、20例细菌性脑膜炎及15例单纯热性惊厥对照组脑脊液标本,采用Western blot法分析脑脊液14-3-3蛋白条带,并用ELISA定量检测14-3-3蛋白水平,同时与临床表现、预后、EEG、头颅CT或MRI进行相关性分析.结果 细菌性脑膜炎中14-3-3蛋白阳性率为65.0％(13/22例),病毒性脑膜炎组阳性率为27.3％(6/22例),2组比较差异有统计学意义.ELISA定量检测中,与对照组[(0.9±0.1)μg/L]比较,细菌性脑膜炎组[(5.6±0.2) μg/L]及病毒性脑膜炎组[(3.2±0.3) μg/L]脑脊液14-3-3蛋白水平均升高,治疗后14-3-3蛋白均明显下降,差异有统计学意义；在临床表现、影像学、EEG表现脑损伤严重的病例,脑脊液中14-3-3蛋白也明显升高；在预后方面,14-3-3蛋白明显升高的病例,预后差,表现为癫(痫)、死亡等.结论 脑脊液14-3-3蛋白可用于鉴别病毒性脑膜炎及细菌性脑膜炎,同时14-3-3蛋白升高程度与疾病严重程度有一定相关性.     

脐血IGF-1及IGFBP-3与胎儿生长发育的关系研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF—1）及胰岛素样生长因子结合蛋白-2（IGFBP-3）与胎儿宫内生长发育的关系。方法将新生儿根据出生体重与胎龄的关系分为大于胎龄儿（IAG）、适于胎龄儿（AGA）、小于胎龄儿（SGA）三组,分别测定三组新生儿出生时身长、体重及胎盘重量,同时取脐血采用EUSA法测定IGF-1及IGFBP-3水平。结果①三组新生儿出生时身长、体重及胎盘重量3个指标比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。②脐血IGF-1及IGFBP-3水平在SGA、AGA、LGA三组间比较,LGA组〉AGA组〉SGA组,各组间比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）。③胎儿发育的重要指标出生体重、身长及胎盘重量与IGF-1及IGFBP-3水平均呈正相关。结论IGF-1及IGFBP-3与胎儿生长发育密切相关,对胎儿的生长发育起重要的调节作用。     

氯硝西泮单次给药与重复给药治疗惊厥的疗效

目的研究氯硝西泮单次给药和重复给药治疗惊厥血药质量浓度的变化,寻找合理的给药方案。方法具有惊厥发作的住院患儿,分为单次给药组、重复给药组及减量重复给药组,于给药后不同时间点取血,用高效液相色谱法(HPLC)测定血药质量浓度。结果单次给药后15、30、60、120及480min测定血药质量浓度分别为(101.9±12.1)、(76.9±5.8)、(50.7±2.9)、(30.9±5.4)、(21.5±6.8)μg/L,相同剂量重复给药后15、45、60及120min测定血药质量浓度分别为(97.2±6.1)、(130.4±13.4)、(106.8±4.8)、(79.6±2.4)μg/L,减量重复给药后15、45、60及120min测定血药质量浓度分别为(101.1±13.1)、(123.1±6.6)、(99.4±9.8)、(79.3±2.2)μg/L。结论减量重复给予氯硝西泮,不但可以有效地控制惊厥发作,同时可以降低不良反应的发生。     

病毒性心肌炎患儿血清白细胞介素-18、肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ水平及其相关性

目的研究细胞因子白细胞介素-18（IL-18）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）在病毒性心肌炎（VM）患儿血清中水平及相互关系。方法采用双抗体夹心ELISA方法检测72例VM患儿及25例健康儿童血清IL-18、TNF-α、IFN-γ水平。结果1.VM组血清中IL-18、TNF-α、IFN-γ水平高于正常对照组,均有显著性差异（Pa〈0.05）;2.VM组血清中IL-18与TNF-α呈直线正相关（r=0.35P〈0.05）。结论细胞因子IL-18、TNF-α、IFN-γ参与VM发病免疫过程,IL-18具有抗病毒作用,与TNF-α同样具有心肌免疫损伤可能。     

心肌营养素-1在大鼠缺血再灌注心肌中的表达及神经调节蛋白-1对其表达的促进作用

目的研究大鼠缺血再灌注心肌中心肌营养素-1(CT-1)的表达及神经调节蛋白-1(NRG-1)对其表达的影响。方法制备大鼠缺血再灌注心肌模型,分为模型组(n=8),NRG-1预处理组(n=9),假手术组(n=8)和正常对照组(n=10)。利用RT-PCR技术检测各组CT-1 mRNA表达,计算CT-1 mRNA相对量,并作统计学处理。结果模型组CT-1 mRNA结果(63.96±9.34)高于假手术组(36.16±5.43)和正常对照组(36.84±4.64),三者比较差异有显著性(F=47.37 P<0.01);NRG-1预处理组(89.49±6.99)高于模型组,差异有显著性(t=6.43 P<0.01)。结论大鼠心肌缺血再灌注后CT-1 mRNA表达升高,其原因可能是缺血再灌注激活机体内源性保护机制,NRG-1预处理对心肌的保护作用可能与提高心肌细胞中CT-1的表达有关。实用儿科临床杂志,2006,21(1):29     

病毒性心肌炎小鼠不同时点胰岛素样生长因子-1及其相关蛋白的表达

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其相关蛋白在病毒性心肌炎病程中的作用。方法取Balb／C小鼠60只，随机分为病毒实验组40只，腹腔感染CVB3病毒，分别于实验d3、7、15、30采血、取心肌组织；空白对组（未感染CVB3病毒小鼠）20只。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其血浆IGF-1的表达，用免疫组织化学法和逆转录酶多聚链反应（RT-PCR）技术检测其心肌组织IGF-1及相关蛋白的表达。结果病毒性心肌炎小鼠血浆IGF-1及相关蛋白表达均较空白对照组高，且在感染病毒后表达渐增高，15d达最高峰，30d表达降低，但仍维持一较高水平，与对照组比较仍有显著差异（F=19．53 P〈0.05），其在心肌组织中的表达与血浆中的表达变化规律一致。结论IGF-1及其相关蛋白可能参与小鼠CVB3病毒性心肌炎的病理生理过程。     

胰岛素样生长因子-1在病毒性心肌炎小鼠中的变化及对心肌的保护作用

目的 探讨病毒性心肌炎（VMC）小鼠血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平的变化及外源性IGF-1对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 Balb／c雄性小鼠随机分为3组：正常对照组、柯萨奇B3病毒（CVB3）感染组（感染组）和病毒感染加IGF-1治疗组。分别在实验d7、d14处死动物，留取血清、心肌标本。放射免疫法检测血清IGF-1水平，免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 感染组血清IGF-1水平较对照组明显降低，Bcl-2表达减少、Bax表达增加（P〈0．01）；治疗组较感染组Bcl-2表达增加、Bax表达减少（P〈0．01）。结论 IGF-1对VM小鼠的心肌细胞有保护作用。     

黄芪对哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液白细胞介素-4、-12表达的影响

目的研究哮喘大鼠模型支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素-4（IL-4）和IL—12水平变化及黄芪对其影响。方法雄性SD大鼠30只随机分为正常对照组、哮喘组和黄芪组（AM组）。以卵蛋白（OVA）致敏激发法制备大鼠哮喘模型．对PALF进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数；应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4、-12水平。结果1．哮喘组BALF细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数百分比（EOS％）均高于对照组（P均〈0．01），AM组上述指标均低于哮喘组（P均〈0．01）；2．BALF中IL-4水平哮喘组显著高于对照组（P〈0．01），AM组显著低于哮喘组（P〈0．01）；3．IL-12水平哮喘组显著低于对照组（P〈0．01），AM组最著高于哮喘组（P〈0．01）。结论IL-4高表达、IL-12低表达参与哮喘的病理生理过程；黄芪下调IL-4、上调IL-12表达水平，可能为其抑制哮喘呼吸道炎症的重要作用机制之一。     

���ݵ�����ͯ���Ժ�������Ⱦ������Ѫ�˾���ҩ�Ժ�Ѫ������о�

目的 了解2000-2007年广州地区急性呼吸道感染儿童流感嗜血杆茵(Hi)耐药性和2000-2003年分离的Hi血清分型情况,有效指导临床合理用药.方法 采集2000年1月至2007年12月广州市儿童医院门诊及住院的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物或深部吸痰标本,应用Hi选择培养基进行分离培养;用E-teat法检测Hi对阿莫西林/克拉维酸、头孢呋辛、头胞曲松、氨苄西林、头胞克洛的耐药性,用K-B法检测Hi对阿奇霉素、四环素、氯霉素、复方新诺明的耐药性;采用头孢硝基噻酚显色反应法检测β-内酰胺酶.用玻片凝集法对2000-2003年分离的381株Hi进行血清分型.结果 在8年时间内,Hi对阿莫西林,克拉维酸、头孢呋辛、头胞曲松、阿奇霉素敏感性较高,对氨苄西林、头胞克洛、氯霉素、四环素的耐药率呈逐年上升趋势,复方新诺明的耐药率高迭72.13%;氨苄西林耐药的Hi多重耐药率达82.51%.Hi的产酶率也由2000年的9.91%上升到2007年的36.48%.200-2003年所分离381株Hi的血清分型以不定型株为主,占95.53%,Hib仅占1.57%.结论 广州地区急性呼吸道感染儿童流感嗜血杆菌血清分型以不定型株为主,Hib分离率不高;广州地区急性呼吸道感染儿童Hi的耐药性和产酶率有逐年上升趋势;治疗Hi感染以β-内酰胺类抗茵药物为首选.     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠c-fos蛋白表达的意义

目的观察新生大鼠脑缺血时c-fos蛋白在海马区的表达特点，探讨c-fos蛋白表达与缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的关系。方法48只7日龄新生SD大鼠随机分为对照组6只和实验组42只。给动物吸入含有920mL／L氮气和80mL／L氧气混合气体建立新生大鼠HIBD动物模型，分别在脑损伤后不同时间点（0．5、2、4、12、24、48、72h）断头处死动物，取海马组织，用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及c-fos蛋白表达情况。结果海马区c-fos蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现，2h达到高峰，持续至4h渐减低并持续至72h，各时间点阳性凋亡细胞的出现与c-fos蛋白呈负相关（r=-0．57P〈0．05）。结论c-fos蛋白强表达于HIBD新生大鼠的海马缺血区和缺血周边区的神经元，与神经元的存活或死亡有一定联系。     

泛素特异性修饰酶2-69对大鼠系膜细胞内饰胶蛋白聚糖表达和泛素化降解的调节

目的 研究泛素特异性修饰酶2-69（USP2-69）对系膜细胞（MC）内饰胶蛋白聚糖（DCN）表达和泛素化的调节作用。方法 ①培养MC细胞,采用Western blot法检测大鼠肾MC内USP2-69的表达;②采用免疫共沉淀、激光共聚焦和免疫荧光法,检测MC内USP2-69是否与DCN结合,并观察两者在MC内的定位;③将pRK5-USP2-69-HA质粒瞬时转染MC后,用Western blot法检测HA、USP2-69和DCN的蛋白表达,用免疫共沉淀法检测DCN的泛素化水平;④采用USP2-69 siRNA处理MC,用PCR检测USP2-69和DCN的mRNA表达,用time-course Western blot法检测DCN的半衰期, Western blot法检测DCN的下游效应分子（TGF-β1和Col Ⅳ）的蛋白表达。结果 ① USP2-69在MC、肝细胞（BRL-3A）和足细胞（GEC）内均有表达,其在MC内的基础蛋白表达水平显著高于BRL-3A和GEC［MCs：(0.27±0.05),BRL-3A：(0.035±0.009),GEC：(0.012±0.004), P<0.01］。② MC总蛋白经DCN抗体免疫沉淀后,可检测到USP2-69的表达;经USP2-69抗体免疫沉淀后,可检测到DCN表达;且在MC胞质内,代表USP2-69蛋白的荧光与代表DCN蛋白的荧光存在共定位。③ 转染pRK5-USP2-69-HA质粒的MC内可检测到代表外源性USP2-69表达的HA蛋白,USP2-69和DCN蛋白表达的升高,同时DCN的泛素化水平明显降低。④ 经USP2-69 RNA干扰的MC内DCN的mRNA水平没有明显改变,但其半衰期明显缩短（3 h）,且TGF-β1和Col Ⅳ的蛋白表达均明显升高。结论 大鼠肾MC内USP2-69可与DCN相结合,及两者在胞质内共定位,USP2-69能够降低MC内DCN的泛素化水平及提高DCN蛋白总量并促进其功能。     

亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡和胱天蛋白酶-3活性的影响

目的探讨亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)活性的影响。方法7日龄SD大鼠分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤常温组(HIBD组)和缺氧缺血性脑损伤亚低温处理组(亚低温组)。HIBD组行左颈总动脉结扎后.吸入氧氮混合气持续2h;亚低温组将HIBD新生鼠维持于31-32℃亚低温8h。用TUNEL法和荧光四肽底物(ACDEVDAMC)法分别检测假手术组、HIBD组和亚低温组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平。结果与HIBD组比较,亚低温组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平显著降低。结论亚低温可减弱新生鼠HIBDCaspase-3活性.抑制神经细胞的凋亡。     

过敏性紫癜患儿可溶性血管细胞黏附分子-1、免疫球蛋白A抗内皮细胞抗体检测的意义

目的探讨可溶性血管细胞黏附分子-1(SVCAM-1)、IgA抗内皮细胞抗体(IgAAECA)在过敏性紫癜(HSP)诊断中的价值及两者的关系。方法采用ELISA检测55例HSP患儿(其中急性期40例,恢复期15例),20例健康儿血清SVCAM-1水平,应用荧光免疫印片法检测IgAAECA阳性率。结果HSP肾炎组SVCAM-1较非肾炎组明显升高,且急性期高于恢复期,差异均有显著意义(P均<0.01)。HSP肾炎组IgAAECA阳性率明显高于无肾炎组,IgAAECA阳性组SVCAM-1高于阴性组,差异均有显著意义(P均<0.01)。结论SVCAM-1、IgAAECA参与HSP的发病过程,可反映疾病进展程度。