ATM基因辐射防护功能研究

[目的]研究ATM基因对毛细血管扩张性共济失调症(ataxia-telangiectasia,AT)患者皮肤成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)高辐射敏感性的纠正情况,以评价ATM基因的辐射防护功能。[方法]利用电穿孔技术,将含有ATM基因cDNA的真核表达载体PEBS7-YZ5转染到AT细胞,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATMcDNA的转录以进一步验证;用常规染色体畸变分析法,在PEBS7-YZ5-AT细胞、PEBS7-AT细胞和未转染AT细胞经60Coγ射线0、1、2、3、4Gy照射后,观察比较三者间染色体畸变率(CAF)的差异。[结果]PEBS7-YZ5成功转进AT细胞,RT-PCR检测到ATMcDNA片段,在0、1、2、3、4Gy剂量下,PEBS7-YZ5-AT细胞染色体畸变率明显低于AT细胞,其差别具有显著性(P<0.05);而PEBS7-AT细胞和AT细胞间无明显差别(P>0.05),三种细胞染色体畸变率随受照剂量增加而升高。[结论]毛细血管扩张性共济失调症患者AT细胞高辐射敏感性被ATM基因纠正,ATM基因具有辐射防护功能,有望成为辐射防护剂。     

胞质分裂阻滞微核法研究ATM基因辐射防护功能

[目的]研究ATM基因对毛细血管扩张性共济失调症(AT)患者皮肤成纤维细胞系AT5BIVA(AT细胞)高辐射敏感性的纠正情况,以评价ATM基因的辐射防护功能。[方法]利用电穿孔技术,将含有ATM基因cDNA的真核表达载体PEBS7-YZ5转染到AT细胞,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATM cDNA的转录,Western blot验证ATM蛋白的表达;用胞质分裂阻滞微核法(CBMN),在PEBS7-YZ5-AT细胞、PEBS7-AT细胞和未转染AT细胞经60COγ射线0、1、2、3、4Gy照射后,观察比较三者间微核率及微核细胞率的差异。[结果]PEBS7-YZ5成功转进AT细胞,RT-PCR检测到ATM cDNA片段,Westernblot检测到ATM蛋白的表达。在0、1、2、3、4Gy剂量下,PEBS7-YZ5-AT细胞微核率及微核细胞率明显低于PEBS7-AT细胞和AT细胞,其差异具有显著统计学意义(P<0.01);而PEBS7-AT细胞和AT细胞间无明显差异(P>0.05)。[结论]AT细胞高辐射敏感性被ATM基因纠正,ATM基因具有辐射防护功能,含有ATM基因的真核表达载体PEBS7-YZ5有望成为辐射防护剂。     

~(60)Co γ射线对HeLa细胞端粒酶活性的影响

 目的　探讨γ射线对人宫颈癌细胞系HeLa端粒酶活性的影响。方法　不同剂量的γ射线照射HeLa细胞后 2 4h、72h、12 0h ,用TRAP ELISA法检测端粒酶的活性。结果　γ射线照射细胞后 2 4h ,较低剂量 (0 .5～ 1.5 )Gy时 ,端粒酶的活性呈剂量依赖式增加 ;(2～ 3)Gy时增加的幅度减低 ;而较高剂量 (4～ 12 )Gyγ射线照射时 ,又呈剂量依赖式增加。与照射后 2 4h相比 ,在较高剂量 (4～ 12 )Gy照射后 72h及 12 0h ,酶的活性呈剂量依赖式减少。结论　HeLa细胞在较高剂量γ射线照射后 2 4h出现的端粒酶活性上调反应 ,可能是其组分从DNA释放增加或者与端粒酶的核内位置调节有关 ;较低剂量照射后的上调反应 ,可能与DNA的修复 ,稳定断裂的染色体有关。     

γ射线照射后HeLa细胞端粒酶活性变化及机制探讨

[目的]观察射线照射后细胞端粒酶活性变化，并探讨其机制。[方法]HeLa细胞体外培养。照射2、4、8和20Gv后，分别于0、2、4、8、12、24、72和168h收集细胞．测定端粒酶活性、凋亡指数和’H掺人量。另取定量细胞照射0，1．2，3，4，6，8和10Gv．培养7d后。计算细胞存活率。[结果]2Gy和4Gy γ射线照射后．HeLa细胞端粒酶活性在短时间内上升，然后下降；8Gy和20Gy γ射线照射后酶活性迅速下降，并保持低水平。[结论]辐射后细胞端粒酶活性呈现规律性变化，这种变化是细胞死亡、亚致死损伤修复和存活细胞调节的综合结果。     

沉默 ATM基因对人胃癌细胞 BGC823放射敏感性的影响

目的：探讨毛细血管扩张突变基因（ATM）对人胃癌细胞放射敏感性的影响。方法：将 ATM基因敲减后获取得到的稳定转染克隆细胞和空载细胞同时通过不同剂量的照射后,观察敲减 ATM基因前后 BGC823细胞平板克隆形成率,并使用流式细胞术,观察 ATM被敲减后对细胞周期和凋亡的影响。结果：BGC823细胞中的 ATM被敲减后,经不同剂量的照射（2、4、6和8Gy）克隆形成率分别为（15．4±0．9）％、（9．2±0．3）％、（2．2±0．1）％和（1．0±0．1）％,远低于空载细胞的克隆形成率分别为（28．1±0．6）％、（15．6±0．8）％、（5．3±0．1）％和（1．8±0．1）％,P 均小于0．05,有显著性差异。采用相同剂量（4Gy）照射后,流式细胞术检测发现,BGC823细胞中的 ATM被敲减后,细胞周期被阻滞,细胞停止生长,并在12h 后出现凋亡的现象。结论：ATM基因的表达可影响胃癌细胞的放射敏感性,ATM的表达被敲减后对 BGC823细胞的放射起到增敏作用。ATM基因在胃癌放射敏感性方面可能有非常重要的作用。     

端粒酶抑制剂叠氮胸苷对HeLa细胞放射性DNA损伤修复的影响

背景与目的:研究端粒酶抑制剂叠氮胸苷(Azidothymidine,AZT)对人宫颈癌HeLa细胞DNA放射性损伤修复的影响,探讨端粒酶在放射诱导的DNA损伤修复中的作用.材料与方法:实验分为空白组,AZT组(400 μmol/L AZT处理HeLa细胞24 h),放射组(2 Gy 60Co γ射线照射),AZT放疗组(400 μmol/L AZT处理HeLa细胞24 h后,用2 Gy 60Co γ射线照射).照射后于0、5、10、30、60、180及360 min分别收集细胞,用端粒重复序列扩增法(PCR-based telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-联合酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)即TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性.用单细胞凝胶电泳法检测DNA单链断裂损伤,以彗尾DNA百分含量表示DNA单链断损伤量.结果:HeLa细胞受2 Gy 60Co γ射线照射后10 min,端粒酶活性即开始增加,60 min后增加明显,360 min时达到最高.AZT处理HeLa细胞后,能使端粒酶活性下降约50%,而且能抑制HeLa细胞照射后端粒酶活性的增加(P＜0.05).单细胞凝胶电泳实验表明,2 Gy 60Co γ射线照射HeLa细胞后0～10 min,AZT放疗组与放射组的彗尾DNA百分含量无明显差异(P＞0.05),照后30～360 min AZT放疗组彗尾DNA百分含量均高于放射组(P均＜0.05).结论:AZT能阻抑照射后30～360 min DNA单链断裂的修复,说明端粒酶可能在放射性DNA损伤修复中具有重要作用.     

ATM基因在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中的作用

目的：探讨低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中ATM基因的作用。方法：EL-4细胞应用渥曼青霉素处理后接受低剂量0.075 Gy预先照射,再分别进行较高攻击剂量照射（1.0,1.5和2.0 Gy）,RT-PCR和免疫荧光法检测ATM mRNA及蛋白表达。同时应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程变化。结果：渥曼青霉素能够阻断ATM基因在mRNA及蛋白水平的表达。应用渥曼青霉素后直接接受攻击剂量照射和应用渥曼青霉素后先接受低剂量0.075Gy预先照射后再接受攻击剂量照射,均能诱导EL-4细胞发生适应性反应。结论：ATM基因可能不影响低剂量电离辐射诱导EL-4细胞发生适应性反应。     

γ射线照射后HeLa细胞端粒酶活性变及机制探讨

[目的]观察射线照射后细胞端粒酶活性变化,并探讨其机制.[方法]HeLa细胞体外培养,照射2、4、8和20Gy后,分别于0、2、4、8、12、24、72和168 h收集细胞,测定端粒酶活性、凋亡指数和3H掺入量.另取定量细胞照射0,1,2,3,4,6,8和10Gy,培养7d后,计算细胞存活率.[结果]2Gy和4Gy γ射线照射后,HeLa细胞端粒酶活性在短时间内上升,然后下降;8Gy和20Gy γ射线照射后酶活性迅速下降,并保持低水平.[结论]辐射后细胞端粒酶活性呈现规律性变化,这种变化是细胞死亡、亚致死损伤修复和存活细胞调节的综合结果.     

电离辐射对胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：研究电离辐射对体外胃腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响。方法：~（60）Coγ射线单次照射胃腺癌BGC-823细胞,照射剂量分别为0、2、4 Gy,利用MTT和克隆形成率实验检测各剂量组BGC-823的增殖能力;同时利用Annexin-V/PI双染法检测各剂量组BGC-823细胞的凋亡;用PI单染测定各剂量组BGC-823的细胞周期。结果：与0 Gy组相比,2、4Gy 60Coγ射线照射可显著抑制胃腺癌BGC-823细胞的增殖（P〈0.05）,诱导BGC-823细胞在照射后依次出现S期和G2/M期阻滞。4Gy 60Coγ射线照射后48h,凋亡细胞比例显著高于对照组（P〈0.05）。结论：60Coγ射线照射可抑制胃腺癌细胞BGC-823增殖、诱导胃癌细胞出现周期阻滞和细胞凋亡。     

RNA干扰抑制Hep-2细胞人端粒酶逆转录酶基因表达对放射敏感性的影响

目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异性短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体,观察其联合射线对人喉癌Hep-2细胞端粒酶活性和细胞存活的影响,研究hTERT基因在放射增敏中的作用。方法根据hTERT mRNA编码序列设计RNA干扰(RNAi)靶点,构建重组表达质粒pshRNA-hTERT,构建成功后,转染Hep-2细胞并作射线处理,用端粒重复序列扩增方法(TRAP-PCR- EHSA)检测端粒酶活性的动态变化,采用克隆形成分析方法观察质粒pshRNA-hTERT对Hep-2细胞放射敏感性的影响,计算放射增敏比SER_(SF2)。结果转染质粒pshRNA-hTERT后,Hep-2细胞的hTERT mRNA表达抑制率为60.8%,质粒pshRNA-hTERT不仅能够抑制Hep-2细胞的端粒酶活性(P<0.05),而且还可以抑制辐射诱导的端粒酶活性上升(P<0.05)。照射前经pshRNA-hTERT处理24h,明显降低了2Gy照射后Hep-2细胞的存活分数(85.7%),与单纯放射组(67.7%)相比,差异有统计学意义(P<0.05),pshRNA-hTERT的放射增敏比SER~(SF2)为1.27。结论RNAi显著抑制了靶基因hTERT的表达,质粒pshRNA-hTERT能明显抑制2Gy照射诱导的Hep-2细胞端粒酶活性升高,并显著提高其体外放射敏感性;质粒pshRNA-hTERT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.