脾酪氨酸激酶对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的作用

目的：研究脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase, Syk）在血小板源性生长因子BB（platelet-derived growth factor-BB, PDGF-BB）诱导大鼠肺血管平滑肌细胞（PVSMCs）增殖中的作用。方法：体外培养雄性Sprague-Dawley大鼠PVSMCs,经鉴定后选用3~5代细胞,经PDGF-BB诱导细胞增殖后,用3种不同剂量Syk选择性抑制剂piceatannol干预,以MTT比色法测定细胞增殖,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期,荧光定量PCR、Western blot分别检测细胞Syk mRNA和蛋白表达水平。结果：PDGF-BB刺激后,Syk蛋白表达水平明显增高,细胞显著增殖;经Syk抑制剂piceatannol干预后,随着Syk mRNA和蛋白表达水平的降低,细胞的增殖受到明显抑制,其抑制作用与剂量大小具有相关性。结论：在PDGF-BB诱导下的大鼠肺血管平滑肌细胞增殖中,Syk可能起促进作用。 ［中国当代儿科杂志,2010,12（11）：886-890］     

酪氨酸激酶受体B及其配体脑源性神经营养因子水平对神经母细胞瘤耐药的影响

目的 研究酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor,TrkB）及其配体脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达水平对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞化疗敏感性的影响。方法 Western-blot技术检测不同纳摩尔浓度全反式维甲酸（all trans-retinoic acid,ATRA）诱导后TrkB蛋白水平变化;四甲基偶氮蓝比色（MTT）法检测细胞存活率;流式细胞仪（flow cytometer,FCM）检测细胞凋亡率;透射电镜检测凋亡细胞的形态。结果 （1）不同浓度ATRA（1、10、100nmol／L）处理神经母细胞瘤细胞SY5Y5d,TrkB蛋白水平随ATRA浓度增加而增加;（2）BDNF10ng／ml＋ATRA 10nmol／L＋顺铂（Cisplatin,CP）5μg／ml作用组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较均无显著差异,BDNF（50、100ng／m1）加相同浓度ATRA及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,BDNF 100ng／ml组存活率高于BDNF 50ng／ml组,凋亡率低于BDNF 50ng／ml组。ATRA 1nmol／L＋BDNF 50ng／ml＋CP 5μg／ml组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较无显著差异,ATRA 10、100 nmol／L加相同浓度BDNF及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,ATRA 100 1nmol／L组细胞存活率高于ATRA 10nmol／L组,凋亡率低于ATRA 10nmol／L组。（3）透射电镜技术观察到CP作用组可见到较多细胞呈凋亡改变,而ATRA 10nmol／L＋BDNF 50ng／ml＋CP 5μg／ml组细胞形态多数正常。结论 SY5Y对化疗药顺铂的敏感性受TrkB及BDNF水平的影响,二者水平越高越容易产生化疗耐药。     

血小板源生长因子α亚基受体结构域切除对血管平滑肌凋亡和c-sis基因表达的影响

目的 探讨从血小板源生长因子α(platelet-derived growth factor,PDGF-α)受体水平阻断对肺血管平滑肌细胞凋亡和c-sis基因表达的影响。方法 采用两种方法干预肺动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscular cells,VSMC),一种是在培养液中分别给予不同剂量的受体结构域切除的PDGF—α受体腺病毒重组体Ad5CMV-PaRtr(ACP),另一种是加入固定的中浓度ACP液后再分别加入不同浓度的血小板源生长因子BB(PDGF-BB),对不同组细胞的细胞周期、凋亡细胞百分率和c-sis原癌基因表达进行测定。结果 中、大浓度ACP对细胞增殖有明显的抑制作用,且使凋亡细胞百分率明显升高。在中浓度ACP的作用下,加入PDGF-BB不能促进VSMC的增殖,亦不改变细胞的凋亡水平。不同浓度的ACP可使c—sis mRNA的表达上调。在中浓度ACP的作用下,加入PDGF-BB可下调c—sis mRNA的表达。结论 ACP作为细胞增殖的抑制剂,能在中、大剂量下明显增加Go／G1期细胞的数量,抑制肺VSMC的增殖,增加细胞的凋亡率,同时使c-sis mRNA的表达上调。     

FMS样酪氨酸激酶3靶向RNA干扰对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖和凋亡的影响

目的探讨短发夹状干扰RNA（shRNA）诱导FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）的靶向抑制对急性单核细胞白血病（AMOL）细胞株THP-1增殖、凋亡的影响。方法设计并体外转录合成FLT3靶向shRNA（FLT3-shRNA）,转染THP-1细胞。以半定量逆转录PCR（RT-PCR）、流式细胞法（FCM）检测细胞FLT3在mRNA、蛋白水平表达,细胞计数试剂8（CCK-8）检测细胞增殖活力,FCM法检测细胞周期,DNA梯度条带（DNA Ladder）和Annexin V—FITC染色法分析细胞凋亡。结果合成的FLT3-shRNA 15nmol／L转染48h对FLT3 mRNA和蛋白的抑制率分别达（72．95±2．07）％、（65．39±5．57）％。shRNA干扰后细胞增殖活力受到抑制,48h抑制率达（36．66±3．67）％,72h达（35．56±0．73）％。转染48h细胞周期出现G0／G1期到S期的阻滞,FLT3-shRNA组G0／G1期的细胞百分比（65．71±4．47）％明显高于对照组,S期（25．11±2．70）％低于对照组。FLT3-shRNA作用48h有明显的凋亡条带出现,Annexin V-FITC检测细胞的早期凋亡率（18．59±2．07）％明显高于对照组。结论由shRNA诱导的FLT3靶向干扰可有效的抑制THP-1细胞增殖、诱导凋亡,显示其在儿童AMOL治疗中具有潜在的价值。     

GATA-6基因在内源性一氧化碳抑制肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨GATA-6基因在内源性一氧化碳（CO）抑制肺动脉平滑肌细胞（PVSMCs）增殖中作用。方法体外培养雄性SD大鼠的PVSMCs，用血小板衍生生长因子（PDGF）诱导其增殖，用不同浓度氯血红素（Hemin）诱导血红素加氧酶（HO-1）．促进CO生成，用四唑盐（MTT）法测定不同条件下PVSMCs的细胞增殖，氚掺入法测定DNA合成，RT-PCR测定GATA-6基因mRNA的表达。结果CO可抑制PDGF诱导的PVSMCs增殖，此抑制作用呈剂量和时间依赖关系，高浓度Hemin可明显抑制PVSMCs增殖和DNA合成，在PDGF刺激后2h，PVSMCs的GATA-6表达明显下调，6h开始恢复，而CO可阻止GATA-6这种下调。结论CO可抑制PDGF诱导的PVSMCs增殖，PDGF可引起GATA-6基因表达下调，这种下调可被CO阻止；提示在抑制PVSMCs异常增殖过程中，CO可能通过调节GATA-6表达发挥作用。     

血小板源性生长因子致肺发育和肺损伤机制研究的新进展

血小板源性生长因子 (plateletderivedgrowthfactor ,PDGF)是一种重要的促有丝分裂的肽类调节因子和趋化剂 ,通过血小板源性生长因子受体 (plateletderivedgrowthfactorreceptor,PDGFR)发挥其生物学功能。在肺生长发育中 ,PDGF作用至关重要。氧可刺激PDGF产生 ,但不同浓度氧对PDGF有不同影响。胚胎期低氧引起PDGF产生可促进肺发育 ;而在出生后长时间吸入高浓度氧却引起肺氧化应激损伤、纤维化 ,导致支气管肺发育不良 (bronchopulmonarydys plasia ,BPD) [1,2 ] 。本文就PDGF与肺发育及肺损伤的关系作一综述。　　一、PDGF及…     

血小板源性生长因子受体α阳性细胞在先天性肾盂输尿管连接部梗阻发病中的表达及意义

目的探讨血小板源性生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha-positive,PDGFRα)阳性细胞在儿童先天性肾盂输尿管连接部梗阻(ureteropelvic junction obstruction,UPJO)发病中的表达与意义。方法应用免疫组织荧光双染方法对首都医科大学附属北京儿童医院30例UPJO患儿肾盂输尿管连接部(ureteropelvic junction,UPJ)组织(为UPJO组)及10例因肾脏肿瘤行肾输尿管切除术患儿的UPJ组织(排除肾盂输尿管连接部狭窄以及其他泌尿系统畸形,病理结果证实肿瘤未侵犯肾盂输尿管交界处,为对照组)进行染色观察,同时分析所有患儿PDGFRα阳性细胞表达的小电导钙离子激活钾离子通道3型(small conductance calcium-activated potassium channel 3,SK3)表达水平。结果PDGFRα阳性细胞表型区别于Cajal间质细胞,与平滑肌细胞、神经纤维关系密切。PDGFRα细胞在UPJO组中的分布与对照组相似,而该细胞表达的SK3通道在UPJO组中显著低于对照组。结论UPJO患儿肾盂输尿管连接部PDGFRα细胞上SK3通道表达降低,推测SK3通道可能通过干扰UPJ蠕动参与UPJO发病过程。     

米贝地尔对血小板衍生生长因子诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨新型钙通道拮抗剂米贝地尔(mibefradil,Mib)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖的影响。方法体外培养HPASMCs,随机分为对照组、PDGF刺激组、Mib干预组、PDGF+Mib组,PDGF刺激组细胞用25 ng/ml PDGF刺激,Mib干预组细胞加入10μmol/L的Mib干预,PDGF+Mib组细胞予PDGF和Mib联合干预。通过MTT法检测48 h和72 h各组HPASMCs增殖率,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光染色法观察增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果 MTT法检测48 h和72 h各组HPASMCs增殖率的差异均具有统计学意义(P0.05),并以72 h时的差异更明显;其中PDGF组均为最高,与其余3组间的差异均有统计学意义(P均0.05);而PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异则无统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测各组G0/G1期及S期细胞比例差异均有统计学意义(P0.05);其中PDGF刺激组G0/G1期细胞比例最低、S期细胞比例最高,与其余3组比较差异均有统计学意义(P0.05);PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组化染色结果表明各组间PCNA表达差异有统计学意义(P0.05);其中PDGF组的PCNA表达最高,与其余3组间的差异均有统计学意义(P均0.05);而PDGF+Mib组与Mib组、对照组,以及Mib组与对照组间的差异则无统计学意义(P0.05)。结论 Mib组能显著抑制PDGF诱导的HPASMC增殖,抑制PDGF促进的细胞周期进程,对PCNA的表达具有明显的抑制作用。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞血小板源生长因子-β受体与细胞外信号调节激酶表达的影响

目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌细胞血小板源生长因子-β(PDGF-β)受体、细胞外信号调节激酶 (ERK1/2) 表达的影响,探讨其治疗心肌肥大的作用机制.方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为AngⅡ组(以 10-7 mol/L AngⅡ刺激)、川芎嗪组(10-7 mol/L AngⅡ加10 mg/L川芎嗪刺激)及对照组(正常培养的心肌细胞).3组分别培养24 h,收集心肌细胞,采用[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,免疫印迹法测定其PDGF-β受体、ERK1/2表达.应用SPSS 11.0软件进行统计学分析.结果 3组间心肌细胞蛋白合成速率比较有显著性差异(F=20.71 P<0.01),其中AngⅡ组较对照组显著增加(P<0.01),川芎嗪组较AngⅡ组显著降低(P<0.01); AngⅡ组心肌细胞PDGF-β受体表达水平较对照组显著增加(P<0.01),川芎嗪组心肌细胞PDGF-β受体表达显著低于AngⅡ组 (P<0.05);AngⅡ组心肌细胞ERK1/2表达显著高于对照组(P<0.01),川芎嗪处理后AngⅡ诱导的心肌细胞ERK1/2表达较AngⅡ组显著降低 (P<0.01).结论 川芎嗪可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞PDGF-β受体与ERK1/2的表达,这可能是川芎嗪治疗心肌肥大的重要机制之一.     

结缔组织生长因子对血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质沉积影响的研究进展

先天性心脏病常因继发肺动脉高压而失去手术根治机会.肺血管重建是肺动脉高压的病理学特征,围绕血管重建中肺血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质沉积是心血管领域的研究重点.近年发现结缔组织生长因子可与血管平滑肌细胞表面的一些受体结合并通过相应的信号传导通路激活相关基因表达,引起血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质异常沉积等生物学行为改变,血管重建可能是肺动脉高压发病的分子病理机制之一.     

整合素在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用

血管平滑肌细胞增殖与迁移所引起的血管重构是肺动脉高压、动脉粥样硬化斑块形成及血管成形术后再狭窄等心血管疾病共同的病理学特征.整合素受体通过相应的信号转导通路激活相关基因的表达所引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移等生物学行为改变是研究血管重构发病机制并寻找其干预途径的新热点.     

洛沙坦对高肺血流量大鼠肺血管平滑肌增殖及肺小动脉重构的抑制作用

目的观察血管紧张素受体拮抗剂对高肺血流量导致肺动脉高压肺血管重构的影响。方法采用腹主动脉-下腔静脉瘘制造大鼠容量负荷性肺动脉高压模型,并应用洛沙坦(losartan)进行干预,6周后观察肺动脉收缩压(PASP)、舒张压(PADP)、右室收缩压(PVSP)变化,心室重量变化,肺血管平滑肌细胞(VSMC)α-平滑肌肌动蛋白(α_actin)及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色;比较各组α_actin积分光密度值(IOD)及肺血管VSMC的PCNA阳性率,比较无肌性动脉肌性化程度及肺小动脉血管厚度百分比(%WT)。结果手术组动物RVSP、PASP、PADP较对照组明显升高(P<0.05),手术 洛沙坦组RVSP、PASP、PADP明显低于手术组(P<0.05);手术组右心室(RV)/左心室加室间隔(LV S)、RV/体重(BW)、(LV S)/BW较对照组显著增加(P<0.001),而手术 洛沙坦组则较手术组显著降低(P<0.01)。与对照组比较,手术组α_actin染色IOD值显著降低(P<0.01),而手术 洛沙坦组IOD值则高于手术组(P<0.05),手术组细胞PCNA阳性率显著升高(P<0.01),而手术 洛沙坦组低于手术组(P<0.05);手术组与其他两组比较,管经50~100μm、101~150μm%WT及15~50μm血管肌性化百分比显著增加(P<0.01)。结论腹主动脉-腔静脉分流导致了肺血管重构和肺动脉高压的发生,洛沙坦能有效地抑制高肺血流量大鼠肺动脉VSMC增殖,减缓肺动脉高压肺血管重构进程。     

肾母细胞瘤VEGF及其受体Flk-1的表达及其临床意义

目的 探讨肾母细胞瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flk-1)的表达和肿瘤微血管密度(MVD)的临床意义.方法 应用免疫组织化学(SABC)法检测33例肾母细胞瘤、瘤旁组织和6例正常肾组织中VEGF、Flk-1表达和MVD计数.观察并分析三个指标之间的相关性,同时分析其临床意义.结果 33例肿瘤组织VEGF阳性表达率81.8%,Flk-1阳性表达率69.7%,瘤旁组织VEGF阳性表达率9.1%,Flk-1阳性表达率6.1%,6例正常肾组织VEGF及Flk-1均为阴性表达,三者之问差异具有统计学意义.肿瘤组织MVD值29.7±12.4,瘤旁组织MVD值10.3±9.6,正常肾组织MVD值9.8±2.3.肿瘤组织的血管密度与后二者比较差异具有统计学意义.VEGF表达与Flk-1、MVD计数正相关,Flk-1与MVD表达正相关,VEGF、Flk-1表达在不同临床分期,及转归之问均具有显著性差异.结论 肾母细胞瘤中VEGF及其受体Flk-1呈高表达,血管生成增多,VEGF、Flk-1表达与MVD密切相关,提示VEGF及其受体Flk-1参与肾母细胞瘤的血管形成过程,促进血管生成,与预后相关.     

p38丝裂原活化蛋白激酶调节急性淋巴细胞性白血病CEM细胞株糖皮质激素受体功能的分子机制研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）对地塞米松（DEX）诱导急性淋巴细胞性白血病CEM细胞株凋亡过程中糖皮质激素受体α（GRα）功能的影响。方法台盼蓝拒染法绘制增殖曲线;流式细胞仪解析细胞凋亡;Western blot检测糖皮质激素受体蛋白及磷酸化p38MAPK蛋白表达。结果（1）p38MAPK特异阻滞剂SB203580预处理后继续培养24-72h,细胞的增殖率分别由单用DEX时的62．3％、35．5％、11．6％升至82．8％、54．7％和48．1％（P〈0．01）;（2）5μmol／LDEX处理CEM细胞36h时,亚二倍体细胞为26．2％,显著高于对照组（P〈0．01）。SB203580预处理后,亚二倍体细胞由26．2％降至7．1％（P〈0．01）;（3）5μmol／L的DEX处理CEM细胞后,GRα总蛋白的表达水平从12h开始分别上调至117％（12h）、121％（24h）、122％（36h）、125％（48h）。未与DEX结合的GRα主要存在于细胞浆中,细胞核GRα与细胞浆GRα之比为0．27。从6-48h,GRα的胞核与胞浆之比分别为0．48、0．59、0．95、2．16、4．08;（4）5μmol／LDEX处理CEM细胞后,p-p38MAPK蛋白在15min时即隐约可见,1h开始表达增强并持续增强至6h,之后减弱至48h仍可见。SB203580预处理后,未检测到p-p38MAPK蛋白的表达;（5）SB203580预处理后,GRα的核浆比例由4．08降至0．43（P〈0．05）,GRα总蛋白无明显变化。结论DEX在诱导CEM细胞凋亡时上调GRα的蛋白表达水平并促进转位人核。p38MAPK信号转导通路的活化促进了GRα转位人核。     

Syk与血管平滑肌细胞的增殖和迁移

脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)在较长时间里被认为是造血细胞特有的信号分子,在淋巴细胞的成熟和免疫细胞的激活中起重要作用.近年来发现syk在多种非造血细胞也有表达.研究表明,Syk对血管平滑肌细胞的迁移和增殖有促进作用,主要通过MAPK、PI3K、Src和Rho/Ras信号通路起作用.该文就syk在血管平滑肌细胞迁移和增殖过程中的作用机制作一综述.     

低浓度紫杉醇对大鼠肺动脉平滑肌细胞外胶原沉积的作用及其机制研究

目的 探讨低浓度紫杉醇（PTX）对转化生长因子β1（TGF-β1）促进大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）外胶原沉积的作用及其机制。方法 原代培养大鼠PASMCs并分为空白对照组、模型组和干预组（n=3）。空白对照组不做任何处理,模型组施加终浓度为10 ng/mL的TGF-β1,干预组在模型组基础上施加终浓度为100 nmol/L的PTX。MTT比色法检测细胞增殖能力;实时荧光定量PCR法检测Ⅰ型胶原（COLⅠ）、Ⅲ型胶原（COLⅢ） mRNA相对表达量;ELISA法检测COLⅠ、COLⅢ蛋白的OD值;Western blot法检测COLⅠ、COLⅢ蛋白,以及TGF-β1/Smad3信号通路关键蛋白Smad3、p-Smad3的相对表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组细胞增殖能力、COLⅠ、COLⅢ mRNA及其蛋白、p-Smad3蛋白相对表达水平均明显增高（P < 0.05）;干预组上述指标较模型组均有所下降,但仍高于空白对照组（P < 0.05）;各组Smad3蛋白相对表达水平比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 低浓度PTX对TGF-β1促进PASMCs外胶原合成具有明显抑制作用,该作用可能是通过调控Smad3蛋白的磷酸化来实现。