miRNA-145抑制肺癌细胞系A549迁移侵袭的研究

摘 要：［目的］ 观察miRNA-145对肺癌细胞系A549迁移、侵袭和克隆形成的影响,探讨其潜在的应用价值。［方法］ 采用miRNA-145过表达的慢病毒载体上调A549细胞中miRNA-145的表达量,Transwell迁移及侵袭实验分析miRNA-145表达上调前后A549细胞的体外迁移、侵袭能力,平板克隆形成实验分析miRNA-145表达上调前后A549细胞的体外增殖能力。［结果］ RT-PCR结果表明,侵染了miRNA-145过表达载体的A549细胞中miRNA-145水平明显高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;Transwell迁移和侵袭实验结果表明,过表达miRNA-145的A549细胞过膜数少于阴性对照及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);平板克隆形成实验结果表明,过表达miRNA-145的A549细胞平板克隆形成能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。［结论］ miRNA-145的过表达能够抑制肺癌细胞系A549的迁移、侵袭和克隆形成,由此提示miRNA-145有可能成为肺癌治疗的潜在靶点。     

上调miRNA-145表达对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响

目的探讨上调miRNA-145表达对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。方法收集人正常肺上皮细胞株BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞株A549,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两种细胞中miRNA-145的相对表达量。以Lipofectamine^TM 2000转染试剂将miRNA-145模拟物和阴性对照质粒转染至A549细胞中,分别作为miRNA-145组和NC组,以只加入转染试剂的A549细胞作为对照组,RT-PCR检测各组细胞中miRNA-145的相对表达量。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术(FCM)检测上调miRNA-145表达对细胞增殖和凋亡的影响。给予不同放射剂量X线照射后采用克隆形成实验检测细胞的放射敏感性。结果A549细胞中miRNA-145的相对表达量明显低于正常肺上皮BEAS-2B细胞(P<0.01);转染后,miRNA-145组细胞中miRNA-145的相对表达量高于对照组(P<0.05);转染后,NC组与对照组细胞中miRNA-145的相对表达量比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);miRNA-145组细胞转染24、48、72 h的光密度(OD)值均低于对照组(P<0.05);转染48 h后,miRNA-145组细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05);2、4、6、8 Gy剂量的X线照射后miRNA-145组细胞的存活分数(SF)均低于对照组,放射增敏比(SER)为1.491。结论与正常肺上皮BEAS-2B细胞比较,A549细胞中miRNA-145的相对表达量较低,上调其表达能够抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,增强放射敏感性。     

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

MicroRNA-10b对人肺腺癌细胞株A549增殖及侵袭能力的影响

目的探讨miRNA-10b对人肺腺癌细胞A549的增殖及侵袭能力的影响。方法用脂质体法将miRNA-10b真核表达质粒转染入A549,实验设置空白对照组、阴性对照组和miRNA-10b质粒转染组,转染后荧光显微镜下观察转染效率,实时定量PCR检测各组细胞miRNA-10b的表达,细胞增殖实验检测各组细胞的增殖情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果与空白对照组和阴性对照组相比,miRNA-10b质粒转染组细胞转染后增殖速度加快,细胞侵袭能力增强(P<0.05)。结论 miRNA-10b可以促进A549细胞的增殖及侵袭能力。     

上调miRNA-506对肺癌耐药细胞株A549/DDP耐药性的逆转及其机制

目的:探讨微小核糖核酸（miRNA）-506对人非小细胞肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的逆转及其可能机制。方法:构建miRNA-506 模拟物,应用脂质体法转染A549/DDP细胞。应用实时逆转录酶链聚合反应（qRT-PCR）法验证各组细胞中miRNA-506的表达情况,CCK8法检测顺铂对细胞的抑制作用。流式细胞术Annexin V／PI双染检测各组细胞的凋亡。Western blot检测MDR1、MRP1、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:qRT-PCR结果显示,miRNA-506转染组miRNA-506的表达量明显高于对照组（P<0.05）。CCK8结果显示,上调miRNA-506 增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。流式细胞术结果显示上调miRNA-506 促进顺铂诱导的A549/DDP细胞凋亡。上调miRNA-506可以使A549/DDP细胞MDR1、MRP1和Bcl-2蛋白的表达下降,使Bax蛋白的表达升高。结论:上调miRNA-506能逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药,这一过程可能通过miRNA-506调控多药耐药蛋白和凋亡相关蛋白实现。     

CD147对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,EMP,又称CD147)对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:将CD147过表达慢病毒、短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰CD147表达的慢病毒及阴性对照(negative control,NC)慢病毒分别感染肺癌A549细胞,获得CD147稳定过表达的A549EMP细胞、稳定干扰CD147表达的A549sh EMP细胞和阴性对照A549NC细胞。应用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验和Transwell小室法分别检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞的增殖、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞中β-catenin的核表达情况。结果:A549EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于未进行慢病毒感染的空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显低于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。A549EMP细胞β-catenin的核表达水平明显高于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞β-catenin的核表达水平明显低于空白对照A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。结论:CD147可增强肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与β-catenin的激活有关。     

miRNA-196b靶向抑制IGF2BP1对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨miRNA-196b通过靶向调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的机制。方法将miRNA-196b模拟物(mimics)和阴性对照转染至肝癌HepG2 细胞,分别作为阴性对照组和mimics-196b 组,未处理的细胞作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3 组肝癌HepG2 细胞miRNA-196b 和IGF2BP1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测IGF2BP1 和caspase 3 蛋白的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 mimics-196b组细胞miRNA-196b相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,IGF2BP1 mRNA相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。mimics-196b 组细胞光密度(OD)值和IGF2BP1 蛋白的相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,细胞凋亡率和caspase 3 蛋白相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。空白对照组和阴性对照组OD值、细胞凋亡率、IGF2BP1和caspase 3蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 miRNA-196b 可能通过靶向抑制IGF2BP1 的表达,抑制肝癌HepG2 细胞的增殖并促进其凋亡。     

IL-17RA基因过表达对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨白介素-17受体A（interleukin-17 receptor A,IL-17RA）对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建IL-17RA基因过表达慢病毒载体并感染A549细胞,采用RT-qPCR法和Western blot方法检测IL-17RA、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达。MTT实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测IL-17RA过表达对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:IL-17RA过表达A549细胞中IL-17RA mRNA和蛋白表达显著上调。IL-17RA过表达细胞的增殖活性同对照组无明显变化,但过表达组细胞的迁移距离较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）,过表达组穿膜细胞数较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）。IL-17RA高表达可明显上调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:成功构建IL-17RA过表达A549细胞,IL-17RA具有增强A549细胞迁移及侵袭的作用,其机制可能与上调MMP-2和MMP-9表达有关。     

miRNA21对人肺癌 A549细胞增殖及迁移的影响

目的：探讨抑制 miRNA21对人肺癌 A549细胞体外增殖、迁移及凋亡的影响。方法：采用体外转染法将 miRNA21－5p 瞬时转染 A549细胞后,应用 Real －time PCR 特异探针法检测人肺癌细胞系中 miRNA21的表达情况;应用 MTT 法检测人肺癌 A549细胞的增殖情况;应用 Transwell 小室检测人肺癌 A549细胞的迁移情况;流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞的凋亡情况;Western blot 检测人肺癌 A549细胞中表皮因子生长受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达。结果：与正常对照组和 miRNA21－NC 阴性对照组相比,miRNA21－5p 转染组人肺癌 A549细胞中 miRNA21表达水平显著降低,EGFR 表达显著下调,细胞生长显著受抑制,且促进人肺癌 A549细胞的凋亡（P ＜0．05）。结论：抑制 miRNA21在人肺癌 A549细胞中的表达,能够抑制 A549细胞的生长,促进其凋亡,miRNA21有可能作为治疗肺癌的新靶标之一。     

Glypican-3过表达对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨glypican-3对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用glypican-3 cDNA瞬时转染A549细胞,Western blot方法检测转染前后glypican-3在A549细胞中的表达水平,分别采用MTT、流式和Transwell小室研究glypican-3 cDNA对A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用。结果转染后glypican-3在A549细胞中表达上调,细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低（均P〈0.05）。结论 A549细胞中glypican-3过表达促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,可能对A549细胞的生长和存活具有重要作用。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。