148例肝硬化患者乙型肝炎病毒基因型分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型与肝炎后肝硬化的相关性。方法用PCR荧光基因型分型方法对甘肃地区HBV感染者中148例肝硬化(LC)患者的血清标本进行分型。结果基因型在LC患者中的分布:B基因型39.86%(59/148),C基因型57.43%(85/148),两者差异有统计学意义(χ2=4.69,P=0.036);C基因型患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平明显高于B基因型患者(t=1.99,P<0.05);C基因型患者血清HBeAg阳性率明显高于B基因型患者(χ2=13.33,P=0.000)。结论甘肃地区LC患者主要有B、C两种基因型,以C基因型为优势基因型,C基因型与肝病的严重性有关。     

上海地区部分乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因型分析

目的 研究上海地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布情况。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）检测136例HBV DNA阳性的上海籍HBV感染者的基因型。结果 136例HBV DNA阳性的HBV感染者中基因型B43例,占31．6％,基因型C92例,占67．6％,基因型D仅有1例,未发现基因型A、E、F。结论 上海地区存在HBV基因B、C、D型,基因型A、E、F是否存在仍需扩大样本作进一步深入研究。     

上海地区部分乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因型分析

目的研究上海地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情况。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测136例HBV DNA阳性的上海籍HBV感染者的基因型。结果136例HBV DNA阳性的HBV感染者中基因型B 43例,占31.6%,基因型C 92例,占67.6%,基因型D仅有1例,未发现基因型A、E、F。结论上海地区存在HBV基因B、C、D型,基因型A、E、F是否存在仍需扩大样本作进一步深入研究。     

西安市慢性乙型肝炎病毒基因型检测及其临床意义

目的：明确西安市慢性乙肝患者血清中HBV基因型的分布状况及其临床意义。方法对262例慢性HBV患者的血清采用巢式PCR法进行病毒基因型检测,并分析HBV基因型的临床意义。结果262例慢性HBV患者的基因分型,C型186例（70.2%）、B型58例（22.1%）、B/C混合型18例（7.7%）,基因型分布在性别上差异无统计学意义,在慢性乙肝、肝硬化、肝癌中分布差异无统计学意义,HBeAg阳性率与HBeAg阴性率差异无统计学意义。结论西安市HBV的基因型以C型为主,其次为B型及B、C混合型;各基因型患者的临床特点相似;HBeAg阳性率与HBeAg阴性率相比较,各基因型间差异有统计学意义（P〈0.05）。     

南阳地区乙型肝炎病毒基因型的分布及临床意义

依据乙型肝炎病毒（HBV）基因组序列差异的程度,目前可把HBV分为A~H8种基因型,基因型比血清亚型更能反映HBV的异质性,近年的研究认为HBV感染的不同后果可能与其基因组序列差异有关。     

乙型肝炎病毒基因型的分布及临床意义

目的：了解乙型肝炎病毒基因型的分布情况,并探讨各基因型与临床类型的相关性。方法：采用聚合酶链反应-反向点杂交技术检测130例HBV感染者的HBV基因型,并分析各基因型在不同临床类型的比例。结果：130例HBV感染者中B型57例,占43.8%,C型69例,占53.1%,D型2例,占1.5%,B、C混合型1例,占0.8%。1例未检出基因型,占0.8%;C基因型在表面抗原携带者和慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及肝纤维化的比例依次增高,分别为27.8%、47.2%、59.5%、61.5%和66.7%;C基因型在慢性乙肝中度以上所占比例高于B型（2=5.54,P〈0.05）。结论：本组HBV基因型由B、C、D型构成,以B、C基因型为主,C型与中重度肝病有关。     

实时荧光定量PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型

目的建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型。用此方法对安徽地区乙肝患者进行检测,了解该地区HBV基因型分布情况。方法首先用实时荧光定量PCR方法对150例安徽地区乙肝患者进行HBVDNA定量检测和分型检测,然后对其中载毒量大于5000IU/mL的113例标本和1例1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL进行测序分型检测,验证所建立方法的准确性,了解安徽地区HBV基因型分布情况。结果150例HBV样本中HBVDNA含量<1000IU/mL30例,分型检测结果均为阴性,对载毒量≥5000IU/mL的样本检出率为97.35%(110/113);对1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL的样本检出率为14.29%(1/7);对全部DNA阳性样本的检出率为92.5%(111/120)。HBV分型检测与HBVDNA测序检测的114例样本中,只要是HBVB基因型、C基因型或B/C混合型,乙型肝炎病毒基因分型检测都能检出来(共111例),其中部分样本经分型检测属于B/C混合基因型,测序结果都是混合基因型中占优势的基因型结果,总体符合率为100%。未能被本法检出的样本共3例,3例样本经测序分型均为D型。120例病毒载毒量≥1000IU/mL乙肝患者中B型病例占51.67%(62/120);C型占29.17%(35/120);B/C混合型占11.67%(14/120)。PCR测序检出为D型3例,占2.5%(3/120)。结论应用TaqMan探针的实时荧光定量PCR方法能快速对我国HBV主要基因型B基因型、C基因型进行检测,结果准确可靠,特异性高。安徽地区的HBV基因型以B型为主,C型次之,亦存在着D型的少数感染病例和B/C的混合感染。     

鄂东南、鄂西、鄂西北地区乙型肝炎病毒亚型分布探讨

目的 对鄂东南、鄂西、鄂西北地区从业人员体检人群乙型肝炎病毒(HBV)基因亚型分布状态进行分析比较.方法 以鄂东南、鄂西、鄂西北地区体检的从业人员为对象,每人静脉采血5 mL并分离血清,通过巢式PCR方法对HBV亚型进行分型.结果 共检测HBV阳性血清标本29份(鄂东南9份,鄂西、鄂西北各10份),其中B型18份(62.06%)、C型1份(3.44%)、BC混合型3份(10.34%)、A型3份(10.34%)、AC混合型1份(3.44%).结论 29份HBV阳性血清标本中B型基因18份,占62.06%,数据显示B型为该地区HBV流行优势基因型,其结果与相关研究报道相一致.     

某地区乙型肝炎病毒基因型检测及其与患者肝功能的关系分析

目的探讨甘肃地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型与患者肝功能的关系。方法采用荧光PCR法检测532例慢性HBV感染者的HBV基因型并同时测定其肝功能。结果 532例不同临床类型慢性HBV感染者中,B型168例(31.58%),C型320例(60.15%),B/C混合型32例(6.02%),未分型12例(2.25%)。甘肃地区慢性HBV感染者中,以C基因型为主,其次为B基因型,部分以B/C混合型存在。感染C基因型者的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素水平均高于B型感染者,但差别无统计学意义,但其清蛋白水平低于B型感染者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论甘肃地区病毒性肝炎以C基因型为主,以C基因型为主,其次为B基因型,部分以B/C混合型存在。     

高发区肝癌患者血清乙型肝炎病毒HBV标志物和HBV DNA水平比较分析

目的 探讨高发区原发性肝癌血清中乙型肝炎病毒(HBV)的感染标志(HBVM)状态和核酸(HBVDNA)水平及相互关系.方法 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对江苏省启东地区211例原发性肝癌(肝癌组)和229例HBV感染者(对照组)进行HBVM和HBV DNA含量检测.结果 肝癌组HBV感染率高达99.5%,两组HBV DNA阳性率分别为70.0%和66.4%(P>0.05).肝癌组HBsAg阳性率显著低于对照组,85.2% vs 93.9%(P<0.05),这类患者HBV DNA检出率显著高于对照组,79.9% vs 69.3%(P<0.05),但其中栽量≥106 copies/ml检出率显著低于对照组,28.0%vs 40.3%(P<0.05).HBVM模式主要有HBsAg/HBeAg/抗-HBc阳性、HBsAg/抗-HBe/抗-HBc阳性和HBsAg/抗-HBc阳性3种,它们在两组中的分布差异有统计学意义(P<0.01),对照组中HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性模式最常见(41.5%),而肝癌组中HBsAg/抗-HBc阳性者最多(35.7%),且其HBV DNA阳性率和平均水平都显著高于对照组(P<0.05).结论 启东地区原发性肝癌患者HBV感染率很高,多数处于中低水平的HBV复制活跃期,这可能增加了HBV DNA的肝内整合机会,最终导致癌变的发生;启东肝癌患者HBVM以HBsAg/抗-HBc阳性最多见,HBVe系统的缺失是否暗示有特定变异的存在值得作进一步的研究.     

Survival rates of early-stage HCV-related liver cirrhosis patients without hepatocellular carcinoma are decreased by alcohol

Although alcohol abuse is the most common cause of liver cirrhosis in the United States, the enhancing effects of alcohol on the long-term prognosis of hepatitis C virus (HCV) related liver cirrhosis has not been clarified. To investigate how alcohol abuse influences the prognosis of hepatitis virus related liver cirrhosis, we studied 716 Japanese patients. Cumulative survival and hepatocellular carcinoma (HCC) development rates were analyzed in alcohol abusive, cirrhotic patients with or without hepatitis virus infection. Patients who abused alcohol were younger (p<0.0001) than HCV infected, non-abusive patients. The overall survival rate among patients with alcoholic cirrhosis (Al group), HCV related cirrhosis (HCV group), and HCV infected + alcoholic cirrhosis (HCV + Al group), showed no significant differences, although the 10-year cumulative survival rate of Al group was the highest of the three groups. The HCC development rate of Al group was the lowest. In addition, alcohol abuse decreased the survival rates of HCV group in the early stage with no HCC (p = 0.0028). In conclusion, alcohol abuse might affect the progression of liver damage in HCV infected patients with liver cirrhosis in the early stage, although the influence of alcohol abuse on the long term prognosis seems to be rather small.     

中国北方地区HBV主要基因型和肝损伤相关性研究

目的探讨HBV基因型和HBV DNA、肝纤维化指标、肝功能指标及HBV e抗原(HBeAg)的相关性。方法对乙型肝炎患者进行HBV基因型、HBV DNA、肝纤维化四项指标、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、清蛋白(ALB)、HBeAg检测。对检测结果进行统计学分析。结果 B、C型HBV感染者间HBV DNA、ALT、AST、TBIL、ALB、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原、透明质酸、层粘连蛋白水平比较差异无统计学意义(P0.05)。C型HBV感染者HBeAg水平高于B型HBV感染者(P0.05)。结论 C型和B型HBV感染者间HBV DNA、肝功能指标、肝纤维化指标水平无差异,但C型HBV感染者HBeAg水平高于B型HBV感染者。     

不同病期慢性HBV感染者肝功能、HBV-DNA与HBV-M模式的关系

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者不同病期乙型肝炎五项指标(HBV-M)模式的分布及其与肝功能和HBV-DNA载量的关系。方法采集456例慢性HBV感染者血清标本,定量检测HBV-M、肝功能及HBV-DNA载量;根据病期不同将患者分为慢性乙型肝炎组(包括轻度、中度、重度亚组),肝硬化组(包括代偿亚组、失代偿亚组)和肝癌组。结果 3组间HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性模式(135模式)和HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性模式(145模式)所占比例比较,差异有统计学意义(P0.05)。慢性乙型肝炎各亚组135模式的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平高于另两种模式,差异有统计学意义(P0.05);肝硬化各亚组和肝癌组中,3种HBV-M模式的清蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)水平进行比较,差异有统计学意义(P0.05)。各组135模式HBV-DNA载量均高于另两组,差异有统计学意义(P0.05)。结论随着慢性乙型肝炎病情的进展,135模式的比例呈现下降趋势,145模式的比例呈上升趋势;在区分HBV慢性感染者病期的情况下,ALT、AST、ALB、TBIL水平及HBV-DNA载量与HBV-M模式密切相关。     

乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区变异对疾病进展的影响

目的 应用测序列的方法，探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型在南京地区的流行病学状况和HBV基因型与基本核心启动子（BCP）及前C区变异对疾病进展的影响。方法 选用南京地区94例HBV感染患者血清，其中慢性乙型肝炎（CHB）44例、慢性重型乙型肝炎（CSH）、肝硬化（LC）和肝细胞癌（HCC）50例，应用测序列的方法测定HBV的S基因序列以确定其基因型，测定C基因序列以确定其变异状况。结果 南京地区94例HBV感染患者的HBV基因型以B型和C型为主，分别为40例（42．6％）和54例（57．4％），未发现其他型和混合型，CHB组与HCC、CSH和LC组病毒基因型分布差异有统计学意义（P〈0．01），对于不同病情的HBV感染患者，基本核心启动子变异区（T1762／A1764双变异）变异差异有统计学意义（P〈0．05）；而不同基因型的患者基本核心启动子变异差异有统计学意义（P〈0．05）。前C区变异（A1896变异）在不同病情和不同基因型的患者中，差异均无统计学意义。结论 南京地区流行的HBV主要基因型是B和C，C型感染可以引起较重的肝病，尤其是BCP发生双变异者；HBV基因型是影响临床表现的重要因素之一。     

乙肝病毒前C区基因变异对干扰素疗效影响的研究

以错配聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析，研究了ＨＢＶ前Ｃ区基因变异对干扰素疗效的影响。在２９例接受干扰素治疗的慢性乙型肝炎病人中，有前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（４６．６％，７／１５），追踪１年内全部复发；无变异者ＨＢＶＤＮＡ阴转７例（５０．０％，７／１４），追踪未见复发。表明ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位Ｇ→Ａ突变是影响干扰素远期疗效，导致停药后复发的重要原因之一。     

血管紧张素Ⅱ1型受体在乙型肝炎病毒感染者肝纤维化形成过程中的表达变化及意义

目的 研究血管紧张素Ⅱ1型受体(ATlR)在不同阶段慢性肝痛患者肝组织的表达情况,探讨血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)转换酶抑制剂(ACEIs)及血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARBs)治疗肝纤维化的可能性.通过定量检测血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA),探讨HBV病毒栽量与肝纤维化分期的关系.方法 以2007年1月至2008年1月因慢性HBV感染行肝组织穿刺术或手术切除的肝组织标本55例,正常肝组织12例(正常对照组)为研究对象,分别进行病理分级.并根据慢性肝炎的纤维化分期标准,将入选病例分为:S0-1组、S2-4组、晚期肝硬化组及正常对照组.67例均在肝穿或手术前后2日内抽取空腹静脉血4 ml并分离血清.用免疫组织化学法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝组织中AT1R及AT1R mRNA的表达.用荧光定量PCR法对血清HBV DNA进行定量检测.结果 AT1R及AT1RmRNA在正常肝组织中只微弱表达或不表达,而随纤维化分期的加重其表达量逐渐增加.与正常对照组比较,各组肝组织中AT1R的阳性表达均增多(平均秩为21.91,41.28,53.12 vs 15.25,H=34.005,P<0.01),S0-1组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),余组间比较差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).AT1RmRNA的表达正常对照组为0.173±0.036,S0-1组0.196±0.045,S2-4组0.394±0.098,晚期肝硬化组0.603±0.116.S0-1组与正常对照组比较纤维化有加重趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),余组间比较差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).血清HBV DNA含量与肝组织纤维化分期之间无相关性(P>0.05).结论 AT1R及AT1RmRNA在正常肝组织中只微弱表达或不表达,在纤维化及硬化肝组织中表达高度上调.且其表达强度与纤维化分期密切相关.从而认为肾素血管紧张素系统(RAS系统)的AngⅡ及AT1R在肝纤维化发生发展过程中起了重要作用.血清HBV DNA含量与肝组织纤维化分期之间无明显关系.     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

The long-term effects of lamivudine treatment in patients with HBeAg-negative liver cirrhosis

Introduction In hepatitis B virus (HBV)-related liver cirrhosis, patients with HBV replication show a higher mortality rate than those without. We aimed to investigate the long-term effects of lamivudine on HBV DNA suppression, Child-Pugh score, and survival in patients with hepatitis Be antigen (HBeAg)-negative liver cirrhosis. Methods Sixty-eight patients (51 male, 17 female) diagnosed with HBV-positive liver cirrhosis, who were monitored by the hepatology and liver transplantation outpatient clinics of our hospital between June 1999 and May 2007, were included in the study. Lamivudine (100 mg/day) was administered orally. Follow-up visits were scheduled monthly during the first 3 months, and every 3 months thereafter. Complete blood count, haemostasis, biochemistry (aspartate aminotransferase [AST], alanine aminotransferase [ALT], amylase, urea, creatinine, total bilirubin, direct bilirubin, total protein, albumin), and alpha-foetoprotein were recorded every 3 months. HBV DNA levels, abdominal ultrasound and the Child-Pugh score were evaluated every 6 months. Results Sixty-eight patients (mean age, 52.05±12.6 years) were monitored for 49.51±18.51 months. Basal ALT, HBV DNA levels and Child-Pugh scores were 103.9±73.9 IU/ml, 4133±121,94 IU/ml, and 7.6±2.4, respectively. The ALT normalisation was 59.7% during the first year, 68.2% during the second year and 44.4% during the fifth year. There was a significant decrease in Child-Pugh scores in the first 3 follow-up years when compared with the baseline score (P<0.05). During the treatment, HBV DNA positivity and YMDD mutations were determined in 20 of 68 (29.4%) patients at 46±17.9 months. Nine patients (13.2%) developed hepatocellular carcinoma at 44.8±21.5 months. Thirteen patients (19.1%) died during the treatment due to liver failure or variceal bleeding. Conclusion Lamivudine is beneficial in patients with HBeAg-negative liver cirrhosis in terms of improvement in liver function and enhancement of survival and quality of life. An HBV DNA suppressive effect and improvement in Child-Pugh score were seen especially in the first years. It is important to be aware of YMDD mutation early, as addition of new antivirals is necessary to overcome unwanted results of the mutation.     

乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种采用Lightcycler系统进行HBVDNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值。方法针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBVRT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌（DH5a）,经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品。结果用于制成外标准品的质粒经1：10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为：Y=-3．344X＋37（r2=0．9999）;通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBVDNA,表明其最低检测限为5×10^2 IU／mL;拷贝数介于5×10^2～5×10^8 IU／mI。之间的HBVDNA浓度与ct值具有良好的线性关系。结论外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情。