孕激素促子宫内膜癌细胞株凋亡及下调细胞内survivin表达

目的 观察孕酮（P）对人子宫内膜癌内膜高分化腺癌细胞株Ishikawa细胞内survivin蛋白表达的影响,探讨孕激素治疗子宫内膜腺癌的机制。方法 体外培养人子宫内膜高分化腺癌细胞株Ishikawa细胞,MTT法观察细胞的增殖;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期和细胞凋亡率;链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法测定Ishikawa细胞survivin蛋白的表达。结果 P呈剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖（P<0.01）。P组G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,凋亡率上升,并出现细胞凋亡峰（P<0.01）。survivin在Ishikawa细胞中有强表达, P处理24h后,明显下调survivin的表达,（P<0.01）。结论 孕酮调解调亡抑制蛋白Survivin的表达可能是调节细胞凋亡的机制之一。     

Survivin特异小干扰RNA表达载体构建及对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的测定Survivin特异小干扰RNA(siRNA)表达载体对肺腺癌细胞A549 Survivin基因表达的抑制及对增殖和凋亡的影响。方法构建Survivin特异性小干扰RNA表达载体,转染A549细胞,筛选出稳定表达的细胞株。用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法、Western blot和免疫组化法检测Survivin基因mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果经测序鉴定证实成功构建Survivin-siRNA表达载体。Survivin基因mRNA表达量下降76.4%,Western blot显示蛋白表达下降84.5%,免疫组化法也显示Survivin蛋白表达下降。MTT法测定细胞增殖较对照组减慢(P<0.01),细胞凋亡率较对照组增加8.95%(P<0.01)。结论Survivin特异siRNA表达载体下调Survivin基因表达,抑制A549细胞的增殖,促进凋亡。     

Survivin特异性siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 观察survivin特异性siRNA对胰腺癌细胞株Panc-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外构建Survivin特异性siRNA表达载体p-Survivin-siRNA,转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞系,RT-PCR和Western印迹法检验其对胰腺癌细胞株Panc-1细胞的RNA干扰(RNAi)效果.采用MTT法分析其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.同时,采用Western印迹法检测半胱氨蛋白酶 3(caspase 3)的表达变化.结果 p-survivin-siRNA表达质粒高效而特异地剔降胰腺癌细胞株Panc-1细胞中survivin的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断胰腺癌细胞株Panc-1细胞在G1期.随着survivin基因被沉默,caspase 3表达升高(P<0.01).结论 靶向survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制胰腺癌细胞株Panc-1细胞增殖,促进细胞凋亡.     

靶向ANG-2的shRNA重组载体抑制人子宫内膜癌Ishikawa生长和侵袭的研究

目的 探讨采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制血管生成素-2(angiopoietin-2,ANC-2)基因的表达对人子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞的影响.方法 采用脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法将针对ANG-2基因的短发卡状RNA(short hairpin RNA,ahRNA)表达载体转染到人子宫内膜癌Ishikawa细胞中,逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测ANG-2 mRNA及蛋白的表达;噻唑蓝比色法检测Ishikawa细胞的增殖;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;侵袭实验检测其对侵袭能力的影响.结果 人子宫内膜癌Ishikawa细胞ANG-2 mRNA及其蛋白质表达水平均显著降低;增殖被抑制,抑制率63.11%;细胞凋亡增加,细胞凋亡率与空白对照组和阴性对照组相比明显增高;细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少;侵袭能力明显下降.结论 靶向ANG-2的shRNA能成功下调ANG-2基因的表达,抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长和侵袭.     

靶向ANG-2的shRNA重组载体抑制人子宫内膜癌Ishikawa生长和侵袭的研究

目的 探讨采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制血管生成素-2(angiopoietin-2,ANC-2)基因的表达对人子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞的影响.方法 采用脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法将针对ANG-2基因的短发卡状RNA(short hairpin RNA,ahRNA)表达载体转染到人子宫内膜癌Ishikawa细胞中,逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测ANG-2 mRNA及蛋白的表达;噻唑蓝比色法检测Ishikawa细胞的增殖;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;侵袭实验检测其对侵袭能力的影响.结果 人子宫内膜癌Ishikawa细胞ANG-2 mRNA及其蛋白质表达水平均显著降低;增殖被抑制,抑制率63.11%;细胞凋亡增加,细胞凋亡率与空白对照组和阴性对照组相比明显增高;细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少;侵袭能力明显下降.结论 靶向ANG-2的shRNA能成功下调ANG-2基因的表达,抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长和侵袭.     

靶向ANG-2的shRNA重组载体抑制人子宫内膜癌Ishikawa生长和侵袭的研究

目的 探讨采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制血管生成素-2(angiopoietin-2,ANC-2)基因的表达对人子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞的影响.方法 采用脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法将针对ANG-2基因的短发卡状RNA(short hairpin RNA,ahRNA)表达载体转染到人子宫内膜癌Ishikawa细胞中,逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测ANG-2 mRNA及蛋白的表达;噻唑蓝比色法检测Ishikawa细胞的增殖;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;侵袭实验检测其对侵袭能力的影响.结果 人子宫内膜癌Ishikawa细胞ANG-2 mRNA及其蛋白质表达水平均显著降低;增殖被抑制,抑制率63.11%;细胞凋亡增加,细胞凋亡率与空白对照组和阴性对照组相比明显增高;细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少;侵袭能力明显下降.结论 靶向ANG-2的shRNA能成功下调ANG-2基因的表达,抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长和侵袭.     

靶向ANG-2的shRNA重组载体抑制人子宫内膜癌Ishikawa生长和侵袭的研究

目的 探讨采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制血管生成素-2(angiopoietin-2,ANC-2)基因的表达对人子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞的影响.方法 采用脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法将针对ANG-2基因的短发卡状RNA(short hairpin RNA,ahRNA)表达载体转染到人子宫内膜癌Ishikawa细胞中,逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测ANG-2 mRNA及蛋白的表达;噻唑蓝比色法检测Ishikawa细胞的增殖;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;侵袭实验检测其对侵袭能力的影响.结果 人子宫内膜癌Ishikawa细胞ANG-2 mRNA及其蛋白质表达水平均显著降低;增殖被抑制,抑制率63.11%;细胞凋亡增加,细胞凋亡率与空白对照组和阴性对照组相比明显增高;细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少;侵袭能力明显下降.结论 靶向ANG-2的shRNA能成功下调ANG-2基因的表达,抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞生长和侵袭.     

核糖核酸酶抑制因子对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和侵袭的影响

目的:将核糖核酸酶抑制因子(RI)转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,探讨RI对细胞凋亡和侵袭的影响。方法:(1)应用脂质体LipofectamineTM2000分别将重组表达载体pLNCX-RI和空载体pLNCX导入MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆并扩增传代。RT-PCR和Western blot检测RI表达。(2)流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验分别观察RI对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的影响。(3)RT-PCR和West-ern blot法检测Survivin mRNA和蛋白的表达,Western blot方法检测Caspase-3蛋白的活化情况,初步探讨RI诱导乳腺癌细胞凋亡的相关机制。(4)RT-PCR和Western blot法检测CD24mRNA和蛋白的表达,初步探讨RI抑制细胞侵袭的机制。结果:(1)成功构建表达外源性RI的亚克隆细胞系MDA-MB-231/pLNCX-RI。(2)与未转染的MDA-MB-231细胞及转染空载体的MDA-MB-231/pLNCX细胞相比,MDA-MB-231/pLNCX-RI细胞凋亡率增加(P<0.01);细胞穿膜数减少(P<0.01);Survivin mRNA和蛋白的表达量下降(P<0.01),且能活化Caspase-3;CD24 mRNA和蛋白的表达量亦下降(P<0.01)。结论:(1)外源性RI基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的稳定表达可以通过抑制Survivin的表达和激活Caspase-3促进细胞凋亡,并能通过抑制CD24表达降低细胞侵袭力。     

过表达LKB1基因增加子宫内膜癌对顺铂敏感性的作用及机制研究

目的肝激酶基因B1(The liver kinase B1,LKB1)对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞顺铂(Cisplatin,DDP)化疗敏感性的影响及作用机制。方法 qRT-PCR检测LKB1在DDP耐药EC细胞株Ishikawa/DDP及子EC细胞株Ishikawa中的表达情况。过表达质粒转染Ishikawa/DDP细胞,分为oe-NC组和oe-LKB1组,MTS检测各组细胞对DDP的敏感性;Hoechst 33342凋亡染色检测DDP处理各组细胞后细胞发生凋亡变化;流式细胞仪检测DDP处理各组细胞后细胞凋亡率变化;LKB1过表达重组慢病毒及其阴性对照空载以MOI=(病毒滴度×病毒体积)/细胞数目为20分别感染Ishikawa/DDP细胞,经1.0μg/mL G418(遗传霉素)筛选,成功构建稳定过表达LKB1(oe-LKB1)或对照(oe-NC)的Ishikawa/DDP细胞,注射到BALB/c裸鼠中构建裸鼠移植瘤模型,每天给予DDP 3mg/kg灌胃,观察各组肿瘤体积变化;Western-blot法检测DDP处理各组细胞后细胞中p-AMPK、p-mTOR和Bcl-2蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果LKB1 mRNA在DDP耐药EC细胞株Ishikawa/DDP中的表达为0.32±0.06,显著低于EC细胞株Ishikawa中的表达1.00±0.10;MTS检测结果显示过表达LKB1后DDP作用于Ishikawa/DDP的IC50值降低,对DDP的敏感性增加;Hoechst 33342凋亡染色结果显示过表达LKB1后DDP处理的细胞Hoechst 33342染色阳性细胞增多;流式细胞仪结果显示过表达LKB1后DDP处理的细胞凋亡率增加;裸鼠移植瘤模型结果显示过表达LKB1后DDP灌胃的裸鼠肿瘤体积减小;Western-blot检测发现过表达LKB1后DDP处理的细胞中p-AMPK表达增多、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达降低(P均0.05)。结论 LKB1基因可能通过抑制AMPK/mTOR信号通路作用于Bcl-2凋亡蛋白,增加EC对DDP的化疗敏感性。     

人脐带间充质干细胞影响子宫内膜异位症细胞的增殖及凋亡**☆

背景：人脐带间充质干细胞可通过旁分泌机制调控细胞的生物学活性。 目的：观察人脐带间充质干细胞对子宫内膜异位症细胞增殖及凋亡的影响。 方法：体外原代培养人异位子宫内膜细胞与人脐带间充质干细胞,实验组将脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞按1×105/1×105比例接种于Transwell共培养板上下室,建立上下双层细胞非接触共培养体系,设1×105单独培养异位子宫内膜细胞为对照组。 结果与结论：①MTT法检测异位子宫内膜细胞增殖：与对照组比较,实验组细胞增殖明显受到抑制(P < 0.05),且具有时间依赖性(P < 0.05)。②流式细胞仪检测异位子宫内膜细胞增殖凋亡：实验组凋亡细胞明显多于对照组(P < 0.05),异位子宫内膜细胞由G1期进入S期细胞减少。③RT-PCR法检测异位子宫内膜细胞张力蛋白同源物基因mRNA的表达：实验组明显高于对照组。表明人脐带间充质干细胞可以通过旁分泌机制抑制人异位子宫内膜细胞的体外增殖并促进其凋亡,且可能是通过提高张力蛋白同源物基因基因表达来达到的。 关键词：人脐带间充质干细胞;子宫内膜异位症细胞;细胞凋亡;共培养;张力蛋白同源物基因 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.013