JAK2/STAT3信号转导通路参与调节IL-6介导的肺腺癌细胞株中MMP-10的表达

目的研究Janus激酶2（JAK2）及信号转导和转录激活子3（STAT3）途径对IL-6介导的肺腺癌细胞（A549）中基质金属蛋白酶10（MMP-10）表达调节的作用,探讨MMP-10的调节机制。方法待生长状况良好的A549细胞融合生长至50%～70%时,分别用0,12.5,25,50ng/mlIL-6及AG490（JAK2特异性抑制剂）＋25ng/mlIL-6处理A549细胞24h后,采用实时RT-PCR技术检测JAK2、STAT3和MMP-10mRNA的表达水平;应用Westernblot检测MMP-10蛋白的表达水平。结果25ng/mlIL-6组STAT3mRNA表达水平较0ng/ml组高43.87%（P〈0.05）,AG490＋25ng/mlIL-6组较25ng/mlIL-6组低36.73%（P〈0.01）;AG490＋25ng/mlIL-6组MMP-10mRNA表达水平较25ng/mlIL-6组高43.21%（P〈0.01）;12.5,25,50ng/mlIL-6组的MMP-10蛋白水平显著高于0ng/ml组（P〈0.05）,且峰值出现在25ng/ml组;与25ng/mlIL-6组相比,MMP-10蛋白水平在AG490＋25ng/mlIL-6组明显降低（P〈0.05）。结论JAK2/STAT3信号转导途径可能参与调节IL-6介导的肺癌细胞株A549中MMP-10的表达。     

阻断STAT3信号转导通路抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭转移的体外研究

【目的】观察JAK2激酶特异性抑制剂AG490对非小细胞肺癌A549细胞侵袭的影响,探讨通过药物阻断STAT3信号转导通路在治疗非小细胞肺癌中的作用。【方法】应用AG490处理非小细胞肺癌A549细胞。噻唑蓝法检测各组细胞的增殖情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成率;利用B0yden小室体外侵袭模型检测A549细胞体外粘附和侵袭力;Westernblot检测STAT3信号转导通路成员的表达。【结果】AG490明显抑制非小细胞肺癌细胞增殖和细胞克隆形成（P〈0．05）,降低细胞粘附力和体外侵袭力（P〈0．05）,并可抑制JAK2／STAT3信号转导通路活化,使STAT3、CyclinE1蛋白的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]STAT3信号转导通路参与癌细胞侵袭调控,阻断STAT3通路活化可以抑制非小细胞肺癌细胞侵袭。     

口腔鳞癌细胞缺氧诱导因子表达水平与其对顺铂敏感性的研究

目的 检测不同口腔鳞癌细胞的缺氧诱导因子-1α的表达水平,探讨口腔鳞癌细胞对顺铂的敏感性是否与其表达水平相关.方法 将OSC2、OSC4、OSC5、OSC6口腔鳞癌细胞培养并检测其缺氧诱导因子-1α的表达水平,利用四唑蓝比色法(MTT)检测各种细胞对不同浓度顺铂的生长抑制率.结果 OSC2和OSC4的缺氧诱导因子-1α的表达水平明显低于OSC5和OSC6,OSC2和OSC4对顺铂的敏感性高于OSC5和OSC6,其生长受顺铂抑制明显.结论 缺氧诱导因子-1α的表达水平与口腔鳞癌细胞对顺铂的敏感性相关,缺氧诱导因子可能成为肿瘤化疗药物的新分子靶点.     

PDCD4调控STAT3信号通路对肾癌细胞凋亡的影响

目的研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对肾癌细胞凋亡和信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路的影响。方法肾癌细胞RC-2中转染PDCD4过表达载体和空载体记为PDCD4组和空载体组,同时以不做转染的细胞作为对照组。在转染PDCD4过表达载体后的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490+PDCD4组,在不做转染的肾癌细胞培养液中添加STAT3抑制剂AG490记为AG490组。qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞内PDCD4 mRNA和蛋白表达。用STAT3信号通路抑制剂处理肾癌细胞,MTT测定各组细胞存活率,流式细胞术测定各组细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中STAT3、p-STAT3、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、裂解后的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)蛋白水平。结果转染PDCD4过表达载体可以提高肾癌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平,而转染空载体对细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平无显著影响。PDCD4组、AG490组肾癌细胞存活率明显降低,细胞凋亡明显增多,细胞内STAT3磷酸化水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。AG490+PDCD4组肾癌细胞存活率降低更多,细胞凋亡率进一步增加,细胞内的Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白水平增加,与PDCD4组、AG490组细胞相比,差异具有统计学意义(P0.05)。空载体组细胞存活率、凋亡率与对照组比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 PDCD4可以通过降低肾癌细胞中STAT3激活水平诱导肾癌细胞凋亡。     

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2／信号转导子和转录活化子5（JAK2／STAT5）通路特异性抑制剂——苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血（MDS—RA）骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS—RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STATS、Bcl-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测方法；粒单集落刺激因子（GM-CSF）激活10例MDS—RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bcl—xL表达，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子自细胞介素（IL）-2、IL-3、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，FQ—PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAl（2、STATS、Bcl—xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组（P〈0．01），IL-2、INF-α水平差异无显著性；AG490组JAK2、STAT5、Bcl-xL基因表达与空白对照组比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平，进而影响JAK2／STAT5通路信号转导，下调Bcl-xL表达。     

JAK2/STAT3信号通路在应激性溃疡大鼠胃黏膜炎症反应中的作用研究

目的：探讨Janus激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活子3（STAT3）信号通路在应激性溃疡（SU）的胃黏膜炎症反应过程中的作用。方法：选用雄性清洁级SD大鼠96只,随机分为4组,分别为：正常对照组（NC组）、应激性溃疡组（SU组）、抑制剂组（AG490组）、二甲基亚砜组（DMSO组）。建立水浸束缚SU大鼠模型。4组大鼠分别于实验开始后2h、4h、8h、16h各取6只,测定胃黏膜血流量（GMBF）,计算溃疡指数（UI）。观察胃黏膜组织学变化,测定TNF-α、IL-1β、IL-6以及JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达量。结果：SU组GMBF明显低于NC组,而UI明显高于NC组（P〈0.01）;AG490组GMBF明显高于SU组,而UI明显低于SU组（P〈0.01）。通过造模前给予抑制剂AG490,胃黏膜病理学变化明显改善。SU组TNF-a、IL-1β、IL-6以及p-JAK2、p-STAT 3表达量明显高于NC组（P〈0.01）,而AG490组较SU组显著降低（P〈0.01）。结论：JAK2/STAT 3信号通路参与了SU大鼠胃黏膜炎症反应过程,使用JAK2特异性抑制剂AG490可以减轻SU大鼠胃黏膜炎症反应。     

抑制JAK/STAT通路对烫伤后金黄色葡萄球菌脓毒症大鼠肝损害的影响

目的：研究JAK激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路对烫伤后金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染致严重脓毒症大鼠肝损害的影响。方法：采用烫伤后金葡菌感染致严重脓毒症的大鼠模型,60只动物随机分为正常对照组,烫伤对照组,烫伤后金葡菌感染组,JAK2激酶抑制剂AG490和STAT3抑制剂雷帕霉素（RPM）处理组,采用逆转录多聚酶链式反应和酶联免疫吸附法,分别检测肝组织中肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因和蛋白表达,肝功能指标的改变。结果：AG490和RPM早期干预均能显著降低烫伤脓毒症大鼠肝组织TNF－αmRNA表达峰值（P均＜0．01）,AG490处理后2小时肝组织TNF－α的蛋白水平也有所下降,同时,血清丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶亦显著降低（P＜0．01或P＜0．05）,结论：脓毒症早期抑制JAK／STAT通路的活化有助于减轻肝组织炎症反应及急性肝损害。     

血管内皮细胞生长因子在舌鳞状细胞癌的表达及意义

目的 :研究血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在舌鳞状细胞癌 (舌鳞癌 )组织中的表达及与舌鳞癌患者预后的关系。方法 :应用免疫组化S -P法对 75例舌鳞癌石蜡切片进行血管内皮细胞生长因子定性测定 ;同时对阳性组与阴性组患者预后进行比较。结果 :VEGF表达阳性率为 5 2 %。VEGF表达与舌鳞癌细胞分化程度有关 (P <0 0 5 ) ;与颈淋巴结转移呈正相关 (r =0 4,P <0 0 1) ;与患者 5年生存率呈负相关 (r =-0 32 ,P <0 0 1)。结论 :VEGF与舌鳞癌的生物学行为有关 ,可作为判断舌鳞癌患者预后的指标。     

STAT3和CyclinD1在口腔高分化鳞状细胞癌化疗前后的表达及临床意义

目的探讨STAT3和CyclinDl在口腔高分化鳞状细胞癌化疗前后的表达及其与预后的关系。方法选择2003年1月至2013年6月在我院接受手术治疗的高分化口腔鳞状细胞癌72例,其中术前未化疗组34例,术前静脉化疗组38例,免疫组化法检测STAT3和CyclinDl的表达,并分析STAT3和CyclinDl的表达与肿瘤大小、性别、年龄、淋巴结转移及临床分期之间的关系。结果与未化疗组相比,术前化疗可以明显降低高分化口腔鳞癌中STAT3和CyclinDl的阳性率;STAT3和CyclinDl表达情况与高分化口腔鳞状细胞癌的淋巴结转移、部位及临床分期（T1、T2）相关（P〈0．05）,而与患者的年龄、性别、瘤体大小及T3期无关（P〉0．05）。结论术前化疗可以降低高分化口腔鳞癌中STAT3和CyclinDl的表达,进而减少淋巴结的转移和改善预后。     

Multicenter Randomized Phase 2 Clinical Trial of a Recombinant Human Endostatin Adenovirus in Patients with Advanced Head and Neck Carcinoma

A randomized, open-label, phase 2, multicenter clinical trial was conducted to evaluate the efficacy and safety of the addition of a recombinant human endostatin adenovirus (E10A) to cisplatin and paclitaxel in patients with advanced head and neck squamous cell carcinoma or nasopharyngeal carcinoma. Patients with locally advanced or metastatic head and neck squamous cell carcinoma or nasopharyngeal carcinoma not suitable for operation or radiotherapy were randomly assigned to receive E10A plus chemotherapy every 3 weeks for a maximum of six cycles or to receive chemotherapy only. One hundred and thirty-six eligible patients were randomly assigned. The addition of E10A did not significantly improve the objective response rate (29.9 versus 39.7%, P = 0.154). However, patients who received endostatin had longer progression-free survival (7.03 versus 3.60 months, P = 0.006; hazard ratio: 0.55). The combination of E10A with chemotherapy benefited prior chemotherapy-treated patients and those who received three to four treatment cycles (6.50 versus 3.43 months, P = 0.003; 8.27 versus 4.27 months, P = 0.018; respectively). The overall disease control rate significantly increased from 80.6% in the control group to 92.6% in the test group (P = 0.034). Except for fever, no adverse events were associated with the E10A treatment. In summary, E10A plus chemotherapy is a safe and effective therapeutic approach in patients with advanced head and neck squamous cell carcinoma or nasopharyngeal carcinoma.     

Small interfering RNA targeting 14-3-3ζ increases efficacy of chemotherapeutic agents in head and neck cancer cells

Patients diagnosed in advanced stages of head and neck squamous cell carcinoma often show limited response to chemotherapeutic agents. Recently, we reported the overexpression of 14-3-3ζ protein in head and neck premalignant and cancer tissues using liquid chromatography-tandem mass spectrometry with isotopic labeling and revealed its significance as a prognostic marker using immunohistochemical analysis. In this study, we determined the potential of 14-3-3ζ as a therapeutic target for head and neck cancer. Small interfering RNA (siRNA) targeting 14-3-3ζ was used to downregulate its expression in head and neck cancer cells in culture. Cell cycle analysis showed that head and neck cancer cells transfected with siRNA targeting 14-3-3ζ showed G(2)-M arrest. These siRNA transfectants also showed increased cell death on treatment with any one of the following chemotherapeutic agents: cisplatin, 5-fluorouracil, paclitaxel, or doxorubicin in comparison with the no transfection controls. Flow cytometric analysis using propidium iodide staining showed increased sub-G(0) fraction in siRNA-transfected cells treated with any of these chemotherapeutic agents, suggesting cell death; in addition, Annexin V staining and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling assay revealed increased apoptosis. Taken together, our results strongly showed that downregulation of 14-3-3ζ expression may serve to improve the sensitivity of head and neck cancer cells to chemotherapeutic agents.     

紫杉类联合顺铂+氟尿嘧啶治疗局部晚期头颈部鳞癌效果的系统评价

目的系统评价紫杉类联合顺铂+氟尿嘧啶与顺铂+氟尿嘧啶比较治疗局部晚期头颈鳞癌的有效性和安全性。方法计算机检索h e Cochrane Library(2013年第1期)、PubMed、EMbase、Web of Science、CBM、CNKI、VIP和WanFang Data数据库,收集所有紫杉类联合顺铂+氟尿嘧啶与顺铂+氟尿嘧啶比较诱导化疗治疗局部晚期头颈鳞癌的随机对照试验(RCT),检索时限均从建库至2013年4月1日。由2位评价员按纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料并评价质量后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果共纳入7个RCT,2088例患者,其中紫杉类联合顺铂+氟尿嘧啶诱导化疗组(TPF组)1051例,顺铂+氟尿嘧啶诱导化疗组(PF组)1037例。Meta分析结果显示:TPF组与PF组在1年总生存率[RR=1.12,95%CI(1.02,1.23),P=0.02]、2年总生存率[RR=1.20,95%CI(1.11,1.29),P<0.00001]、3年总生存率[RR=1.18,95%CI(1.07,1.31),P=0.0007]、1年无进展生存率[RR=1.18,95%CI(1.08,1.28),P=0.0002]、2年无进展生存率[RR=1.20,95%CI(1.06,1.36),P=0.003]、3年无进展生存率[RR=1.48,95%CI(1.25,1.74),P<0.00001]、完全缓解率[RR=1.67,95%CI(1.26,2.23),P=0.0004]和总反应率[RR=1.18,95%CI(1.11,1.27),P<0.00001]方面差异均有统计学意义,TPF组均优于PF组。在不良反应方面,与PF相比,TPF组中性粒细胞减少症发生率[RR=1.42,95%CI(1.24,1.63),P<0.00001]、脱发发生率[RR=16.09,95%CI(4.59,56.38),P<0.0001]和中性粒细胞减少性发热发生率[RR=2.21,95%CI(1.29,3.80),P<0.004]更高。结论紫杉类联合顺铂+氟尿嘧啶诱导化疗治疗局部晚期头颈鳞癌具有较好的治疗效果,但不良反应较多。