噪声磁场阻断工频磁场对佛波酯的协同抑制效应

目的　研究噪声磁场对低强度工频磁场诱导或增强致癌物 12 氧 14 酰佛波 13酯(TPA)对细胞缝隙连接通讯功能 (GJIC)抑制作用的干预。方法　NIH3T3小鼠成纤维细胞分别受5 0Hz 0 2mT、0 2mT TPA极低频磁场或 (和 )同等强度的噪声磁场作用 2 4h后 ,采用激光共聚焦显微镜 ,用荧光漂白后恢复技术测定细胞的GJIC功能。结果　 0 2mT工频磁场与TPA可协同抑制GJIC功能 ,其荧光恢复率为 (2 3± 11) % ,与对照组的 (46± 19) %及TPA组的 (34± 17) %比较 ,均差异有非常显著性 ;当叠加 0 2mT噪声磁场后 ,荧光恢复率为 (35± 19) % ,可显著拮抗 0 2mT磁场对TPA的协同抑制作用。结论　 0 2mT噪声磁场可以阻断同等强度磁场协同TPA抑制细胞GJIC的作用。     

工频磁场辐照导致细胞连接蛋白Cx43的异常移位

目的　研究 5 0Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx4 3移位的影响 ,以探索极低频磁场 (ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯 (GJIC)的机制。方法　用 5 0Hz、0 .8mT的正弦磁场和 (或 )十四酰基咐哌醇酯 (TPA ,5ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)处理 2 4h(其中TPA处理 1h)。采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦显微镜进行连接蛋白Cx4 3定位的测定 ;采用Westernblot方法检测胞浆和核内Cx4 3蛋白的含量。结果　正常组细胞间连接处有明亮的点状标记 ,连接成线 ;TPA处理组、0 .8mT正弦磁场单独作用组及 0 .8mT正弦磁场联合TPA处理组细胞的连接处标记斑点均较正常组减少 ,大量Cx4 3蛋白标记斑点出现在胞浆内 ,且在核附近聚集。各组核内Cx4 3蛋白条带很淡 ,而胞浆内Cx4 3蛋白含量ELF组 (2 .0 3± 0 .89)和TPA组 (2 .4 3± 0 .82 )明显增加 ,与正常组 (1.0 4± 0 .17)相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　 5 0Hz正弦磁场直接和 (或 )协同TPA抑制体外培养细胞GJIC功能与细胞连接蛋白Cx4 3内移至胞浆有关     

电磁噪声阻断极低频磁场对细胞缝隙连接功能的抑制效应

目的　探讨电磁噪声对 5 0Hz磁场诱导的细胞缝隙连接通讯功能 (GJIC)抑制的干预作用。方法　小鼠成纤维细胞 (NIH 3T3)受 5 0Hz 0 .4mT极低频磁场或磁场加同等强度的电磁噪声联合作用 2 4h后 ,在激光共聚焦显微镜下 ,采用荧光光漂白后恢复技术 (FRAP)测定细胞的GJIC功能。结果　 0 .4mT磁场单独作用明显抑制细胞的GJIC ,其荧光恢复率为 2 7.6 7%± 5 .12 % ,与对照组(45 .5 7%± 9.72 % )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;而磁场与电磁噪声联合作用 (5 2 .6 1%± 8.30 % )明显拮抗磁场对GJIC的抑制作用 ,与 0 .4mT磁场组的差异有显著性 (P <0 .0 1) ,并与对照组的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　电磁噪声对极低频磁场诱导的GJIC的抑制具有阻断作用     

对苯二甲酸对NIH-3T3细胞间隙连接通讯功能的影响

目的 研究对苯二甲酸(TPA)对NIH-3T3细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法及划痕标记示踪技术(scrape-loading and dye transfer,SLDT),以0、125、250、500、1000、2000μg／ml的剂量染毒细胞,同时设立溶剂对照及阳性对照,观察TPA对GJIC的影响。结果 TPA对细胞GJIC功能抑制随着染毒剂量增大和染毒时间延长而逐渐增强,呈现剂量．效应和时间．效应关系,在250μg／ml或更高剂量染毒1h或更长时间时,细胞GJIC功能被明显抑制,在染毒8h时各剂量组细胞GJIC功能抑制效应均最显著;去除TPA后,GJIC功能有恢复倾向,但在12h内仍不能恢复至正常水平;加入哺乳动物肝脏微粒体酶(S9)能加重TPA对细胞GJIC功能抑制作用。结论 TPA原形及其代谢产物对NIH-3T3细胞GJIC功能均具有抑制作用。     

毫米波对人角质形成细胞缝隙连接通讯功能的影响

目的　研究低功率毫米波对人皮肤角质形成细胞 (HaCaT)缝隙连接通讯 (GJIC)的影响。方法　采用荧光淬灭后恢复技术 ,用激光共聚焦显微镜检测频率为 30 16GHz、功率密度分别为1 0和 3 5mW/cm2 毫米波辐照对细胞缝隙连接通讯功能的影响。结果　 12 氧 14 酰佛波酯 (TPA)5 μg/L可抑制细胞GJIC功能 ,激光淬灭后平均荧光恢复率由正常对照的 (5 5± 17) %降至 (34±13) % ,差异有非常显著性。功率密度为 1 0和 3 5mW /cm2 毫米波单独辐照不改变细胞GJIC功能 ,其平均荧光恢复率分别为 (5 2± 16 ) %和 (5 0± 17) % ;当毫米波与TPA联合作用时 ,TPA诱导的细胞GJIC功能抑制被削弱 ,其中 1 0mW /cm2 毫米波使TPA诱导的细胞GJIC功能抑制部分恢复 ,其平均荧光恢复率为 (47± 16 ) % ,差异有非常显著性 ;而 3 5mW /cm2 毫米波使细胞GJIC功能完全恢复至正常对照水平 ,其平均荧光恢复率为 (5 0± 16 ) % ,差异有非常显著性。结论　毫米波辐照可消除或减小TPA诱导的细胞GJIC功能抑制。     

共轭亚油酸对正常动物细胞和人体肿瘤细胞间通讯功能的影响

为探讨c9,t11-共轭亚油酸 (CLA)的抑癌作用可能机制 ,在促癌物 (TPA)存在下 ,对正常细胞(CHL)以及人体肿瘤细胞 (SGC 790 1细胞和MCF 7细胞 )的细胞间隙连接通讯功能 (GJIC)的影响 ,采用划痕标记染料示踪技术 (SLDT) ;c9,t11 CLA剂量为 2 5 (mol L ,5 0 (mol L ,10 0 (mol L和 2 0 0 (mol L ,阴性对照为乙醇。结果显示 ,c9,t11 CLA可明显地提高TPA对CHL细胞的GJIC的抑制效应 ,当c9,t11 CLA浓度为 2 0 0 (mol L作用 48h时 ,细胞间隙通讯功能基本上与阴性对照组相近 ;当用c9,t11 CLA作用SGC 790 1细胞和MCF 7细胞2 4h和 48h时 ,可见 (2 4h 10 0 μmol L的MCF 7细胞 ) 2 4h 2 0 0 μmol L和 48h 10 0、2 0 0 μmol L剂量组的肿瘤细胞有一定的细胞间隙通讯功能。提示c9,t11 CLA可提高SGC 790 1细胞和MCF 7细胞的GJIC的功能 ,并且不同程度的拮抗TPA对CHL细胞GJIC的抑制效应     

煤焦油对小鼠NIH/3T3细胞间隙连接通讯影响的研究

目的探讨煤焦油对小鼠肺成纤维细胞(NI H/3T3)的细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法以小鼠NI H/3T3细胞为靶细胞,煤焦油对NI H/3T3细胞GJIC的影响采用划痕标记染料示踪(SLDT)技术测定。结果煤焦油低、中、高剂量(0.1、1.5、22.5μg/ml)作用6 h后,高剂量组与阴性对照组比较,GJIC的平均水平下降,差异有统计学意义(P0.05);随着作用时间延长至12 h,各剂量组与阴性对照组比较,GJIC水平再次下降,差异均具有统计学意义(P0.05),并具有一定剂量-反应关系。结论煤焦油能够抑制GJIC功能。     

极低频磁场对细胞色素氧化酶亚基1基因转录水平的影响

目的　克隆和鉴定本研究室经DD法在Daudi细胞中筛选到的一个极低频磁场的特异反应基因 (MF 1) ,并在多种磁场敏感细胞中证实该基因反应的普遍性 ,为揭示磁场所致生物学效应的作用机制提供实验依据。方法　克隆、序列分析MF 1片段 ;选择HL 6 0、L12 10和中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)等细胞 ,用Northern技术观察该基因在不同条件的磁场辐照 (5 0Hz磁场 ,磁通密度分别是 0 .1mT和 0 .8mT ,辐照时间分别是 2 0min和 2 4h)后该基因转录水平的变化。结果　克隆测序及与GeneBank同源性比较表明 ,MF 1序列与细胞色素氧化酶亚基 1基因 (CO1)有 10 0 %同源性。HL 6 0、L12 10和CHL等细胞在 0 .1mT、0 .8mT磁场辐照 2 0min后 ,CO1转录水平 (分别为 0 .38± 0 .12、0 .37± 0 .0 4 )均比对照组 (0 .5 8± 0 .12 )下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;辐照 2 4h后 ,3种细胞该基因转录水平 (分别为 0 .4 6± 0 .0 9、0 .4 5± 0 .0 9)亦比对照组 (0 .6 5± 0 .0 6 )下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　CO1是磁场辐照密切相关的反应基因之一。磁场可能通过影响CO1的转录水平来影响细胞色素氧化酶的活力 ,从而影响多种生物学效应     

甲基对硫磷对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯和孕酮分泌的影响

目的 探索甲基对硫磷(methyl parathion,MP)对小鼠黄体细胞的细胞间隙连接通讯(gapjunctional intercellularcommunication,GJIC)和孕酮分泌的影响.方法 体外培养5周龄SPF级BALB/c小鼠黄体细胞,分别设MP暴露组(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L的MP处理3h)和GJIC促进剂——1 μmol/L异丙肾上腺素预处理组及蛋白激酶A(PKA)专一抑制剂——10 μmol/L H89预处理组与蛋白激酶C(PKC)专一抑制剂——10 μmol/L恩扎妥林预处理组(预处理5 min,0.8 mmol/L MP处理3h).采用ELISA法检测培养液中孕酮含量,划痕标记染料转移法测定贴壁细胞的GJIC.结果 高浓度(0.2～1.6 mmol/L)MP可明显抑制小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌(P＜0.05);异丙肾上腺素、H89和恩扎妥林均能缓解MP对体外小鼠黄体细胞的GJIC和孕酮分泌的抑制作用(P＜0.05).结论 MP可通过抑制小鼠黄体细胞的GJIC导致孕酮分泌受抑制,而PKA与PKC参与该过程.     

极低频磁场抑制细胞间隙连接通讯的分子机制

目的研究极低频(ELF)磁场抑制细胞间隙连接通讯(GJIC)的分子机制.方法MH3T3小鼠成纤维细胞受50Hz、0.8mTELF(24h)、12-氧-14-酰佛波13酯(TPA,2h)或ELF加TPA的作用后,用Northern和Western印迹法检测连接蛋白(Cx43)的基因转录水平及其磷酸化状态.结果各处理组的Cx43基因转录水平与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).Cx43的非磷酸化条带在正常组为107.33±27.42(以样本Cx43基因条带的特异吸光度值与相对应的GAPDH吸光度值之比来表示),与ELF处理组(64.69±27.88)、TPA处理组(45.54±20.59)和ELF+TPA处理组(39.96±11.93)比较,差异有显著或极显著性(P＜0.05、P＜0.01),在各处理组间则差异无显著性(P＞0.05).各处理组均出现了过磷酸化的P3条带.结论ELF和(或)TPA不影响Cx43基因的转录;ELF和(或)TPA抑制GJIC的主要机制是Cx43蛋白的过磷酸化.     

工频磁场抑制细胞缝隙连接通讯功能的剂量-效应研究

目的 研究５０Ｈｚ磁场对细胞缝隙连接通讯（ＧＪＩＣ）功能抑制作用的剂量－效应关系及其有关机理。方法 利用微注射法将荧光染料引入单个中国仓鼠肺来源成纤维（ＣＨＬ）细胞内,以５分钟后的荧光偶合细胞数作为ＧＪＩＣ功能的指标。     

Effect of magnetic field exposure on anchorage-independent growth of a promoter-sensitive mouse epidermal cell line (JB6)

The anchorage-independent growth of mouse epidermal cells (JB6) exposed to 60-Hz magnetic fields (MF) was investigated. Promotion-responsive JB6 cells were suspended in agar (10(4)cells/plate) and exposed continuously to 0.10 or 0.96 mT, 60-Hz magnetic fields for 10-14 days, with or without concurrent treatment with the tumor promoter tetradecanoylphorbol acetate (TPA). Exposures to MF were conducted in a manner such that the experimenter was blind to the treatment group of the cells. At the end of the exposure period, the anchorage-independent growth of JB6 cells on soft agar was examined by counting the number of colonies larger than 60 microm (minimum of 60 cells). The use of a combined treatment of the cells with both MF and TPA was to provide an internal positive control to estimate the success of the assay and to allow evaluation of co-promotion. Statistical analysis was performed by a randomized block design analysis of variance to examine both the effect of TPA treatment (alone and in combination with MF exposure) and the effect of intra-assay variability. Transformation frequency of JB6 cells displayed a dose-dependent response to increasing concentrations of TPA. Coexposure of cells to both TPA and 0.10 or 0.96 mT, 60-Hz MF did not result in any differences in transformation frequency for any TPA concentrations tested (0-1 ng/ml). These data indicate that exposure to a 0.10 or 0.96 mT, 60-Hz MF does not act as a promoter or co-promoter in promotion-sensitive JB6 cell anchorage-independent growth.     

电磁噪声抑制工频磁场诱导的应激活化蛋白激酶磷酸化

目的　研究电磁噪声对 5 0Hz工频磁场诱导细胞内应激活化蛋白激酶 (stress activatedproteinkinase ,SAPK)磷酸化的影响 ,探索电磁噪声对极低频磁场生物效应可能存在的干预作用。方法　中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)分别经 0 .4mT工频磁场、等强度的电磁噪声、工频磁场与噪声的复合磁场辐照及假辐照处理 3min和 15min后 ,裂解细胞 ,提取细胞蛋白质 ,以Western印迹技术测定并比较细胞内SAPK磷酸化 (活化 )的变化。结果　 0 .4mT的工频磁场可诱导细胞内SAPK的磷酸化。经 3min及 15min辐照后 ,磷酸化SAPK含量分别增至 4 9.3%及 5 7.0 % ,与假辐照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而相同强度的电磁噪声不能增强SAPK的磷酸化 ,磷酸化SAPK分别为 37.7%及31.8% ,与假辐照组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。复合磁场辐照 3min后 ,可明显抑制工频磁场对SAPK磷酸化的增强作用 ,磷酸化SAPK含量下降至 2 4 .4 % ,与辐照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;辐照 15min后也可降低工频磁场对SAPK磷酸化的诱导作用 ,磷酸化SAPK含量下降至 39.0 % ,与工频磁场组和假辐照组相比 ,差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　一定强度的电磁噪声可以抑制工频磁场诱导SAPK磷酸化 ,对工频磁场的生物效应存在干预作用     

工频磁场诱导肺成纤维细胞膜受体聚簇及噪声磁场的干预作用

目的 研究50Hz工频磁场对细胞膜表皮生长因子(EGF)和肿瘤坏死因子(TNF)受体聚簇的可能诱导作用,进一步说明二频磁场生物效应细胞信号起始部位及噪声磁场可能存在的干预作用。方法 将中国仓鼠肺成纤维细胞分别用EGF、TNF、O．4mT的工频磁场、噪声磁场或工频磁场与噪声磁场叠加的复合磁场处理一定时间后,以免疫组化方法标记细胞膜EGF及TNF受体,并用激光共聚焦显微镜观察分析细胞膜EGF及TNF受体的聚簇程度。结果 细胞经EGF及TNF处理5min后即可诱导相应受体的聚簇,0.4mT工频磁场辐照5min后也可诱导细胞膜EGF及TNF受体的聚簇,并均在15min时达到最大程度。然而相同强度的噪声磁场不能诱导细胞膜受体的聚簇。当等强度的噪声磁场与工频磁场叠加后,可以抑制工频磁场诱导的细胞膜。EGF及TNF受体聚簇。结论 50Hz工频磁场与相应配体一样,能诱导细胞膜EGF及TNF受体的聚簇,膜受体是电磁场可能的信号耦合位点之一。等强度的噪声磁场可干预工频磁场对细胞膜受体聚簇的诱导。     

工频磁场抑制细胞缝隙连接通讯功能的机制探讨

目的　研究工频磁场抑制细胞缝隙连接通讯（ ＧＪＩＣ） 功能的可能作用机制。方法　中国仓鼠肺成纤维（ ＣＨＬ） 细胞受０ ．８ ｍ Ｔ５０ Ｈｚ 脉冲磁场作用２３ 小时后,加入不同浓度的蛋白激酶Ｃ（ ＰＫＣ）抑制剂———斯特罗斯孢啉（ Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ,ＳＴＳ） 或十六酰基肉毒硷（ ＰａｌｍｉｔｏｙｌＤＬｃａｒｎｉｔｉａ ,ＰＭＣ） 共同作用１ 小时,中止作用后,用微注射方法检测ＧＪＩＣ 功能。结果　５０ Ｈｚ 脉冲磁场对ＧＪＩＣ 的抑制作用能被ＳＴＳ或ＰＭＣ 所拮抗,拮抗程度与 ＳＴＳ 或ＰＭＣ 的浓度有关,当ＳＴＳ、ＰＭＣ 分别达到１０ ｎｍｏｌ／ Ｌ、１０μｍｏｌ／ Ｌ 时,ＧＪＩＣ 功能恢复至（８ ．７１ ±１ ．０７） 个、（９ ．００ ±１ ．０７） 个,接近于辐照前水平（１０ ．０１ ±２ ．０１） 个。结论　工频磁场抑制ＧＪＩＣ 与ＰＫＣ 激活有关。     

工频磁场对人绒毛滋养细胞分泌功能的影响

目的研究50Hz工频磁场对离体原代培养的人早孕绒毛滋养细胞分泌功能的影响，探索工频磁场生殖健康效应的可能机制。方法体外分离、培养人早孕绒毛滋养细胞，以0．2、0．4mT强度的工频磁场分别辐照处理6、12、24、48以及72h，每一辐照组均设立相应时间的平行对照组，用电化学发光免疫分析法测定每组细胞培养液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）和黄体酮的含量并对结果进行统计分析。结果0．2mT工频磁场辐照72h内，滋养细胞分泌的HCG和黄体酮与空白对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。0．4mT工频磁场辐照48h内不影响滋养细胞的分泌；辐照72h，则可以明显抑制滋养细胞分泌HCG与黄体酮（与空白对照组相比，P〈0．05）。结论一定强度的工频磁场长时间辐照可抑制绒毛滋养细胞的分泌功能，阈强度可能在0．2至0．4mT之间。     

50Hz正弦磁场对肌质网钙释放通道Ryanodine受体的影响

目的 探讨正弦磁场对提取的骨骼肌肌质网(SR)囊泡钙释放通道(RyR1)的影响.方法 采用动态光谱法和同位素标记方法 ,分别检测了正弦磁场对SR囊泡Ca2+释放初速率、[3H]-Ryanodine平衡结合度、还原型辅酶(NADH)的氧化初速率和超氧(O·2-)产率的影响.结果 0.4 mT、50 Hz正弦磁场辐照SR囊泡30 min,由1 mmol/L NADH与1 mmol/L NAD调控的Ca2+释放初速率Con组为(10.82±0.89)pmol·mg-1 pro·s-1、MF组为(14.69±1.21)pmol·mg-1pro·s-1;上调了35%,[3H]-Ryan-odine平衡结合度上调15%,由(2.13±0.05)pmol/mg pro上升到(2.45±0.07)pmol/mg pro.另外,该磁场辐照SR囊泡30 min,导致NADH的氧化速率上调22%,由(0.88±0.11)×10-4FI/s上升到(1.07±0.13)×10-4FI/s;O·2-产率上调32%,由(0.99±0.09)×10-5FI/s上升到(1.31±0.06)×10-5FI/s. 结论 0.4 mT正弦磁场在低氧化还原电势环境下对RyR1有显著的激活,且该磁场促进了NADH氧化酶的活力和O·2-产率的增加.