陕西秦岭地区三叶木通遗传多样性的AFLP分析

目的利用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术对陕西秦岭地区6个天然居群的三叶木通种质进行遗传多样性分析。方法利用10对引物组合对111份三叶木通种质进行AFLP扩增,并评估遗传多样性。结果 AFLP扩增结果共产生221条清晰的条带,其中多态性条带132条,占59.7%。6个三叶木通居群间遗传分化系数为0.505,基因多态性指数为0.185。在Nei’s遗传距离0.13处,6个天然居群被聚为4个类群。结论陕西秦岭地区三叶木通天然居群遗传多样性水平较低,居群内与居群间的遗传变异程度基本相同。     

三叶木通AFLP反应体系的建立及优化

目的 为研究三叶木通种质资源遗传多样性,建立并优化三叶木通AFLP反应体系.方法 以三叶木通叶片为材料,对影响AFLP反应体系中连接、预扩增和选择性扩增的各因素进行分析,建立优化的AFLP反应体系.结果 建立三叶木通AFLP反应优化体系:连接体系加入T4连接酶2 U,Mse I接头100 pmol,EcoR I接头10 pmol;预扩增反应总体积20 μL,加入连接产物2.0μL,E-0、M-0各100 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+1.875mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U;选择性扩增反应总体积20 μL,加入5 μL稀释100倍的预扩增产物,E3、M3各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+1.875 mmol/L,Taq DNA酶1.5 U.结论 建立适用于三叶木通种质资源遗传多样性研究的AFLP反应优化体系.     

白术种质AFLP指纹图谱分析体系的建立和应用

目的：建立中药白术种质AFLP指纹图谱的分析体系。方法：10份野生及栽培白术样品,采用EcoRI/MseI双酶切和银染技术,以获得指纹图谱。结果：1）2倍CTAB法提取的白术基因组DNA质量最好;2）从40对AFLP引物中筛选到了16对能扩增出较强多态性的引物组合,共获得了3003条多态性条带,并根据多态位点可将10个白术种质聚类为四种类型。结论：建立的白术种质AFLP分析体系,可为种质保存和育种提供依据。     

不同种源高良姜遗传多样性的AFLP分析

目的:研究不同种源高良姜的遗传多样性,探求各种质间的亲缘关系,为合理利用高良姜种质资源及优良品种选育奠定理论基础.方法:采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术,对8个种源地的高良姜进行遗传多态性分析,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYSpc-2.11F软件计算并分析高良姜种质间的相似度,构建遗传系统进化树.结果:通过筛选得到8对AFLP引物组合,共扩增出1120个DNA条带,多态性条带为1044个,多态性位点平均为92.57%;通过构建系统进化树,将8个种源地的高良姜种质分为3类.结论:高良姜种质间存在较高多态性,遗传多样性丰富.     

基于ITS序列鉴定三叶木通与白木通

目的应用ITS条形码鉴定三叶木通与白木通中药材。方法对三叶木通与白木通的8份材料的核糖体DNA ITS区序列进行测定与分析,同时利用MEGA v5.1软件分析遗传距离并构建NJ树。结果 1参试的8份材料的ITS区序列全长均为653 bp,整个ITS序列区共有8个碱基位点(1.23%)发生了变异,其中在第56位碱基上,三叶木通为"G",白木通为"A",该位点可作为三叶木通与白木通鉴别的关键位点;2三叶木通和白木通的亲缘关系很近,但仍可以根据ITS序列进行聚类分析加以鉴别。结论 ITS序列可对三叶木通与白木通中药材作出鉴别。     

益母草种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的 通过对9份益母草种质资源的AFLP分析,探求各种质间的遗传多样性.方法 采用扩增片段长度多态性(AFLP)标记,在DNA水平上进行遗传多样性研究,筛选了32对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYS-PC软件计算并分析了益母草种质间的相似度,构建了遗传系统进化树.结果 SDS法提取的益母草基因组DNA质最较佳,能够满足AFLP分析的要求;从32对选择性扩增引物中,筛选出10对多态性较强、带型较好、分辨率较高的组合;构建了益母草AFLP指纹图谱,将9个益母草种质全部区分开来;通过构建进化树,把9个种质分成2类.结论 益母草种质资源有丰富的遗传多样性,某些形态特征差异和基因型存在相关性.     

夏枯草种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的:通过对8份夏枯草种质资源的AFLP分析,探求各种质间的遗传多样性.方法:采用扩增片段长度多态性(AFLP)标记,在DNA水平上进行遗传多样性研究,筛选了32对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYS-PC软件计算并分析了夏枯草种质间的相似度,构建了遗传系统进化树.结果:①SDS法提取的夏枯草基因组DNA质量较佳,能够满足AFLP分析的要求;②从32对选择性扩增引物中,筛选出10对多态性较强、带型较好、分辨率较高的组合;③构建了夏枯草AFLP指纹图谱,将8个夏枯草种质全部区分开来;④通过构建进化树,把8个种质分成3类.结论:夏枯草种质资源有丰富的遗传多样性,某些形态特征差异和基因型存在相关性.     

不同种源地广金钱草药材质量变异与遗传多样性分析

目的:研究不同种源地广金钱草药材质量变异及遗传多样性,为合理利用广金钱草种质资源及优良品种选育奠定基础.方法:采用AFLP分子标记技术,对18个种源地广金钱草进行遗传多样性分析,用NTSYSpc-2.11F软件计算并分析广金钱草种质间的相似度,构建遗传系统进化树;采用HPLC测定药材夏佛塔苷含量,并进行方差分析.结果:通过筛选得到8对AFLP引物组合,共扩增出844个DNA条带,多态性条带为717个,多态性位点平均为84.27％;通过聚类分析,将18个种源地的广金钱草种质分为3大类.种源间广金钱草药材夏佛塔苷含量差异显著,海南三亚种源夏佛塔苷含量显著高于其他种源地药材夏佛塔苷含量.结论:不同种源广金钱草药材质量差异显著,遗传多样性丰富,蕴藏着优质的种质资源,可以进行综合开发及优良品种选育.     

半夏栽培品遗传差异的AFLP分析

目的构建不同地区来源半夏栽培品的DNA指纹图谱,探讨利用AFLP分子标记在半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别上的可行性。方法运用扩增片段长度多态性技术(AFLP),对我国17个地区的51份半夏栽培品和4份掌叶半夏样品(外群)进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中筛选出8对多态性丰富、鉴别效率高的AFLP引物组合,构建了51份半夏栽培品的AFLP指纹图谱。聚类分析结果表明:所有半夏栽培品完全被区分开,来源地相同的种质表现出相对密切的亲缘关系,浙江等华东地区的栽培半夏同其他地区半夏有着明显遗传差异,聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持。结论AFLP分子标记可用于半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别分析,浙江、江苏等华东地区栽培半夏的遗传特性相对独立。     

广西草珊瑚种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的探索广西草珊瑚Sarcandra glabra种质资源的遗传多样性,为草珊瑚及其他中药种质资源保护、亲缘关系研究、品种选育和引种栽培提供分子生物学依据。方法利用AFLP标记对来自广西不同产地的18份草珊瑚开展遗传多样性分析,采用NTSYS软件进行聚类和主坐标分析。结果从64对AFLP引物组合中筛选出8对用于扩增,共获得319条清晰可辨条带,其中多态性条带251条,多态性位点百分率为78.68%。聚类和主坐标分析表明广西草珊瑚种质资源的遗传基础存在一定的多样性,但遗传相似性系数(0.630 3～0.836 6)较大,遗传距离较近。结论广西草珊瑚种质资源的遗传多样性偏低,应该尽快采取相应措施,对草珊瑚资源进行合理保护。     

天麻不同种质的AFLP和SSR分析

目的:研究天麻不同种质DNA指纹图谱,探讨扩增酶切片段长度多态性(AFLP)、简单序列重复(SSR)分子遗传标记技术在天麻遗传变异分析上的应用。方法:采用AFLP、SSR及其聚类树对24份不同天麻种质材料的遗传多样性等进行分析,并对这2种分子标记进行比较。结果:检测到AFLP多态性44%-89%、SSR多态性15%-69%;AFLP聚类相似性系数0.56-0.98,SSR聚类相似性系数0.13-1.00。2种分子标记将天麻变型种质聚类划分的结果相近,但SSR能将野生天麻聚在一类。结论:天麻不同种质AFLP多态性高于天麻SSR,SSR对野生天麻有较强的区分能力。     

三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选

目的研究三叶木通表观遗传多样性,建立并优化三叶木通甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplifiedpolymorphism,MSAP)反应体系。方法以三叶木通叶片为材料,利用正交试验建立三叶木通MSAP的预扩增和选择性扩增的最佳反应体系。结果建立的MSAP最佳反应体系为酶切反应:HpaII/MspI 10 U,EcoR I 10 U;预扩增反应:总体积20μL,连接产物2μL,E00、HM00各125 ng,dNTPs 0.312 5 mmol/L,Mg2+1.875 mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U;选择性扩增反应:总体积20μL,稀释200倍的预扩增产物5μL,引物E-ACT、HM-CAT各50 ng,dNTPs 0.250 mmol/L,Mg2+1.250mmol/L,Taq DNA酶1 U。利用优化的体系,最终从MSAP的80对引物中筛选出有效引物6对。结论建立的MSAP反应体系可用于后续三叶木通DNA甲基化的相关研究。     

我国三叶木通生态适宜性等级区划研究

目的:进行三叶木通的生态适宜性区划,为三叶木通人工种植基地选取和优质工业原料收购区域的确定提供依据。方法:以我国地形、土壤类型和30年气象数据为基础,根据三叶木通与地形和土壤条件之间的关系,应用ArcGIS软件的空间信息提取、空间计算和数据叠加功能,进行三叶木通生态适宜性等级划分。结果:得到了基于地形和土壤条件的三叶木通生态适宜性等级分布图,结果显示,三叶木通最适宜区主要集中在长江流域,以及陕西、河南等省的部分地区。结论:应用空间分析技术,从气候、地形和土壤方面,可以实现三叶木通的生态适宜性等级划分,为人工种植三叶木通的基地选取提供依据。     

基于AFLP分子标记的广藿香遗传多样性分析

目的 采用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记方法研究广藿香的种质遗传多样性。方法 采用12对引物对14个品种共212个样本进行AFLP分析;利用POPGENE 32,Arlequinver 3.5,MEGA7,NTSYSpc 2.10e等生物学分析软件进行多态性参数计算、主坐标分析以及聚类分析。结果 12对引物共扩增出2 238个位点,其中多态性位点有2 226个,多态位点百分率为99.38%;在种群间,有效等位基因数（Ne）为1.365 6±0.066 3,Nei''s基因多样性指数（H）为0.220 7±0.036 4,Shannon多态性信息指数（I）为0.343 7±0.050 2;在种群内,Ne为1.118 5±0.038 7,H为0.071 3±0.023 0,I为0.109 4±0.035 0;分子方差学分析（AMOVA）表明广藿香的总变异有71.57%来源于种群间,28.43%来源于种群内;聚类分析可将14个种群分为4大类。结论 AFLP分子标记结果显示,广藿香种间具有比较丰富的遗传多样性,种内遗传多样性相对较小,种间遗传分化显著,可为广藿香后续的优良种质筛选等研究提供参考依据。     

不同产地南药益智的AFLP分析

目的通过对AFLP分子标记的引物筛选和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行优化和分析,获得一套适用于南药益智的AFLP技术体系。方法采用8对引物随机配对形成64对引物,以不同产地的益智基因组DNA为模板进行AFLP-PCR扩增,再利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,筛选能够鉴定益智遗传多样性的核心引物,进一步采用NTSYS软件进行聚类分析。结果从64对引物中筛选了4对引物适合于益智AFLP分析,并以E3/M7引物组合效果最佳,扩增出104条多态性带,多态性带比率为94.54%,能够鉴定不同产地益智的种质资源。结论获得适合分析不同产地益智的AFLP技术体系,为研究南药益智遗传多样性奠定基础。     

三叶木通HPLC指纹图谱研究

目的:采用反相高效液相色谱建立三叶木通药材的指纹图谱。方法:采用HibarC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;乙腈和水梯度洗脱;流速:0.8mL/min;柱温:30℃;检测波长:210nm。结果:对采集的10批三叶木通药材进行了测定,标定了14个共有峰,建立了三叶木通HPLC指纹图谱。结论:该方法准确可靠,重现性好,可为控制三叶木通药材质量提供科学依据。     

白芷扩增片段长度多态性反应体系的建立及优化

目的 建立白芷扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系及筛选出扩增条带丰富的引物.方法 以12份白芷为试材,对AFLP分析过程中包括提取DNA的方法、DNA的提取质量和浓度、Mse Ⅰ/EcoR Ⅰ酶切反应时间等进行了研究,从64对引物中筛选适合白芷的引物.结果 改良的CTAB方法提取的DNA质量比较好,建立了一种适于白芷AFLP银染技术的优化体系:模板DNA的用量为400 ng,酶切体系中Mse Ⅰ和EcoR Ⅰ反应时间为4 h,筛选出了7对适合白芷的引物.以引物E+AGC/M+CAA构建的白芷种质资源的AFLP指纹图谱,扩增带多,多态性强.结论 建立了适用于白芷的AFLP反应体系,并筛选出了适合白芷的引物,为今后利用AFLP标记技术进行白芷鉴定及种质遗传多样性分析提供了标准化程序.     

忍冬种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的:研究国内主产区忍冬种质资源的遗传多样性,探讨它们之间的亲缘关系,并为新品种选育提供参考。方法:选用6对引物组合对13个忍冬种质进行AFLP分析,利用DPS V3.01软件计算各品种的遗传距离,按UPGMA法进行聚类分析。结果:共获得435条扩增带,其中191条具有多态性,平均多态检出率为43.9%。聚类结果表明,同一道地产区的栽培品种亲缘关系较近,山东种质基于AFLP标记的分类结果与形态特征基本一致。结论:AFLP分子标记揭示出忍冬种内存在丰富的遗传多样性,为忍冬种质资源的合理利用及品种选育提供了分子水平的理论依据。     

肉苁蓉种质资源多样性的AFLP分析

目的分析栽培与野生肉苁蓉Cistanche deserticola种质资源多样性。方法对58个种植基地和野生肉苁蓉单株进行AFLP分析,利用PopGene32软件分析群体的遗传多样性。结果栽培肉苁蓉多态位点百分率79.16%,野生居群总计多态位点百分率89.53%,4个居群平均Nei's基因多样性指数为0.1938,Shannon's多态性信息指数为0.3004,基因分化系数Gst为0.0979。结论栽培与野生肉苁蓉遗传多样性均较高,遗传分化很小。说明现阶段该物种的种内丰度较高,其濒危原因不在于此。因此,野生抚育和人工栽培是保护肉苁蓉资源并实现可持续利用的根本方向。     

明党参遗传多样性的SRAP分子标记

目的:研究明党参的遗传多样性,为明党参种质资源利用提供理论依据.方法:以10个不同居群的明党参为材料,通过SRAP分析,计算各样品间的遗传相似系数,在此基础上采用UPGMA方法进行聚类,构建树状图.结果:从160个引物组合中筛选得到17个多态性引物组合,共检测到363个基因位点,其中多态性位点有314个,平均每个引物组合产生18.47个多态性位点,多态性位点百分率为86.50%,显示了较高的多态性比率;各居群遗传相似系数在0.495 9～0.818 2;根据聚类结果可将10个不同居群的明党参分为两大类.结论:明党参不同居群间具有高度的遗传多样性;不同居群的亲缘关系与其地理分布有一定的相关性.