食管鳞状细胞癌组织中TPX2的表达

癌前病变组织中TPX2 mRNA阳性率分别为73.3%(16/22)、60.0%(12/18),正常食管黏膜组织中TPX2 mRNA几乎不表达,3种组织间比较,差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织中TPX2蛋白及mRNA的表达与癌组织浸润深度及淋巴结转移有关(P均<0.05).结论:TPX2高表达可能是食管鳞癌淋巴结转移的危险因素;TPX2有望成为食管鳞癌早期诊断及判断预后的指标.     

食管鳞癌组织中NDRGl mRNA和蛋白的表达

目的:探讨食管鳞癌组织中NDRG1 mRNA和蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系.方法:分别采用RT-PCR和免疫组织化学SP法检测49例食管鳞癌组织(分化程度Ⅰ级14例,Ⅱ级23例,Ⅲ级12例;有淋巴结转移21例,无淋巴结转移28例)、23例癌旁不典型增生黏膜组织及49例正常食管黏膜组织中NDRG1 mRNA和蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中NDRG1 mRNA相对含量低于癌旁不典型增生黏膜组织及正常食管黏膜组织(P＜0.05或0.01);不同分化程度的食管鳞癌组织之间NDRG1 mRNA相对含量差异无统计学意义(P＞0.05);伴淋巴结转移的食管鳞癌组织与无淋巴结转移的食管鳞癌组织NDRG1 mRNA相对含量差异无统计学意义(P＞0.05).癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中NDRG1蛋白( )阳性率(3/23和4/49)均低于正常黏膜组织的43/49(P＜0.01);食管鳞癌组织中NDRG1蛋白表达与癌组织的分级及有、无淋巴结转移无关(P均＞0.05).结论:食管鳞癌组织中NDRG1 mRNA和蛋白表达降低,其低表达可能与食管鳞癌发生有关.     

survivin在食管鳞状细胞癌中的表达及其与bcl-2,bax表达的相关性

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在食管鳞状细胞癌(简称食管鳞癌)中的表达,及其与bcl-2、bax基因表达的相关性.方法:应用SP免疫组织化学法检测85例食管鳞癌组织及对应癌旁正常食管黏膜组织中survivin,bcl-2和bax蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中,survivin蛋白的表达率为77.64%,显著高于癌旁正常食管黏膜组织的表达率7.06%(P＜0.05).survivin蛋白表达与食管鳞癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.05).survivin表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P＜0.05),而与bax蛋白表达无关(P＞0.05).结论:survivin在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,可能成为食管鳞状细胞癌基因治疗的新靶点.survivin基因可能与bcl-2基因在食管鳞癌的发展中协同作用.     

食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA表达

目的:检测食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA的表达.方法:应用免疫组化SP法和原位杂交方法检测49例食管鳞癌组织及其相应的30例癌旁不典型增生组织和49例正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白及其mRNA的表达.结果:①正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白和mRNA均为阳性表达.食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA阳性表达率均低于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P均＜0.05).②淋巴结转移者食管鳞癌组织与不典型增生组织中Syndecan-1蛋白和mRNA阳性表达率均低于无淋巴结转移组(P均＜0.05).③浸润至外膜的食管鳞癌组织及不典型增生组织中Syndecan-1蛋白和mRNA的阳性表达率分别低于深肌层及浅肌层(P均＜0.05).结论:人食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA均呈低表达,Syndecan-1与食管鳞癌的发生发展及浸润转移有关.     

食管鳞癌组织中磷脂酶A2mRNA检测与分析

目的 探讨分泌型磷脂酶A2-Ⅱa(secretory phospholipase A2-Ⅱa,sPLA2-Ⅱa)及胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)mRNA表达与食管癌发生、发展及浸润、转移的关系.方法 应用原位杂交法检测45例食管鳞癌组织、22例癌旁不典型增生组织及45例正常食管黏膜组织中sPLA2-Ⅱa及cPLA2 mRNA表达.结果 食管鳞癌组织中sPLA2-Ⅱa mRNA表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05);在食管鳞癌癌变过程中sPLA2-Ⅱa mRNA表达在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).cPLA2 mRNA表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(P＜0.05);cPLA2 mRNA在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),sPLA2-Ⅱa及cPLA2的表达呈正相关(rp=0.429,P=0.003).结论 sPLA2-Ⅱa及cPLA2 mRNA在食管鳞癌组织中表达显著升高,并与食管鳞癌生物学行为关系密切,提示sPLA2-Ⅱa及cPLA2低表达与食管鳞癌的发生、发展有关,sPLA2-Ⅱa及cPLA2可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.     

TPX2和Aurora A在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察靶向Xklp2靶蛋白(TPX2) 和Aurora A在口腔鳞癌组织中的表达,探讨TPX2 和Aurora A表达在口腔鳞癌治疗和预后中的意义。方法:选择口腔鳞癌标本61例,另选29 例癌旁组织和61 例正常口腔黏膜组织为对照组。应用免疫组织化学SP法检测TPX2 和Aurora A蛋白的阳性表达,在显微镜下观察阳性细胞所占百分比,并进行结果判定。采用Spearman等级相关分析法分析TPX2 和Aurora A的蛋白表达相关性。结果:免疫组织化学染色,TPX2 蛋白在正常黏膜组织、癌旁组织和口腔鳞癌组织的阳性表达率依次增高,分别为4.9 %(3/61)、51.7%(15/29) 和86.9%(53/61),各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);Aurora A 蛋白在正常黏膜组织、癌旁组织和口腔鳞癌组织的表达率依次增高,分别为3.3%(2/61)、44.8 %(13/ 29) 和72.1 %(44/ 61),各组间比较差异均有统计学意义( P<0.05)。TPX2 的蛋白表达水平与口腔鳞癌的淋巴结转移有密切关联(P<0.05)。随Aurora A表达水平的增高,口腔鳞癌的恶性程度和淋巴结转移的可能性也相对增加 ( P<0. 05)。Spearman等级相关分析,在口腔鳞癌组织中TPX2与Aurora A蛋白的表达呈正相关关系（r= 0.445,P<0.01）。结论:TPX2和Aurora A在口腔鳞癌的发生和转移过程中均具有重要的促进作用,且二者间也有相互促进的关系。     

食管鳞癌组织中胰岛素样生长因子-Ⅱ蛋白的表达

目的:检测食管鳞癌组织中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)蛋白的表达.方法:应用免疫组织化学S-P法,检测54例食管鳞癌组织,22例癌旁不典型增生组织及54例正常食管黏膜组织中IGF-Ⅱ蛋白的表达,并分析IGF-Ⅱ表达与食管鳞癌浸润、转移的关系.结果:食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织中IGF-Ⅱ蛋白的阳性表达率分别为85.19%、63.64%和22.22%,任意2者间差异有统计学意义(P＜0.01).IGF-Ⅱ蛋白的阳性表达与食管鳞癌的浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05).结论:IGF-Ⅱ蛋白在食管鳞癌组织中高表达与食管鳞癌的发生发展、浸润转移有关.     

食管鳞癌组织中CD44V6和基质金属蛋白酶-7的表达

目的:探讨CD44V6及基质金属蛋白酶-7(MMP-7)的表达与食管癌发生、发展及浸润、转移的关系.方法:应用免疫组化SP法检测60例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织及60例正常食管黏膜组织中CD44V6及MMP-7蛋白的表达情况.结果:癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织中CD44V6蛋白的阳性表达率依次降低,分别为76.7%(46/60)、60.0%(18/30)、43.3%(26/60),组间比较差异有统计学意义(χ2=14.222,P＜0.05);癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织中MMP-7的阳性表达率分别为73.3%(44/60)、80.0%(24/30)、36.7%(22/60),组间比较差异有统计学意义(χ2=23.431,P＜0.05).食管鳞癌组织中CD44V6蛋白表达与癌的浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05);MMP-7蛋白表达与癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05).结论:在食管癌的浸润、转移及黏膜上皮癌变过程中CD44V6和MMP-7可能起重要作用,二者的联合检测可望成为食管鳞癌早期诊断和判断预后的分子指标之一.     

Expression and clinical significance of Caveolin-1 in esophageal squamous cell carcinoma

目的 探讨Caveolin-1蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化法和免疫印迹法检测65例食管鳞癌患者的癌组织及对应癌旁正常食管黏膜中Caveolin-1的表达情况.结果 食管鳞癌组织中Caveolin-1蛋白的表达水平高于对应癌旁正常食管黏膜,差异有统计学意义(P＜0.05),食管鳞癌组织中Caveolin-1蛋白的表达水平与其分化程度相关(P＜0.05),与淋巴结转移、TNM分期等无关.结论 Caveolin-1蛋白在食管鳞癌中的高表达可能与其发生发展有关.     

食管鳞状细胞癌组织中EGF蛋白和mRNA的表达

目的:观察食管鳞状细胞癌组织中EGF的表达情况及其与食管鳞状细胞癌浸润、转移及发生发展的关系.方法:采用免疫组化SP法和原位杂交法分别检测62例正常食管黏膜组织、31例癌旁不典型增生组织及62例食管鳞状细胞癌组织中EGF蛋白和mRNA的表达.结果:正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中EGF蛋白的阳性表达率依次增高,分别为27.4%、45.2%、69.4%,3组间比较差异有统计学意义(x2=21.954,P＜0.01);正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中EGF mRNA的阳性表达率依次升高,分别为40.3%,48.3%,77.4%,3组间比较差异有统计学意义(x2=18.494,P＜0.05);食管鳞状细胞癌组织中EGF蛋白和mRNA的表达与癌组织的分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移有关(P均＜0.05).结论:EGF过表达与食管鳞状细胞癌的浸润、转移及发生发展有关.EGF有望成为食管鳞状细胞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因及耐消毒剂基因研究

目的 分析金属β-内酰胺酶基因及耐消毒剂基因与耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的相关性。方法 采用琼脂二倍稀释法测定246株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,Etest法进行金属酶表型的筛选,PCR检测金属β-内酰胺酶基因及耐消毒剂基因。结果 检出102株多重耐药株,21株广泛耐药株,分别占41.5%和8.5%;亚胺培南耐药组筛选出金属酶表型阳性24株,阳性率为37.5%,敏感组未检出;亚胺培南耐药组经PCR扩增金属酶阳性21株,阳性率为32.8%,其中8株为IPM-1,9株为IPM-2,4株为NDM-1,未检出VIM-1、VIM-2;敏感组株未检出金属酶基因,两组的检出率差异具有统计学意义(P<0.05);21株金属酶阳性和表型结果一致;耐药组耐消毒剂基因qacE?1阳性率为81.25%,敏感组阳性率为75%,两组间的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 耐亚胺培南铜绿假单胞菌表现为多重耐药;金属β-内酰胺酶基因的存在和其产生的金属酶是本地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的机制之一,其基因型主要为IPM-1、IPM-2和NDM-1,铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药还存在其他的主要机制;NDM-1阳性铜绿假单胞菌对头孢类抗生素、呋喃妥因、碳青霉烯类等多种抗菌药物耐药;合理使用有效的消毒剂将有利于控制NDM-1阳性菌的传播。     

无毛基因及其突变后引起的免疫学改变

无毛小鼠(hairless mice)是一种皮肤毛发结构表型性状发生遗传突变的小鼠,表现为被毛缺失或逐渐消失,包括有不同基因突变引起的多种类型,最早于1924年在伦敦的一家饲养场中偶然发现,当时认为是由野生型的Musmusculus突变所致。无毛小鼠不同于课鼠(nude mice,指一种先天性无胸腺无毛的裸体     

自杀基因联合细胞因子的癌症治疗

INTRODUCTION The transfer of suicide genes into tumor cells is currently being used in a variety of clinical gene therapy trials for the treatment of cancer, and suicide gene therapy is the transduction of a gene that transforms a non-toxic into a toxic substance[1].     

携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体的构建

目的构建携带有凋亡素(Apoptin、VP3)、内皮抑素(Endostatin)双基因的重组腺病毒载体,为其在肿瘤治疗的应用研究打下基础。方法将VP3基因和Endostatin基因克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316中,将该穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒颗粒Ad-vp3-IRES-sEndo-his。其后挑选病毒空斑获取克隆进行小剂量扩增并提取病毒DNA进行PCR、RT-PCR检查以筛选和鉴定毒种,之后大剂量扩增所选得的病毒克隆并进行纯化、测定病毒的滴度。结果所得腺病毒经PCR、RT-PCR检测表明重组腺病毒Ad-vp3-IRES-sEndo-his包装成功。测定病毒50%组织培养感染剂量(TCID50)为5.7×109/ml,病毒颗粒滴度(VP)为1.9×1011/ml。结论成功构建携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体并对其进行了大剂量扩增及提纯,达到了细胞及动物实验使用的标准。     

逆转录病毒载体介导胰岛素原基因突变体与葡萄糖激酶基因共转染的应用价值

目的研究逆转录病毒载体介导基因共转染的效率,探讨其在基因共转染领域的应用价值.方法以携葡萄糖激酶(glucokinase, gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,mpin)的逆转录病毒共同感染HepG2细胞,经G418筛选,放免法、SDS-PAGE、Western-blot挑选联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞,RT-PCR鉴定.结果 G418筛选3周获阳性细胞克隆,采用放射免疫法、SDS-PAGE、Western-blot从20个细胞克隆中挑选出联合表达GK及成熟胰岛素的HepG2细胞4株,选取1株命名为细胞克隆"β";RT-PCR证实细胞"β" 中已有两个目的基因的转录.结论在需要目的基因长期表达的基因共转染领域,逆转录病毒载体仍有一定的应用价值,但如何提高其介导的基因共转染效率有待进一步探究.     

Lumican基因与恶性肿瘤

基膜聚糖(Lumican)是富含亮氨酸低分子蛋白多糖,为细胞外基质成分。Lumican最初发现于角膜,能组织胶原空间,使角膜透明。近来发现Lumican基因在正常上皮细胞与间质细胞均有表达,并调节间质细胞分泌基质蛋白。Lumican基因表达异常影响细胞基质形成,促使肿瘤发展。本文就Lumican基因在恶性肿瘤中的表达及抗肿瘤机制加以综述。     

ApoE、A2M、ACE基因与汉人Alzheimer病的相关性研究

目的 探讨山西汉族人群载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)基因、a2-巨球蛋白(alpha-2 macroglobulin,A2M)基因、血管紧张素转换酶(angiotensin convening enzyme,ACE)基因多态性与Alzheimer病(AD)的相关性.方法 采用聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)和电泳技术,观察山西汉族群体114例(AD患者55例,正常对照59例)的apoE基因、A2M基因、ACE基因多态性的分布并进行关联性分析.结果 AD组和对照组之间apoE各基因型分布总体比较其差异有统计学意义(P<0.05),其中ε4等位基因两组间比较存在明显统计学差异(P=0.000 2),且OR值大于5;AD组和对照组A2M各基因型、等位基因分布总体比较其差异有统计学意义(P<0.05).其中Ⅰ/Ⅴ基因型和Ⅴ等位基因与AD均呈显著正相关(Ⅰ/Ⅴ,基因型OR=2.85,95%CI=1.14-7.14;V等位基因OR=2.49,95%CI=1.05-5.89);两组间ACE各基因型及等位基因间的差异均无统计学意义(P>0.05).且按年龄、血压分层后AD组和对照组中ACE基因型及等位基因的分布差异无统计学意义;按是否携有apoE ε4分层后AD组和对照组A2M、ACE各基因型及等位基因两组分布均无差异(P>0.05).结论 apoE、A2M基因是晚发性AD的危险因子;AcE基因与晚发性AD不存在关联,还不能认为是晚发性AD的危险因子;且A2M基因、ACE基因与apoE基因无相互作用.     

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

目的：构建含人IL-2 cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在真核细胞中表达，以期用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗的研究。方法：应用重叠延伸剪切技术(SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL-2／Fc，回收后克隆到中间pGEM—T：Easy TA克隆载体，得到合适的酶切位点后，用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3．1中，得到真核重组载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc。然后用脂质体法转染SP2／0细胞。结果：对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析，证明连接正确；经ELISA检测证实，该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。结论：成功构建了真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在SP2／0细胞中有效表达。     

原发性高血压与血管紧张素转换酶基因及血管紧张素原基因多态性

目的 :研究血管紧张素转换酶 (ACE)基因及血管紧张素原 (AGT)基因多态性与原发性高血压病的关系。方法 :应用PCR -RFLP技术检测 312例原发性高血压患者与正常对照组 189名健康受试者血管紧张素转换酶基因第 16内含子I/D多态性及血管紧张素原基因第二外显子M2 35T多态。结果 :原发性高血压病组血管紧张素转换酶和血管紧张素原基因各基因型和等位基因与正常对照组相比无显著差异 (P >0 0 5 ) ,而ACE DD +AGT TT基因型频率高于对照组。结论 :血管紧张素转换酶基因和血管紧张素对抗基因在部分原发性高血压发生中具有协同作用。     

Construction of adenovirus vector carrying apoptin gene and endostatin gene.

目的 构建携带有凋亡素(Apoptin、VP3)、内皮抑素(Endostatin)双基因的重组腺病毒载体,为其在肿瘤治疗的应用研究打下基础.方法 将VP3基因和Endostatin基因克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316中,将该穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒颗粒Ad-vp3-IRES-sEndo-his.其后挑选病毒空斑获取克隆进行小剂量扩增并提取病毒DNA进行PCR、RT-PCR检查以筛选和鉴定毒种,之后大剂量扩增所选得的病毒克隆并进行纯化、测定病毒的滴度.结果 所得腺病毒经PCR、RT-PCR检测表明重组腺病毒Ad-vp3-IRES-sEndo-his包装成功.测定病毒50％组织培养感染剂量(TCID.)为5.7×109/ml,病毒颗粒滴度(VP)为1.9×1011/ml.结论 成功构建携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体并对其进行了大剂量扩增及提纯,达到了细胞及动物实验使用的标准.