溶瘤病毒联合丝裂霉素对膀胱癌细胞体内外杀伤的实验研究

目的 探讨溶瘤病毒与丝裂霉素联合应用对膀胱癌T-24细胞体内外生长的抑制效应和机制.方法 将溶瘤病毒不同的感染复数或与丝裂霉素（0.1 mg/L）联合应用,通过细胞生长抑制实验及裸鼠皮下移植瘤模型,观察其对膀胱癌T-24细胞的作用及其机制.结果 与单独应用相比,溶瘤病毒与低剂量的MMC联合可明显抑制T-24细胞体外生长,诱导T-24细胞凋亡,裸鼠体内肿瘤发生时间延迟,4周后肿瘤体积与单独应用时相比,差异有显著性（P＜0.05）.与体外处理结果一致.结论 溶瘤病毒与MMC联合应用可显著增强MMC对T-24细胞的杀伤作用,进一步提高膀胱癌的疗效.     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响。建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性。结果MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关(P<0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P<0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%。结论ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的 观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响.建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性.结果 MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关 (P《0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P《0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%.结论 ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关.     

人红白血病多药耐药细胞裸鼠移植瘤模型建立的初步研究

目的：建立耐药特性稳定的裸鼠移植瘤动物模型,为进行体内肿瘤耐药机制研究和逆转药物的筛选提供实验模型。方法：体外培养白血病细胞系k562／A02及k562细胞,建立裸鼠的皮下肿瘤,K562／A02耐药细胞接种于裸鼠右背侧皮下,而亲本l〈562细胞接种裸鼠左背侧皮下,接种细胞数分别为1×10。、5×10。、1×10。、5×10’细肜只,观察肿瘤成瘤情况及生长特性,并比较体内耐药模型与体外细胞株耐药倍数的变化,同时利用免疫组织化学染色对裸鼠K562／A02移植瘤多药耐药蛋白Pgp进行鉴定。结果：1）K562裸鼠移植瘤的成瘤率为78．13％,K562／A02裸鼠移植瘤的成瘤率为81．25％。大约于第5—10天成瘤,两种肿瘤生长速度无明显差别;2）裸鼠K562／A02移植瘤肿瘤细胞和体外培养原代细胞对阿霉素的IC50分别为169．38ug／ml和181．69ug／ml,而K562移植瘤和体外k562细胞的IC50分别为3．47ug／ml和3．61ug／ml,耐药倍数无明显差异;3）K562／A02裸鼠移植瘤肿瘤细胞Pgp表达稳定。结论：以K562／A02细胞建立的裸鼠移植瘤模型,仍保持近似体外的耐药活性,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型。     

人急性淋巴细胞白血病MOLT-4细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立可移植于裸鼠的、潜伏期短、高致瘤性的人急性淋巴细胞白血病 MOL T- 4细胞株。　方法　初代移植后 ,通过单纯体内传代法进行皮下埋块和体内、体外交叉传代法进行体外传代培养后移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、细胞表面抗原表达、染色体核型等进行观察和检测。　结果　体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞裸鼠移植瘤平均潜伏期为 (2 1 .2 0± 1 .1 0 ) d,致瘤率 1 0 0 %。移植瘤的生长曲线呈“S”型 ;组织形态、超微结构和表面抗原表达特点符合 MOL T- 4细胞特点 ,染色体核型属人类染色体。　结论　通过体内、体外交叉传代法进行体外传代培养 2 0代后的 MOL T- 4细胞能成为潜伏期短、高致瘤性的细胞株 ,此法较单纯体内传代法快速、简便     

PSA特异性树突状细胞瘤苗过继免疫治疗小鼠前列腺癌

目的:利用LNCaP前列腺癌裸鼠模型,观察PSA特异性树突状细胞(dendritic cell,DC)瘤苗(PSA-DC)体外诱导的CTL体内过继输入的抗肿瘤效果。方法:采用裸鼠皮下接种LNCaP细胞的方法建立LNCaP前列腺癌荷瘤裸鼠模型;应用前期制备好的Non-DC、Ova-DC、Lys-DC及PSA-DC瘤苗体外诱导抗原特异性CTL细胞,并在LNCaP细胞接种第15天模型制备成功时首次将体外诱导的抗原特异性CTL细胞经尾静脉过继输入小鼠体内,7 d后重复输入1次。以初次治疗后50 d为终止点,观察肿瘤生长情况;观察各组荷瘤裸鼠的存活情况。结果:过继输入治疗后第30、50天,Non-DC、Ova-DC、Lys-DC及PSA-DC组瘤体明显大于肿瘤细胞接种第15天(P<0.01);Lys-DC、PSA-DC组瘤体明显小于Non-DC、Ova-DC组(P<0.01)。在观察期间内,Lys-DC、PSA-DC组裸鼠生存时间明显长于Non-DC、Ova-DC组(P<0.01)。结论:前列腺癌瘤苗PSA-DC体外诱导的PSA特异性CTL细胞过继输入可抑制裸鼠体内LNCaP肿瘤生长,提高裸鼠生存时间。     

益气解毒颗粒对HNE3细胞及其裸鼠移植瘤的抑制作用

目的观察益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3及其裸鼠移植瘤的抑制作用。方法益气解毒颗粒作用于HNE3细胞、宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤，分别进行体外抑瘤试验(包括IC50测定)和体内抑瘤试验。先行体外实验测定益气解毒颗粒对癌细胞半抑制浓度及其杀伤效力，再行体内实验，观察益气解毒颗粒对荷瘤裸鼠HNE3移植瘤的抑瘤效应，并以人宫颈癌细胞Heka移植瘤和荷瘤模型动物作对照。结果益气解毒颗粒对HNE3细胞的半抑制浓度为0．037mg／mL，并显示了明显的体外杀伤效应和细胞凋亡诱导效应。在体内抑瘤实验中，益气解毒颗粒对HNE3移植瘤的抑瘤率为74．7％，伴有细胞增殖速度、成瘤能力的明显抑制，同时提高细胞分化能力，降低肿瘤的侵袭力。结论益气解毒颗粒对鼻咽癌细胞HNE3具有明显抑制作用。     

胃癌细胞-树突状细胞融合疫苗肿瘤细胞杀伤活性研究

目的对胃癌细胞-树突状细胞(dendtitic cells,DCs)融合疫苗激活杀伤性T淋巴细胞体内外肿瘤细胞杀伤活性进行研究,为胃癌DC疫苗免疫治疗提供实验依据.方法胃癌患者外周血单个核细胞经GM-CSF,IL-4,TNF-α定向诱导获取DC.DC与SGC7901胃癌细胞经PEG诱导融合、HAT/HT筛选培养获得纯净融合细胞.MTT比色法检测融合疫苗体外杀伤胃癌细胞的细胞毒作用.观察融合疫苗对胃癌裸鼠种植瘤模型肿瘤生长的影响,流式细胞术AnnexinV/PI双标法检测瘤细胞凋亡,观察融合疫苗对肿瘤组织病理学改变的影响.结果①胃癌患者外周血单个核细胞体外定向诱导分化,可获得具备典型形态特征及表型的DC.②DC与SGC7901细胞经PEG诱导融合,HAT/HT筛选培养,可获得纯净融合细胞.③体外MTT比色检测,融合疫苗胃癌细胞杀伤率为(81.47±5.25)%,与混合培养DC组(70.53±2.46)%差异显著(P＜0.05),与单纯T细胞组(21.67±2.55)%差异非常显著(P＜0.01).④融合疫苗组荷瘤裸鼠终末肿瘤体积平均(1.298±0.021)cm3,与对照组差异非常显著(P＜0.01),抑瘤率为57.8%.⑤融合疫苗组肿瘤细胞凋亡率(54.9±1.38)%,坏死率为(21.04±1.47)%;与对照组瘤细胞凋亡百分率(20.02±0.39)%,坏死百分率(1.23±0.03)%比较差异非常显著(P＜0.01).⑥融合疫苗组肿瘤组织与对照组比较显著出血、坏死,瘤组织内大量淋巴细胞浸润.结论融合细胞疫苗激活T淋巴细胞体内外均可诱导显著胃癌细胞杀伤细胞毒活性;其应用于荷瘤动物体内,可以明显减慢肿瘤生长速度,诱导更多肿瘤细胞凋亡.     

三种镍化合物诱发转化细胞恶性度的鉴别与分析

目的 :利用已建立的三种镍化合物体外转化细胞进行裸鼠体内成瘤实验研究 ,比较它们恶性度的差异。方法 :三种镍化合物转化细胞接种BALB/C裸鼠 ,进行肿瘤细胞和转化细胞的透射电镜及扫描电镜观察。结果 :硫化镍 ,氯化镍 ,硫酸镍分别诱发的转化细胞都能在BALB/C裸鼠皮下形成肿瘤 ,病理组织学检查确定为纤维肉瘤。经扫描电镜与透射电镜观察瘤细胞形态与转化细胞有一定差别。结论 :本文进一步说明了三种镍化合物所诱发的细胞转化为恶性转化 ,且都具有体内致瘤性。     

CIK细胞联合表柔比星对肝癌的体内外杀伤作用研究

目的 研究CIK细胞联合表柔比星对肝癌细胞BEL-7402的体内外杀伤效应.方法 取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-1、IL-2、抗CD3单抗诱导CIK细胞成熟,流式细胞仪检测培养第1、7、14 d的CIK细胞表型.Cell Counting Kit-8试剂盒(CCK-8)检测CIK细胞、表柔比星及两者联合对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应.用肝癌细胞BEL-7402建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为生理盐水对照组、CIK治疗组、表柔比星组、CIK联合表柔比星治疗组(联合组),观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用.结果 CIK细胞经多种细胞因子诱导培养后,CD_3~+CD_(56)~+细胞比例明显上升,14 d时CD_3~+CD_(56)~+细胞比例达(46.83±2.53)%,与第1天比差异有显著性(P<0.01),细胞量扩增了近1 000倍.联合组对肝癌细胞的杀伤率明显高于各单独治疗组,差异有显著性(P<0.05).体内实验表明,CIK细胞联合表柔比星可明显抑制裸鼠肝癌细胞种植瘤的生长且无明显副作用.结论 细胞因子活化杀伤细胞疗法联合化疗能显著抑制体内外肝癌细胞BEL-7402的生长,为肝癌的生物化疗提供了实验室依据.     

异黄酮类化合物F11抗癌活性的实验研究

目的 研究经结构修饰后的异黄酮类化合物F11是否具较好的体外、体内抗癌活性.方法 采用MTT法,以5,7,4'-三羟基异黄酮(genistein, GEN)作为对照,研究化合物F11对Hela细胞的抗增殖作用;采用荷瘤裸鼠模型,以GEN和环磷酰胺作为对照,研究化合物F11在体抗癌效应.结果 MTT实验结果显示,在相同的作用浓度下,F11处理组Hela细胞形态异常改变,死细胞明显增多,细胞存活率显著低于GEN作用组(P＜0.05).荷瘤动物实验结果表明与GEN相比,F11对Hela细胞裸鼠移植瘤的生长有显著的抑制作用(P＜0.01),效果与环磷酰胺相当,且未观察到毒副反应.结论 异黄酮类化合物经过特定结构修饰,可显著增强其抗癌效应,有值得进一步研究开发的潜在价值.     

正常人CIK细胞对卵巢癌SKOV3ip细胞抗肿瘤的活性

目的　观察正常人CIK(cytokine inducedkiller)细胞对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的体外细胞毒活性以及对卵巢癌腹水瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法　取正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子γ IFN、IL 2、抗 -CD3单抗和IL - 1,体外诱导成CIK细胞 ,用MTT法测定CIK细胞体外对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的细胞毒活性 ,并与CD3AK作对比。在Babl/c裸小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3ip细胞 ,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果　体外实验证明 ,CIK细胞对SKOV3ip有明显的细胞毒活性 ,对比CD3AK其抑瘤率为 89.7%与 6 7.1% (P <0 .0 5 )。裸鼠卵巢癌腹水瘤模型体内实验表明 ,CIK细胞能够显著抑制癌性腹水生长 ,其抑制率可达 10 0 %。结论　CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞 ,具有较强的体内外抗卵巢癌细胞活性 ,具有明显的抑制癌性腹水生长的作用 ,有可能用于临床上卵巢癌腹水的过继性免疫治疗     

嗅鞘细胞移植联合应用甲基强的松龙修复急性脊髓损伤

目的探讨嗅鞘细胞髓内移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复脊髓损伤的可行性和疗效,观察甲基强的松龙与嗅鞘细胞的相互作用。方法将Wistar大鼠做成脊髓半切模型,随机分成髓内单独移植嗅鞘细胞组(OEC)、嗅鞘细胞联合应用甲基强的松龙组(OEC MP)、单独应用甲基强的松龙组(MP)和对照组(CG)共四组,分期进行联合行为学综合评分(CBS评分)及组织学检查,评价各组对脊髓修复情况。结果CBS评分OEC组及OEC MP组较MP组及CG组在3周后各时段差别有显著意义(P<0.01);OEC组和OEC MP组没有明显差别(P>0.05);MP组与CG组有显著差别(P<0.05)。OEC组及OEC MP组组织学改变与MP组及CG组有显著差别,前两组间无显著差别。结论嗅鞘细胞髓内移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复脊髓损伤具有很好的疗效,但未见MP与OEC的明显协同作用。     

Combined Transplantation of Neural Stem Cells and Olfactory Ensheathing Cells Improves the Motor Function of Rats with Intracerebral Hemorrhage

Objective To investigate the effects of combined transplantation of neural stem cells （NSC） and olfactory ensheathing cells （OEC） on the motor function of rats with intracerebral hemorrhage. Methods In three days after a rat model of caudate nucleus hemorrhage was established, NSCs and OEC, NSC, OEC （from embryos of Wistar rats） or normal saline were injected into bematomas of rats in combined transplantation group, NSC group, OEC group, and control group, respectively. Damage of neural function was scored before and in 3, 7, 14, 30 days after operation. Tissue after transplantation was observed by immunocytochemistry staining. Results The scores for the NSC, OEC and co-transplantation groups were significantly lower in 14 and 30 days after operation than in 3 days after operation （P〈0.05）. The scores for the NSC and OEC groups were significantly lower than those for the control group only in 30 days after operation （P〈0.05）, while the difference for the NSC-OEC group was significant in 14 days after operation （P〈0.05）. Immunocytochemistry staining revealed that the transplanted OEC and NSC could survive, migrate and differentiate into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. The number of neural precursor cells was greater in the NSC and combined transplantation groups than in the control group. The number of neurons differentiated from NSC was significantly greater in the co-transplantation group than in the NSC group. Conclusion Co-transplantation of NSC and OEC can promote the repair of injured tissue and improve the motor fimction of rats with intracerebral hemorrhage.     

CD146过表达对SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤能力的影响

目的：研究 CD146基因在卵巢癌细胞 SKOV3中过表达对其接种裸鼠皮下生成肿瘤能力的影响。方法:以脂质体介 导的CD146基因转染卵巢癌细胞SKOV3,G418筛选阳性克隆细胞,并经Western blot鉴定其过表达CD146蛋白。分别应用MTT 与软琼脂克隆形成试验评价过表达 CD146克隆细胞对细胞增殖与体外集落形成能力的影响,并将这些细胞接种裸鼠皮下组 织,每周观察、记录肿瘤的生长状况至裸鼠处死,称量肿瘤重量并对肿瘤组织进行免疫组织化学染色观察。结果:SKOV3细胞经 脂质体转染与 G418筛选后,可获得过表达 CD146的阳性克隆细胞。CD146过表达明显抑制了 SKOV3细胞的体外增殖能力与 集落形成能力,亦明显抑制了裸鼠皮下的肿瘤生成能力,其肿瘤重量与体积明显比对照组小（P < 0.05）。免疫组织化学染色结 果表明过表达CD146的SKOV3细胞接种裸鼠生成的肿瘤组织仍可高表达CD146蛋白分子。结论:CD146过表达明显抑制卵巢 癌细胞SKOV3的体外增殖能力与裸鼠体内的致瘤性,可能是卵巢癌预后的一个潜在分子标记。     

细胞外基质支架对大鼠嗅鞘细胞神经营养素表达的影响

目的:构建一种复合型细胞外基质支架,并探讨其是否影响大鼠嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OEC)合成神经营养素。方法:将纤维蛋白原、层黏连蛋白和纤黏连蛋白按一定比例混合,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建细胞外基质支架,在支架表面种植大鼠OEC,观察其生长增殖情况和对神经营养因子表达能力的影响。结果:OEC在复合支架上贴壁良好,增殖旺盛,伸出较长的突起。生长于复合支架上的OEC较玻璃片上的细胞合成更多的神经营养素。结论:细胞外基质支架能促进OEC增殖,同时促进OEC神经营养素分泌。     

人鼻咽癌自发性高淋巴道转移模型的建立及生物学特性研究

目的在裸鼠体内建立人鼻咽癌自发性高淋巴道转移模型,并研究该癌细胞的有关生物学特性。方法将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ２ＺＨ５）移植于裸鼠皮下,待裸鼠发生转移时,取其淋巴结转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代,重复传９代后,观察各代裸鼠的转移率和转移途径;各代癌细胞体外增殖能力、癌细胞生长因子和受体表达的变化;裸鼠体内移植瘤增殖指数及瘤重和体积倍增时间的变化。结果癌细胞在裸鼠体内传９代后,各代裸鼠的淋巴结转移率一直稳定在８５％以上,且转移途径较为单一;各代癌细胞的体内外增殖能力不断增强。结论建立了人鼻咽癌自发性高淋巴道转移模型;鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强,两者关系密切     

Notch-1对大鼠嗅球成鞘细胞神经生长因子表达的影响

目的 观察Notch-1对嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)神经生长因子(nerve growth factor,NGF)表达的影响.方法 原代培养大鼠OECs,用有活性的Notch质粒(NotchICV),无活性的Notch质粒(NotchVK)以及空质粒分别转染OECs,将实验对象分成NotchICV转染组,NotchVK转染组和空白质粒组,应用免疫荧光双标、Western blot及RT-PCR技术,检测各组OECs中NGF及其mRNA的表达变化.结果 转染Notch-1后,OECs中NGF的表达明显增高.免疫荧光双标结果显示,NotchICV转染组OECs 中NGF的表达较NotchVK转染组和空白质粒组均明显增高(P<0.05);RT-PCR结果显示,NotchICV转染组OECs中NGF mRNA的表达(0.496 1±0.026 9)均高于NotchVK转染组(0.244 5±0.013 4)及空白质粒组(0.245 9±0.016 0)(P<0.01);Western blot结果显示,NotchICV转染组OECs中NGF的表达(0.887 5±0.016 6)均高于NotchVK转染组(0.686 2±0.059 2)和空白质粒组(0.682 1±0.067 0)(P<0.01).结论 Notch-1转染OECs后,其NGF的表达上调,提示Notch-1能增强OECs中NGF的合成.     

雄激素受体反义RNA抑制前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的研究

目的　观察雄激素受体 (Androgenreceptor ,AR)反义RNA对前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的影响。方法　分别用细胞平板克隆形成试验及裸鼠接种实验观察前列腺癌细胞LNCaP、LNCaPNeo和LNCaPas AR 细胞致瘤性的变化。结果　LNCaPas AR细胞的克隆形成效率显著低于LNCaPNeo细胞 (P <0 .0 1)。LNCaPas AR细胞在雄性裸鼠体内形成的瘤体体积明显小于LNCaPNeo细胞并且形成瘤体的时间延长。结论　雄激素受体反义RNA可抑制前列腺癌细胞LNCaP成瘤能力。     

混合胸腺裸小鼠移植模型的建立及重建T细胞功能的体外研究

目的　建立混合胸腺移植模型 ,并在体外观察重建T细胞的功能状况。方法　首先建立混合胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模型 ,流式细胞仪检测受体动物外周血中T细胞的重建情况 ,并利用刀豆素A(concanavalinA ,ConA)增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果　混合胸腺移植 3个月后 ,移植的胸腺组织在裸小鼠肾包膜下能够正常发育 ,并有效重建了受体外周血中的CD4 T和CD8 T细胞。体外功能检测显示 ,受体的脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性 ,并对供体胸腺来源的F3Q44大鼠抗原刺激表现为特异性的低反应。结论　混合胸腺移植不仅在数量上可重建受体裸小鼠外周血中CD4 T和CD8 T细胞 ,而且受体中重建的T细胞还可发挥正常的免疫功能