硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法 前房内分别注入M-K液，以及含有3μmol／L、5μmol／L、8μmol／L亚硒酸钠的M-K液后。全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后。分别行内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力检测、角膜内皮细胞活性染色、角膜内皮显微镜检查。结果 保存后实验组GSH-Px活力明显高于对照组。保存3d及5d后实验组内皮细胞存活率高于对照组。内皮显微镜显示。保存后的六边形细胞百分率各实验组均较对照组高。保存5d后实验组细胞平均密度高于对照组。结论 在角膜中期保存液中加入一定剂量的硒，能够提高内皮细胞的抗氧化能力，延长角膜的保存时间。     

中期保存的兔角膜内皮细胞的形态学观察

目的　通过对兔角膜内皮细胞形态结构的观察 ,了解中期保存对内皮细胞的影响。方法　前房内注入M K液 ,全眼球保存兔角膜。在保存 1、3、5、7d后 ,分别进行角膜内皮显微镜检查、角膜内皮细胞活性染色及电镜学检查。结果　随着保存时间的延长 ,角膜内皮细胞的活性不断降低。尤其在保存 7d后 ,角膜内皮细胞存活率及六边形细胞百分率明显下降。超微结构显示细胞膜连续性破坏 ,细胞器丢失 ,细胞死亡。结论　角膜中期保存液保存角膜的最佳时间为 1～ 5d。     

保存液中添加bFGF对中期保存角膜细胞活性的影响

目的:研究bPGF对中期保存角膜细胞活性的影响.方法:配制保存液保存新西兰大白兔角膜,对照组为配制保存液保存,实验组为配制保存液加入bFGF(10ng/ml),两组在30～34℃恒温条件下保存16～18h后转入4℃低温保存,在保存3、5、7d分别取保存角膜片行30～34℃ 2h复温,台盼蓝-茜素红联合染色检测角膜内皮细胞活性、电镜检测细胞超微结构和PCNA检测细胞增殖情况.结果:加入bFGF实验组保存角膜,角膜水肿较轻、皱褶较少、透明度较高,角膜内皮细胞形态结构和活性较好(P＜0.05);并且角膜上皮、基质和内皮层有PCNA阳性细胞,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:bFGF在中期角膜保存中有促进细胞增殖、保持角膜细胞活性的作用,可应用于中期角膜保存.     

器官培养角膜保存法保存兔角膜的观察研究

目的观察器官培养角膜保存法保存角膜活性的效果,探讨该方法临床应用的可行性.方法兔角膜28只,分为两组,实验组16只眼,对照组12只眼.实验组用31℃器官培养液保存,对照组用K-液4℃保存.两组中每4只角膜分别保存3、7、14 d.实验组4只角膜保存14 d后移入运输液中培养3 d.保存前测角膜厚度,做内皮细胞形态学检查和台盼蓝染色.保存后不同时间做相同检查和茜素红染色, 并用透射电镜观察角膜内皮细胞超微结构.在取出角膜前从所有保存瓶抽取保存液样本做细菌和真菌的培养. 临床应用器官培养保存1周的角膜行穿透性角膜移植术1例.结果实验组和对照组角膜内皮细胞形态、活性率1周后差异有显著性.2组角膜厚度差异有显著性.透射电镜检查, 实验组7 d和14 d角膜内皮细胞超微结构完整.对照组7 d后线粒体肿胀,14 d可见细胞结构破坏.穿透性角膜移植术临床病例随访2年,角膜移植片基本透明.结论器官培养液保存角膜的效果确切,活性保存时间明显长于K-液保存.     

三种不同方法保存的兔角膜内皮细胞形态学观察

目的 通过观察兔角膜内皮细胞形态,了解不同保存方法和不同保存时期及时间点对角膜内皮细胞活性和密度的影响.方法 采用短期湿房4 ℃保存6 h、D-X角膜中期保存液4 ℃保存3 d、长期深低温保存3个月,取3组各自限定时间的保存角膜片进行检测,分别行角膜内皮细胞茜素红和台盼蓝活性染色、光学显微镜观察及图像分析.结果 长期深低温保存后的兔角膜内皮细胞活性率、细胞密度及六边形细胞率低于前两组,细胞面积高于前2组,均具有统计学差异.结论 正确掌握3种方法,维持角膜内皮细胞生物活性,虽然深低温保存方法对角膜内皮细胞活性和密度有一定影响,但其活性率在80%以上,仍在角膜移植手术可接受的范围内.     

氟碳保存角膜的实验研究

目的　探讨氟碳在角膜中期保存中的应用价值。方法　将 6 0只新西兰兔角膜随机分为 3组 :( 1)空白对照组 ;( 2 )通氧组 ;( 3)实验组。每组角膜各 4 0片。空白对照组以Dexsol中期保存液常规保存 ;通氧组在常规保存同时持续通氧保存 ;实验组在通氧组基础上加入等量氟碳液保存。 3组保存 7d ,14d后观察角膜透明度和厚度 ,行组织细胞化学染色 (各组取 15片角膜 ) ,扫描电镜观察 (各组取 2片角膜 )及细菌学检查。结果　角膜透明度和厚度 :空白对照组、通氧组角膜外观灰白略显混浊 ,水肿、增厚 ;实验组角膜仅轻度水肿、增厚 ,外观仍透明。角膜内皮细胞密度及存活率 :实验组与空白对照组、通氧组相比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,实验组的内皮细胞形态活性有明显改善。结论　氟碳可有效改善角膜保存液的效果 ,改善中期保存的角膜质量     

自制人血清中期角膜保存液对兔角膜的保存效果

目的 研制一种适合我国国情的人血清角膜中期保存液.方法 配制人血清浓度分别为10%(A组)、20%(B组)、30%(C组)、0%(D组)的角膜保存液保存兔角膜,用Optisol-GS角膜保存液作对照组,分别在保存第3、7、10、14天进行角膜内皮细胞活性率检测、HE染色、扫描电镜超微结构观察,并检测角膜保存液的理化性质...     

透明质酸钠在角膜中期保存中的实验研究

目的:研究透明质酸钠(SH)在角膜中期保存中的作用.方法:在中期保存液(MMK液)中,加入SH制成保存液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(浓度分别为0.05%、0.03%、0.01%),以未加SH的MMK液作对照并作组间对照.对保存后的兔角膜片行大体和超微结构观察、内皮细胞苔盼兰-茜素红染色、琥珀酸脱氢酶(SDH)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)活性检测.结果:加入SH的三组所保存的角膜片其透明度、超微结构均好于对照组,角膜内皮细胞活性以实验Ⅰ组最高,对照组最低,各组间比较有显著性差异.结论:SH对角膜内皮细胞有明显的保护作用,可提高保存角膜的质量,延长保存时间,其效果与SH浓度有关.     

中长期保存的角膜内皮细胞超微结构的变化

目的 探讨角膜保存方法及保存角膜内皮细胞的超微结构变化.方法 取新鲜眼球经消毒处理后,抽空房水,前房注入optisol、likorol角膜保存液或C3F8惰性气体,全眼球置于保存液中,4℃冰箱保存.分别取保存3～7d的角膜5例(保存组),通过电子显微镜观察角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核及线粒体结构,应用角膜内皮机检测角膜内皮细胞密度及六边形细胞比率,并与3d内保存的新鲜角膜对照(对照组).结果 保存组与对照组角膜内皮细胞的细胞膜、细胞核、线粒体之结构变化无明显差异;两组角膜内皮细胞密度及六边形细胞比率差异也无统计学意义(均P>0.05).结论 在optisol、likorol角膜保护液和C3F8气体中长期保存的角膜与新鲜角膜无明显差异.     

氟碳保存角膜的实验研究

目的　探讨氟碳在角膜中期保存中的应用价值。方法　将 6 0只新西兰兔角膜随机分为 3组 :( 1)空白对照组 ;( 2 )通氧组 ;( 3)实验组。每组角膜各 4 0片。空白对照组以Dexsol中期保存液常规保存 ;通氧组在常规保存同时持续通氧保存 ;实验组在通氧组基础上加入等量氟碳液保存。 3     

探讨流式细胞仪测定不同浓度维生素K3对肝癌细胞凋亡周期的影响

目的:对维生素K3诱导肝癌细胞分子凋亡机制进行初步探讨从而达到指导临床肝癌治疗的作用。方法:对人类肝癌细胞株HCC-9204进行培养并选取对数生长期的肝癌细胞,不同浓度及时间的维生素K3进行诱导,通过荧光染色法在激光共聚焦显微镜下观察凋亡细胞核形态。CKK-8法对维生素K3抑制HCC-9204细胞增值,使用流式细胞仪检测细胞凋亡率、凋亡周期及细胞膜Fas表达情况。结果:经维生素K3进行诱导CCK-8检验肝癌细胞比率明显下降,自身生长抑制率上升且呈现明显的计量依赖性,荧光染色后发现细胞凋亡中期细胞凋亡细胞核呈现波纹状或折缝样,有部分染色质出现浓缩,中晚期凋亡细胞核染色质呈现高度凝聚且边缘化,细胞核裂解呈现碎块状并产生凋亡小体。流式细胞仪检测不同浓度VK3作用的肝癌细胞珠HCC-9204在48h时2μmol/L凋亡率为31.44%,5μmol/L凋亡率为62.81%,10μmol/L凋亡率为76.89%,20μmol/L凋亡率为89.24%,25μmol/L凋亡率为93.58%。结论:维生素K3诱导肝癌细胞凋亡48h时呈现明显浓度计量依赖性,荧光染色法在能动速度态观察差细胞核凋亡变化并可以进行定量、定性分析。     

Dopamine inhibits proliferation, induces differentiation and apoptosis of K562 leukaemia cells

Background Dopamine exerts its effects mainly in nervous system through D1, D2 or D3 receptors. There are few reports dealing with the effects of dopamine on leukaemia cells. However, some dopamine agonists or antagonists do show biological effects on some types of leukaemia cells. Here, we report the effects of dopamine on the proliferation, differentiation and apoptosis of K562 leukaemia cells.Methods Proliferation was determined by MTT assay and cell counting both in liquid and semisolid cultures. Differentiation was verified by morphology, benzidine staining and flow cytometry. Apoptosis was checked by Hoechst 33258 staining and flow cytometry. The two groups were untreated group and treated group (dopamine 10(-9) mol/L―10(-4) mol/L).Results In liquid culture, MTT assay and colony assay, dopamine inhibited proliferation of K562 cells. Inhibition rate was 29.28% at 10(-6) mol/L and 36.10% at 10(-5) mol/L after culture for 5 days in MTT assay. In benzidine staining and CD71 expression, dopamine induced K562 cells toward erythroid differentiation by increased 155% at 10(-6) mol/L and by 171% at 10(-5) mol/L after culture for 5 days in benzidine staining. In Hoechst 33258 staining and flow cytometry, dopamine induced K562 cells toward apoptosis. The sub G1 peak stained by PI was 14.23% at 10(-4) mol/L dopamine after culture for 3 days compared with the control (0.81%) in flow cytometry.Conclusion Dopamine inhibites proliferation and induces both differentiation and apoptosis of K562 leukaemia cells.     

李氏5号水提液在兴奋性氨基酸损伤神经元中的保护作用

目的 探讨李氏5号水提液在兴奋性氨基酸性神经元损伤中的保护作用。方法 MTT法观察不同干扰因素作用下细胞成活率和用Hoechest333258染色法荧光显微镜下观察细胞凋亡的比例;借助共聚焦显微镜钙成像和钙荧光指示剂Fluo-3/AM测细胞内钙浓度。结果 300μmol/LNMDA+5μmol/L甘氨酸作用10min后换正常培养液培养18h,细胞死亡率比正常对照组高(54.64±5.76)%;用李氏5号水提液(终浓度为0.5mg/ml)预处理3h后,加300μmol/LNMDA+5μmol/L甘氨酸作用10min,换正常培养液同时加李氏5号水提液继续培养18h,细胞死亡率明显降低。10μmol/LNMDA可明显增加海马神经元胞质游离钙浓度。李氏5号水提液本身可轻度增加胞质游离钙浓度(与正常组比较差异不显著),但明显抑制NMDA导致的胞质游离钙浓度的升高;NMDA阻断剂MK-801明显拮抗NMDA导致胞质游离钙升高的效应,但李氏5号水提液预处理后,MK-801拮抗NMDA的效应显著降低。结论 李氏5号水提液可能通过拮抗兴奋性氨基酸所致的细胞内钙超载而明显保护神经元。     

黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的致凋亡效应及黄芪含药血清的保护作用。方法将培养的 ECV-304分为以下3组：（1）空白对照组;（2）AngⅡ诱导组,使培养基中 AngⅡ终浓度为0、1×10－6、1×10－5、1×10－4 mol／L,与细胞共孵育18 h。MTT 法检测 AngⅡ对 HUVECs 生长增殖的影响;流式细胞仪检测 AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化;电子显微镜观察 AngⅡ诱导后内皮细胞的超微结构特点;（3）黄芪含药血清干预组,培养基中加入不同浓度黄芪含药血清培养24 h 后,加入 AngⅡ（1×10－4 mol／L）孵育18 h,检测内皮细胞凋亡率的变化。结果不同浓度的 AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖。不同浓度的 AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡。透射电镜下可见 AngⅡ诱导后内皮细胞的凋亡形态。黄芪含药血清抑制 AngⅡ所诱导的内皮细胞凋亡。结论黄芪含药血清具有内皮保护作用。     

糖尿病角膜内皮的定量分析

用非接触型角膜内皮显微镜,对18例(24眼)糖尿病患者和19例(20眼)年龄配对的非糖尿病人的角膜内皮进行检查并照像。内皮照片用计算机图像处理系统进行分析。与对照组比较,糖尿病人的角膜内皮细胞不仅密度显著下降,且呈现大小和形态多形性。研究表明,糖尿病角膜内皮不正常,角膜内皮显微镜联合计算机图像处理技术可早期对此作出诊断。     

不同粘弹剂对角膜内皮细胞影响的对比研究

目的　研究超声乳化过程中 ,应用不同粘弹剂对角膜内皮细胞的影响 ,并作对比分析。方法　 7只纯种日本大耳白兔 ,随机抽出 1只兔 2只眼制成正常角膜内皮电镜切片 ,其余分为两组 :AmviscPlus组和海诺特组 ,双眼行超声乳化术 ,用接触性角膜内皮显微镜分别观察术前和术后即时角膜内皮细胞密度 ,并在透射电镜下观察正常和术后即时角膜内皮细胞超微结构的变化。结果　术后即时内皮细胞损失率 ,AmviscPlus组 8 85 % ,海诺特组 9 2 3% ,两组内皮细胞密度分别与术前相比有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而两组间内皮细胞损失率无显著性差异 (P >0 0 5 )。术后即时角膜中央 1mm区域内取材的透射电镜切片示两者的内皮变化无明显差异。结论　两种不同的粘弹剂在超声乳化术中对角膜内皮细胞均具有明显的保护作用。     

Induction of Apoptosis by Superoxide Anion and the Protective Effects of Selenium and Vitamin E

Objective:The purpose of this study is to investigate the effect of superoxide anion on the apoptosis of cultured fibroblasts and the protective role of seleium and Vitamin E.Methods:Cultured fibroblasts(NIH3T3),with or without selenium or vitamin E in the medium,were treated by superoxide anion produced by xanthine/xanthine oxidase reaction system and changes in cell structure and DNA were observed microscopically and electrophoretically,Results:Apoptosis was observed when superoxide anion at a concentration of 5nmol/L or 10nmol/L had acted on the fibroblasts for 5-10h.Selenium and Vitamin E in the medium inhibited the apoptosis significantly when their concentrations reached 1.15mol/L and 2.3mol/L respectively.Concleusion:selenium and vitamin Ehave protective effect against the apoptosis induced by superoxide anion.The effect of selenium is more remakable than that of vitamin E.     

血管内皮细胞活化在感染后肠易激综合征发病机制中的作用

目的 研究感染后肠易激综合征(PI-IBS)患者中肠血管内皮细胞形态以及血浆中内皮素(ET)和一氧化氮(NO)表达水平的变化,明确血管内皮细胞活化在PI-IBS发病机制中的作用。 方法 同期收集就诊的PI-IBS患者28例和正常对照组12例,采集所有研究对象的空腹血标本和结肠标本。用光学显微镜观察内皮细胞形态和变化,用放射免疫法和硝酸还原法分别检测血浆中ET和NO表达水平的变化。 结果 PI-IBS患者内皮细胞形态较正常对照组发生显著变化,功能上的变化表现为血浆中ET(55.49±13.49)ng/L和NO(75.90±16.52)μmol/L表达水平较正常对照组［(43.40±13.69)ng/L和(62.48±15.63)μmol/L］明显增高(P<0.05)。 结论 血管内皮细胞活化与PI-IBS的发病机制可能密切相关。     

烟碱对白细胞介素1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达E-选择素的增强作用

目的 :观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞 (BCMEC)表达E 选择素的影响。方法 :离体培养新生牛脑微血管内皮细胞 ;血细胞计数仪测定BCMEC粘附大鼠血单核细胞 (MN)的数目 ;应用ELISA法检测BCMEC的E 选择素表达量。结果 :高浓度烟碱 ( 10 - 5mol L)单独作用于BCMEC 2h后 ,使BCMEC对MN的粘附率从 ( 12 .9± 0 .4 ) %增至 ( 15 .7± 0 .6) % ,且BCMEC也可表达少量的E 选择素 ;而当烟碱与BCMEC作用 2h后 ,再经白细胞介素 1β(IL 1β)诱导 4h ,烟碱可浓度依赖性 ( 10 - 7～ 10 - 5mol/L)的增强IL 1β的诱导作用 ,增加BCMEC对MN的粘附率以及E 选择素的表达量 ;抗E 选择素单克隆 (AEmAb)能显著阻断IL 1β诱导BCMEC后对MN的粘附率。结论 :烟碱增强IL 1β诱导的脑微血管内皮细胞表达E 选择素的作用