细胞间黏附分子1与血管细胞黏附分子1在心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义

目的研究细胞间黏附分子1（ICAM-1）与血管细胞黏附分子1（VCAM-1）在心脏移植慢性排斥反应中的表达及作用。方法采用供体脾细胞（SPC）和环磷酰胺（CP）预处理移植受体,然后行异位心脏移植术,免疫组织化学检测移植心脏中VCAM-1和ICAM-1的表达。结果SPC和CP预处理后,移植心脏中ICAM-1、VCAM-1的表达水平明显减低,而ICAM-1和VCAM-1在急性排斥反应和环孢素A（CsA）治疗组中的表达明显增强（均P〈0．05）。急性排斥反应与CsA治疗组比较差异无统计学意义。结论ICAM-1和VCAM-1的表达水平与心脏移植排斥反应的程度密切相关。     

不同处理对大鼠移植心脏存活时间的影响

目的 观察供体脾细胞(SPC)与环磷酰胺(CP)联合预处理对大鼠移植心脏存活时间的影响.方法 应用大鼠颈部心脏移植模型,实验分为对照组(未干预组)、CsA组、SPC CP组.CsA组心脏移植后予环孢霉素A(CsA)10 mg/kg,SPC CP组采用供体SPC和CP预处理移植受体,然后行大鼠颈部心脏移植术.观察移植心脏存活情况及组织病理变化.结果 对照组、CsA组、SPC CP组移植心脏存活时间分别为(7.2±2.4)、(15.8±4.3)、(30.4±10.7)天;组织病理检查显示,经SPC PC预处理的移植心脏排斥反应明显减弱.结论 SPC和CP预处理可以诱导受体对移植物的免疫耐受,延长移植心脏的存活期,效果优于CsA.     

趋化因子RANTES和受体CCR5在心脏移植慢性排斥反应中的表达

目的探讨调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)及其受体CCR5在心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义。方法健康近交系Sprague-Dawley(SD)大鼠为受者,Wistar大鼠为供者,采用"套管连接技术"建立颈部心脏移植的实验模型。将SD大鼠随机分为3组:A组(n=12)供、受者均未采用任何治疗;B组(n=12)移植手术后使用环孢素A(CsA)10 mg.kg-1治疗受者,术后2～3个月采集移植心脏;C组(n=24)使用供者脾细胞(SPC)及环磷酰胺(CP)预处理受者,其中12只在术后15～60 d采集移植心脏(C1组),另外12只术后至少观察半年(C2组)。采用H-E染色观察移植心脏组织排斥反应病理改变程度,Van Gieson染色观察移植心脏血管病变(CAV)的血管狭窄程度,免疫组化检测RANTES和CCR5的表达水平。结果 SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,RANTES和CCR5在冠状血管和心肌组织中呈低水平表达,移植心脏血管病和心肌纤维化明显减轻;而在急性排斥反应和CsA治疗的移植心脏组织中,RANTES和CCR5的表达水平明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论移植心脏组织中RANTES和CCR5的表达水平与移植排斥反应的程度密切相关。     

单核细胞趋化蛋白-1和NF-κB通路在心脏移植排斥反应中的作用

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在心脏移植排斥反应中的表达及意义,并研究核因子-κB(NF-κB)通路在其中发挥的作用。方法 近交系SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,“套管连接技术”行颈部心脏移植术。将SD大鼠随机平均分为4组,急性排斥组：受体未采用任何治疗;CsA组：移植术后环孢霉素A(CsA) 10mg/kg治疗受体,术后60～90d采集移植心脏;免疫耐受组：采用Wistar大鼠脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理SD大鼠,14d后行颈部心脏移植术;PDTC组：移植术后腹腔注射吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)100mg/kg,1次/d,连续15d。Masson染色观察移植心脏纤维化程度,免疫组化及Western blotting检测MCP-1的表达。结果 急性排斥组、CsA组、免疫耐受组和PDTC组移植心脏存活时间分别为(6.53±2.48)d、(93.51±20.07)d、 (201.42±40.36)d和(142.37±24.64)d,PDTC组明显高于CsA组和急性排斥组(P＜0.05),且心肌纤维化程度明显减轻。各组MCP-1表达的积分光密度(IOD)值依次为(1.86±0.23)、(1.58±0.16)、(0.57±0.15)及(1.16±0.28),免疫耐受组明显低于其他３组,PDTC组显著低于急性排斥组和CsA组(P＜0.05)。结论 MCP-1的表达与排斥反应程度呈正相关,测定MCP-1的水平可预测移植心脏的功能状况;抑制NF-κB通路可减少MCP-1表达,明显减轻心脏移植排斥反应。     

抗ICOS单抗与小剂量环孢素A联用对大鼠心脏移植慢性排斥反应的影响

目的：探讨抗可诱导共刺激分子（inducible costimilator,ICOS）单克隆抗体与小剂量环孢素A（cyclosporine,CsA）联用对同种异基因大鼠心脏移植后移植物生存质量和慢性排斥反应的影响。方法：建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,术后随机分为同基因移植对照组和同种异基因移植试验组,其中试验组根据术后处理不同又分为安慰剂组、常规剂量CsA组、抗-ICOS-单抗组、小剂量CsA组和抗-ICOS-单抗联合小剂量CsA组,观察各组大鼠移植心脏的存活时间及移植心组织病理学变化,对移植心长期存活（〉100d）的受体,应用流式细胞仪检测其外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。结果：单独使用不同剂量CsA者移植心脏的存活时间较安慰剂组明显延长（P〈0.05）;抗-ICOS-单抗联用小剂量CsA组移植心脏的存活时间较单用小剂量CsA组明显延长（P〈0.05）;与安慰剂组相比,单用抗-ICOS-单抗组移植心脏存活时间差异无统计学意义（P〉0.05）。移植心长期存活受体中,与常规剂量CsA组比较,联合治疗组移植心慢性排斥损伤明显减轻,而外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例有显著升高（P〈0.05）。结论：抗ICOS单抗加小剂量CsA联合免疫治疗,可有效延长大鼠移植心存活时间和减轻慢性排斥反应,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的高水平表达与诱导移植耐受、抑制慢性排斥反应有重要关联。     

大鼠异位移植心脏的心肌、血管病变观察与研究

目的探讨在心脏移植中心肌及血管病变的发生和发展情况,为预防和治疗移植排斥反应提供理论依据。方法采用颈部心脏移植模型,用供体脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理受体,H-E、Masson三色、VanGieson和免疫组化平滑肌细胞染色,对移植心脏的浸润细胞,心肌纤维化和移植心脏动脉硬化进行分析研究。结果经SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,炎性细胞浸润,心肌纤维化和心脏动脉硬化明显减轻。结论①急性排斥反应时,移植心脏内大量炎性细胞浸润;②炎性细胞浸润是由心外膜心肌开始逐渐向心内膜方向发展;③SPC和CP联合预处理,可以预防和减缓移植心脏心肌纤维化和心脏动脉硬化。     

环孢素对心脏移植大鼠急性排斥反应及血清IDO活性的影响

目的 探讨不同剂量的强效免疫抑制剂环孢素（CsA）对同种异基因心脏移植大鼠急性排斥反应程度和血清吲哚胺2,3双加氧酶（IDO）活性的影响.方法 分别以SD和Wistar大鼠为供、受体,建立同种异基因大鼠颈部异位心脏移植模型.18只受体大鼠随机分为对照组、低剂量CsA组（CsA 2 mg·kg-1·d-1）和高剂量CsA组（CsA 15 mg·kg-1·d-1）,每组6只.术后第7天,所有受体大鼠经腹主动脉采集血样后处死,取移植心脏制备组织学检查标本.ELISA法检测血清白介素2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）水平;高压液相色谱法检测血清犬尿氨酸和色氨酸浓度,计算两者比值并以此估算IDO活性.移植心脏标本常规HE染色,采用Stanford标准进行急性排斥反应程度分级.结果 三组血清IL-2和IFN-γ水平以及IDO活性比较显示,对照组＞低剂量CsA组＞高剂量CsA组,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.三组移植心脏急性排斥反应程度分级结果显示,对照组＞低剂量CsA组＞高剂量CsA组,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 CsA可明显减轻同种异基因大鼠移植心脏急性排斥反应程度并降低血清IDO活性,两者变化趋势一致且与CsA的使用剂量有关.提示血清IDO活性监测有可能成为一种无创性移植器官急性排斥反应及其程度的预测和评估方法.     

细胞间黏附分子-1与血管细胞间黏附分子-1在血管慢性排斥反应中的表达及霉酚酸酯的抑制作用

目的探讨大鼠同种异体腹主动脉移植慢性排斥反应期间移植动脉细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达及霉酚酸酯（MMF）对移植动脉排斥反应的抑制作用。方法建立大鼠腹主动脉移植模型,设Wistar到Wistar大鼠的同系腹主动脉移植对照组、SD大鼠到Wistar大鼠的同种移植组、同种移植MMF治疗组和抗黏附分子单克隆抗体治疗组。采集移植动脉组织标本行免疫组织化学和组织病理学检查,对移植动脉组织ICAM-1及VCAM-1的表达进行定量检测。结果对照组移植动脉组织ICAM-1、VCAM-1表达较弱;同种移植组在排斥反应期间移植动脉组织血管内皮细胞的ICAM-1、VCAM-1表达强度和数量明显增加,且伴有大量淋巴细胞浸润;MMF治疗组移植动脉仅微弱表达ICAM-1、VCAM-1,同时少有淋巴细胞浸润,与黏附分子单克隆抗体治疗相似。结论ICAM-1、VCAM-1的表达水平与慢性排斥反应的发生和发展有关;MMF能显著抑制移植肾ICAM-1和VCAM-1的表达和淋巴细胞的浸润,明显延长移植物的存活。     

环孢素对心脏移植大鼠急性排斥反应及血清IDO活性的影响

目的 探讨不同剂量的强效免疫抑制剂环孢素(CsA)对同种异基因心脏移植大鼠急性排斥反应程度和血清吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)活性的影响.方法 分别以SD和Wistar大鼠为供、受体,建立同种异基因大鼠颈部异位心脏移植模型.18只受体大鼠随机分为对照组、低剂量CsA组(CsA 2 mg·kg-1·d-1)和高剂量CsA组(CsA 15 mg·kg-1·d-1),每组6只.术后第7天,所有受体大鼠经腹主动脉采集血样后处死,取移植心脏制备组织学检查标本.ELISA法检测血清白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平;高压液相色谱法检测血清犬尿氨酸和色氨酸浓度,计算两者比值并以此估算IDO活性.移植心脏标本常规HE染色,采用Stanford标准进行急性排斥反应程度分级.结果 三组血清IL-2和IFN-γ水平以及IDO活性比较显示,对照组＞低剂量CsA组＞高剂量CsA组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).三组移植心脏急性排斥反应程度分级结果显示,对照组＞低剂量CsA组＞高剂量CsA组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 CsA可明显减轻同种异基因大鼠移植心脏急性排斥反应程度并降低血清IDO活性,两者变化趋势一致且与CsA的使用剂量有关.提示血清IDO活性监测有可能成为一种无创性移植器官急性排斥反应及其程度的预测和评估方法.     

苏木提取物对大鼠移植心脏心肌PDGF-A、VEGF-C含量的影响

目的:通过观察苏木乙酸乙酯提取物对心脏移植模型大鼠心肌病理形态学及生长因子表达的影响,探讨苏木乙酸乙酯提取物对慢性排斥反应的作用机理,为从中药学中研发出新型的免疫抑制剂奠定工作基础。方法:应用改良Ono术式行大鼠腹腔心脏移植,结合CsA灌胃建立心脏移植慢性排斥动物模型。选择移植心脏跳动良好的大鼠随机分为3组。苏木组予苏木乙酸乙酯提取物溶液灌胃;环孢素组予CsA溶液灌胃;模型对照组按体重计算予等体积橄榄油灌胃,连续灌胃7 d后取下移植心脏。观察移植术后受体的一般情况,移植心脏收缩力情况,移植心脏心肌病理形态学改变,并进行慢性排斥反应诊断分级;采用Real-time-PCR法检测各组大鼠移植心脏心肌生长因子PDGF-A、VEGF-C、FGF-1、FGF-2的基因表达水平。结果:1、与模型对照组相比,苏木组和环孢素组PDGF-A的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);苏木组和环孢素组移植心脏心肌组织PDGF-A的表达水平相当,差异无统计学意义(P0.05)。2、与模型对照组相比,苏木组和环孢素组VEGF-C的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);苏木组和环孢素组移植心脏心肌组织VEGF-C的表达水平相当,差异无统计学意义(P0.05)。3、与模型对照组相比,苏木组和环孢素组FGF-1的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与苏木组相比,环孢素组FGF-1的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。4、与模型对照组相比,苏木组和环孢素组FGF-2的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与苏木组相比,环孢素组FGF-2的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:苏木乙酸乙酯提取物能降低大鼠慢性排斥模型移植心肌PDGF-A、VEGF-C的基因表达,作用与CsA相当。苏木乙酸乙酯提取物能降低大鼠慢性排斥模型移植心肌FGF-1、FGF-2的基因表达,作用不及CsA。     

Effects of long-term administration of low-dose FTY720 on survival of murine cardiac allograft

This study examined the effect of long-term administration of low-dose FTY720 on survival of murine cardiac allograft and the possible mechanism. Murine models of abdominal heterotopic heart transplantation were established. Low-dose FTY720 (0.3 mg/kg) was administrated to the animals 4 days before the transplantation of cardiac allografts until the occurrence of rejection or the observation terminals. The animals without FTY720 treatment and those with syngeneic cardiac grafts transplanted served as controls. The mean survival time (MST) of grafts, and T lymphocyte subsets in grafts, periph-eral blood and lymphoid organs were measured by histopathological examination or flow cytometry, and compared among groups. The results showed that the MST of allografts in FTY720-treated mice was more than 40 days, significantly longer than that in the untreated group (MST=8 days, P<0.01). After the long-term administration of FTY720, the proportion of CD4+ and CD8+ lymphocytes in pe-ripheral blood was diminished significantly, but the proportion of CD4+ lymphocytes was increased in mesenteric lymph nodes (MLNs) and spleen. Immunofluorescence staining revealed that the infiltration of CD4+ and CD8+ lymphocytes in allografts was significantly inhibited after long-term administration of low-dose FTY720. It was concluded that low-dose long-term administration of FTY720 could pro-mote T lymphocytes in lymphatic organs and decrease their infiltration in allografts, resulting in the in-hibition of rejection and the long-term survival of allografts.     

Th1/Th2细胞因子对心脏移植大鼠NPC输注诱导免疫耐受的作用

目的探讨大鼠血清中Th1/Th2细胞因子表达与供肝非实质细胞(NPC)输注诱导心脏移植免疫耐受的关系。方法建立大鼠心脏移植模型,将40只大鼠随机分成排斥反应组、免疫耐受组,每组20只。观察移植心脏存活时间,并检测受者血清中Th1/Th2细胞因子白细胞介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的表达水平。结果免疫耐受组供心存活时间为(30.83±2.55)d,排斥反应组为(8.15±2.08)d,差异有显著性(t=24.46,P<0.01)。术后7、14 d排斥反应组血清Th1细胞因子IL-2、IFN-γ水平均高于免疫耐受组,Th2细胞因子IL-4、IL-10表达水平均低于免疫耐受组,术后7 d血清IL-6表达水平显著高于免疫耐受组(t=4.50~16.20,P<0.01)。结论免疫耐受的形成与Th1/Th2细胞因子相互作用有关。     

结缔组织生长因子在大鼠移植心脏急性排斥反应期的表达

目的:检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在大鼠移植心脏急性排斥期(acute rejection,AR)的表达,并探讨其与移植心脏心肌纤维化的关系.方法:取Wister大鼠16只作为供体,取SD大鼠16只作为受体,进行腹部异位心脏移植,采用10 mg/(kg·d) 环孢霉素A,40 mg/(kg·d)骁悉和3 mg/(kg·d)甲泼尼龙三联免疫抑制疗法,2周后取其中10例移植心脏标本作为实验组,10例健康Wister大鼠心脏标本作为对照组(normal heart,NH).采用HE及van Gieson染色观察心肌病理形态、心脏血管狭窄程度;并进行纤维化的半定量评分.采用免疫组化半定量方法检测CTGF在心脏组织中的表达,并分析其与心肌纤维化的相关性.结果:移植心脏血管壁及心肌间质组织内有大量粒细胞浸润,呈典型的急性排斥反应期改变;移植心脏血管内膜及大量纤维组织增生,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);CTGF在移植心脏组织中有明显表达,且主要表达于血管壁及心肌损伤部位,而正常心脏无表达,CTGF灰度值为 (AR vs NH: 103.52±6.42 vs. 182.61±8.72,P<0.05).CTGF灰度值与移植心脏纤维化显著负相关(r=-0.734,P<0.01).结论:CTGF在急性移植心脏组织中有明显表达且可能与移植心脏心肌纤维化相关.     

环孢霉素A对大鼠心脏移植模型淋巴细胞分子表达与移植心脏病理学改变时相关系的影响

【目的】 通过环孢素A(CsA)干预的异体异位心脏移植动物模型的研究,对移植术后淋巴细胞分子表达?心肌组织淋巴细胞浸润能力和移植心脏病理改变时相进行比较,探讨环孢素A对其影响?【方法】 SD大鼠为移植心脏供体,Wistar大鼠为移植心脏受体?实验分为心脏移植对照组和环孢素A干预+心脏移植组实验组两组?在移植前及移植后24 h?3 d?7 d?10 d和12 d时间点免疫荧光测定淋巴细胞在心肌组织中浸润能力?实时定量PCR检测淋巴细胞编码基因CD4?CD8 和酪氨酸激酶P59 mRNA表达水平?心肌组织病理学检查判断排斥反应程度?【结果】 ①心脏移植后24 h内,外周血淋巴细胞基因的转录与表达为一过性降低;②心肌组织CD4+?CD8+ 淋巴细胞浸润和Ⅱ级排斥反应病理改变,主要出现于心脏移植后的d3 ~ d7;③环孢素A不能有效抑制移植后3 d内心肌组织CD4+?CD8+淋巴细胞浸润程度的快速增加,但可明显降低移植后d3 ~ d7的心肌组织CD4+ 淋巴细胞的浸润程度;④环孢素A不能完全阻断淋巴细胞P59基因的表达;⑤环孢素A不能有效抑制淋巴细胞CD4基因正调表达,但可抑制CD8基因的转录?【结论】环孢素A的移植排斥反应的抑制作用在大鼠移植后d3 ~ d7?淋巴细胞基因表达?心肌组织淋巴细胞浸润与排斥反应病理改变有关?这将有助于同种移植病人环孢素A的临床应用?     

兔同种异体角膜缘移植术后免疫排斥反应的实验研究

目的：本研究旨在探索同种异体角膜缘移植免疫排斥反应规律并观察环孢霉素A（CsA）滴眼液的免疫抑制作用。方法：32只新西兰白兔随机分成实验组和CsA对照组．建立右眼角膜缘缺陷症动物模型，1月后实施同种异体角膜缘移植术，术后分别予生理盐水及1％CsA眼液滴眼并观察4周。术前1天及术后1～8周动态监测外周血T淋巴细胞上CD25的表达；分别取术后第4、8及10周的角膜缘植片观测淋巴细胞浸润及T淋巴细胞上CD25的表达。结果：实验组术后第1周外周血表达CD25的T淋巴细胞数就有增高，第3周已达到高峰，第5周开始缓慢下降。CsA组角膜缘植片中浸润的淋巴细胞及表达CD25的T淋巴细胞数目显著低于实验组。结论：同种异体角膜缘移植术后排斥反应的发生与表达CD25的T淋巴细胞数目密切相关：CsA眼液可抑制外周血及植片中T淋巴细胞上CD25的表达，从而抑制排斥反应发生。     

肿瘤坏死因子和组织粘附分子在慢性排斥移植肾中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子(VCAM-1)在慢性排斥移植肾组织中的表达及其意义.方法采用免疫组化技术对30例慢性排斥移植肾活检组织中TNF-α、ICAM-1和VCAM-1表达进行检测.12例正常肾脏组织作为对照.结果在发生慢性排斥的移植肾组织中,大多数病例有活动性间质及血管周围淋巴细胞浸润和小管局部炎症,肾小球、肾小管及间质浸润细胞TNF-α、ICAM-1和VCAM-1表达程度和分布普遍增强,但主要见于间质浸润细胞、肾小管损伤部位上皮细胞、炎症区域管周毛细血管和微小动脉内皮细胞,与正常对照有明显差异.结论细胞免疫可能在慢性排斥发病中起作用,细胞因子和粘附分子则是一过程中的重要介质.     

云南眼镜蛇毒因子用于预致敏大鼠同种心脏移植的实验研究

目的观察纯化的云南眼镜蛇毒因子(Y-CVF)对预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的作用。方法BN大鼠到Lewis大鼠连续3次皮肤移植预致敏后行颈部异位心脏移植。将15对大鼠用随机数字法分成2组,实验组(n=8)于心脏移植前24h静脉给予Y-CVF80μg/kg;对照组(n=7)不用Y-CVF。观察移植心的生存时间,移植心停跳后病理学检查排斥类型,免疫组织化学染色观察移植心IgG和补体C3的沉积。结果Lewis大鼠预致敏后抗BN大鼠抗体滴度由0升高至1∶1028~1∶2056。对照组移植心存活时间为12·71h±13·94h,实验组移植心存活时间为99·50h±38·72h,与对照组比较差异有统计学意义(t=5·599,P<0·01)。病理检查结果证实,实验组均未发生急性体液排斥,仅见以大量单核淋巴细胞浸润为特征的急性细胞排斥反应。对照组则见以小血管内血栓形成为特征的急性体液排斥反应。免疫组织化学IgG染色实验组和对照组均为阳性,C3染色对照组为阳性,而实验组为阴性。结论使用Y-CVF可克服预致敏大鼠同种心脏移植急性体液排斥反应的发生。