风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒(RV)Gos-10株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株,经克隆培养后发现其中的1A_9株能稳定分泌高效价特异性McAb,经鉴定为IgG2a,经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验征明该McAb是种特异性的,能与各株RV发生交叉反应,而与其它种病毒不发生反应,证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性,可用以制备诊断试剂,实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗恶性疟原虫EBA—175的单克隆抗体（McAb），为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法以恶性疟原虫EBA-175（Ⅱ区F2段）重组抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb，间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株．测定其免疫球蛋白亚类及其效价，ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4Al、4C3、4H9，6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1，1株为IgG2a，6株McAb的培养上清ELISA效价为1：256～1：512，腹水效价为1：12800-1：25600，间接ELISA显示其中4株McAb 1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合，而只有1F3、4A1、4H9在Western blot试验中识别恶性疟原虫Mr约35000的虫源蛋白。结论获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

旋毛虫幼虫单克隆抗体制备和鉴定

本实验用旋毛虫幼虫可溶性抗原,免疫BALB/c小鼠的脾细胞,与NS_1鼠骨髓瘤细胞融合后,选择4株连续分泌抗旋毛虫幼虫McAb的杂交瘤细胞。经ELISA、IFA鉴定分析,证明这4株细胞能分泌高效价特异性McAb。McAb亚类鉴定结果为IgG_3和IgG_1。是抗幼虫表面抗原,虫体抗原和虫体及囊液不同部位的特异性McAb。     

抗A组轮状病毒单克隆抗体特性鉴定及临床初步应用

本文报道了A组RV McAb的特性鉴定及临床初步应用。用从河南省腹泻犊牛粪便中分离的HN-7毒株(RV)免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术获得2株分泌A组RV特异性McAb的杂交瘤细胞。所获2个McAb(2C_7、3C_9)与A组RV第1血清型Wa株、第3血清型SA-11株、第6血清型NCDV株,以及从国内猪、牛粪便中分离的4株未分型毒株的间接ELISA效价达1:10~5～1:10~6,但与这7个毒株的血凝抑制滴度≤1:8,中和效价≤1:100,表明这2个McAb是针对A组RV共同抗原的。用此McAb建立的单夹心ELISA技术,测定162人、牛腹泻粪样,与常规ELISA总符合率为98.8％。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法 以恶性疟原虫EBA-175(II区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果 筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256~1:512,腹水效价为1:12800~1:25600,间接ELISA显示其中4株McAb1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Westernblot试验中识别恶性疟原虫M_r约35000的虫源蛋白。结论 获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具。方法用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性。单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8 000~1∶256 000,培养上清效价为1∶256~1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳。结论获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究。     

特异性O1群稻叶型霍乱弧菌单克隆抗体的制备、筛选及识别抗原表位的分析

目的制备并筛选出高特异性高活性的抗01群稻叶型霍乱弧菌（Vibrio cholerae O1 Serotype Inaba）单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）,为霍乱的预防诊断提供有力的抗体工具。方法应用杂交瘤技术,通过灭活的O1群稻叶型霍乱弧菌免疫的BALB／c小鼠的脾细胞与SP2／O细胞融合制备特异性McAb,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行了特异性及排除性筛选,对筛选出的特异性McAb进行了包括亚型鉴定,效价、亲和常数的测定以及特异性的鉴定与分析,并通过单克隆抗体的位点相加实验、与O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖（LPS）的间接ELISA和Western blot实验对McAb识别的抗原表位进行了初步分析。结果融合了386株能分泌抗01群稻叶型霍乱弧菌McAb的杂交瘤细胞株,通过用O1群小川型、0139霍乱弧菌及9种非霍乱弧菌的细菌进行的筛选,最后得到4株能稳定分泌特异性的针对该McAb的细胞株,其分泌的抗体亚类分别为2株IgG1,1株IgG2,1株IgG2b;腹水效价均达10^-6;亲和常数达10^8以上。间接ELISA法及Western blot证实所获的McAb可与O1群稻叶型霍乱弧菌发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示4株McAb识别不同的抗原表位,与LPS的反应表明其中2株针对O1群稻叶型霍乱弧菌脂多糖,2株针对非脂多糖抗原位点。结论获得霍乱弧菌O1群稻叶型特异性McAb,初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。     

抗人精子单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

本文采用杂交瘤技术获得4株能稳定分泌抗人精子单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(HS-1,HS-2,HS-3,HS-4)。经SPA-ELISA及ELISA封闭试验表明,这些McAb对人精子具有特异性。其中HS-3和HS-4二株细胞分泌的McAb具有凝集和制动精子的能力。间接免疫荧光定位试验证明,4种McAb分别结合于精子的整个头部,头前部和中段区。     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的：建立抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。方法：从人心肌组织中提取纯化人cTnT，免疫BALB／C小鼠，采用杂交瘤技术，间接ELISA法选择能稳定分泌抗cTnT　McAb的杂交瘤细胞株。结果：建立了2株稳定分泌抗cTnT　McAb的杂交瘤细胞株N15C和N16D，其染色体数目为90-106，McAb Ig亚类均为IgG，，间接ELISA法测定McAb腹水效价分别为1：8000和1：32000。免疫印迹结果显示2株McAb均可识别cTnT中Mr为37000的单一区带，不识别人骨骼肌提取物。间接ELISA法测定N15C和N16DMcAb与cT—nT反应的最低浓度分别为47μg/L和23μg／L。相加试验表明2株McAb能识别不同的抗原表位。结论：获得2株能稳定分泌特异性抗人心肌cTnT McAb的杂交瘤细胞株。     

抗人IgA McAb的鉴定

用人IgA免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0-Ag 14融合,测定99个融合孔,抗体阳性者10孔。其中2个经克隆获得代表株39-1,2-9。对后者所分泌的McAb及杂交瘤细胞免疫小鼠的腹水,进行了特异性和纯度鉴定。被动血凝抑制试验证明,2个McAb均可被抗原IgA所抑制,抑制率与抗原量成正比;用含2％PEG-6000的琼脂免疫双扩散试验,39-1McAb和免疫抗原IgA产生一条沉淀线,     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的建立与鉴定

用HFRSV血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中10株细胞系应用血凝抑制试验证明有9株为特异性分泌抗HFRSV血凝素McAb的杂交瘤细胞系。应用微量细胞培养中和试验证明6株具有中和活性。z株(3D_8和3G_1)具有高滴度的血凝抑制活性和中和活性。10株HFRSV血凝素McAb均能与从不同疫区,不同宿主分离的HFRSV反应,说明HFRSV血凝素具有群共同性。     

抗绿脓杆菌Ⅱ群10117株及Ⅳ群10119株McAb杂交瘤细胞株的筛选和鉴定

用SP2/0骨髓瘤细胞分别与绿脓杆菌Ⅱ群10117株和Ⅳ群10119株免疫BALB/c小鼠脾细胞融合,各获得三株连续分泌抗绿脓杆菌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株10117A_1、B_3、D_5及10119A_6、B_4、C_3。经染色体、IFA、ELISA 鉴定分析,证明是能分泌高效价McAb的杂交瘤细胞株。McAb类和亚类鉴定分别为IgG_? IgG_2b和IgM。交叉反应初步表明上述McAb具有较高的型特异性。     

抗人IgG重链McAb和抗人IgG亚类限制性McAb的鉴定

本文对4株针对人IgG重链杂交瘤细胞株(1B3,2D5,2A4和2B6)所分泌的McAb用琼脂糖免疫双扩散试验及ELISA试验分析,均证实它们是针对人IgG上的三个不同抗原决定簇;用人IgG亚类Ig分析,证明1B3 McAb可与IgG所有的4个亚类反应,而其它3种McAb为IgG亚类限制性的McAb,2B6和2D5不与IgG4反应,称缺-IgG4 McAb,2A4不与IgG3反应,称缺-IgG3 McAb。     

抗人肺癌单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的制备抗人肺癌细胞的单克隆抗体（McAb）,鉴定其生物学特征。方法用人肺癌细胞株A549作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人肺癌细胞McAb,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其特异性。结果获得了1株分泌抗人肺癌细胞McAb杂交瘤细胞（命名为1D11）,其染色体呈双亲特点,该McAb与人卵巢癌细胞株SKOV3有交叉反应,与肝癌细胞株SMMC7721,宫颈癌细胞株Hela.表皮癌细胞株A431,正常肝细胞株L02无交叉反应。结论该McAb对肺癌和卵巢癌具有特异性。     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

Ⅰ型嗜肺军团菌杂交瘤细胞株的建立和鉴定

用Ⅰ型嗜肺军团菌(Ⅰ型LDB)颗粒生抗原免疫的BALB／C小鼠脾细胞与小鼠骨髓癌SP2／0细胞在PEG怍用下融合，经二次克隆化后建立了一株分泌抗Ⅰ型LDB单克隆抗体的细胞株(No．19 McAb)。经ELISA、间接血凝试验、双向琼脂扩散试验、结合力试验，染色体检查及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测，证实此杂交瘤所分泌的McAb属小鼠IgG类，对Ⅰ型LDB是特异的。No．19 McAb将有助于Ⅰ型LDB的检测及其亚型的分析与流行病学调查．     

登革热Ⅳ型病毒McAb的研究

将SP2/0-Ag小鼠骨髓瘤细胞与经登革热病毒Ⅳ型H_241株免疫的瑞士种小鼠脾细胞融合,获得1株分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞,经克隆化得6E_5和6F_4两个细胞株。此McAb用免疫荧光法检查属型特异性,而用血凝抑制试验检查则呈组特异性。此抗体和一些蚊媒病毒和虫媒病毒Langat株有交叉反应。用6E_5组织培养上清液标记荧光素获得成功,这使从蚊     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。