亚低温对SAH大鼠rCBF及死亡率的影响

目的 研究亚低温对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑局部血流量(rCBF)及24 h内死亡率和的影响.方法 SD大鼠分为常温组和亚低温组.常温组通过大脑前动脉穿刺法建立SAH模型,室温处理;亚低温组于穿刺后将大鼠放于冰毯上降低体温至(32±0.5)℃,3 h后室温下自动复温.测定大鼠SAH后2 h内rCBF,计算各组大鼠24 h内死亡率.结果 常温组穿刺后2 h内rCBF显著降低,24 h内死亡率35.88%;亚低温组术后2小时内rCBF显著降低,但降低幅度较SAH显著减少,24 h内死亡率为5.17%.结论 亚低温治疗能显著提高SAH大鼠rCBF,减少24 h内死亡率.     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达及细胞凋亡的影响

[目的]观察亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨亚低温对脑神经细胞保护作用的机制。[方法]将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。应用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型,于缺血2 h再灌注,再灌注后3、6、12、24、72 h和7 d处死。其中亚低温组大鼠于缺血后30 min实施病灶侧脑亚低温并持续4 h。采用HE染色观察神经细胞形态学改变,免疫组化法检测脑组织HSP70表达,TUNEL法检测凋亡细胞。[结果]正常组及假手术组均未见明显病理改变;常温缺血组梗死灶明显,大量神经元坏死消失;亚低温缺血组未见明显梗死灶,但可见神经元固缩。正常组及假手术组未见或偶见HSP70阳性细胞;常温缺血组HSP70阳性细胞较多;与常温缺血组相比亚低温缺血组在相应时间点均明显减少(P<0.05)。常温缺血组TUNEL阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72 h达高峰;与常温缺血组相比,亚低温缺血组各时间点均明显减少(P<0.05)。[结论]亚低温对大鼠缺血再灌注损伤脑有保护作用,通过降低HSP70的表达和减少细胞凋亡可能是其保护机制之一。     

局部亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后XIAP和Caspase-9表达的影响

目的 观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和半胱天冬蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响,研究亚低温的脑保护机制.方法 用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,后两组又再分别分为缺血2 h再灌注3 h、6 h、12 h、24 h、72 h、7 d组,亚低温组于缺血后30 min内实施病灶侧脑亚低温并持续4 h.处死前进行神经功能缺陷评分,HE染色观察组织病理变化,免疫组化检测XIAP和Caspase-9的表达.结果 神经功能缺陷评分,亚低温组大鼠各时间点均明显低于常温组(P<0.05).XIAP表达在常温缺血2 h再灌注3 h表达开始增加,随着时间延长而表达逐渐增强,至再灌注24 h达高峰,与常温组比,亚低温组在3 h、6 h表达差异不明显,其它时间点增加明显(P<0.05).Caspase-9表达也是在常温缺血2 h再灌注3 h表达开始增加,随着时间延长而表达逐渐增强,至再灌注24 h达高峰,亚低温组则在72 h达到高峰,与常温组比,亚低温组在3 h表达差异不明显,6 h、12 h、24 h明显减少(P<0.05),72 h、7 d明显增加(P<0.05).结论 提示亚低温能促进XIAP表达,降低Caspase-9表达,从而减少神经元凋亡,其机制可能与促进蛋白合成有关.     

亚低温对大鼠脑出血颅内压力及预后的影响

目的：研究亚低温对大鼠脑出血后颅内压力及预后的影响。方法将70只Wistar大鼠随机分为亚低温组与常温组，造模后4 h测定血浆TNF-α。一部分用于测定颅内压力值并观察大鼠行为功能恢复。一部分断头取脑，采用干湿重法测量脑水肿含水量。结果大鼠脑出血后常温组与亚低温组颅内压力均呈上升趋势，第5d达到高峰，第5～7d颅内压力缓慢回落。各时间点测定颅内压力，亚低温组第5 d，7 d颅内压低于常温组（P＜0．05）。神经功能等级评分，亚低温组于14 d，21 d比较有显著性差异；脑水肿变化测定，第5 d，7 d亚低温组显著低于常温组。亚低温和常温组第14 d与21 d分别与同组第3、5、7 d比较含水量差异显著，P＜0．05。两组大鼠脑出血后4 h血浆TNF-α测定，亚低温组显著低于常温组。结论大鼠脑出血后常规早期行亚低温治疗，可有效降低脑水肿及颅内压力，促进神经功能恢复，提高生存质量。     

亚低温对脑梗死后血脑屏障通透性的影响

目的 观察脑梗死后亚低温干预对大鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 和基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达变化,探讨亚低温对缺血后血脑屏障通透性的影响.方法 线栓法制造大鼠脑缺血再灌注模型,同时给与亚低温治疗.用免疫组织化学方法检测VEGF、TIMP-1的表达.结果 再灌注损伤后脑内VEGF和TIMP-1蛋白的水平开始升高,至再灌注后72h达最高水平,亚低温组VEGF的表达明显低于常温组,而TIMP-1明显高于常温组.结论 亚低温能有效抑制VEGF的表达和增加TIMP-1的表达,减小血脑屏障的通透性,减轻脑缺血再灌注后脑水肿程度.     

亚低温对缺血再灌注鼠脑LN与MMP-9表达的影响及意义

目的 研究亚低温与常温条件下层粘连蛋白(Laminin, LN)与明胶酶-B(MMP-9)表达的差异性,为进一步探讨亚低温的脑保护机制提供实验依据.方法 制备大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和亚低温条件下缺血再灌注组;缺血2h后依照再灌注时间点的不同分为3h、6h、12h、24h、72h与7d 6组,共14组.免疫组织化学法观察脑组织LN与MMP-9的表达变化.结果 LN在微血管的表达于再灌注12h明显减少,24h达最低,72h开始回升;在同一时相(72h, 7d除外),与常温组比,亚低温组LN的表达显著增多.LN在神经元的表达于再灌注3h明显增多,6h明显减少,12h和24h呈阴性,72h开始回升,7d开始下降.在同一时相(72h除外),与常温组比,亚低温组LN的表达显著增多.MMP-9的表达于再灌注6h开始增加,12h开始减少,72h达最低,呈阴性,7d又回升.与常温组比,3h、6h组,亚低温组MMP-9的表达显著减少;12h、24h、72h组, 亚低温组MMP-9的表达显著增多;7d组,亚低温组MMP-9的表达显著减少.结论 LN与MMP-9可能参与了缺血再灌注血管源性脑水肿的形成与发展.再灌注早期亚低温通过增加LN的表达,减少MMP-9的表达而对缺血再灌注脑有保护作用.     

大鼠蛛网膜下腔出血后自噬的变化及意义

目的 研究大鼠蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后自噬的激活情况及脑水肿的时程变化,探讨自噬这一细胞行为在SAH后早期脑损伤中的作用,以期为SAH的治疗提供新策略和新靶点.方法 采用颈内动脉刺破法制备大鼠SAH模型,采用数字表法随机分为正常对照组和SAH 6h组、24h组、72h组,通过脑干湿重法测定SAH早期脑水肿的程度,并通过免疫印迹技术检测各组脑组织中自噬相关蛋白LC3的表达.结果 脑干湿重法测脑含水量显示SAH模型建立后6h出现脑含水量增多,至3d时明显升高（P＜0.05）.Western blot结果显示：SAH后24h LC3 II/LC3 I较正常对照组即有明显增加（P＜0.05）,持续至72h仍有较高表达.结论 SAH早期大鼠大脑皮层组织神经元自噬被激活的同时早期脑损伤加重,与其表达时程具有相关性,大鼠SAH后早期自噬的激活可能加重了脑损伤.     

亚低温对脑缺血性损伤后凋亡诱导因子表达变化的影响

目的 观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)表达的影响,研究凋亡诱导因子从线粒体释放与神经细胞凋亡的关系.方法 用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机分为假手组、常温缺血组和亚低温缺血组,于缺血2h再灌注3h、6h、12h、24h、72h、7天后处死,其中亚低温组于缺血后30min实施病灶侧脑亚低温并持续4h.处死前进行神经功能缺陷评分;HE染色;免疫组化检测AIF的表达,TUNEL检测凋亡细胞.结果 ①神经功能缺陷评分:亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组(P＜0.05).②AIF表达:常温组随再灌注时间的延长而表达逐渐增强,至24h达高峰;亚低温缺血组各时间点表达明显少于常温缺血组(P＜0.05).③凋亡细胞的检测:常温组凋亡阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72h达高峰;亚低温缺血组各时间点的表达明显减少(P＜0.05).结论 AIF随缺血再灌注时间的延长,表达逐渐增强并出现核转移,相应时间点亚低温组降低,同时凋亡阳性细胞数也呈相似的趋势,亚低温抑制缺血后神经元凋亡通过抑制AIF从线粒体释放及核转移起作用.     

亚低温对大鼠外伤性脑损伤保护作用的实验研究

目的研究亚低温对大鼠外伤性脑损伤急性期的保护作用。方法27只大鼠随机分为假手术组、亚低温组和常温对照组。采用改进的Feeney自由落体法制作重型外伤性颅脑损伤模型,体表降温法在伤后30 min内达到亚低温目标,检测三组大鼠脑组织的病理变化、含水量以及神经功能缺陷评分。结果亚低温组大鼠脑组织在治疗后24 h的含水量较对照常温组显著降低（P〈0.05）;病理组织学检查见亚低温组大鼠脑损伤较常温组改善;亚低温组大鼠在6 h的神经功能缺陷评分显著低于常温组（P〈0.05）。结论亚低温具有减轻大鼠外伤性颅脑损伤急性期脑水肿及神经功能缺陷的作用。     

缺氧诱导因子-1α在蛛网膜下腔出血早期脑水肿形成中的作用

目的 探究缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）在蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）早期脑水肿形成中的作用及相关机制.方法 采用改良血管内穿刺法制作SAH模型.雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠随机分成以下3组：SAH ＋3-（5’-羟甲基-2＇-呋喃基）-1-甲苯（YC-1）组;SAH＋二甲亚砜（DMSO）组;假手术组（sham组）.手术后24h采集脑组织标本.分别用Western blot技术和免疫荧光染色技术检测HIF-1 α和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达水平;应用伊文思蓝法（Evans blue,EB）和干湿重法分别检测血脑屏障通透性和脑组织含水量;同时记录大鼠术后24h神经功能评分及死亡率.结果 与sham组相比,SAH＋ DMSO组中HIF-1α和VEGF的表达显著增多,血脑屏障破坏和脑水肿明显加重（P＜0.05）;相对于SAH＋ DMSO组,SAH＋ YC-1组中HIF-1α和VEGF的表达显著性减少,血脑屏障破坏和脑水肿明显减轻,同时改善神经功能及降低大鼠死亡率（P＜0.05）.结论 HIF-1α可能通过诱导、调控VEGF的表达加重血脑屏障破坏,从而促进SAH早期脑水肿的形成.YC-1通过抑制SAH后HIF-1α、VEGF表达水平,进而减轻SAH后血脑屏障破坏和早期脑水肿,同时改善大鼠神经功能及降低大鼠死亡率.