胰岛素对局灶性脑缺血再灌注大鼠HSP70表达的影响

目的 :探讨胰岛素对脑缺血再灌注损伤的中枢保护机制。方法 :参照ZeaLonga线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组化法检测同一剂量胰岛素 ( 2IU·kg-1)对缺血再灌注不同时限点脑组织HSP70 蛋白的表达情况。结果 :与对照组相比 ,胰岛素能显著上调缺血侧大脑皮质及基底节区HSP70 蛋白的表达 ( χ2 检验 ,P <0 0 0 1) ,表达高峰主要在再灌注后 2 4h。结论 :胰岛素能上调缺血再灌注脑组织HSP70 蛋白的表达 ,这可能是其发挥中枢保护作用的机制之一     

大鼠短暂脑缺血后海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达的时间规律

目的 探讨大鼠脑缺血-再灌注后脑海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达规律。方法 采用左侧大脑中动脉插入丝线结扎(LMCAO)方法制作大鼠脑缺血-再灌注缺血模型，分别按照30min至7d的不同灌注时间取材，应用原位杂交方法标记各实验组大鼠脑组织海马区c-for mRNA表达数量；应用免疫组化方法标记各实验组大鼠脑组织中海马区FOS阳性神经元数量。结果 c-fos mRNA阳性细胞在MCAO缺血再灌注1h开始表达，2h达高峰，至2d时c-fos mRNA阳性细胞表达基本消失；c-fos免疫活性细胞从2h开始表达，4h达高峰，4d时表达基本消失。脑缺血—再灌注后c-fos mRNA与FOS蛋白在海马区表达具有一定的时间上规律性。结论 本研究证明了大鼠MCAO缺血—再灌注后可诱发FOS蛋白和c-fos mRNA表达增加，且基因和蛋白的表达均具有一定的时间规律性和相关性。     

脑温不同对大鼠缺血脑组织c—fos和bcl—2表达的影响

目的：研究脑缺血后不同脑温对相关基因表达的影响,探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为常温（37－38℃）脑缺血、亚低温（31－32℃）脑缺血、高温（41－42℃）脑缺血和假手术组,每组12只动物。脑缺血动物模型采用改良的Pulsinelli四动脉阻断法。脑组织中Fos和bcl-2蛋白的检测采用链菌素亲生物素－过氧化酶连接法（SP）免疫组织化学技术。结果：脑缺血再灌注可诱导Fos蛋白的表达,亚低温可使Fos蛋白的表达提早而增多,高温却使脑缺血时Fos蛋白的表达减少。常温脑缺血再灌注可诱导大脑皮质bcl-2蛋白表达;亚低温增加bcl-2蛋白表达;高温减少bcl-2蛋白表达。结论：脑缺血后即时开始亚低温可增加Fos和bcl-2蛋白的表达,是亚低温脑保护作用的机制;脑缺血后高温则加剧脑缺血损伤。     

阿托伐他汀钙对实验性脑缺血MMP-9表达变化的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,应用原位杂交和免疫组化法检测MMP-9mRNA及蛋白表达。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),24h达高峰;阿托伐他汀钙干预治疗后能减少缺血脑组织中MMP-9mRNA和蛋白表达(P<0.05);降低神经功能缺损评分(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-9mRNA及蛋白表达,减轻缺血再灌损伤。     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP10表达的影响

目的研究丁苯酞干预对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时点脑组织中热休克蛋白10(HSP10)表达的影响,并探讨丁苯酞对缺血性脑血管病保护作用的机制。方法采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作大鼠前脑缺血再灌注模型;H&E染色和NSE免疫组化染色神经元,观察脑组织的形态变化和记数各组神经元数目;免疫组织化学检测对照组、缺血再灌注组及丁苯酞干预组大鼠脑组织HSP10的表达水平变化。结果脑缺血再灌注后丁苯酞干预组及缺血再灌注组HSP10表达水平于再灌注后6h开始上调,3d达到高峰,丁苯酞干预组各时间点HSP10阳性表达指数均高于缺血再灌注组,丁苯酞干预组脑组织的损伤程度明显轻于脑缺血再灌注组(P<0.05)。结论丁苯酞可能通过上调大鼠缺血再灌注损伤后脑组织HSP10的表达,从而抑制前脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,减少神经元死亡,减轻缺血再灌注后脑组织的损伤。     

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70影响

目的探讨缺血后处理(Postcond)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,以探讨其脑保护的机制。方法成年健康SD大鼠45只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,于灌注24h后断头留取大脑皮质组织,用免疫组化、Western blot检测HSP70蛋白的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HSP70mRNA表达水平。结果局灶性脑缺血再灌注24h后脑皮质内HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达增加(P0.05)。应用缺血后处理能显著地促进脑缺血再灌注后脑组织HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达(P0.05)。结论缺血后处理促进大鼠局灶性脑缺血再灌注皮质内HSP70的表达,这可能是其脑保护作用的部分机制。     

rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。     

脑组织TOLL样受体2的激活与大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的关系

目的 探讨TOLL样受体2(TLR2)的激活与脑组织缺血再灌注损伤的关系.方法 线栓法制造局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型,采用免疫组织化学法观察TLR2和核因子-κB(NF-κB)在不同再灌注时间点缺血脑组织的分布和表达量,同时应用酶联免疫方法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在不同再灌注时间点缺血脑组织内浓度,并分析其表达相关性.结果 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤过程中,TLR2蛋白在缺血半影区及皮质区、纹状体区有表达,且在灌注早期(即1h)即有增强表达,在3 h即达高峰;皮质区和纹状体区NF-κB表达从6 h开始逐渐增强,于再灌注24 h达高峰;缺血侧半球皮质内TNF-α变化规律与NF-κB相似,但表达高峰在再灌注12 h;TLR2蛋白的表达与NF-κB和TNF-α表达呈正相关.结论 TLR2在脑缺血再灌注过程中被激活,可能通过NF-κB导致炎性因子TNF-α等的大量表达介导参与了脑缺血再灌注损伤的过程.     

胰岛素对脑缺血后鼠海马CA1区神经元凋亡及记忆影响

目的　观察胰岛素对全脑缺血后海马CA1区神经元凋亡及大鼠学习记忆力改变的影响 ,探讨胰岛素对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用的机理。方法　利用 4 VO法制作大鼠全脑缺血模型。造成脑缺血 15min后行再灌注 ,于再灌注后即刻经脑室注入 1U胰岛素 ,利用免疫组化及原位标记法分别于全脑缺血后 1、3d观察海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白表达及神经元凋亡的情况 ;缺血后 8周 ,利用“Y”型迷宫测试大鼠的学习记忆功能。结果　全脑缺血后 3d ,缺血组大鼠海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白的表达呈阴性 ,海马CA1区原位标记阳性细胞计数为 14 3.5± 11.6。治疗组大鼠海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白呈阳性表达 ,海马CA1区原位标记阳性细胞计数为 75 .6±6 .7。全脑缺血后 8周 ,治疗组大鼠学习记忆力明显好于缺血组。结论　全脑缺血后脑室内注入胰岛素可促进海马CA1区Bcl 2、Bcl xl蛋白表达 ,减少神经元的凋亡 ,进而减轻脑缺血后大鼠的学习记忆力损害 ,这可能是其对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用主要机理之一     

碱性成纤维细胞生长因子治疗猫急性脑梗死的作用机制研究

目的:观察碱性成纤维生长因子(bFGF)处理的缺血再灌注不同时程的猫脑组织中微管相关蛋白(MAP-2)和神经丝蛋白(NTP)的表达,探讨bFGF治疗缺血性脑损伤的可能作用机制。方法:健康家猫30只,随机分为生理盐水对照组和bFGF治疗组。采用左侧眼眶入路制作大脑中动脉缺血再灌注模型。于术前和再灌注24h、48h和7d,采用Philip的猫脑缺血神经功能评分标准进行神经功能缺损评分;应用免疫组织化学SP法检测缺血再灌注不同时程的脑组织MAP-2及NTP蛋白表达,进行免疫阳性细胞计数。结果:缺血再灌注48h后,治疗组动物神经功能受损程度较对照组明显减轻,MAP-2及NTP蛋白阳性细胞数目较对照组也显著增加。结论:bFGF通过诱导MAP-2及NTP蛋白的表达,减轻了缺血再灌注脑组织的神经元损伤和促进了神经纤维生长,从而改善受损的神经功能。     

胰岛素对脑缺血再灌注后bFGF表达的影响

目的 研究胰岛素对脑缺血再灌注后碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)蛋白表达的影响。方法 用线栓法制成大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型，外周应用胰岛素保持血糖水平正常，免疫组化观察单纯缺血再灌注后bFGF表达及胰岛素对它们的影响。结果胰岛素组bFGF表达明显强于未用药组。结论 胰岛素增强缺血再灌注后bFGF的表达可能是其具有脑保护作用的机制之一。     

雌激素对癫癎大鼠大脑皮层、海马FOS蛋白表达的影响

目的;了解雌激素对马桑内酯（ＣＬ）致■大鼠中枢神经系统ＦＯＳ蛋白（ＦＯＳ）表达的影响。方法：应用流式细胞免疫荧光技术对ＣＬ致■及给予雌激素后再致■大鼠大脑皮层、海马细胞ＦＯＳ表达进行定量检测。结果：ＣＬ致■组大鼠大脑皮层、海马ＦＯＳ表达的荧光指数（ＦＩ）和阳性细胞数较正常对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）;给予雌二醇（Ｅ２）后再致■组皮层、海马ＦＯＳ表达较单纯ＣＬ致■组增加（Ｐ＜００５,Ｐ＜０．０１）。结抡：由于ＦＯＳ可作为神经元兴奋的标志,雌激素可以提高皮层、海马神经细胞的兴奋性,提示雌激素有致■性。     

纳洛酮对大鼠脑缺血bcl-2和c-fos蛋白表达的影响

目的探讨纳洛酮对脑缺血再灌注的神经保护机制.方法采用线栓法制造的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,通过免疫组化法检测脑缺血不同再灌注时间以及经纳洛酮(5 mg/kg)预处理后bcl-2和c-fos蛋白的表达.结果脑缺血30 min再灌注6h,bcl-2和c-fos蛋白表达显著增加;再灌注24h,bcl-2蛋白持续增高,而c-fos蛋白基本降至正常.表明纳洛酮可显著上调脑缺血后bcl-2蛋白的表达,抑制c-fos蛋白的表达.结论纳洛酮的神经保护机制可能与其上调bcl-2蛋白,抑制c-fos蛋白表达有关.     

大鼠脑缺血再灌注与蛋白激酶C活性变化及FOS、BCL-2的表达

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注对时蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活必珠变化与ＦＯＳ、ＢＣＬ－２表达的关系。方法 采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，用磷基转移片检测ＰＫＣ的活性，用免疫组化检测ＢＣＬ－２及ＦＯＳ的量。结果 缺血再灌注后膜ＰＫＣ活性持续增加，ＦＯＳ在缺血再灌注早期即有明显增加，至缺血再灌注２天时仍有少量表达。ＢＣＬ－２表达的高峰是在缺血再灌注２天时。结论 缺血再灌注期间ＰＫＣ发生易位激活，ＰＫＣ促进     

雌激素致癎作用部位的研究

目的了解雌激素在癫癎大鼠中枢神经系统的作用部位.方法利用海人酸致癎和6-氟二乙酯致癎的两种不同机制的癫癎模型(单纯致癎组),应用免疫组化法检测单纯致癎及给予雌激素后再致癎大鼠海马、大脑皮质、纹状体的FOS表达.结果两种模型单纯致癎组海马、皮质、纹状体FOS表达较正常组显著增高(均P＜0.01).给予雌二醇(E2)后再致癎,海人酸模型中海马、皮质FOS表达较单纯致癎组增加(P＜0.01,P＜0.05);而6-氟二乙酯模型中无变化.结论在两种不同致癎机制的癫癎模型中,雌二醇对鼠脑FOS表达的影响不同.     

脑缺血时半乳糖凝集素-3对大鼠脑皮质中bcl-2、BAX及caspase-3表达的影响

目的通过脑缺血/再灌注损伤模型,测定脑缺血时半乳糖凝集素-3(Gal-3)对B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达的影响,从而为脑缺血的发病机制提供一定的实验依据。方法雄性SD大鼠18只,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血1.5 h,再灌注至24 h。采用随机分组法分为假手术组(sham)、缺血/再灌注组(I/R)和Gal-3 RNA干扰组(siRNA)。采用real-time PCR及western blot检测大鼠脑皮质中Gal-3、bcl-2、BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达变化。结果大鼠脑缺血/再灌注损伤后,脑皮质中Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.38、0.47和1.310、1.299;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.41、1.55及1.076、1.155。而Gal-3 RNA干扰后,Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.24、0.14及1.014、1.058;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.76、1.88及1.480、1.515。结论 Gal-3可能通过上调bcl-2、下调caspase-3及BAX mRNA及蛋白的表达,参与脑缺血/再灌注损伤的病理过程。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（mid-dle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Caspase-3的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多（P〈0.01）;给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组明显减弱（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0.01）,但两者均显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,促进细胞凋亡,胰岛素可下调脑皮质神经元Caspase-3的表达,发挥神经保护作用。     

定量评估大鼠局灶性脑缺血再灌注后少突胶质细胞的病理学变化

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后少突胶质细胞的病理学改变.方法 应用改良插线法制作大鼠脑缺血再灌注模型.应用免疫组化方法检测大鼠tau-1蛋白的表达水平,以大鼠白质缺血区tau-1蛋白表达阳性的细胞体积定量少突胶质细胞的损伤,并分析其与神经元核周体损伤的关系.结果 模型组大鼠缺血侧皮质和尾壳核可见大量缺血坏死的神经元及tau-1蛋白表达,而正常对照组大鼠未出现缺血坏死的神经元及tau-1蛋白表达增加;模型组大鼠少突胶质细胞损伤体积和神经元核周体损伤体积呈正相关(r=0.895,P＜0.01).结论 少突胶质细胞易受局灶性缺血性损伤,通过检测tau-1蛋白的表达可定量显示少突胶质细胞的损伤程度,为白质损伤的研究提供评估标准.     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。