大鼠不同发育阶段β-防御素-2基因在肺组织的表达研究

目的：探讨大鼠β-防御素-2基因在肺组织表达的发育调控。方法：根据Genbank大鼠β-防御素-2的cDNA序列,设计一对特异引物。采用RT-PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中,扩增其特异cDNA片段,并进行DNA序列测定。借助Genbank中BLASI、程序,将从该cDNA序列推导的氨基酸序列与人的hBD-2和大鼠的rBD-1做相似性分析。     

β-防御素-1基因在大鼠皮肤和肾脏固有表达

目的：检测大鼠β-防御素一1基因表达的组织分布。方法：从Genbank检索到的Norway大鼠β-防御素-1 cDNA序列,据此设计一对特异引物,采用RT-PCR技术在Wistar大鼠10种受检测组织的总RNA中,扩增其特异cDNA片段,然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果：在10种大鼠组织中,     

β-防御素-1基因在大鼠皮肤和肾脏固有表达

目的:检测大鼠β-防御素-1基因表达的组织分布。方法:从GenBank检索到的Norway大鼠β-防御素-1 cDNA序列,据此设计一对特异引物,采用RT-PCR技术在Wistar大鼠10种受检测组织的总RNA中,扩增其特异cDNA片段,然后进行克隆扩增、限制性内切酶谱分析和DNA序列测定。结果:在10种大鼠组织中,仅从皮肤和肾脏扩增出一条长度为272 bp的cDNA片段,在气管、子宫、骨髓、膀胱、小肠、脾脏、骨骼肌、腮腺等均未检测出其mRNA。其RT-PCR产物经测序分析证明系大鼠β-防御素-1 cDNA。结论:本研究显示大鼠β-防御素-1基因除在肾脏表达外,亦在皮肤组织固有表达,提示β-防御素-1亦可能在大鼠皮肤天然抵抗微生物感染机制中发挥作用。     

卡介苗吸入对LPS致肺炎大鼠肺β-防御素mRNA的影响

目的探讨卡介苗（BCG）雾化吸入是否能增强肺炎大鼠活体内肺组织β-防御素-1、β-防御素-2的mRNA表达。方法采用RT-PCR方法研究肺炎时大鼠活体内β-防御素-1（RBD-1）、β-防御素-2（RBD-2）mRNA的表达，卡介苗雾化吸入时脂多糖所致肺炎大鼠活体内的肺组织RBD-1、RBD-2mRNA的表达。结果脂多糖（LPS）、卡介苗不能增强下呼吸道RBD-1mRNA的表达，但可增强RBD-2mRNA表达。结论通过卡介苗雾化吸入能增强机体表达内源性β-防御素-2，协助治疗呼吸道感染，其在诱导β-防御素方面的作用是一个值得进一步探索的研究领域。     

大肠杆菌对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的抑制

目的：探讨细菌对大鼠β-防御素-2(rBD-2)基因的表达调控。方法：将大肠杆菌E．coliML-35和绿脓杆菌27853大鼠气管内接种,于24小时后提取肺组织RNA,用RT-PCR法检验大鼠β-防御素-2基因的表达情况。结果：气管内接种大肠杆菌使大鼠肺组织β-防御素-2mRNA的表达受抑制。结论：大肠杆菌及其产物直接或通过炎症细胞因子间接抑制rBD-2mRNA的表达。     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β-防御素体外试验显示具广谱抗菌活性，本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠β-防御素-2(rBD2)重组质粒pBK-CMV-rBD2和pCDNA-3．1-Myc-His( )-rBD2，通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入，检测其在气管和肺组织表达情况，并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2-His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达，说明脂质体包裹的重组p防御素-2pBK-CMV-rBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒pBK-CMV-rBD2气道转染与对照相比可显著提高肺组织对绿脓杆菌的清除率(n(8，p(0．01)．本研究表明β-防御素基因气道转染可提高呼吸道天然抗感染防御功能，可能在呼吸道感染的防治实践中具有潜在应用价值。     

大鼠不同发育阶段β-防御素-2基因

目的:探讨大鼠β-防御素-2基因在肺组织表达的发育调控。方法:根据Genbank大鼠β-防御素-2的cDNA序列,设计一对特异引物。采用RT-PCR技术在大鼠不同发育阶段的肺组织总RNA中,扩增其特异cDNA片段,并进行DNA序列测定。借助Genbank中BLAST程序,将从该cDNA序列推导的氨基酸序列与人的hBD-2和大鼠的rBD-1做相似性分析。结果:从足月胎鼠、出生8h和4d以及成年大鼠相同重量肺组织所提取的总RNA中,均扩增出一条密度相同、长度约为220bp的cDNA片段。在所推导氨基酸序列中与hBD-2氨基酸相同率为48.6%(17/35),与rBD-1氨基酸残基的相同率为31%(11/35)。其成熟分子链长35个氨基酸残基,含β-防御素共有的且排列次序相同的6个典型的半胱氨酸和其它保守氨基酸残基。结论:本实验表明不同发育阶段大鼠肺组织均表达β-防御素-2mRNA,提示该分子可能是肺组织天然抵抗微生物感染的一个重要分子基础。     

人β-防御素-2基因5′-端转录调控区DNA片段的克隆及序列初步分析

人 β-防御素 (hBD)主要由上皮细胞生成 ,包括hBD - 1、hBD - 2等亚类 ,是皮肤、粘膜免疫的重要分子。其中hBD - 2是富含半胱氨酸阳离子的由 4 1个氨基酸组成的低分子抗菌肽。通常hBD - 2在健康组织中为低水平表达 ,但当皮肤、肺、气道组织有病菌入侵时可诱导hBD - 2的大量表达。对牛气道防御素 (TAP)受LPS刺激诱导表达的转录机制的研究表明NF -κB和NF -IL6共同调控TAP基因的转录。本研究将人 β -防御素 - 2基因上游序列输入Matinspector软件 ,应用Matinspector软件于转录因子数据库 (http ://tansfac gbf de/TRANSFAC)中…     

人体β-防御素hBD-3的cDNA克隆与鉴定

防御素是一类具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,具有抗菌、抗病毒及杀伤肿瘤细胞的多功能效应,其效能强大,且至今尚未发现病菌株对它产生耐药性,有关防御素的基础和临床前应用研究已成为生物医学研究领域的热点之一,深受医学界、药学界瞩目,尤其引人注目的是新近发现的β-防御素.已发现3种人体β-防御素,hBD-1是Bensch等[1]于1995年从肾衰患者血透析液中分离获得的;hBD-2是Harder等[2] 于1997年从银屑病患者病损上皮中分离获得的; 2001年,Harder等[3]又从人体鳞癣皮肤中分离获得hBD-3.有关hBD-1 和hBD-2基因的克隆、表达及其调控已有许多研究报道[4],为开发新一类抗菌药物奠定了一定基础.hBD-3的发现为人体防御素的基础和应用研究注入了新的活力,进一步深入研究人体β-防御素hBD-3基因的表达及其调控机制,建立高效表达具有广谱抗菌活性的人体防御素的生物工程新方法、新技术具有极其重要的意义.本研究利用RT-PCR技术,成功克隆了hBD-3的cDNA片段.     

大肠杆菌感染对大鼠肺组织β—防御素—2基因表达的负相调节作用

目的：探讨细胞对大鼠β-防御素－2(rBD-2)基因的表达调控。方法：将大肠杆菌E.coli ML-35p和绿脓杆菌ATCC 27853大鼠气管内接种，于24h后提取肺组织RNA，用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法和Northern blot检测大鼠β－防御素－2基因的表达变化。结果：气管内接种大肠杆菌24h后使大鼠肺组织β－防御素－2mRNA的表达受到显著抑制，绿脓脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论：大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBC-2 mRNA的表达。     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

目的和方法 :β -防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β -防御素 - 2 (rBD2 )重组质粒pBK -CMV -rBD2和pCDNA - 3 1-Myc -His(+) -rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果 :显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 -His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β -防御素 - 2pBK-CMV -rBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示…     

人β防御素2在大鼠子宫内膜异位模型异位病灶组织中的转染表达

目的构建人β防御素2（hBD-2）的真核表达载体PLXSN的重组质粒pLXSN-hBD2,将其转染至大鼠子宫内膜异位症（EMS）模型的局部异位病灶组织,并检测hBD-2基因和蛋白表达。方法利用双酶切定位定向克隆技术,将hBD-2基因片段连接于pLXSN质粒的EcoRI和BamHI两个酶切位点之间,构建重组质粒pLXSN-hBD2。自体内膜移植法建立大鼠EMS模型,将pLXSN-hBD2局部多点注射至其局部异位病灶组织,Western印迹检测局部病灶组织中的hBD-2蛋白表达。结果经过重组质粒的鉴定电泳以及测序鉴定,设计合成的基因片段序列与GenBank中hBD-2cDNA序列完全相同,其中碱基54-248为目的基因hBD-2序列。Western印迹证实大鼠EMS模型异位病灶局部有hBD．2蛋白的表达。结论通过局部多点注射的方法,可将携带hBD-2基因的重组质粒pLXSN-hBD2成功转染至大鼠EMS异位病灶组织中,并获得hBD-2蛋白的表达。     

白细胞介素-22、β-防御素-2与呼吸系统的免疫调节及哮喘关系的研究进展

白细胞介素(IL)-22是一种有活性的细胞因子,具有抗炎和促炎两种活性,其受体在呼吸道上皮细胞高度表达,参与呼吸道的固有免疫.人类β-防御素有6种,其中人β-防御素-2是最早被发现的具有诱导性表达的防御素,主要来源于呼吸系统,与呼吸系统疾病的发生发展密切相关.IL-22及β-防御素-2在呼吸道均具有免疫调节作用,在一定程度上参与哮喘的发生发展.     

大鼠β-防御素-2基因气道转染增强肺抗感染防御功能的研究

β 防御素体外试验显示具广谱抗菌活性 ,本研究应用转基因方法评估其体内抗菌作用。构建大鼠 β 防御素 2 (rBD2 )重组质粒 pBK CMV$CrBD2和 pCD NA 3.1 Myc His( + ) rBD2 ,通过脂质体包裹的方法将重组质粒经气管滴入 ,检测其在气管和肺组织表达情况 ,并应用肺组织匀浆上清菌落计数法检察对绿脓杆菌的肺清除率。结果显示在基因转染大鼠的气管和肺组织内均检测到rBD2 His融合蛋白基因mRNA和蛋白的表达 ,说明脂质体包裹的重组 β 防御素 2pBK CMV$CrBD2质粒可有效转染气道上皮组织。肺细菌清除率实验显示构建重组质粒 p…     

脂质体介导人β防御素2基因转染膀胱上皮的实验研究

目的 探讨脂质体介导人β防御-2( humanβ-defensin 2,hBD2 )基因体内、外转染膀胱上皮细胞的可行性.方法 采用脂质体法体外转染人膀胱上皮细胞株T24及膀胱灌注大鼠体内转染,ELISA检测细胞上清及大鼠尿液中hBD2的表达;RT-PCR及Western印迹检测细胞及大鼠膀胱中hBD2的表达;组织免疫...     

大鼠白细胞介素10(IL-10)cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的:克隆大鼠白细胞介素10（IL-10）cDNA的全长序列,并使其在大肠杆菌中表达,为其分子生物学利用奠定基础。方法:无菌条件下切取大鼠的脾脏,收获脾细胞,用LPS刺激培养4h;提取细胞的总RNA,用RT-PCR技术克隆IL-10cDNA的全长序列;经测序后将IL-10cDNA插入表达载体 pJW2,转染 DH5α细胞后进行热诱导表达并对表达蛋白进行测定。结果:脾细胞经LPS刺激后IL-10转录水平增加,从提取的RNA易反转录并扩增出期望的PCR产物,测序结果表明得到的IL-10CDNA序列与基因库报告的序列完全一致。将其插入表达载体pJW2后经热诱导顺利表达出蛋白分子量与文献报道一致。Western-blot分析表明表达的条带可与小鼠抗大鼠IL-10抗体特异性结合。结论:大鼠的IL-10cDNA全长序列被成功克隆,克隆序列能够在大肠杆菌中表达。     

慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化

目的:观察慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,揭示其与慢性牙周炎发病的相关性。方法:收集慢性牙周炎患者和同期牙周健康者各80例。ELISA检测血浆β-防御素-2浓度。统计分析其与慢性牙周炎发病的相关性。结果:经t检验,慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度(405.2±133.9)pg/ml显著低于牙周健康者(641.6±128.3)pg/ml(t=6.492,P<0.01)。经Spearman相关分析,慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2浓度与牙周探诊深度(r=-0.482,P<0.01)、附着丧失(r=-0.498,P<0.01)和出血指数(r=-0.501,P<0.01)均呈显著负相关。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-2浓度(OR=0.415,95%CI=0.297～0.862,P<0.01)是罹患慢性牙周炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-2浓度预测罹患慢性牙周炎有显著预测价值(曲线下面积=0.843,95%CI=0.774～0.894,P<0.01),且判定血浆β-防御素-2浓度<621.5 pg/ml,对预测罹患慢性牙周炎有81.3%的灵敏度和75.0%的特异度。结论:慢性牙周炎患者血浆β-防御素-2水平降低,血浆β-防御素-2水平降低可能是慢性牙周炎的危险因素。     

急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2的检测及临床意义

目的:探索急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2浓度的变化,探讨其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。方法:收集急性阑尾炎患者作为阑尾炎组,共208例。收集同期健康体检者作为对照组,共104例。ELISA检测血浆β-防御素-2浓度。统计分析其与急性阑尾炎患病危险性的相关性。结果:t检验显示,阑尾炎组血浆β-防御素-2浓度(398.6±128.0)pg/ml显著低于对照组(629.1±47.2)pg/ml(t=6.470,P<0.05)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-2浓度(OR=0.429,95%CI=0.251～0.795,P<0.05)是罹患急性阑尾炎的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-2浓度预测罹患急性阑尾炎有显著预测价值(曲线下面积=0.817,95%CI=0.778～0.865,P<0.001),且判定血浆β-防御素-2浓度<612.4 pg/ml,对预测罹患急性阑尾炎有75.0%的灵敏度和72.1%特异度。结论:急性阑尾炎患者血浆β-防御素-2水平降低,血浆β-防御素-2水平降低可能是急性阑尾炎发病的危险因素。     

C端带cmyc和多聚组氨酸双标记的重组人β防御素-2真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的转染表达

目的：人类β-防御素(β-defensins hBDs)是一类具广谱抗微生物活性的小分子阳离子多肽,在人体多种器官尤其是粘膜上皮细胞中广泛存在,起着重要的屏障防御作用。由于hBD-2在粘膜上皮组织受炎症刺激呈诱导性表达,提示其在机体粘膜防御中的作用更为突出。本研究旨在探索建立不仅能有效表达和分泌人类β-防御素-2而且其表达产物易于被检测和分离纯化的哺乳类动物型工程细胞的可能性及技术路线。     

大肠杆菌感染对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的负相调节作用

目的:探讨细菌对大鼠β-防御素-2(rBD-2)基因的表达调控。方法:将大肠杆菌E.coliML-35p和绿脓杆菌ATCC27853大鼠气管内接种,于24h后提取肺组织RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northernblot检测大鼠β-防御素-2基因的表达变化。结果:气管内接种大肠杆菌24h后使大鼠肺组织β-防御素-2mRNA的表达受到显著抑制,绿脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论:大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBD-2mRNA的表达。