督脉、夹脊电针治疗急性脊髓损伤实验研究进展分析

在简单介绍电场与神经细胞再生等研究成果的基础上,对国内近二十年有关电针督脉、夹脊穴治疗急性脊髓损伤的实验机理研究进行综述。     

髓鞘碱性蛋白与脊髓损伤预后的关系

目的 研究急性脊髓损伤后血清、脑脊液髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）变化与脊髓损伤程度、预后情况之间的关系。方法 ＥＬＩＳＡ法检测５１例不同程度脊髓损伤患者伤后２４ｈ内血清和脑脊液ＭＢＰ含量,结合预后程度进行分析。结果 脊髓完全性损伤患者伤后２４ｈ内即出现脑脊液ＭＢＰ显著增高,较重的脊髓不完全性损伤（ＡＳＩＡ分级Ｂ或Ｃ级）伤后２４ｈ内也出现脑脊液ＭＢＰ增高,但各时间点增高幅度完全性损伤组小;较轻的脊髓不完全性损伤（ＡＳＩＡ分级Ｄ级）和脊髓震荡不出现脑脊液ＭＢＰ增高;各组血清检测结果与脑脊液结果一致变化。结论 受伤后２４ｈ内血清或脑脊液ＭＢＰ检测对于判断脊髓损伤程度以及估计预后具有积极的意义。     

夹脊电针对脊髓损伤大鼠运动功能、神经肌肉形态学影响及机制研究

目的 研究夹脊电针对脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)大鼠运动功能、神经肌肉形态学的影响,并探讨相关机制.方法 将40只Wistar成年雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、阳性对照组.假手术组仅做椎板切除不造成SCI,其余各组采用Allen′s改良式重物撞击法建立SCI模型.假手术组及模型组...     

夹脊穴电针治疗对急性脊髓损伤大鼠microRNA-21及其介导的神经元凋亡的影响

目的:观察夹脊穴电针治疗对急性脊髓损伤大鼠miR-21的表达及其介导的神经元凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和甲强龙组,通过改良版Allen's打击法复制急性脊髓损伤大鼠模型。各组于造模后2 h给予相应的干预治疗,其中电针组予胸8～胸12夹脊穴电针治疗,甲强龙组给予甲泼尼龙琥珀酸钠30 mg/kg腹腔注射,假手术组和模型组不予处置。分别观察各组大鼠治疗后肢体运动功能评分,并取损伤节段脊髓组织,通过Nissl染色观察脊髓神经病理形态的改变,RT-qPCR法检测组织中miR-21的表达水平,Western-Blot法检测组织中凋亡蛋白(Bax、Bcl-2和cleaved-Caspase-3)的表达丰度。结果:与除假手术组相比,模型组术后BBB、神经元存活率和组织中miR-21的表达水平明显低,神经元凋亡率明显增高,组织中Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白的表达及Bax/Bcl-2的比值均明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);夹脊穴电针治疗能够明显升高ASCI大鼠术后BBB评分、神经元存活率和组织中miR-21的表达,降低神经元凋亡率和Bax/Bcl-2的比值,抑制组织中Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白的表达,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:夹脊穴电针治疗可明显促进SCI后小鼠神经功能的恢复,其作用机制可能与其上调组织中miR-21的表达进而抑制Bax/Bcl-2/cleaved Caspase-3信号通路的活化密切相关。     

电针治疗对大鼠脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响

目的:探讨电针治疗对大鼠脊髓损伤(SCI)后Nogo-A蛋白表达的影响。方法:以96只2月龄Wistar大鼠为受试对象,SCI组于T9处行脊髓全横断,治疗组予电针治疗,采用Western blot测定各时间点及各组脊髓Nogo-A表达及变化,并以苏木精-伊红和免疫组化染色对受损脊髓进行形态学观察。结果:SCI后Nogo-A蛋白表达呈递增趋势,于14 d后最强;经电针治疗,Nogo-A表达减少。结论:Nogo-A是SCI后脊髓神经纤维再生的主要抑制因子,电针治疗对Nogo-A表达具有明显的抑制作用。     

电针对坐骨神经损伤大鼠血清中髓鞘碱性蛋白及其抗体的影响

目的从髓鞘修复的角度探讨电针治疗坐骨神经损伤(SNI)的机制。方法选SD大鼠随机分为5组:正常组、假手术组、模型组、模型对照组、电针组。除正常组和假手术组外,采用坐骨神经夹持损伤法建立SNI大鼠模型。电针组采用电针仪治疗,电流2 m A,频率为5 Hz,疏密波,选取的穴位为伤侧环跳、殷门、阳陵泉和承山。模型对照组造模后,与电针组治疗同时开始束缚大鼠。治疗每天1次,每次10 min,10次为1个疗程,共2个疗程。正常组、假手术组、模型组不干预。用髓鞘染色法观察脊髓及坐骨神经损伤点髓鞘的损伤及修复情况,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)及其抗体的表达量。结果干预20次后,模型组、模型对照组白质中髓鞘松散,髓鞘化程度非常低;电针组髓鞘化程度较高,髓鞘、轴突结构完整。模型组及模型对照组血清中MBP、MBP抗体浓度明显高于正常组(P0.05),电针组明显低于模型组及模型对照组(P0.05),电针组MBP、MBP抗体表达量与正常组接靠近,稍高于正常组。结论电针可以降低MBP在血清中的表达,从而减少髓鞘、轴突崩解;电针可以降低MBP抗体在血清中的表达,减少大鼠自身免疫反应,从而减少对髓鞘的二次损伤,保护髓鞘,进而促进损伤的坐骨神经修复。     

骨髓单个核细胞移植对脊髓半横断大鼠损伤组织中髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的：研究骨髓单个细胞移植脊髓半横断大鼠脊髓损伤区域后髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）表达的影响.方法：取Wistar大鼠胫骨及股骨提取骨髓单个核细胞,采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,制成细胞悬液.建立大鼠脊髓右半横断模型,造模后分为假手术组、模型组、骨髓单个核细胞移植组.于模型建立成功后7d,14d,21d,28d手术的大鼠进行BBB评分从而评估损伤脊髓神经功能恢复情况,利用RT-PCR观察MBP mRNA的表达变化.结果：术后各时间点假手术组BBB评分均明显高于骨髓单个核细胞移植组、模型组（P＜0.05）;术后随时间延长骨髓单个核细胞移植组、模型组BBB评分逐渐增加,14、21、28d时骨髓单个核细胞移植组BBB评分明显优于模型组（P＜0.05）.PT-PCR测试各时间点骨髓单个核细胞移植组和模型组大鼠脊髓中MBP mRNA的表达量高于假手术组,且骨髓单个核细胞移植组高于模型组（P＜0.05）.结论：骨髓单个细胞移植可提高脊髓组织中MBP的表达,有助于大鼠半横断脊髓损伤神经功能的恢复.     

针刺夹脊穴治疗脊髓损伤便秘临床研究

目的:探讨针刺夹脊穴治脊髓损伤便秘的疗效。方法:将56例脊髓损伤后便秘患者随机分为治疗组(28例)和对照组(28例)。治疗组采用针刺夹脊穴治疗;对照组采用口服麻仁软胶囊治疗。两组均连续治疗4周,观察两组患者治疗前后慢性便秘评分量表总评分(CCS)变化差值。结果:根据慢性便秘评价量表(CCS)评价:治疗组总有效率96.4%,对照组总有效率为25%,治疗组临床疗效明显优于对照组(P0.05)。结论:针刺夹脊穴治疗脊髓损伤便秘疗效优于药物治疗。     

电针对大鼠CSCI后少突胶质前体细胞表达的影响

目的 研究脊髓压迫性损伤 （CSCI）后,电针对少突胶质前体细胞 （OPC）表达的影响,分析电针促进大鼠CSCI后受损神经纤维再髓鞘化的可能机制。方法 将36只SD大鼠建立CSCI模型后分为对照组和电针组,根据治疗时间分别分为3 d、7 d和14 d 3个亚组,每个亚组6只。对照组只造模,不治疗;治疗组于造模后,针刺脊髓损伤节段局部夹脊穴、双侧足三里和双侧太溪穴,并于双侧足三里和太溪穴进行电针刺激 （连续波,输出频率为2 Hz,电压1.5 V,30 min）。运用神经功能评分和电镜分别观察大鼠行为学变化及有髓神经纤维超微结构变化;采用免疫印迹法观察OPC标记物NG2蛋白的表达变化。结果 神经功能评分显示：3 d和7 d对照组和电针组组间及组内相比,差异均无统计学意义（P＞0.05）。14 d电针组分别与7 d电针组及同时期的对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。电镜结果显示：不同时间点的对照组均有程度不等的轴突肿胀,轴浆内细胞器变性、丢失;髓鞘出现水肿,髓鞘板层结构紊乱、增厚,直至溃变、崩解。电针组的髓鞘、轴突肿胀程度比同时期的对照组略轻,髓鞘结构较为致密。G-ratio值显示,3 d和7 d对照组和电针组组间及组内相比,差异均无统计学意义（P＞0.05）。14 d电针组分别与7 d电针组及同时期的对照组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）。免疫印迹结果显示：对照组和电针组的NG2蛋白表达随时间延长均逐渐上调,对照组和电针组各组内不同时间点及相同时间点（7 d,14 d)组间比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 CSCI后,通过电针刺激穴位,并给予足够有效的刺激时间,可促进受损神经纤维炎症、水肿的吸收,并使OPC的表达增强,帮助脊髓受损神经纤维再髓鞘化,从而改善神经功能。     

丙泊酚对大鼠急性脊髓损伤早期的影响

目的观察丙泊酚对大鼠急性脊髓损伤早期的影响,探讨丙泊酚对急性脊髓损伤早期脊髓神经组织的保护作用。方法健康雄性SD大鼠48只随机分为6组,每组8只。假手术组(S组)、脊髓损伤组(I组)、脂肪乳组(F组)和不同剂量丙泊酚组:低剂量组(L组)、中剂量组(M组)和高剂量组(H组)。S组仅切除T9全椎板,不损伤脊髓;其余各组应用Allen,s重物坠落法并加以改良制备大鼠急性脊髓损伤模型。各组药物干预15min(T15)和60min(T60)时取动脉血大鼠1.5mL测血清S100β蛋白含量,各组药物干预60min后立即断头处死大鼠取脊髓组织测脊髓含水量及脊髓组织总钙含量。结果与S组比较,其余五组在T15和T60时血清S100β蛋白和脊髓组织总钙含量均明显升高(P均<0.01),I组、F组、L组和H组脊髓含水量均增多(P均<0.05);I组与F组间各时间点血清S100β蛋白含量、脊髓组织含水量及总钙含量差异均无统计学意义(P>0.05);与I组和F组分别比较,在T15和T60时L组、M组和H组血清S100β蛋白和脊髓组织总钙含量均显著降低(P均<0.01),M组脊髓含水量低于I组和F组(P<0.05);与L组比较,在T15和T60时M组和H组血清S100β蛋白和脊髓组织总钙含量均降低(P均<0.01);与M组比较,在T15和T60时H组血清S100β蛋白和脊髓组织总钙含量均升高(P均<0.01),脊髓含水量增多(P<0.05);与T15时比较,L组、M组和H组在T60时血清S100β蛋白含量均明显降低(P均<0.01)。结论丙泊酚34.92mg·(kg·h)-1持续泵注60min对急性脊髓损伤后早期有保护作用。     

脂质过氧化反应在脊髓损伤中的作用

本实验通过大鼠脊髓损伤模型,观察了抗氧化剂对组织和血清丙二醛(MDA)的影响。结果表明:大鼠脊髓损伤2h 后,损伤组织中 MDA 含量已明显高于对照组(P<0.05),3d 后增高更著(P<0.01);血清 MDA 在损伤2h 后已极明显高于对照组(P<0.01),以后逐渐降低。维生素 E、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及二甲基亚砜均能显著降低损伤组织 MDA(P<0.01)和血清 MDA(P<0.05)。提示脊髓损伤后组织脂质过氧化反应增强,早期应用抗氧化剂,可作为减轻继发损害的一项有效治疗。     

大鼠脊髓再灌注损伤中三甲氧苄嗪的保护作用

目的　评价三甲氧苄嗪对大鼠脊髓再灌注损伤的保护作用 ,并探讨其作用机制。方法　 4 5只SD大鼠随机分为 3组 ,假手术组、对照组和三甲氧苄嗪组 ,每组 15只。建立大鼠脊髓缺血损伤模型 ,假手术组不阻断主动脉 ,对照组在肾动脉以下及髂动脉以上同时阻断主动脉 2 0min ,三甲氧苄嗪 (TMZ)组于主动脉阻断前 10min静脉内注射三甲氧苄嗪 (3mg/kg) ,余同对照组 ,2 0min后开放主动脉。分别于阻断主动脉前、松开主动脉前和松开主动脉后2h取静脉血测定丙二醛 (MDA)含量。术后 4 8h按Tarlov评分标准评价动物后肢神经功能 ,然后处死动物 ,取脊髓进行含水量、MDA含量测定及组织病理学检查。结果　TMZ组血中MDA含量明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;TMZ组动物后肢神经功能评分明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;TMZ组脊髓含水量、MDA含量明显低于对照组 (P <0 .0 1) ;TMZ组光镜下脊髓病理改变轻微 ,而对照组较重 ,两组病理评分有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　三甲氧苄嗪对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的：探讨胚胎脊髓（fetal spinal cord, FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响.方法：采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型.移植供体为同种异体妊娠14 d的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤＋FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组.术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score, CBS）评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5 cm作嗜银染色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况.结果：胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组优于C组,可以较好的恢复神经元形态.CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,统计学分析治疗组与对照组间有显著性差异.免疫组织化学检查,术后8周A、B组NF着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生.结论：脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和 bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用.     

防己黄芪汤加味治疗大鼠脊髓半横断损伤

目的：研究中药复方对急性脊髓半切损伤的治疗疗效及对脊髓组织病理改变及星型胶质细胞的影响,并探讨其作用机制。方法：65只大鼠随机取5只作为空白组,余60只大鼠脊髓损伤造模后随机分为损伤、中药和甲基强的松龙三组,各20只。损伤组造模后不用药,中药组造模后予中药治疗,甲基强的松龙组造模后予甲基强的松龙治疗。于术后24小时、1、2、3、4周观察三组大鼠脊髓运动功能恢复、光密度测定及脊髓组织学改变。结果：中药组及甲基强的松龙组脊髓运动功能及光密度评分与损伤组相比有统计学意义（P〈0.01）;中药组病变与损伤组相比,病损缩小、空泡面积减少。中药组与甲基强的松龙组后期脊髓运动功能评分无统计学差异（P〉0.05）。结论：中药组在改善脊髓微环境、保护神经组织免受损害、促进间质细胞生长上发挥其有益作用,抑制胶质细胞的过度增生,从功能和形态学上证实了中药治疗的有效性。     

β-七叶皂甙钠对大鼠脊髓损伤段钙、水含量的影响及其保护作用

目的探讨β-七叶皂甙钠（SA）对脊髓继发性损伤的保护作用。方法SD大鼠72只随机分4组，一组行切除椎板但不损伤脊髓，其他三组采用改良Alien法制备大鼠脊髓损伤（SCI）模型，术后立即分别腹腔注等体积的生理盐水、SA（5mg／kg）、甲基强的松龙（MP，100mg／kg）。于术后2、12、24h取SCI段标本，采用干湿法、原子吸收光谱法分别测定SCI段水、钙含最。结果SCI区组织水和钙含量均明显增高（P〈0．01）；应用SA后水和钙含量明显降低（P〈0．05），与MP组相比无明显差异（P〉0．05）。结论SA能明显降低SCI段脊髓水、钙含量，对SCI具有保护和治疗作用。     

实验性脊髓损伤后中枢性疼痛动物模型的建立

目的 建立脊髓损伤后中枢性疼痛的动物模型.方法 选用成年SD大鼠45只,分为正常组、脊髓损伤组、假手术组,每组15只.用自制Allen氏打击装置,以400 gcm(下落重物的质量与下落高度的乘积)的打击力度撞击L1节段脊髓造成大鼠脊髓损伤,分别在损伤前后T12节段记录刺激胫神经引起的体感诱发电位,假手术组大鼠仅打开椎板而不损伤脊髓.术后4、8、12、16、24 h及此后每天对大鼠的机械性痛敏压力阈值(paw withdrawl pressure threshold,PWPT)和热痛敏潜伏期(paw withdrawl latency,PWL)进行测量,同时观察大鼠自发痛的行为学变化,共观察3个月.结果 脊髓损伤组大鼠对机械刺激和热刺激均发生痛觉过敏,与正常组和假手术组比较,其PWPT和PWL均显著下降(P＜0.05),且出现自发痛现象;而假手术组PWPT、PWL与正常组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).结论 用Allen氏重物坠击法建立的脊髓损伤后中枢性疼痛动物模型具有较好重复性和临床相关性.     

大鼠脊髓损伤后一氧化氮合酶含量的变化及其意义

采用Allen′s打击法,以10g×2．5cm致伤大鼠T8脊髓,于伤后10min及1、2、4、8、24h取伤段脊髓,采用放射强度测定法测定一氧化氮合酶（NOS）含量。结果显示：脊髓损伤后可明显导致NOS含量的升高,与正常对照组相比较,NOS含量在10min、1、2、4、8h分别提高了198．11％（P＜0．01）、183．14％（P＜0．01）。结果表明,一氧化氮（NO）与脊髓继发性损伤有关,一氧化氮参与了脊髓的继发性损伤过程。对NO的作用规律进行了探讨。