香加皮杠柳苷对SW480细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制研究

背景与目的:研究香加皮杠柳苷(periploein extracted from cortex periplocae,CPP)对人结肠癌SW480细胞株在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制.材料与方法:将SW480细胞经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠,构建裸鼠SW480细胞荷瘤动物模型,观察CPP作用后移植瘤体积和重量的变化,HE染色光镜下观察移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学方法检测瘤组织内Wnt/β-catenin信号通路中核心成分β-catenin及其下游靶蛋白Survivin和C-myc表达的变化. 结果:CPP在体内能明显抑制SW480细胞荷瘤小鼠移植瘤的生长,其肿瘤体积和重量均被明显抑制,抑瘤率为61.4l%(P<0.01).CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化;肿瘤组织内β-catenin、Survivin和C-myc蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01).结论:CPP可抑制结肠癌细胞SW480在小鼠体内的增殖,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号分子的表达下调有关.     

香加皮杠柳苷对结肠癌细胞SW480体内外生长的影响

背景与目的： 观察香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae, CPP)对人结肠癌细胞SW480体内外生长的抑制作用。 材料与方法： 应用MTT法检测CPP不同浓度(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 μg/ml)处理SW480细胞后,对细胞增殖的影响;并于CPP (0.5 μg/ml)处理SW480细胞24 h 后用光学显微镜及透射电镜观察细胞凋亡形态学变化;免疫细胞化学检测细胞Survivin蛋白表达变化。采用裸鼠移植瘤模型进行体内移植瘤抑制实验。以上各实验均设立对照组。 结果： 与对照组比较,CPP对SW480细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量和时间依赖效应;CPP 处理SW480细胞后,细胞出现典型的细胞凋亡形态学改变;CPP可明显下调SW480细胞survivin蛋白表达阳性率和表达水平(P<0.01);以30 mg/kg CPP对SW480细胞裸鼠移植瘤进行治疗后,荷瘤小鼠的肿瘤重量和体积均被明显抑制,抑瘤率为61.41％(P<0.01)。CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化。 结论： CPP对人结肠癌细胞SW480的体内外生长均具有明显抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞survivin蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

香加皮杠柳苷通过溶酶体途径诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的 探讨香加皮杠柳苷（periplocin extracted from cortex periplocae, CPP）是否通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。方法 200、100、50 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24和48 h后,MTS 法检测细胞的增殖情况,用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测不同浓度香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后Caspase-3和Caspase-9的表达情况,吖啶橙染色检测溶酶体释放情况,免疫荧光法检测组织蛋白酶B（Cathepsin B）的表达变化情况。结果 与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24、48 h后,均具有增殖抑制作用,24 h增殖率分别为 [(66.43±1.67)%、(55.39±3.63)%、(37.06±0.57)% vs. (100.14±8.49)%,P均<0.05],48 h增殖率分别为[(38.16±3.26)%、(32.00±1.83)%、(24.75±1.57)% vs. (100.33±8.98)%,P均<0.05]。与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,凋亡率为[(28.56±6.96)%、(33.70±4.60)%、(60.42±4.48)% vs. (2.23±1.03)%,P均<0.05],Caspase-3的活性裂解片段和Caspase-9表达量升高,溶酶体膜的完整性被破坏,Cathepsin B由溶酶体释放到细胞质中。结论 香加皮杠柳苷可通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。     

那可丁通过下调钙黏素17 及Wnt3a/β -catenin 信号通路抑制结肠癌SW480 细胞迁移

[摘要] 目的: 探讨那可丁（Nos）对结肠癌SW480 细胞钙黏素17（CDH17）表达的影响及其对细胞迁移的作用机制。方法:选用SW480 细胞,分为对照组、空载组（si-EV）、CDH17 干扰组（si-CDH17）、Nos 处理组和CDH17 干扰+Nos 处理组（si-CDH17+Nos）,其中CDH17 干扰采用小干扰RNA（siRNA）敲低CDH17 水平,Nos 处理使用半数抑制质量浓度（55.30±2.21）μg/ml。用qPCR检测SW480 细胞CDH17 mRNA表达水平,用Hoechst33258 染色法和Transwell 实验检测细胞的凋亡和迁移能力,用ELISA检测细胞中VEGF、MMP2 和MMP9 含量,用WB检测细胞CDH17、Wnt3a 和β-catenin 蛋白表达水平。结果: 与对照组相比,Nos组、si-CDH17 组和si-CDH17+Nos 组的CDH17 mRNA及蛋白表达水平明显降低（均P<0.01）,细胞凋亡增加、迁移能力减弱,细胞中VEGF、MPP2 和MPP9 含量及Wnt3a 和β-catenin 蛋白表达水平显著降低（均P<0.01）,且si-CDH17+Nos 组比si-CDH17 组效果更显著（P<0.01）。结论: Nos 可诱导人结肠癌SW480 细胞凋亡、抑制其迁移能力,其机制可能与下调CDH17 表达抑制Wnt3a/β-catenin信号通路有关。     

香加皮杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:探讨中药香加皮醇提物杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制.方法:应用MTT法检测香加皮醇提物杠柳苷对食管癌细胞TE-13、Eca-109、TE-1和TE-10增殖的影响,并计算其对食管癌细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration ,IC50);在光学显微镜下观察经杠柳苷处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察Eca-109细胞凋亡的形态学变化;FCM检测杠柳苷对Eca-109细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测经杠柳苷处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;caspase-3/7蛋白酶活性检测试剂盒检测细胞caspase蛋白酶活性的变化.结果:香加皮醇提物杠柳苷对人食管癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;经杠柳苷处理后,Eca-109细胞出现明显的凋亡形态学变化,与未处理组比较,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);经杠柳苷处理后,Eca-109 细胞中survivin和bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),bax mRNA的表达水平升高(P<0.05),xiap、caspase-3和caspase-7 mRNA的表达水平无明显变化,而caspase-3/7蛋白酶活性明显增加(P<0.05).结论:杠柳苷可明显抑制食管癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调凋亡抑制基因的表达而诱导细胞凋亡.     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

吴茱萸碱抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡

目的 探讨吴茱萸碱对骨肉瘤MG-63细胞增殖与凋亡的影响及其机制.方法 吴茱萸碱作用于骨肉瘤MG-63细胞24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测吴茱萸碱对MG-63细胞的增殖抑制作用.流式细胞术检测吴茱萸碱对细胞周期、细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响.利用BALB/C小鼠建立骨肉瘤移植瘤模型,观察吴茱萸碱对骨肉瘤模型的生长影响.用Western blotting检测吴茱萸碱对Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达的影响.结果 随着吴茱萸碱浓度(0.25 μmol/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L、2.0μmol/L和4.0μmol/L)增加,MG-63细胞抑制率也明显增加[(4.18±1.26)％、(15.49 ±2.26)％、(40.55±6.57)％、(49.87 ±7.69)％和(60.42±8.29)％],2.0 μmol/L组与对照组(0)比较差异有统计学意义(t=-2.66,P＜0.05).2.0 μmol/L吴茱萸碱作用MG-63细胞24 h后凋亡率为(64.67±8.63)％、S期细胞比例为(85.33±9.31)％、钙离子荧光值为97.33±21.31,对照组凋亡率为(4.94±0.81)％、S期细胞比例为(43.67±8.92)％、钙离子荧光值为28.67±8.92,差异均有统计学意义(t=-11.90,P＜0.05;t=-7.22,P＜0.05;t=-6.65,P＜0.05).小鼠模型吴茱萸碱组肿瘤重量为(2.15 ±0.35)g,对照组肿瘤重量为(4.29±0.49)g,差异有统计学意义(t=7.95,P＜0.05).与对照组(1.00 ±0.00)比较,吴茱萸碱可降低β-catenin蛋白表达(0.72±0.36),升高Bax(1.15 ±0.27)、Caspase-3(1.46±0.18)蛋白表达,差异均有统计学意义(t=-3.05,P＜0.05;t=-6.42,P＜0.05;t=-5.85,P＜0.05).结论 吴茱萸碱可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖并诱导其凋亡.     

黄芩苷通过Notch通路对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄芩苷能否通过抑制人结肠癌SW480细胞中Notch通路的表达而抑制其增殖并促进其凋亡。方法:MTT法及流式检测术分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞生长抑制及凋亡的影响；Western Blot法及RT-PCR法分别检测不同浓度黄芩苷对人结肠癌SW480细胞Notch1、Hes-1蛋白和Jagged1基因表达的影响。结果:随着药物剂量的增大，黄芩苷对人结肠癌SW480细胞的抑制率逐步上升；黄芩苷20 μmol/L组细胞凋亡率显著高于对照组；黄芩苷40 μmol/L组细胞凋亡率显著高于黄芩苷20 μmol/L组；黄芩苷20 μmol/L组细胞Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于对照组，黄芩苷40 μmol/L组Notch1、Hes-1蛋白、Jagged1基因表达均显著低于黄芩苷20 μmol/L组。结论:黄芩苷能抑制人结肠癌SW480细胞的增殖，促进其凋亡，这种作用可能是通过对细胞中Notch通路的负性调节而实现的。     

Wnt/β-catenin信号通路与胰腺癌相关性的研究进展

Wnt信号通路是调节细胞增殖、分化及移型的经典通路之一.Wnt蛋白可与多种不同Wnt蛋白受体结合,激活细胞内不同的信号通路,研究证实Wnt/β-catenin信号通路与胰腺癌的发生发展密切相关.对Wnt/β-catenin信号通路在细胞周期、细胞凋亡、肿瘤干细胞及血管生成方面对胰腺癌发生发展的影响进行综述.     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。     

Wnt/β-catenin信号转导通路与脑胶质瘤

Wnt/β-catenin信号转导通路是一种在进化中高度保守的信号通路,它参与了胚胎生长、发育、能量代谢和干细胞维持等多种生物学过程的调控.Wnt/β-catenin通路的异常激活与肿瘤的发生密切相关.探讨Wnt/β-catenin信号转导通路与脑胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡和肿瘤新生血管形成的关系将为脑胶质瘤的治疗提供新的靶点与干预措施.     

沉默YAP通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌BGC823细胞的凋亡

目的 本研究探讨Yes相关蛋白（YAP）对胃癌BGC823细胞凋亡的影响。方法 BGC823细胞中转染YAP小干扰RNA（YAP siRNA1、YAP siRNA2）,用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别测定细胞中YAP表达,筛选干扰效果较好的YAP siRNA1做后续实验。MTT测定细胞增殖,平板克隆实验测定克隆形成能力,流式细胞术测定凋亡情况,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9活性,蛋白质印迹法检测β-catenin、c-myc、CyclinD1蛋白水平。用Wnt/β-catenin的激活剂处理下调YAP后的BGC823细胞,按照上述方法测定细胞增殖凋亡和克隆形成能力。结果 YAP siRNA1、YAP siRNA2下调BGC823细胞中YAP的转录和表达,YAP siRNA1对YAP表达的干扰效率较好。敲低YAP后的细胞增殖能力、克隆形成能力降低,细胞凋亡率由（6.32±0.58）%升高至（32.71±2.64）%,Caspase-3、Caspase-9活性升高,β-catenin、c-myc、cyclinD1蛋白表达减少,与正常培养的BGC823细胞相比,差异有统计学意义（P<0.05）。Wnt/β-catenin的激活剂处理可以部分逆转敲低YAP对BGC823细胞的凋亡、增殖、克隆形成能力和细胞中Caspase-3、Caspase-9活性的影响。结论 YAP敲低诱导胃癌细胞凋亡,且作用机制与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

Wnt/β-catenin信号通路在食管癌变中的作用

Wnt家族基因编码一组糖蛋白信号分子,这些分子激活的信号通路在人类不同肿瘤细胞中的作用相互交织,β-catenin是Wnt信号通路正向调节的重要效应分子,该分子在细胞质内降解的失调可于细胞核内累积激活一系列靶基因的转录,导致肿瘤发生.近来,Wnt信号通路及其关键组分β-catenin在食管癌形成过程中的作用越来越受到重视,阻断Wnt途径,在食管癌治疗中可能是一个新的靶点.     

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤耐药中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,并且诱导肿瘤的耐药,是介导组织癌变的关键通路.体外实验表明,靶向抑制Wnt/β-catenin能够增强化疗药物的敏感性.因此对Wnt/β-catenin介导肿瘤耐药的深入研究将为肿瘤的治疗提供可能途径和潜在靶点.     

Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育和细胞增殖、分化等生理过程中扮演着重要角色,同时它在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的肿瘤干细胞(cancerstemcell, CSCs)的维持、血管生成和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition, EMT)中起着至关重要的作用。有多项研究证实Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC中被显著激活,随着对Wnt/β-catenin信号通路的研究,靶向Wnt/β-catenin信号通路疗法在NSCLC的治疗中取得了显著成效。本文对Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC发生和发展中的作用以及治疗研究进行概述。     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用机制

目的探讨番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法体外培养SW480细胞,采用MTT比色实验、流式细胞术、RT-PCR和Westernblot方法,分析番茄红素对SW480细胞的生长增殖作用、对细胞凋亡率的影响及对细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。结果MTT法显示,番茄红素能显著抑制SW480细胞的生长增殖能力,且呈一定的量效与时效关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为1.0 μmol/L;流式细胞仪分析表明,番茄红素呈浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡;RT-PCR或Western blot分析表明,SW480细胞经不同浓度番茄红素诱导后,与溶媒组相比,Bcl-2表达逐渐减弱,而Bax,Caspase-9和Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2/Bax比值降低。结论番茄红素对SW480细胞的抑制增殖作用,可能与降低Bcl-2/Bax比值、增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展和转移

目的 :研究在卵巢癌发展转移进程中miRNA-15a的作用, 并探讨其作用机制。 方法 :收集锦州医科大学附属第一医院2012年5月至2015年6月32例卵巢癌患者的手术切除标本, 采用RT-PCR检测miRNA-15a表达。将培养的卵巢癌SKOV-3细胞分为转染miRNA-15a模拟物的实验组和转染无义miRNA的对照组, 采用CCK8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡的变化, 采用Western blot法检测相关蛋白表达。通过生物信息学方法预测miRNA-15a靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验结合Western blot法验证miRNA-15a对靶基因的调控。检测Wnt3a与miRNA-15a模拟物共转染SKOV-3细胞后对细胞增殖和侵袭的影响。 结果 :与癌旁组织中的miRNA-15a相对表达量0.692±0.228相比, 显著低于卵巢癌组织中的0.911±0.209, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组细胞增殖能力相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组细胞增殖能力, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组189.667±14.742相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组的细胞侵袭能力96.667±13.614, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a过表达实验组的细胞凋亡率27.400%±0.854%显著高于对照组细胞凋亡率6.933%±0.379%, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a模拟物下调Wnt3a和β-catenin的表达, 抑制细胞周期蛋白(Cyclin D1)和血管内皮生长因子(vascu-lar endothelial growth factor, VEGF)的表达, 促进E-钙离子依赖的细胞黏附素(E-calcium-dependent adhesion, E-cad)的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miRNA-15a靶向抑制Wnt3a表达。上调Wnt3a能显著降低miRNA-15a对卵巢癌细胞增殖、侵袭和对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论:miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路的激活以抑制卵巢癌的发展和转移。