多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料的组织相容性研究

[目的]评价多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)的组织相容性。[方法]采用标准的毒理学方法进行溶血实验、全身急性毒性实验、致癌实验和皮下植入实验验证多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)的组织相容性。[结果]溶血实验测得溶血指数为2.617%,符合生物材料的国家标准(<5%);全身急性毒性实验:各组裸鼠活动正常,体重正常增长,未见中毒表现或不良反应,72 h内PLL-DBM材料浸提液组与生理盐水组裸鼠体重增长无明显差异(P>0.05),且4周内裸鼠无死亡;致癌实验显示实验组裸鼠正常存活,8个月内未见肿块形成,心、肝、脑、肺、肾、胰、脾组织学观察未见肿瘤细胞;皮下植入实验显示实验动物伤口未见感染、红肿及裂开等不良反应,置入材料无排异现象,取材时见材料周围肌肉颜色及质地正常。[结论]多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)具有良好的组织相容性。     

新型脱细胞骨基质-壳聚糖复合支架的生物相容性研究

[目的]评价新型脱细胞骨基质-壳聚糖(ABECM/CS)骨组织工程复合多孔支架的生物相容性和安全性,为临床应用提供实验依据.[方法]采用联合脱细胞方法对猪股骨进行处理后制备脱细胞骨基质/壳聚糖骨组织工程复合支架.分离、培养兔骨髓间充质干细胞传代后进行实验.采用MTT法观察材料浸提液于1、3、5、7d时进行细胞毒性实验观察细胞的活性;将材料浸提液与稀释血混合离心后观察红细胞溶血情况,检测OD值计算相对溶血率;将材料浸提液经静脉注入兔体内进行热原实验,在规定时间内观察兔体温变化.[结果]细胞毒性实验显示,培养1、3、5、7d后各时间段内三组OD值两两比较(P＞0.05)无显著差异,表明材料无毒性.在溶血实验中观察实验材料的溶血率为3.0％,在标准值溶血率5％范围内,提示无溶血现象发生.热原实验结果显示每只兔体温升高均低于0.6℃,且3只兔体温升高总度数低于1.4℃,符合热原检测规定,复合材料无致热作用.[结论]经联合脱细胞处理制备的ABECM/CS复合支架无细胞毒性、无溶血反应、无热原性,具有良好的生物相容性和安全性,可作为构建组织工程骨的支架载体材料.     

纳米脱钙骨基质的制备及其性能检测

[目的]通过MICROS超细粉碎机制备同种异体纳米脱钙骨基质(DBM),观察纳米DBM结构特征,研究DBM纳米化工艺及其作为骨移植替代物的生物相容性.[方法]采用改良Urist法制备同种异体脱钙骨基质,液氮冷冻球磨机将块状DBM预粉碎,使用MICROS超细粉碎机进一步研磨粉碎制备纳米DBM.电镜扫描观察其结构,按照我国卫生部<生物材料和医疗器材生物学评价的技术要求>中的标准,对纳米DBM进行急性毒性实验、热原实验、溶血实验等检测.[结果]制备颗粒直径在50～200纳米的脱钙骨基质,生物相容性检测无毒性,无热源性,不引起溶血反应,纳米DBM具有良好的生物相容性.[结论]纳米DBM可在低温或控制温度条件下制备,是一种无毒、无刺激,不含热源、不引起免疫排斥反应的生物材料,具有良好生物相容性.     

表面脱钙骨基质明胶修复大块骨缺损的实验与临床研究

目的 探讨表面脱钙骨基质明胶修复大块骨缺损的疗效及相关问题。方法 将32只成年家兔随机分成A、B两组，双侧桡骨制成1cm骨缺损，分别植入表面脱钙骨基质明胶(SDBMG)、全脱钙骨基质明胶(VDBMG)及SDBMG、自体骨，术后定期进行X线、组织学检查(A组)及生物力学测定(B组)；临床采用人SDBMG治疗大块骨缺损31例，术后定期进行X线检查。结果 SDBMG呈由表及里的“渐进”诱导成骨过程；SDBMG的骨修复作用与自体骨相近，SDBMG侧抗压强度与自体骨侧的差异无显著性意义；临床随访示除1例因适应症选择不当而失败外，其它30例均治愈。结论 SDBMG具有良好的成骨作用和可靠的力学性能，可作为自体骨理想的替代材料修复大块骨缺损，但对活动期感染性骨缺损宜慎用。     

应用脱钙骨基质和硫酸钙颗粒治疗骨缺损的初期结果

目的探讨使用骨移植替代物脱钙骨基质（DBM）和硫酸钙颗粒（OSTEOSET）治疗骨缺损的疗效。方法对同期手术治疗的52例骨缺损患者的缺损处,分别于术后第1、4、8周及3、6、12个月进行随访并摄X线片直至骨缺损愈合。统计分析患者的临床资料、X线片辅助分析骨缺损修复程度和并发症。结果随访8-12个月,植骨术后6、12个月分别有95%和99%患者的骨缺损显示有明显的新骨形成,修复水平为60%-100%。并发症为3例（5.77%）,经换药后治愈,未发生骨缺损不愈合。结论DBM和OSTEOSET在骨愈合早期可加速骨缺损的修复,并可作为新鲜自体髂骨的替代物。     

成型脱钙骨基质移植重建完全半月板缺损的实验研究

[目的]探索成型脱钙骨基质作为完全半月板缺损后替代假体的可行性，并进行移植假体引导自体组织再生效果的评价。[方法]脱钙骨基质按照Urist方法制备，并依据半月板的形状预制成型。48只新西兰大白兔随机分为脱钙骨基质移植组和脱细胞同种异体移植（冻融处理）对照组，并将两组按照三个不同时期分为3个配伍组。将各组动物分作关节功能评价，大体观察，组织学和免疫学观察；并进行统计分析。[结果]脱钙骨基质组回缩较小，细胞组织的增殖活性更高；两组总体和各期在移植体回缩率，免疫组织化学检查均有统计学意义。[结论]成型脱钙骨基质作为半月板假体较脱细胞同种异体半月板具有更好的性能结构和增殖活性。     

脱钙皮质骨基质的拉伸力学性能研究

目的探讨脱钙皮质骨基质厚度与拉伸力学性能的关系,为将其作为组织工程支架材料奠定实验基础。方法取市售新鲜小牛胫骨,常规快速脱钙制备脱钙皮质骨基质,大体观察其颜色、质地等物理性状,并进行脱钙检测。将脱钙皮质骨基质沿径向纵切成不同厚度的片材,并根据厚度分为4组(n=16),分别为A组100～300μm,B组300～500μm,C组500～700μm,D组700～1 000μm;对每组标本进行拉伸性能和组织学观测。结果大体观察显示脱钙皮质骨基质经H2O2处理后呈乳白色,柔韧性好,富有弹性。脱钙皮质骨基质的脱钙率达97.6%。A组强度及弹性模量明显小于B、C、D组(P<0.05),B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);脱钙皮质骨基质刚度随厚度增加呈逐渐增大趋势,A组刚度显著低于B、C、D组(P<0.05),B、C组低于D组(P<0.05),B、C组间差异无统计学意义(P>0.05);各组极限应变差异均无统计学意义(P>0.05)。组织学观察各组均可见典型骨单位结构,其最大直径范围为102～325μm,平均最大直径为182μm。结论骨单位的完整性对脱钙皮质骨基质的力学性能有重要影响;脱钙皮质骨基质作为组织工程支架材料,在厚度>300μm时可保持其拉伸力学性能。     

异体冻干脱钙骨基质隆鼻的实验研究及临床应用初步报告

为了研究异体冻干脱钙骨基质在隆鼻术中的应用效果，作者利用正常新鲜四肢骨干皮质骨经脱脂、脱钙、清毒、冷冻干燥等过程，制备成冻干脱钙骨基质。动物实验中观察到将该种材料植于骨膜下和皮下时均有成骨现象，且植于骨膜下的成骨量优于皮下。临床上利用冻干脱钙骨基质进行隆鼻术，将该材料植于鼻骨表面，对１５例受术者中的８例进行了５～１８个月的随访，取得了较满意的效果。作者认为冻干脱钙骨基质有良好的诱导成骨作用，同时该材料易于雕刻修整，不发生排斥反应，能够长期保存，因此作为隆鼻衬垫材料具有可行性     

表面脱钙骨基质明胶修复节段性骨缺损的实验力学研究

将表面脱钙骨基质的胶（ＳＤＢＭＧ）和自体骨植入家兔桡骨１０ｍｍ节段性骨缺损，经Ｘ光片和生物力学测试，结果发现，ＳＤＢＭＧ与自体骨具有相似的骨修复作用；随着时间的推移，ＳＤＢＭＧ侧抗压强度逐渐增加，且与自体骨侧抗压强度的差异无显著性意义（Ｐ〉０．０５）。这表明，ＳＤＢＭＧ不仅具有良好的骨修复能力，而且具有可靠的机械强度，在节段性骨缺损的治疗中，可作为自体骨理想的替代材料。     

同种异体骨基质明胶在椎体间融合术中的实验研究

目的 通过同种异体骨基质明胶（ＢＭＧ）在腰椎间诱导成骨的实验结果,证明同种ＢＭＧ能够在椎间诱导成骨,达到椎间融合的目的。方法 以兔腰椎间盘摘除后的椎间隙作为动物模型,分别植入明胶海绵、同种ＢＭＧ、脱钙骨基质和酒精保存骨。植入后４、８及１２周进行Ｘ线摄片和组织学检查。结果 同种ＢＭＧ无明显免疫排斥反应,并且具有良好的骨诱导作用,术后４及８周有大量新骨出现于椎间隙中央部,术后１２周椎间完全融合。结论：     

通过注射脱钙骨和自体骨髓治疗动脉瘤样骨囊肿

背景：在假设动脉瘤样骨囊肿通过内部骨化存在自愈潜能的基础上，发展出一种新的、微创的治疗动脉瘤样骨囊肿方法。即用脱矿物质骨粉混合自体骨髓注入骨囊肿内，从而使病变停止进展，并自行骨化。我们提出假设，即为了诱导骨质愈合。骨囊肿细胞只需要对诱导材料的作用产生反应，而囊肿刮除术或扩大的外科手术是不必要的。此项研究的目的在于评估这种新方法对于骨囊肿的治愈情况，及其治疗本病的复发率的因素。方法：对13例经活检确诊为动脉瘤样骨囊肿的患者，经小切口向病灶内注入脱矿物质骨和自体骨髓混合骨泥。研究组中男3例，女10例，平均年龄16．6岁。病灶部位位于长骨者6例，骨盆5例，位于肩关节盂和跟骨者各1例。其中5例患者既往未经任何治疗，1例经术前栓塞，其余7例患者为治疗后复发者。结果：经过平均3．9年的随访，其中11例患者获得治愈。结论：该微创方法能够促进原发性动脉瘤样骨囊肿自愈。采用该治疗方法不再需要进行刮除术。能够避免过大的外科手术及失血，并且对于位于类似骨盆这样不容易暴露部位的病灶，可以使操作更为便捷。     

同种骨基质明胶加石膏修复骨缺损的实验研究

目的研究骨基质明胶加石膏复合物在骨缺损修复过程中的作用。方法新西兰兔１６只,桡骨干缺损为植骨区,实验组植入骨基质明胶加石膏复合物（１６侧）,对照组分别植入骨基质明胶（８侧）和酒精储存骨（８侧）,观察骨缺损的修复情况。结果实验组成骨活跃,１２周时骨缺损已基本修复。对照组也有成骨现象,但进展不如实验组。结论骨基质明胶加石膏复合物为一种良好的骨移植材料。     

WO-1生物衍生组织工程骨支架材料的制备及性能研究

目的制备WO-1胶原生物衍生骨复合支架材料,检测其理化性质及力学强度,为骨组织工程研究和应用提供可选择的支架材料。方法将同种异体骨、I型胶原、WO-1进行系列理化处理,制成单纯生物衍生骨材料、胶原生物衍生骨复合材料及WO-1胶原生物衍生骨复合材料。制备后的材料行大体及扫描电镜观察其形貌特征,X线衍射分析材料成分,并对材料的力学性能进行分析测定。结果单纯生物衍生骨材料具有天然骨的网状孔隙系统;胶原生物衍生骨复合材料具有天然骨的网状孔隙系统,微孔表面覆盖胶原膜;WO-1胶原生物衍生组织工程骨复合支架材料具有骨组织的天然网状孔隙系统,微孔表面可见胶原膜覆盖。3种材料的孔径依次为90～700μm、75～600μm、80～600μm;孔隙率依次为87.96%、80.47%、84.29%,差异无统计学意义(P>0.05);其主要成分为羟基磷灰石,弯曲强度和压缩强度无统计学意义(P>0.05)。结论WO-1胶原生物衍生骨复合材料与其它两种材料相同,可作为一种有效的天然组织工程骨支架材料。     

复合类新型骨基质材料生物相容性研究

目的 评价一种新型无机—有机复合类骨基质材料(NBM)的生物相容性。方法 应用组织培养技术对NBM体外复合兔成骨细胞培养1—14天，然后进行形态学观察、细胞增殖、细胞蛋白含量与碱性磷酸团(ALP)活性测定；对NBM采用同种兔体内植入观察2、4和8周，通过倒置显微镜、扫描电镜及组织学观察其体内成骨情况。结果 体外培养时NBM对成骨细胞的体外增殖和ALP的表达无明显抑制作用，成骨细胞与材料可良好黏附、增殖，并分泌大量细胞外基质成分；而细胞—材料复合体肌内植入后4周可见大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润，8周仍未见新生骨组织生成。结论 NBM材料的体内外生物相容性差异可能与NBM免疫原性有关，体内植入后引起宿主免疫反应，影响体内成骨。无机—有机复合材料引起的移植免疫排斥反应应引起组织工程研究的注意。     

低温保存的组织工程骨修复骨缺损的实验研究

目的探讨低温保存的组织工程骨修复骨缺损的能力及低温保存的可行性。方法将人源性生物衍生骨材料复合成骨细胞构建的组织工程骨,在4℃和-196℃的温度环境中保存3个月和6个月,同时以未行低温保存的组织工程骨和生物衍生骨材料作为对照,分别修复实验兔桡骨的长段骨缺损。80只成年日本大耳白兔,随机分为4个实验组(左前肢植入材料):A3组:组织工程骨在4℃保存3个月;A6组:组织工程骨在4℃保存6个月;B3组:组织工程骨在-196℃保存3个月;B6组:组织工程骨在-196℃保存6个月。2个对照组(右前肢植入材料):C组:组织工程骨未行低温保存;D组:单纯生物衍生骨材料。于术后2、4、6和12周行大体和组织学观察,并于6周和12周行X线片检查和生物力学检测。结果术后大体观察,A3、A6、B3、B6和C组间无显著差异,D组骨痂少且断端更为明显。各时间点组织学观察,A3、A6、B3、B6和C组植入材料周围胶原及骨痂均较D组明显,术后12周组织学评分,D组与其它各组比较P值<0.05。X线片示D组植入材料皮质骨无明显变化,骨痂较少;余各组12周植入材料与自体骨融合,髓腔开通,骨折线消失,塑形好。生物力学检测D组与其它各组比较P值<0.05。结论以4℃和-196℃保存方法能有效保存组织工程骨,对修复骨缺损有明显效果,这一方法适宜推广应用。     

成骨细胞与生物衍生材料联合培养的实验研究

目的：探讨冻干脱钙骨基质（FDBM）作为组织工程骨支架的可行性。方法：取兔颅骨外膜的成骨细胞，经传代培养后作为种子细胞与FDBM于体外联合培养，通过对复合物相差显微镜、光镜及扫描电镜等观察，了解细胞在材料中的生长情况。结果：经系统处理后的FDBM呈现不规则的网－孔结构，其孔隙直径为100－400μm ,孔隙率为70％。体外复合培养8小时，成骨细胞即开始贴附于FDBM网架上；复合培养7天，分布于支架材料上的成骨细胞迅速分化增殖，分泌细胞外基质并形成钙结节。结论：FDBM可作为构建组织工程骨的一种较好支架材料。     

骨髓基质细胞与生物活性玻璃陶瓷和聚乳酸生物相容性的实验研究

目的 探讨骨髓基质细胞与生物活性玻璃陶瓷（ＢＧＣ）和聚乳酸（ＰＬＡ）的生物相容性,为骨组织工程中生物材料的选择提供依据。方法 将骨髓基质细胞与ＢＧＣ、ＰＬＡ复合体培养,进行形态学观察、细胞增殖、蛋白质含量及酶学测定。结果 骨髓基质细胞能在ＢＧＣ、ＰＬＡ上贴附、繁殖,其生长及功能不受影响,并且ＢＧＣ具有一定的促细胞增殖作用。结论 ＢＧＣ、ＰＬＡ具有良好的细胞相容性,有可能作为骨髓基质细胞的载体应用于     

自体骨髓促进引导性骨再生

目的　研究自体骨髓增强引导性骨再生 (GBR)修复骨缺损的能力。方法　 18只兔分为 5组 ,每组 3只 (第 5组 6只 ) ,造成双桡骨干 10 mm骨缺损 ,以硅胶管桥接骨断端 ,实验组于 0、2和 4周分别在硅胶管内注射自体骨髓 0 .3ml;对照组于相同时间点注射等量外周静脉血。在不同时间内作 X线片、大体、组织学观察及生化检测。结果　实验组成骨活跃 ,10周骨缺损完全修复 ,对照组各时间点均较实验组差 ,10周时仍无 1只兔骨性愈合。术后 2、4周实验组钙及碱性磷酸酶含量明显高于对照组。结论　自体骨髓可明显增强 GBR修复骨缺损的能力     

异体脱钙骨基质明胶骨粒/骨水泥复合材料的生物力学性能研究

目的　研究不同质量比的部分脱钙骨基质明胶骨粒 /骨水泥复合材料的结构特征及生物力学性能 ,初步分析与复合比例的关系 ,为临床应用提供依据。方法　按 Urist等的方法制备异体部分脱钙骨基质明胶骨粒 ,再与骨水泥按不同比例混和制成含骨粒质量比分别为 0、4 0 0、5 0 0及 6 0 0 m g/ g的部分脱钙骨基质明胶骨粒 /骨水泥复合材料 ,对其进行扫描电镜观察和抗压极限强度、抗弯极限强度测定。结果　不同复合比例材料中骨粒与骨水泥均匀混合分布 ,呈多点面状接触 ,无序排列 ,其中骨水泥相互延续构成材料的骨架 ,不同大小的骨粒分布其间 ;材料间存在较多 10 0～ 4 0 0 μm不规则相互连通的自然裂隙 ,随材料中骨粒所占比例增加 ,骨水泥含量减少 ,自然裂隙增多。含部分脱钙骨基质明胶骨粒质量比为 0、4 0 0、5 0 0及 6 0 0 mg/ g的复合材料的抗压极限强度分别为 (71.1± 2 .0 ) MPa,(46 .9± 3.3) MPa,(39.8± 4 .1) MPa和 (32 .2± 3.4 ) MPa;抗弯极限强度分别为 (6 5 .0± 3.4 )MPa,(38.2± 4 .0 ) MPa,(33.1± 4 .3) MPa和 (2 5 .3± 4 .6 ) MPa。结论　部分脱钙骨基质明胶骨粒 /骨水泥复合材料具有良好的生物力学性能 ,且制备简便 ,易于塑形 ,其中以 10 0～ 4 0 0 μm自然裂隙有利于宿主骨的长入 ,是很好的