川芎嗪对缺氧缺糖状态下培养的血管内皮细胞ECV-304的影响

目的 :观察缺氧缺糖条件下血管内皮细胞 (ECV-30 4 )释放乳酸脱氢酶 (LDH)、一氧化氮 (NO)、丙二醛(MDA)水平和细胞膜流动性的变化及川芎嗪对它们的影响。方法 :缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 ,自动生化分析仪测定培养液和细胞层中LDH活性 ;用比色法测定细胞培养液中NO水平 ;用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物MDA以评价脂质过氧化程度 ;荧光偏振法测定内皮细胞膜流动性。结果 :缺氧缺糖引起的血管内皮细胞LDH释放增加、MDA生成增多和膜流动性增高 ,NO水平降低。而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞释放LDH ,MDA生成和降低细胞膜流动性 ,提高NO水平。结论 :川芎嗪可保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞的损伤 ,其作用机制有待进一步研究。     

丹参酮ⅡA对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用

目的:研究丹参酮ⅡA对过氧化氢(H2O2)损伤人脐静脉血管内皮细胞株(CRL-1730)的保护作用。方法:H2O2诱导人血管内皮细胞损伤,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)的活性,并对细胞进行流式细胞仪测定,观察丹参酮ⅡA对细胞周期的影响。结果:丹参酮ⅡA对H2O2损伤的CRL-1730具有保护作用,它能抑制H2O2引起的血管内皮细胞减少,其作用主要是使S期和G2M期细胞比率剂量依赖性增加,G0/G1期细胞比率剂量依赖性减少,还能抑制过氧化氢损伤的CRL-1730释放MDA和LDH。结论:丹参酮ⅡA具有减轻H2O2损伤,保护血管内皮细胞的作用。     

川芎嗪对缺氧缺糖培养心肌细胞蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的：观察川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法：本实验利用心肌细胞缺氧缺糖损伤模型，采用同位素掺入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析方法，观察川芎嗪注射液对心肌细胞缺氧缺糖时蛋白质、ＲＮＡ合成及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果：川芎嗪注射液可提高培养心肌细胞缺氧缺糖时３Ｈ亮氨酸（Ｌｅｕ）和３Ｈ尿嘧啶核苷（ＵＲ）的掺入率，促进蛋白质、ＲＮＡ合成，诱导ＮＯＳｍＲＮＡ在缺氧缺糖心肌细胞的表达。结论：川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤有较好的保护作用     

川芎嗪对缺氧缺糖培养心肌细胞蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶基因表达的影响

 目的：观察川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法：本实验利用心肌细胞缺氧缺糖损伤模型，采用同位素掺入、Northern杂交分析方法，观察川芎嗪注射液对心肌细胞缺氧缺糖时蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶(NOS)mRNA表达的影响。结果：川芎嗪注射液可提高培养心肌细胞缺氧缺糖时³H-亮氨酸(Leu)和³H-尿嘧啶核苷(UR)的掺入率，促进蛋白质、RNA合成，诱导NOS mRNA在缺氧缺糖心肌细胞的表达。结论：川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤有较好的保护作用。     

川芎嗪诱导血管内皮细胞的凋亡及对VEGF表达的影响

目的：研究川芎嗪对血管内皮细胞生长的影响及分子机制。方法：不同浓度的川芎嗪作用体外人体脐静脉内皮细胞，MTT法检查血管内皮细胞的生长、细胞周期检查其凋亡和Western blot检测VEGF的表达。结果：不同浓度的川芎嗪作用VEC-30424h后，可显著抑制VEC-304的生长；诱导细胞发生凋亡，凋亡单20．97—81．83％，与对照组比较P〈0．01。Westorn blot结果提示川芎嗪能使血管内皮细胞的VEGF的表达下调。结论：川芎嗪抑制血管内皮细胞生长并诱导其凋亡及VEGF表达下调是川芎嗪抗肿瘤的机制之一。     

川芎嗪对1,3-丁二烯致PC12细胞损伤的保护作用

目的：研究川芎嗪对由1,3-丁二烯损伤的PC12细胞生物学特性的影响。方法：用MTT法测定川芎嗪对损伤后PC12细胞活力的影响;流式细胞仪检测川芎嗪对损伤后PC12细胞凋亡和增殖的影响。结果：20、30、50μg/ml川芎嗪均能够提高1,3-丁二烯损伤的细胞活力,能使凋亡细胞比例减少,S和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少,其中30μg/ml浓度的川芎嗪作用最强（F=88.14,P〈0.01）;90μg/ml川芎嗪无明显作用。结论：川芎嗪能抑制由1,3-丁二烯引起的PC12细胞损伤,促进PC12增殖。     

舒心方对缺氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：探讨对舒心方缺氧环境下人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响。方法：建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期。结果：舒心方能够明显促进缺氧环境下内皮细胞的增殖,增加细胞周期中S期细胞的数目。结论：舒心方对缺氧环境下内皮细胞增殖和DNA合成有促进作用,提示舒心方在缺血心肌新生血管生成过程中可能具有一定作用。     

罗布麻总黄酮对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨罗布麻总黄酮对过氧化氢（H2O2）所致的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法：采用MTT法观察不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测不同浓度罗布麻总黄酮对HUVEC细胞周期变化的影响,采用比色法分别检测细胞培养液NO和SOD的活性、MDA和LDH的含量,免疫组化法测定NF-κB的表达。结果：正常细胞组比,200μmol．L—H2O2模型组细胞增殖活性下降,细胞凋亡率明显增加,G0／G1期细胞比率增加,S期细胞和G2／M期细胞比率明显降低,培养上清液中NO和SOD活性明显下降,MDA和LDH的释放量明显增加,NF—κB的表达时明显增加（P〈0．01）。不同浓度的罗布麻总黄酮作用后,与模型组比较,可明显提高细胞增殖活性,降低细胞凋亡率,降低G0／G1期细胞比率,增加S期细胞和G2／M期细胞比率;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低MDA和LDH的释放,可抑制H2O2引起的NF-κB的过度表达。其中,中、高剂量组有显著性差异。结论：罗布庥总黄酮对H2O2引起HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化作用及调节有关NF—κB的表达有关。     

流式细胞仪检测缺氧/缺血神经细胞凋亡的研究

目的：研究人神经母细胞瘤细胞株(SII—SY5Y)缺氧／缺血后凋亡细胞的百分率及细胞周期的变化。方法：用流式细胞检测技术,用培养的连续细胞系细胞株,建立缺氧／缺血诱导的神经细胞凋亡模型,观察随缺氧程度的加重,凋亡细胞百分率的变化。结果：细胞缺氧／缺血培养8h可诱导细胞凋亡。流式细胞仪检测结果显示：在G1峰前出现一个G1亚峰,为凋亡峰(Ap峰),随缺氧程度的加重,其凋亡比率递增。细胞周期分析则显示S及G2期逐渐下降,与凋亡的百分率呈负相关。结论：缺氧／缺血损伤可致培养的神经细胞凋亡,凋亡比率与缺氧程度呈正相关。缺氧缺血损伤可引起细胞周期的变化,G1亚峰峰值与S、G2期的峰值呈负相关。提示：缺氧／缺血损伤引起细胞凋亡过程中,细胞增殖及分裂处于抑制状态;凋亡是神经细胞缺氧／缺血损伤的重要死亡形式。     

含中药血清对血管内皮细胞生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：探讨含中药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。方法：通过在4代人脐静脉内皮细胞的培养液中加入血管内皮细胞生长因子和含中药血清，应用流式细胞仪分析其细胞周期，结果。含中药血清可以降低细胞周期中S期细胞的数目，抑制细胞的DNA合成，尤以高剂量含中药血清作用明显，结论：含高剂量中药的大鼠血清有抑制血管内皮细胞生长因子诱导内皮细胞增殖的作用。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

川芎嗪对缺氧状态下视网膜血管舒缩因子表达影响的实验研究

目的:体外培养牛视网膜血管内皮细胞,观察不同浓度川芎嗪组对缺氧状态下细胞增殖及其舒缩因子表达的影响。方法:选取第6代牛视网膜血管内皮细胞进行培养。将正常培育的细胞加入100 μmol/L的CoCl₂诱导缺氧12 h后,将细胞随机分为三组。缺氧对照组(不含药物、无生长因子及血清的培养液组)、含川芎嗪0.02 μg/ml培养液组、含川芎嗪0.2 μg/ml培养液组。培养24 h后用MTT比色法检测各组视网膜内皮细胞的吸光度值,观察川芎嗪对血管内皮细胞的增殖情况。Western blot法检测各组细胞eNOS及ET-1的表达。结果:川芎嗪0.02 μg/ml组、0.2 μg/ml组的吸光度值明显高于缺氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并且随浓度的增高吸光度值也增高 0.02 μg/ml组与0.2 μg/ml组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。与缺氧对照组比较,川芎嗪各组eNOS蛋白表达升高(P<0.01),且药物浓度与蛋白表达呈正相关 川芎嗪各组ET-1的蛋白表达均降低(P<0.01),但药物组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:川芎嗪能保护在缺氧环境下受损的视网膜血管内皮细胞,对细胞增殖有一定的促进作用,通过上调eNOS表达,下调ET-1表达,调节其分泌功能和血管舒缩功能,从而维持血管外周阻力和局部舒缩状态。     

低氧条件下四逆汤及组方药提取物对大鼠血管内皮细胞释放PGI2,TXA2和NO的影响

目的 :观察四逆汤提取物 (DRE)及其组方药提取物对低氧条件下大鼠血管内皮细胞释放血栓素A₂(TXA₂ )、前列环素 (PGI₂ )和一氧化氮 (NO)的影响。方法 :低氧处理的大鼠血管内皮细胞经四逆汤及其组方药提取物作用后 ,取条件培养液 ,采用放射免疫法及Griess反应测定培养液中的PGI₂ ,TXA₂ 和NO的代谢产物 6 酮 前列腺素F_1α(6-keto-PGF_1α) ,血栓素B₂ (TXB₂ )及亚硝酸盐 (NO₂ -)含量。结果 :与对照组比较 ,DRE、甘草提取物 (LE)、干姜提取物 (GE)、附子提取物 (AE)、甘草加附子提取物 (ALE)、干姜加附子提取物 (AGE)可以显著增加低氧处理的大鼠血管内皮细胞培养液中 6-keto-PGF_1α的含量及 6-keto-PGF_1α/TXB₂ 的比值 ,但对TXB₂ 的含量没有显著影响。DRE组对 6-keto-PGF_1α含量的影响显著高于LE ,GE ,AE ,ALE ,AGE组。DRE组对 6-keto-PGF_1α/TXB₂ 比值的影响显著高于GE ,AE ,ALE组。与对照组比较 ,DRE ,LE ,GE ,AE ,AGE ,ALE组显著提高血管内皮细胞培养液中NO₂^-的含量。DRE的药理作用显著高于GE ,AE ,ALE组。结论 :四逆汤提取物增加低氧处理的大鼠血管内皮细胞培养液中NO ,PGI₂含量及PGI₂ /TXA₂ 的比值。四逆汤提取物的药理作用强于组方药提取物。     

糖痹康对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察糖痹康大鼠含药血清对高糖造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:以CCK-8法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响;根据实验结果选择葡萄糖浓度为5.55mmol/L组为正常组,葡萄糖浓度为25mmol/L组做为模型组。然后制备正常组,弥可保组,糖痹康组的大鼠含药血清,将含药血清作用于高糖损伤的人脐静脉内皮细胞,分为正常组、高糖模型组、高糖弥可保组、高糖糖痹康低、中、高剂量组,并通过测定培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力,探讨糖痹康对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果:与高糖模型组比较,糖痹康含药血清能减少细胞MDA、LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论:糖痹康对高糖损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用,间接的起到对周围神经的保护作用。     

氯化钙拮抗马兜铃酸肾毒性的体外观察

目的:研究分泌性磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2)激活剂氯化钙能否减轻马兜铃酸(aristolochic acid AA)对人肾小管细胞(human kidney cell HKC)的损伤。方法:以体外培养的HKC为研究对象,观察CaCl2对AA肾毒性的影响。检测指标包括MTT490nm处OD值和流式细胞议测定的细胞周期。实验分为正常对照组、单用AA组和合用AA和CaCl2组,结果:(1)AA表现出剂量相关和时间相关的肾毒性。40mg/L AA组细胞490nm处OD值明显下降,联用600μmol/L CaCl2,490nm处OD值有所上升(0.631±0.123 vs 0.492±0.076,P0.05)。(2)AA可将HKC阻滞在S期和G2/M期。联用600μmol/L CaCl2,促进S期细胞进入G2/M期,逆转S期阻滞。结论:CaCl2可在一定程度上减轻马兜铃酸肾毒性,逆转细胞的增殖受抑状况。     

盐酸川芎嗪对同型半胱氨酸致ECV304 细胞损伤的保护作用

目的:研究盐酸川芎嗪对同型半胱氨酸损伤的ECV304细胞的保护作用。方法:选择人脐静脉内皮细胞ECV304作为体外研究对象,同型半胱氨酸作为造模剂,监测NOS和NO含量的变化判断其损伤程度。确定同型半胱氨酸损伤ECV304细胞时最佳浓度,最佳作用时间,建立内皮细胞损伤模型。在此基础上检测盐酸川芎嗪作用损伤内皮细胞NO和NOS含量,研究其对内皮细胞的保护作用。结果:同型半胱氨酸损伤ECV304细胞的最适浓度为1 mmol.L-1,最佳作用时间为48h,建立内皮细胞损伤模型。阳性药物硝酸甘油和盐酸川芎嗪对ECV304细胞的损伤具有保护作用,NOS和NO生成量与模型组相比显著升高。结论:盐酸川芎嗪具有ECV304细胞保护作用,本实验所建模型可用于筛选以内皮细胞保护剂为靶点的抗心肌缺血药物。     

Protective effect of 5-hydroxymethylfurfural derived from processed Fructus Corni on human hepatocyte LO2 injured by hydrogen peroxide and its mechanism

Aim of the study

The aim of the present study was to evaluate the putative protective effect of 5-hydroxymethylfurfural (5-HMF) derived from processed Fructus Corni on human hepatocyte cell line (LO2) injured by hydrogen peroxide in vitro and the mechanism of its protection.

Materials and methods

The percentage of cell viability was evaluated by 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay. The hepatocyte cell apoptosis and cell cycle were detected by flow cytometric analysis. The content of nitric oxide and caspase-3 activity were quantified spectrophotometrically by enzyme-linked immunoassay.

Result

The study showed that incubation with 5-HMF caused significant increase in the viability of LO2 cell, decrease of cell apoptosis and recovery of cell cycle in LO2 cell injured by hydrogen peroxide, which was accompanied with the decreased nitric oxide level and caspase-3 activity.

Conclusions

Our data suggest that 5-HMF protects LO2 cell against damage induced by hydrogen peroxide through inhibiting effect of cell apoptosis caused by promoting S phase to G2/M phase and the decreased caspase-3 activity and nitric oxide level. 5-HMF is one of the active principles in processed Fructus Corni.