阿司匹林对内皮祖细胞功能及其诱导型一氧化氮合酶的影响

目的:观察阿司匹林对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响。方法:采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,分别加入不同浓度阿司匹林(分别为1、2、5、10mmol/L)培养3、6、12、24h。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,将其在倒置荧光显微镜下计数。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管形成试剂盒来观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,免疫印迹杂交法(Western blot)半定量测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量。结果:阿司匹林能减少外周血EPCs数量,并且EPCs数量随阿司匹林浓度和作用时间增加而减少。EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力、体外血管形成能力和iNOS含量亦随阿司匹林浓度和作用时间增加而降低。结论:阿司匹林通过减少EPCs中iNOS含量,降低EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管形成能力,从而抑制内皮细胞的生成。     

内皮型一氧化氮合酶对内皮祖细胞生物学功能的影响

一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)参与调节机体多种生理活动,在心血管系统中的作用亦倍受重视.近年来,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的又一生物学作用已引起人们的关注.本文探讨了eNOS在内皮祖细胞的动员、分化和归巢中的作用,及其促进内皮祖细胞的生物学功能.     

内皮型一氧化氮合酶对内皮祖细胞生物学功能的影响

一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)参与调节机体多种生理活动,在心血管系统中的作用亦倍受重视。近年来,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的又一生物学作用已引起人们的关注。本文探讨了eNOS在内皮祖细胞的动员、分化和归巢中的作用,及其促进内皮祖细胞的生物学功能。     

肿瘤坏死因子-α对内皮祖细胞功能及其一氧化氮合酶含量的影响

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对外周血内皮祖细胞(EPC)功能及一氧化氮合酶含量的影响。方法采用密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度TNF-α(分别为0,10,20,50和100mg/L)分别培养0,6,12,24和48h。激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光黄标记荆豆凝集素Ⅰ和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白双染色阳性的细胞为正在分化的EPC;将其在倒置荧光显微镜下计数,然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室、黏附能力测定实验和体外血管生成试剂盒来观察EPC的增殖、迁移、黏附和体外血管形成能力。免疫印迹杂交法(Westernblot)半定量测定诱导型和内皮型一氧化氮合酶(iNOS和eNOS)含量。结果TNF-α降低外周血EPC增殖、迁移、黏附、体外血管形成能力、iNOS和eNOS含量,并且EPC增殖、迁移、黏附、体外血管形成能力、iNOS和eNOS含量随TNF-α浓度与作用时间增加而降低。结论TNF-α降低EPC的增殖、迁移、黏附和体外血管形成能力,还减少EPC中iNOS和eNOS含量。     

姜黄素对内皮祖细胞功能及内皮型一氧化氮合酶的影响

目的观察姜黄素对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及功能的影响。方法采用贴壁选择法培养人外周EPCs,培养6 d后,收集贴壁细胞并加入姜黄素（0、5、10、15μmol/L）培养一定时间（6、12、24和48 h）。荧光显微镜鉴定EPCs,分别观察EPCs的体外增殖、黏附、迁移、体外血管生成能力。Griess法检测NO分泌量,并RT-PCR半定量测定eNOS基因表达。结果姜黄素增加外周血EPCs的数量,改善EPCs的体外增殖、黏附、迁移、体外血管生成能力（P<0.01）。并上调eNOS基因表达,促进EPCs来源的NO的释放（P<0.01）。结论姜黄素增加体外EPCs数量及改善其功能,上调eNOS基因表达并增加EPCs来源的NO分泌。     

姜黄素对内皮祖细胞功能及内皮型—氧化氮合酶的影响

目的观察姜黄素对体外培养的人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及功能的影响。方法采用贴壁选择法培养人外周EPCs，培养6d后，收集贴壁细胞并加入姜黄素（0、5、10、15μmol／L）培养一定时间（6、12、24和48h）。荧光显微镜鉴定EPCs，分别观察EPCs的体外增殖、黏附、迁移、体外血管生成能力。Griess法检测NO分泌量，并RT-PCR半定量测定eNOS基因表达。结果姜黄素增加外周血EPCs的数量，改善EPCs的体外增殖、黏附、迁移、体外血管生成能力（P〈0．01）。并上调eNOS基因表达，促进EPCs来源的NO的释放（P〈0．01）。结论姜黄素增加体外EPCs数量及改善其功能，上调eNOS基因表达并增加EPCs来源的NO分泌。     

醛固酮、诱导型一氧化氮合酶与动脉粥样硬化

醛固酮可引起自主神经功能失调、参与高血压的发生发展、参与心血管重构、致心律失常、参与血管再狭窄以及促进血栓形成等.     

肝癌组织中诱导型一氧化氮合酶的表达

为了解诱导型一氧化氮合酶(induce nitricoxide synthase,iNOS)在肝癌发病中的作用,用免疫组织化学方法检测了肝癌组织中iNOS的表达。32例肝癌和10例正常肝组织进行HE染色、iNOS检测。10例正常肝组织内均未见iNOS阳性信号。肝癌组织iNOS表达高于正常对照肝组织(26/32vs 0/10,x2=31.328,P<0.01)。肝癌组织和癌旁肝组织均表达iNOS(23/32vs 25/32,x2=0.333,P=0.564)。iNOS通过多种途径参与肝癌的发病。     

辛伐他汀对脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:90只健康SD大鼠随机分为对照组(生理盐水2 mL静脉滴注)、内毒素(LPS)组(LPS 5 mg/kg,用生理盐水稀释至2 mL静脉滴注)、LPS+辛伐他汀(Sta)组(LPS 5mg/kg,Sta 20mg/kg,生理盐水稀释至2 mL静脉滴注),每组30只.分别在用药后2、4、6、12、24 h处死大鼠,取右肺下叶用RT-PCR法检测肺组织iNOS mRNA表达.结果:光镜下对照组各时点肺泡结构正常;LPS组2h出现炎症损伤,以6h最为显著;LPS+ Sta组中性粒细胞浸润较LPS组减轻.LPS组iNOSmRNA表达较对照组和LPS+ Sta组明显增高(均P＜0.05),6h达高峰,12 h开始下降;LPS+ Sta组各时点iNOSmRNA表达趋势同LPS组,但接近对照组水平(P＞0.05).结论:辛伐他汀能改善脓毒症时肺组织的病理性炎症损伤,辛伐他汀能减低脓毒症时肺组织iNOS mRNA的表达.     

一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶与腹主动脉瘤

腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)是在动脉粥样硬化的基础上发生的最常见的主动脉扩张性病变,65岁以上人群发生率约9%.20世纪50年代以来出现的主动脉重建手术和90年代出现的腔内隔绝术使AAA的治疗有了很大的进展.但本病的诱发因素以及持续扩张直至破裂的控制因素仍未清楚.广泛的基础和临床研究显示:腹主动脉瘤壁的细胞外基质合成与降解以及中膜平滑肌细胞的增殖与凋亡失衡是其形成和发展的关键之一[1].而近年来的研究显示一氧化氮(Nitric oxide,NO)和诱导型一氧化氮合酶(Inducible NO synthase,iNOS)在多个层面上影响了这二者的平衡,在腹主动脉瘤的发生发展中起了一定的作用.本文就NO,iNOS的分类与功能,NO与细胞因子的相互作用及NO,i-NOS与腹主动脉瘤的临床病理联系作一综述.     

高糖及高胰岛素对小鼠骨髓内皮前体细胞增殖及功能的影响

目的研究高糖及高胰岛素对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响。方法通过密度梯度离心法从小鼠(BALB/c)的骨髓中分离出EPCs,将细胞分为4组,A组为对照组(葡萄糖浓度5.5mmol/L),B、C组葡萄糖浓度分别为11.0 mmol/L、22.0 mmol/L,D组(葡萄糖浓度22.0 mmol/L+胰岛素25U/L)。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的含量。结果骨髓源性EPCs的增殖能力与A组(1.31±0.21)比较,B、C、D组(B组0.93±0.27,C组0.78±0.31,D组0.57±0.24)均明显降低,差异有统计学意义(均为P<0.05);B、C、D组间比较差异无统计学意义(均为P>0.05)。实验5 d后,B组的凋亡率为(17.95%±0.38%)、C组的凋亡率为(32.5%±0.63%)、D组的凋亡率为(31.48%±1.26%),3组的凋亡率均较A组的凋亡率(15.75%±0.60%)增高;C组及D组凋亡率均较B组增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。细胞分泌NO、总NOS(TNOS)显著减少、而诱导型NOS(iNOS)分泌显著增加(均为P<0.01)。结论高糖及高胰岛素引起的EPCs增殖能力降低,促使细胞凋亡,并损害细胞的分泌功能;高胰岛素对高糖引起的EPCs损害并未改善。     

内皮祖细胞与低氧性肺动脉高压

低氧性肺动脉高压(HPH)是一种致死性很高的肺血管疾病,其发病与血管内皮的损伤密切相关.近年来研究表明,内皮祖细胞(EPCs)在HPH血管内皮修复中具有重要作用.本文总结了近年来EPCs动员、归巢的分子生物学研究进展.研究了EPCs在HPH发生、发展中的作用,以及药物和EPCs移植对HPH的影响.     

颈动脉粥样硬化影响内皮祖细胞功能的研究进展

动脉粥样硬化是威胁人类健康的最严重的心脑血管疾病之一,阐明动脉粥样硬化发生机制和防治动脉粥样硬化已成为医学界研究的热点。颈动脉粥样硬化在一定程度上可反映全身动脉粥样硬化斑块发展状况,由于颈动脉位置表浅,易于探及检查,已被证实可作为了解和评估全身动脉粥样硬化的"窗口"。经研究证实,内皮祖细胞可修复受损内膜,延缓动脉粥样硬化的发生发展。本文针对颈动脉粥样硬化患者内皮祖细胞数量和功能的变化,以及内皮祖细胞对该病发生发展的作用进行概括和总结,为动脉粥样硬化的治疗与防治提供新的策略。     

辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞分化的不同影响

目的：观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞（SPC）和内皮祖细胞（EPC）分化的影响。方法：采用密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀（0．01～10μmol／L）培养8d。采用平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定FITC—UEA—I和Di I-acLDL双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数。结果：辛伐他汀显著抑制骨髓单个核细胞分化为SPC。0．01μmol／L辛伐他汀组与对照组SPC数量分别为79±5对85±4（P〈0．05）。辛伐他汀显著促进骨髓单个核细胞向EPC分化,其促进作用随辛伐他汀浓度升高而增加,在1．0μmol／L达最大效应。1μmol／L辛伐他汀组与对照组EPC数量分别为87±5对39±4（P〈0．01）。结论：辛伐他汀选择性抑制骨髓单个核细胞向SPC分化,促进其向EPC分化,局部应用有促进损伤血管再内皮化和抑制新生内膜过度增生的可能。     

内皮祖细胞移植在四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型中的作用

目的研究内皮祖细胞（EPCs）移植对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的影响。方法选用雌性健康SD大鼠,共24只。采用25％的CCl4/橄榄油灌胃8周制成SD大鼠肝纤维化模型,随机处死8只为CCl4处理8周组,再随机取16只分成EPCs回输组和等渗盐水对照组,每组各8只。在EPCs回输组,EPCs经门静脉回输入大鼠体内；等渗盐水对照组,门静脉回输入等体积的等渗盐水,回输4周后处死所有大鼠,取肝组织石蜡切片,进行苏木精-伊红常规染色和Masson三色染色法；免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和CⅢ,进行组织学和纤维化评估,同时取血清进行生化检测评估肝功能。结果与等渗盐水对照组相比,EPCs回输组中,肝组织学活动指数（HAI）,ALT、AST和TBil水平降低,Alb水平高,α-SMA和CⅢ表达少（P＜0．05）；与CCl4处理8周组相比,EPCs回输组中,HAI、ALT、AST和TBil水平降低,其他指标差异无统计学意义；等渗盐水对照组中HAI、ALT、AST和TBil水平升高,Alb水平降低（P＜0．05）。结论在肝纤维化发展过程中,门静脉回输EPCs,可以减轻肝脏炎症损伤,同时改善CCl4诱导的肝纤维化程度。     

通心络和他汀类药物对人内皮祖细胞数量与功能的影响

目的:观察中药通心络和他汀类药物对外周血内皮祖细胞(EPCs)数量和功能的影响。方法:采用密度梯度离心法分离培养人外周血EPCs,经FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色鉴定后,并进一步通过流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD133,将贴壁细胞随机分为:对照组、阿托伐他汀组(终浓度10μmol/L)、通心络组(终浓度0、50、100、200、500、750和1000μg/ml),作用不同时间(0、12、24、48、60和72h)后,检测细胞形态及计数,再采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell小室、黏附功能检测评价其增殖、迁移和黏附能力。结果:不同浓度通心络组、阿托伐他汀组均能较对照组明显提高EPCs数量,显著改善其增殖、迁移、黏附能力,通心络在500μg/ml时对细胞数量及功能改善最为显著。采用500μg/ml的通心络进行时效作用的研究,各组呈时间依赖性增强,EPCs的数量和功能在72h达到高峰。结论:通心络和阿托伐他汀均能在体外提高内皮祖细胞的数量及功能。     

Globular adiponectin improves high glucose-suppressed endothelial progenitor cell function through endothelial nitric oxide synthase dependent mechanisms

Plasma levels of adiponectin, an adipose-specific protein with putative anti-atherogenic properties, could be down-regulated in obese and diabetic subjects. Recent insights suggest that the injured endothelial monolayer is regenerated by circulating endothelial progenitor cells (EPCs), but high glucose reduces number and functions of EPCs. Here, we tested the hypothesis that globular adiponectin can improve high glucose-suppressed EPC functions by restoration of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) activity. Late EPCs isolated from healthy subjects appeared with cobblestone shape at 2-4 weeks. EPCs were incubated with high glucose (25 mM) and treatment with globular adiponectin for functional study. Migration and tube formation assays were used to evaluate the vasculogenetic capacity of EPCs. The activities of eNOS, Akt and concentrations of nitric oxide (NO) were also determined. Administration of globular adiponectin at physiological concentrations promoted EPC migration and tube formation, and dose-dependently upregulated phosphorylation of eNOS, Akt and augmented NO production. Chronic incubation of EPCs in high-glucose medium significantly impaired EPC function and induced cellular senescence, but these suppression effects were reversed by treatment with globular adiponectin. Globular adiponectin reversed high glucose-impaired EPC functions through NO- and p38 MAPK-related mechanisms. In addition, nude mice that received EPCs treated with adiponectin in high glucose medium showed a significant improvement in blood flow than those received normal saline and EPCs incubated in high glucose conditions. The administration of globular adiponectin improved high glucose-impaired EPC functions in vasculogenesis by restoration of eNOS activity. These beneficial effects may provide some novel rational to the vascular protective properties of adiponectin.