海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用

目的:探讨海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用及其作用机制.方法:用海芋粗提物处理人正常肝细胞(L02)及肝癌细胞(SMMC-7721),用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、EdU掺入试验研究海芋粗提物对人正常肝细胞和肝癌细胞的增殖抑制作用;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测海芋粗提物对细胞周期的影响;RT-PCR检测细胞周期及凋亡相关基因PPARγ、Cyclin D1、Rb、P21、Bax、Bcl-2基因mRNA表达.结果:用不同浓度海芋粗提物处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P＜0.05),呈时间-剂量-效应关系;克隆形成下降(P＜0.05);EdU标记指数降低(P＜0.05);AO/EB染色凋亡细胞增多(P＜0.01);细胞周期分布改变,凋亡指数显著增加(P＜0.01),G0/G1期细胞增加(P＜0.05),S期和G2/M期细胞减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,海芋粗提物(400μg/ml)处理后,PPARγ表达增加46.0%(P＜0.01)、Cyclin D1降低43.7% (P＜0.01)、Rb增加283.3%(P＜0.01)、Bax增加77.1% (P＜0.01)、Bcl-2降低24.8% (P＜0.05).结论:海芋粗提物对肝癌细胞具有细胞毒和诱导凋亡作用,其作用机理可能与激活PPARγ,上调Rb、Bax基因表达,下调Cyclin D1、Bcl-2基因表达有关.     

手霉素对人卵巢癌3AO细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨手霉素对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:MTT法检测手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用;Giemsa染色、透射电子显微镜下观察及FCM分析手霉素对3AO细胞的凋亡诱导作用;FCM检测手霉素对3AO细胞 ras、survivin和核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)(p65)蛋白表达的影响.结果:手霉素能显著抑制3AO细胞的增殖(P<0.05),并且这种抑制作用随着手霉素浓度的增加和作用时间的延长而增强.Giemsa染色和透射电子显微镜下观察发现,手霉素可诱导3AO细胞出现典型的凋亡形态学变化及超微结构改变.FCM分析结果显示,与对照组相比,手霉素诱导3AO细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞周期中的G2/M期细胞也明显增加(P<0.05);3AO细胞的ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达水平明显下降(P<0.05).结论:手霉素可明显抑制人卵巢癌3AO细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调细胞ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达有关.     

小分子RNA干扰 MTA1基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物活性及相关蛋白表达的影响

目的:采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中转移相关基因(metastasis-associated gene 1,MTA1)的表达,并观察其对15-脂氧合酶-2(15-lipoxygenase-2,15-LOX-2)、p53及bcl-2表达的影响.方法:将shRNA-MTA1载体质粒稳定转染MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制情况,FCM法检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR和Western印迹法检测MTAl、15-LOX-2、p53及bcl-2 mRNA和蛋白表达情况.结果:shRNA-MTA1能明显降低MTA1基因在MDA-MB-231细胞中的表达量;抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,并使细胞被阻滞在G1期,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).转染shRNA-MTA1可使MDA-MB-231细胞中15-LOX-2和p53 mRNA及蛋白的表达明显增强(P<0.01),而 MTA1和bcl-2 mRNA表达明显减弱(P <0.01).结论:MTA1基因可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用可能与上调细胞中15-LOX-2和p53的表达,下调bcl-2的表达有关.     

Trastuzumab联合丁酸钠对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖和p27Kip1表达的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)丁酸钠(NaB)及曲妥珠单抗Trastuzumab对人乳腺癌细胞株SKBR3细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨NaB及Trastuzumab调控乳腺癌细胞增殖的分子机制.方法:乳腺癌SKBR3细胞经NaB、Trastuzumab单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡,Western Blot方法检测p27Kip1的表达.结果:NaB单独用药显著抑制SKBR3细胞增殖,促进细胞G0/G1期阻滞,增加细胞凋亡和p27Kip1蛋白的表达,P<0.05;20 μg/mL Trastuzumab单独用药,对细胞有增殖抑制和细胞周期阻滞作用(P<0.05),但对细胞凋亡及p27Kip1蛋白表达无明显影响,P>0.05.Trastuzumab可协助NaB 增加对SKBR3的抗肿瘤作用及p27Kip1蛋白表达,P<0.05.结论:Trastuzumab联合NaB抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞周期阻滞及细胞凋亡的发生,以上过程可能是通过增加p27Kip1的蛋白表达来实现.     

细胞周期蛋白G2在人甲状腺乳头状癌K1细胞中的表达及其对K1细胞增殖凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨细胞周期蛋白G2(Cyclin G2,CCNG2)基因对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、凋亡的影响。方法通过瞬时转染技术构建CCNG2基因过量表达的甲状腺癌K1细胞系,应用MTT比色法、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡情况;Western blot、免疫细胞化学染色法检测CCNG2、P53、MDM2蛋白表达情况。结果 MTT法及流式细胞术结果表明,CCNG2过表达的甲状腺癌K1细胞增殖抑制及凋亡效应明显(P<0.05);Western blot结果显示,在CCNG2基因过表达的甲状腺癌K1细胞中抑癌基因P53的蛋白表达显著上调(P<0.05),免疫细胞化学染色法检测结果与Western blot检测结果一致。结论 CCNG2基因具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,可能是通过CCNG2基因上调P53基因水平实现的。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对MCF-7乳腺癌细胞生物学行为影响的研究

目的:研究5-氮杂2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响,探讨其临床治疗乳腺癌的可能性.方法:分别使用浓度为0.4、1.6、6.4、25.6和102.4 μmol/L的甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株.通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响.应用流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响.RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA在MCF-7乳腺癌细胞株表达的变化.结果:5-Aza-CdR 6.4 μmol/L作用1 d或0.4 μmol/L作用3 d就可以显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖,P<0.05.作用3 d后,在6.4 μmol/L时细胞周期中处于G0/G1期的细胞的显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期;在0.4 μmol/L时细胞的凋亡率为(11.80±0.30)%,与对照组比较有显著升高,P<0.01.以上作用呈时间-剂量依赖性关系.5-Aza-CdR处理后,无RASSF1A表达的MCF-7乳腺癌细胞株可检测出基因RASSF1A的重新表达.结论:5-Aza-CdR可消除RASSF1A启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制MCF-7乳腺癌细胞株的生长,使细胞周期阻滞于G0/G1期,并促进其凋亡.     

藤黄酸抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并诱导其细胞凋亡

目的:研究中药藤黄的有效成分藤黄酸(gambogic acid,GA)对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的GA作用前列腺癌PC-3细胞后,在体外通过CCK-8比色法分析细胞的增殖情况,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法和FCM法分析细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:GA不仅能抑制PC-3细胞的增殖,而且能有效诱导其细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制增殖和促凋亡作用呈浓度依赖性。CCK-8法检测结果表明,GA浓度>1μmol/L时,细胞的增殖能力受到明显抑制。AO/EB染色法显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞核呈致密浓染橘红色,并伴有核浓缩和偏向。FCM法检测结果显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞凋亡峰明显。蛋白质印迹法进一步表明,GA能够上调PC-3细胞中Bax和P53的表达水平,下调Bcl-2表达水平。结论:GA对前列腺癌PC-3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞的抑制作用及机制

目的:研究VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞的增殖、凋亡的影响、通过检测Her-2、p53探讨VES抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法:应用MTT法检测VES对MDA-MB-453细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测Her-2基因mRNA和Her-2、p53蛋白表达水平。结果:VES能抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20μg/ml VES处理组在48h后受到明显抑制,抑制率达52.25%;经VES处理后细胞出现凋亡,5μg/ml处理48h后,凋亡率为39.52%;药物干预组使肿瘤细胞大量阻滞于G1期(P<0.01);RT-PCR和免疫细胞化学法结果表明,VES能抑制Her-2基因mRNA的转录水平,从而抑制其蛋白的表达,也能降低p53蛋白的表达。结论:VES可诱导Her-2、p53共表达乳腺癌MDA-MB-53细胞凋亡,抑制增殖。其机制可能是通过抑制Her-2基因mRNA及蛋白的表达和通过抑制突变型p53蛋白的表达使细胞停滞于G1有关。     

PI3Kp55γ调节亚基N末端对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)调节亚基p55γ N末端24个氨基酸表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭转移的影响.方法:通过脂质体介导用pEGFPC1和pEGFPN24表达质粒转染MDA-MB-231细胞,建立表达稳定融合蛋白GFP-N24和GFP的细胞系;MTT法观察转染细胞的增殖情况;流式细胞术分析细胞周期;细胞侵袭实验观察N24p55γ对细胞侵袭力的影响;明胶酶谱实验观察N24p55γ表达对基质金属蛋白酶9(MMP9)活性的影响.结果:N24p55γ的表达抑制细胞体外增殖,使细胞生长速度减慢,细胞周期G0/G1期百分率由(42.1±1.637)%上升到(51.4±0.78)%,P<0.05.N24p55γ过表达抑制MDA-MB-231细胞的运动和迁移,与对照组细胞相比,差异有统计学意义,P<0.05;明胶酶谱实验结果显示,N24p55γ抑制活化型MMP-9的表达.结论:N24p55γ不仅能抑制乳腺癌细胞的体外增殖,而且抑制乳腺癌细胞的运动和迁移,抑制细胞周期以及肿瘤转移相关基因MMP-9表达和分泌可能是其发挥作用的主要机制.     

香加皮乙酸乙酯提取物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的:研究香加皮乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract from Cortex Periplocae,CPEAE)诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡作用及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度CPEAE对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的抑制作用;应用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法和透射电镜观察凋亡细胞形态;应用流式细胞术分析CPEAE对细胞凋亡率的影响;RT-PCR法检测用药前后细胞凋亡相关基因survivin和bax的mRNA表达情况。结果:CPEAE呈浓度及时间依赖性抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为(0.943±0.005)μg/mL。CPEAE作用48 h后MCF-7细胞发生了特征性的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测可见典型的凋亡峰,2.0μg/mL CPEAE作用72 h时细胞的凋亡率达(30.24±1.26)%。CPEAE作用后MCF-7细胞的survivin mRNA表达降低,而bax mRNA表达增加。结论:香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)可诱导乳腺癌细胞系MCF-7发生凋亡,可能通过下调survivin基因、上调bax基因的mRNA水平而发挥诱导细胞凋亡作用。