基于TGF-β1/Smad 通路探讨红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的观察红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用及其对转化生长因子β1（TGF-β1）/ Smad 信号通路的影响。方法采用腺嘌呤（250 mg·kg-1）灌胃建立肾纤维化大鼠模型。将SD 大鼠随机分为对照 组、模型组、氯沙坦组（9 mg·kg-1）及红花黄色素低、高剂量组（9、18 mg·kg-1）,每组10 只,灌胃给药,每天 1 次,连续30 d。检测大鼠血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量;采用HE 和Masson 染色法观察大鼠肾脏组织病 理学变化;采用RT-qPCR 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 mRNA 表达情况;采用免疫组化法 及Western Blot 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组 大鼠血清Cr、BUN 含量显著升高（P＜0.01）;大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.05）,Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。与模型组比较,各给药组大鼠血清Cr、BUN 水平明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;各给药组大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）, Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。各组大鼠肾脏组织中Smad4 mRNA 及蛋白表达水平无明显 变化（P > 0.05）。结论红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β1/ Smad 信号通路有关。     

复方芪珠方对肝纤维化模型大鼠作用及机制研究

目的观察复方芪珠方的不同提取物对大鼠肝脏TGF-β1, Smad2,Smad 3蛋白与mRNA, MMP-1, MMP-2,MMP-13, TIMP-1表达的影响,探讨复方芪珠方抗肝纤维化的作用机制。方法 70只大鼠随机分为正常组,模型组,复方芪珠方醇提高剂量组,复方芪珠方醇提低剂量组,复方芪珠方水提高剂量组,复方芪珠方水提低剂量组,秋水仙碱组。除正常组外,其余各组大鼠皮下注射40%四氯化碳(CCl_4)橄榄油造模,首次5mL·kg~(-1),以后每次3mL·kg~(-1),每周2次,共8周。于造模开始次日给药,复方芪珠方高,低剂量组16.2,9.72g·kg~(-1)ig,秋水仙碱组5mL·kg~(-1)剂量ig,每日1次,连续8周。造模结束后所有大鼠处死,肝脏组织学观察,酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测TIMP-1,MMP-1,MMP-2,MMP-13在肝组织的表达,Western-blot检测TGF-β1,Smad2/3蛋白表达,荧光定量PCR检测TGF-β1,Smad2,Smad3mRNA表达。结果模型组大鼠肝组织纤维化程度,炎症程度高于正常组,肝组织内TIMP-1,MMP-2,TGF-β1,Smad2,Smad 3的表达增加, MMP-1, MMP-13的表达减少(P0.05);经过复方芪珠方治疗后,治疗组与模型组相比肝组织纤维化和炎症程度降低,肝组织中TGF-β1,Smad2,Smad 3,TIMP-1,MMP-2的表达降低,MMP-1, MMP-13的表达增加(P0.05)。结论复方芪珠方抗大鼠肝纤维化有显著效果,其作用机制与其能影响TGF-β1/Smad信号传导通路,调节MMP/TIMP相关因子表达有关。     

蛇床子素改善慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化的机制研究

目的:研究蛇床子素(Osthole)对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠肾间质纤维化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组和蛇床子素低、高剂量组,每组10只。利用腺嘌呤溶液连续灌胃21 d建立大鼠CRF模型,对照组给予等量的生理盐水。蛇床子素低、高剂量组分别腹腔注射给予10、20 mg/kg蛇床子素;连续治疗28 d。检测大鼠血清中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及尿酸(UA)的水平变化;HE染色检测肾组织病理变化;ELISA法检测大鼠血清中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)水平;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;Western Blot法检测肾组织中TGF-β、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4及Smad7蛋白的表达。结果:蛇床子素低、高剂量组大鼠血清Scr、BUN及UA含量明显低于模型组(P0.05或P0.01),并能显著改善大鼠肾组织损伤;蛇床子素能够降低TIMP-1、TIMP-2水平,增加MMP-2、MMP-9的水平(P0.05或P0.01);并能够降低肾脏组织中MDA含量,增加SOD活力(P0.05或P0.01);蛇床子素能显著降低TGF-β、Smad2/3、p-Smad2/3及Smad4蛋白表达,增加Smad7蛋白表达(P0.05或P0.01)。结论:蛇床子素对慢性肾衰竭大鼠的肾脏保护作用可能与调控TGF-β/Smad信号通路,抑制肾间质纤维化有关。     

金匮肾气丸对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的影响

目的:研究金匮肾气丸对腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。方法:96只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氯沙坦组(5 mg·kg-1)和金匮肾气丸高、中、低剂量组(2.4,1.2,0.6 g·kg-1),采用腺嘌呤灌胃(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))诱导肾间质纤维化大鼠模型,2 h后灌胃给予相应药物,造模连续9周;给药连续16周。采用生化法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松(Masson)染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠肾脏组组转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),钙黏蛋白(E-cadherin),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ),Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ),Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA的表达;以免疫组化法测定大鼠肾脏TGF-β1,α-SMA和E-cadherin的表达。结果:与正常组比较,模型组中SCr和BUN显著升高(P0.01),给予金匮肾气丸干预后SCr和BUN水平降低(P0.05);HE染色和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组肾间质损伤严重且肾间质胶原物质大量沉积,给予金匮肾气丸干预后肾间质小管损伤减轻,肾间质胶原物质沉积减少;Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA表达上调(P0.05),模型组E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA表达下调(P0.05),给予金匮肾气丸干预后E-cadherin,MMP-1,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达上调(P0.05),TGF-β1,α-SMA,Col-Ⅰ,Col-Ⅲ,Col-Ⅳ,TIMP-1,TIMP-2mRNA的表达明显下调(P0.05);免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组E-cadherin蛋白表达下调(P0.01),TGF-β1和α-SMA蛋白表达上调,金匮肾气丸干预后E-cadherin蛋白表达上调(P0.05),TGF-β1和α-SMA蛋白表达下调(P0.05)。结论:金匮肾气丸可有效改善肾间质纤维化并对肾脏有一定的保护作用,其改善肾间质纤维化的机制可能与降低基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1,TIMP-2)活性,TGF-β1蛋白表达,α-SMA蛋白表达,升高基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-2,MMP-9)活性,E-cadherin蛋白表达,从而减少胶原物质的沉积有关。     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除所致肾纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其分子作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化造模组(n=30)。将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg-1)及抗纤灵方(21 g·kg-1)灌胃治疗,其余组都用等体积的生理盐水。持续8周灌胃后处死,检测各组大鼠血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h-Pro);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变;马松(Masson)染色观察肾脏纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad2,Smad3,Smad7蛋白和mRNA在肾脏组织中的表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠的SCr,BUN,24 h-Pro上升,纤维化面积和肾脏损伤评分增加,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白表达升高,Smad7 mRNA与蛋白表达显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,氯沙坦钾组、抗纤灵方组可减少纤维化面积,降低肾脏损伤评分,SCr,BUN,24 h-Pro,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白的表达水平,Smad7mRNA与蛋白表达显著上调(P 0. 01),但低于正常组与假手术组的水平。结论:中药抗纤灵方可通过抑制TGF-β_1/Smad通路来延缓肾纤维化。     

“调肝肾,祛痰瘀”复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠心肾组织TGF-β1-Smads信号通路的影响

目的:探讨"调肝肾,祛痰瘀"复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠(SHR)心肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)-Smads信号通路的影响。方法:将30只12周龄的自发性高血压大鼠,随机分为复方组(4 g·kg-1),氯沙坦组(30 mg·kg-1)和模型组,另设SD大鼠10只为正常组,12周后,采用RT-q PCR检测心肾组织Smad2,Smad3和Smad7 m RNA表达,免疫组化法检测肾组织Smad2,Smad3和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肾脏Smad2,Smad3和心脏TGF-β1,Smad2,Smad3的m RNA表达明显升高,心脏和肾脏Smad7的m RNA表达明显降低(P0.01),肾组织Smad2和Smad3的蛋白表达均明显升高,Smad7蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,复方组能够下调肾脏Smad2,Smad3和心脏TGF-β1,Smad3的m RNA表达,上调肾脏和心脏Smad7的m RNA表达;复方组转化生长因子β1(TGF-β1)m RNA表达的下调程度比氯沙坦组明显(P0.05);同时复方组的Smad2和Smad3的蛋白表达均明显下调(P0.01),Smad7蛋白表达均明显上调(P0.01),其中,复方组的Smad7蛋白表达与正常组无统计学差异。结论:调肝肾祛痰复方血压峰值前给药能够明显减少ECM聚积而减少高血压心肾纤维化。其作用机制应是在中医阴阳升降机制协同下,通过下调心肾的Smad2,Smad3和上调Smad7的表达以阻断TGF-β1-Smads信号转导通路所致。     

复方丹参片通过 LKB1-AMPK 通路干预高脂血症大鼠的作用机制研究

目的基于LKB1-AMPK 通路探讨复方丹参片对高脂血症大鼠的保护作用及相关机制。方法采用腹 腔注射75%蛋黄乳液+连续饲喂高脂饲料4 周的方式制备高脂血症大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、模型 组、辛伐他汀组（0.02 g·kg-1）和复方丹参低、中、高剂量组（复方丹参片,1.5、3、6 g·kg-1）,每组10 只。各组 大鼠每日1 次给予相应剂量药物灌胃,连续干预4 周。采用ELISA 法检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇 （T-CHO）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天 冬氨酸氨基转移酶（AST）水平;测定大鼠肝脏系数;采用HE 染色法观察肝脏组织病理形态;采用免疫组织化 学法检测肝脏组织中AMPK、p-AMPK、LKB1、HMGCR 蛋白水平;采用Real-time PCR 法检测肝脏组织中 AMPK、LKB1、HMGCR mRNA 表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的肝脏系数及血清TG、T-CHO、 LDL-C、ALT、AST 水平明显升高（P＜0.05）,HDL-C 水平明显降低（P＜0.05）;肝脏出现脂肪性病变;肝脏组 织中AMPK、p-AMPK、LKB1 蛋白及mRNA 表达水平明显降低（P＜0.05）,HMGCR 蛋白及mRNA 表达水平明 显升高（P＜0.05）。与模型组比较,复方丹参片低、中、高剂量能明显降低高脂血症模型大鼠的肝脏系数及血 清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST 水平（P＜0.05）,升高HDL-C 水平（P＜0.05）;改善肝脏脂肪性病变;升 高肝脏组织中AMPK、p-AMPK、LKB1 蛋白及mRNA 表达水平（P＜0.05）,降低HMGCR 蛋白及mRNA 表达水 平（P＜0.05）。结论复方丹参片可能通过激活LKB1-AMPK 通路及抑制HMGCR 表达水平来实现对高脂血症 大鼠的保护作用。     

刺梨黄酮对诱导大鼠肾纤维化TGF-β1/Smads信号转导干预作用及机制分析

目的:探讨观察刺梨黄酮对UUO模型大鼠肾纤维化TGF-β1/Smads信号转导干预作用,并分析其机制。方法:将75只造模成功的肾纤维化大鼠随机分为5组,即假手术组、模型对照组、氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量及大剂量组,每组各15只。氯沙坦钾组给予氯沙坦钾灌胃;刺梨黄酮中剂量及大剂量组分别给予刺梨黄酮灌胃。模型组和假手术组均同时给予同等容积的生理盐水。干预14 d后,观察24 h Upro、Scr、BUN,对比各组大鼠肾脏组织TGF-β1、Smad2/3、Smad7蛋白表达水平,分析刺梨黄酮对肾纤维化大鼠作用机制。结果:干预过程中,模型组和氯沙坦钾组各有1只大鼠死亡。模型组、氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量和大剂量组24 h Upro、Scr和BUN水平较假手术组显著升高(P0.01);治疗后氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量和大剂量组较模型组显著降低;与氯沙坦钾组相比,刺梨黄酮中剂量组24 h Upro、Scr和BUN表达水平无明显差异(P0.05)。免疫组化显示模型组、氯沙坦钾组和刺梨黄酮不同剂量组中,各组TGF-β1、Smad2/3表达均明显高于假手术组(P0.01),各治疗组的表达水平明显低于模型组(P0.05)。各组Smad7的表达均明显低于假手术组(P0.01),各治疗组的表达水平明显高于模型组(P0.05)。与氯沙坦钾组比较,刺梨黄酮中剂量组TGF-β1、Smad2/3、Smad7表达水平无明显差异。结论:刺梨黄酮中剂量组可显著改善肾纤维化大鼠肾功能指标,推测和抑制TGF-β1、Smad2/3蛋白表达、激活Smad7蛋白表达有关。     

三七总皂甙通过Smads 信号通路减缓慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化进程的作用研究

目的探讨三七总皂甙（panax notoginseng saponins,PNS）通过Smads 信号通路减缓慢性肾衰竭（chronic renal failure,CRF）大鼠肾间质纤维化进程的作用。方法60 只大鼠随机留取10 只设为假手术组,其余50 只 采用5/6 肾切除术复制CRF 模型,将建模成功的44 只大鼠随机分为慢性肾衰竭组、尿毒清组、三七总皂甙低 剂量组（LPNS 组）、三七总皂甙高剂量组（HPNS 组）,每组11 只。尿毒清组灌胃2.2 g·kg-1 的尿毒清溶液,三 七总皂甙低剂量组和三七总皂甙高剂量组灌胃25、100 mg·kg-1 的三七总皂甙溶液,假手术组和慢性肾衰竭组 灌胃等量生理盐水溶液,连续4 周。干预结束后,检测各组肾功能指标：血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h 尿蛋白,HE 和Masson 染色观察残余肾组织病理学改变及肾组织纤维化面积占比,RT-qPCR 和Western Blot 法检测残余肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2/3、Smad6 mRNA 表达量及TGF-β1、Smad2/3、 p-Smad2/3、Smad6 蛋白表达量。结果与慢性肾衰竭组比较,尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙高剂 量组血肌酐、尿素氮、24 h 尿蛋白水平均降低,三七总皂甙高剂量组低于三七总皂甙低剂量组和尿毒清组（均 P＜0.05）。HE 染色显示,慢性肾衰竭组可见肾小球、肾小管明显病变,肾间质纤维化增生,大量炎性细胞浸 润;尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙高剂量组上述病变减轻,其中三七总皂甙高剂量组病变最 轻。与慢性肾衰竭组比较,尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙高剂量组肾组织纤维化面积占比、 TGF-β1 mRNA 相对表达量及TGF-β1、p-Smad2/3 蛋白相对表达量均降低,三七总皂甙高剂量组低于三七总 皂甙低剂量组和尿毒清组（均P＜0.05）。与慢性肾衰竭组比较,尿毒清组、三七总皂甙低剂量组、三七总皂甙 高剂量组Smad6 mRNA 和蛋白相对表达量升高,三七总皂甙高剂量组高于三七总皂甙低剂量组和尿毒清组（均 P＜0.05）。结论三七总皂甙可有效减缓慢性肾衰竭大鼠肾间质纤维化进程,可能通过抑制Smad2/3 磷酸化水 平,激活Smad6 发挥调控作用。     

活血通脉方对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化和心肌细胞能量代谢的影响研究

目的：探讨活血通脉方对慢性心力衰竭 （CHF） 大鼠心肌纤维化 （MF） 和心肌细胞能量代谢的影响。方法：将60 只 SD 大鼠随机选择 10 只作为假手术组,其余大鼠用腹主动脉缩窄法建立 CHF 模型。模型制备成功的 50 只大鼠随机分为模型组、阳性对照组及活血通脉方高、中、低剂量组（高、中、低剂量组）,每组 10 只。阳性对照组按 1.5 mg/kg 的剂量灌胃赖诺普利;高、中、低剂量组按 16.0、8.0、4.0 g/kg 的剂量灌胃活血通脉方;假手术组与模型组大鼠灌胃等容积的生理盐水。每天1 次,持续 4 周。计算各组大鼠心质量指数,检测左室射血分数（LVEF）、左心室短轴收缩率（LVFS）及心肌组织转化生长因子-β1 （TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平、5''-单磷酸腺苷（AMP）依赖的蛋白激酶（AMPK）、过氧化物酶体增殖剂激活受体 γ （PPARγ）、辅助激活因子-1α （PGC-1α） 蛋白及 mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组 LVEF、LVFS、AMPK、PGC-1α 蛋白及 mRNA 相对表达下降 （P＜0.05）,心质量指数及 TGF-β1、MMP-9 水平升高 （P＜0.05）。与模型组比较,活血通脉方高、中、低剂量组和阳性对照组 LVEF、LVFS 及 AMPK、PGC-1α 蛋白与 mRNA 相对表达升高（P＜0.05）,心质 量指数及 TGF-β1、MMP-9 水平降低（P＜0.05）。与阳性对照组比较,活血通脉方中、低剂量组LVEF、LVFS、AMPK、PGC-1α蛋白及 mRNA 相对表达较低 （P＜0.05）,心质量指数及 TGF-β1、MMP-9 水平较高 （P＜0.05）。结论：活血通脉方能显著提高CHF 大鼠心功能,改善大鼠心肌纤维化,提高心肌细胞能量代谢,其机制可能与上调 AMPK、PGC-1α 表达,下调 TGF-β1、MMP-9 水平有关。     

艾灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠黏膜TGF-β及Smad4表达的影响

目的：观察艾灸对克罗恩病（Crohn Disease, CD）肠纤维化大鼠结肠转化生长因子-β （Transforming Growth Factor-β, TGF-β）蛋白、Smad4 蛋白及 mRNA 表达的影响,从 TGF-β/Smads 信号途径探讨针灸治疗CD肠纤维化的作用机制。方法：采用雄性清洁级 SD 大鼠建立 CD 肠纤维化模型, 应用随机的方法,将大鼠分为正常组、模型组、温和灸组、电针组、隔药灸组。正常组和模型组不予任何治疗;温和灸组、电针组、隔药灸组均取天枢、气海穴,分别施以温和灸、电针、隔药灸治疗。治疗结束后,采用免疫组织化学法（Immunohistochemistry, IHC）检测各组大鼠结肠 TGF-β与Smad4蛋白的表达;采用荧光定量聚合酶链反应法（Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction, FQ-PCR） 检测结肠 Smad4 mRNA 的表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠结肠 TGF-β蛋白、Smad4 蛋白及 mRNA 表达增加（P〈0.01）。经温和灸、电针、隔药灸治疗后,与模型组比较,TGF-β蛋白、Smad4 蛋白及 mRNA 表达均有不同程度的降低（P〈0.01 或 P〈0.05）。结论：CD肠纤维化大鼠结肠TGF-β蛋白、 Smad4 蛋白及mRNA表达显著增多,温和灸、电针、隔药灸天枢和气海穴均可下调CD肠纤维化大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4 蛋白及 mRNA 的异常表达。     

大车前苷对糖尿病大鼠肾纤维化的干预作用

【目的】 探讨大车前苷对糖尿病大鼠肾纤维化的干预作用。【方法】 将新生大鼠随机分为正常组,模型组,大车前苷低、中、高剂量组, 二甲双胍组,每组6只。除正常组外,其他各组大鼠出生第2天给予单次腹膜内注射链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病模型。第12 ~ 16周,大车前苷低、中、高剂量组大鼠分别对应灌胃大车前苷 10、20、40 mg·kg-1·d-1,二甲双胍组灌胃二甲双胍 25 mg·kg-1·d-1。给药结束后,进行血液和尿液生化检测,进行肾组织氧化应激指标检测,采用苏木素-伊红（HE）染色法观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学法检测肾组织中转化生长因子（TGF）-β水平,采用蛋白免疫印迹法检测肾组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）、TGF-β、Smad2、Smad3和Smad7蛋白表达水平。【结果】 与正常组比较,模型组大鼠血糖含量及总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（SCr）水平显著升高,胰岛素、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）水平均显著降低,尿液中尿蛋白（PRO）、潜血（BLO）和胆红素（BIL）含量均显著增加（均 P <0.01）,肾组织可见明显纤维化改变,肾组织丙二醛（MDA）水平显著升高,还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽转移酶（GST）、超氧化物歧化酶（SOD）水平均显著降低,肾组织TGF-β的PI值显著升高,E-cadherin 和Smad7表达水平显著下调,α-SMA、 TGF-β、 Smad2和Smad3表达水平均显著上调（均P < 0.01）。与模型组比较,大车前苷中、高剂量组和二甲双胍组上述指标均得到明显改善（P < 0.05或P < 0.01）,大车前苷低剂量组则改善不明显（P > 0.05）。【结论】 大车前苷可能通过调节氧化应激及TGF-β/Smad信号通路抑制糖尿病大鼠肾纤维化。     

参芪解毒汤对腺嘌呤所致慢性肾衰大鼠肾组织转化生长因子β1和Smad2、3表达的影响

目的:观察参芪解毒汤对腺嘌呤诱导的慢性肾衰大鼠肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2和Smad3蛋白表达的影响,探讨参芪解毒汤治疗慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)的作用机制。方法:将90只健康Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组、模型组、氯沙坦组、低剂量参芪解毒汤组、中剂量参芪解毒汤组和高剂量参芪解毒汤组。腺嘌呤灌胃复制慢性肾衰大鼠模型,检测造模后血浆肌酐(creati-nine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平判断造模是否成功。治疗8周后,检测血浆Cr、BUN、三酰甘油(triacylglycerol,TAG)、胆固醇(cholesterol,Chol)和白蛋白(albuminous,ALB)水平,HE染色观察大鼠肾脏组织病理学变化,蛋白印迹法检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad3蛋白的表达情况。结果:与治疗前相比,氯沙坦组和低、中、高剂量参芪解毒汤组Cr、BUN水平明显降低(P0.01);治疗后,各治疗组Cr、BUN和Chol水平低于模型组(P0.01,P0.05),ALB水平高于模型组(P0.01)。病理结果显示,各治疗组大鼠的肾组织病理损伤明显轻于模型组。蛋白印迹法检测提示各治疗组肾组织TGF-β1、Smad2和Smad3的蛋白表达低于模型组(P0.01)。结论:参芪解毒汤通过抑制TGF-β1/Smads信号传导通路发挥抗肾脏纤维化作用,减缓CRF进程。     

益气通阳方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的观察益气通阳方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化及TGF-β1/Smad7信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组和西药组各10只。除假手术组外,其余各组建立UUO模型。西药组予依那普利溶液0.18mg/mL灌胃,中药组予益气通阳方浓缩液1.188g/mL灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,每日1次。14d后心脏取血检测大鼠血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,处死大鼠取其肾组织行HE和Masson染色,免疫组化检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的表达,Western blot和RT-PCR分别检测Smad7蛋白和m RNA的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN明显升高(P0.01),病理改变明显,TGF-β1、FN蛋白表达明显升高(P0.01),Smad7蛋白和m RNA表达明显降低(P0.01);与模型组比较,中药组和西药组大鼠血清SCr、BUN明显降低(P0.05),病理改变减轻,TGF-β1、FN蛋白表达明显降低(P0.05),Smad7蛋白和m RNA表达明显升高(P0.05)。结论益气通阳方可能通过上调Smad7表达,抑制UUO大鼠肾组织TGF-β1的高表达,进而延缓肾间质纤维化进展。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝纤维化TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:观察荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠肝脏组织转移生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路中关键信号传导分子TGF-β1,Smad3,Smad7表达水平的变化,探讨TFL抗纤维化的作用机制.方法:SD大鼠ip DMN 4周建立大鼠肝纤维化模型,以ig水飞蓟宾为阳性对照50 mg· kg-1组,用不同剂量的TFL(400,200,100 mg·kg-1·d-1)ig给药,造模当日开始分组给药,每日1次,共给药6周.于实验第6周末处死大鼠,抽取下腔静脉血检测天冬氨酸转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT),留取肝脏同一部位行HE,Masson染色观察大鼠病理改变及肝纤维化程度,采用RT-PCR法检测TGF-β1,Smad3,Smad7 mRNA的表达.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠的肝纤维化程度明显增加,血清AST,ALT均显著升高,肝组织TGF-β1,Smad3 mRNA的表达明显增强(P＜0.05),Smad7 mRNA的表达显著减弱(P＜0.05);与模型组比较,TFL各剂量组和水飞蓟宾组血清AST,ALT均明显低于模型组,肝脏TGF-β1,smad3的表达明显降低(P＜0.05),而smad7则有所升高.结论:荔枝核总黄酮可减轻实验性大鼠肝损伤及改善肝纤维化程度,其作用机制可能与抑制TGF-β1,Smad3 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达有密切关系.     

艾灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠黏膜TGF-β及Smad4表达的影响

目的:观察艾灸对克罗恩病(Crohn Disease,CD)肠纤维化大鼠结肠转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达的影响,从TGF-β/Smads信号途径探讨针灸治疗CD肠纤维化的作用机制.方法:采用雄性清洁级SD大鼠建立CD肠纤维化模型,应用随机的方法,将大鼠分为正常组、模型组、温和灸组、电针组、隔药灸组.正常组和模型组不予任何治疗;温和灸组、电针组、隔药灸组均取天枢、气海穴,分别施以温和灸、电针、隔药灸治疗.治疗结束后,采用免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测各组大鼠结肠TGF-β与Smad4蛋白的表达;采用荧光定量聚合酶链反应法(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)检测结肠Smad4 mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达增加(P＜0.01).经温和灸、电针、隔药灸治疗后,与模型组比较,TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:CD肠纤维化大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达显著增多,温和灸、电针、隔药灸天枢和气海穴均可下调CD肠纤维化大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA的异常表达.     

补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的 基于调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾 病 （DKD） 小鼠的保护作用及机制。方法 将 24 只雄性 db/db 小鼠随机分为模型组、中药组 （补阳还五汤合参芪 地黄汤化裁,生药量 24.44 g·kg-1 ） 和西药组 （厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1 ） ,每组 8 只,另外取 8 只 db/m 小鼠作为 对照组。灌胃给药,每日 1 次,连续 12 周。检测小鼠血糖 （FBG） 、总胆固醇 （TC） 、甘油三脂 （TG） 、尿白蛋白/ 肌酐比值 （ACR） 及肾脏指数;采用 HE、Masson 染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连 蛋白 （FN） 、Ⅰ型胶原蛋白 （ColⅠ） 、波形蛋白 （Vimentin） 、α 平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） 、转化生长因子 β1 （TGF-β1） 、血管内皮生长因子受体 3 （VEGFR3） 、血管内皮生长因子 C （VEGF-C） 、淋巴管内皮透明质酸受体 1 （LYVE-1） 、平足蛋白 （PDPN） 、肿瘤坏死因子 α （TNF-α） 和白细胞介素 1β （IL-1β） 的表达;Western Blot 法检 测肾脏组织 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达; Real-time PCR 法检测肾脏组织 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达。 结果 与对照组比较,模型组小鼠的血清 FBG、TG、TC、ACR 水平及肾脏指数均明显升高 （P＜0.05） ;肾小 球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润, 肾小管萎缩,纤维化水平明显升高 （P＜0.05）;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α -SMA、TGF- β1、 VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、 PDPN 蛋白表达均明显上调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、 LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达均明显上调（P＜0.05）;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、 VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明显升高 （P＜0.05） 。与模型组比较,中药组小鼠的血清 TG、TC、ACR 水平均明显降低 （P＜0.05） ;肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平 明显降低 （P＜0.05） ;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、PDPN 蛋白表达均明显下调 （P＜0.05） ; 肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明 显下调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明 显降低 （P＜0.05） 。结论 补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低 DKD 小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制 可能与调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生有关。     

小檗碱对肝硬化大鼠肝功能的保护及炎症抑制作用

【目的】 观察小檗碱对肝硬化大鼠肝功能的保护及炎症抑制作用,并探讨其相关机制。【方法】 从60只SD大鼠中随机抽取10只设为正常组,其余建立肝硬化模型。将建模成功的40只大鼠随机分为肝硬化组、激活剂组、小檗碱组、激活剂＋小檗碱组,每组10只。激活剂组给予SRI-011381 30 mg/kg灌胃,小檗碱组给予小檗碱200 mg/kg灌胃,激活剂＋小檗碱组给予SRI-011381（30 mg/kg）合小檗碱（20 mg/kg）灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续2周。末次给药后次日测定血清肝功能指标、炎症因子指标、肝纤维化程度指标,采用免疫组织化学染色法测定肝脏组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,苏木素-伊红（HE）染色法观察肝组织病理变化,蛋白免疫印迹（Western Blot）法测定肝脏组织转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad4、Smad7蛋白表达。【结果】 与正常组比较,肝硬化组血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）水平,肝脏组织α-SMA免疫组织化学染色光密度（IOD）值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量升高,白蛋白（ALB）水平、Smad7蛋白表达量降低（均 P＜0.05）;与肝硬化组比较,激活剂组血清 AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA 水平及 α-SMAIOD值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量升高,ALB水平、Smad7蛋白表达量降低（均P＜0.05）;与激活剂组比较,小檗碱组血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量降低,ALB水平、Smad7蛋白表达量升高（均P＜0.05）;与小檗碱组比较,激活剂＋小檗碱组血清AST、ALT、IL-6、TNF-α、Ⅳ-C、PCⅢ、HA水平及α-SMA IOD值,TGF-β1、Smad4蛋白表达量升高,ALB水平、Smad7蛋白表达量降低（P＜0.05）。HE染色结果显示,肝硬化组与激活剂组可见明显肝纤维化表现,小檗碱组肝组织病理变化及纤维化程度较肝硬化组、激活剂组明显改善,激活剂＋小檗碱组肝组织病理变化及纤维化程度较肝硬化组、激活剂组有所改善,但不及小檗碱组。【结论】 小檗碱可抑制肝硬化大鼠炎性反应,促进肝脏胶原降解,降低肝纤维化程度,保护肝功能,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路有关。     

决明子对糖尿病大鼠肾脏纤维化的抑制作用

目的:探讨决明子对糖尿病大鼠肾脏纤维化的保护作用及其可能机制。方法:将70只SD大鼠随机分为模型组(60只)和正常对照组(10只)。禁食12 h后大鼠1次性左下腹腔注射55 mg.kg-1链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,对照组给予等容量生理盐水。造模成功的大鼠随机分为模型组(生理盐水,4 mL.kg-1)、卡托普利组(10 mg.kg-1)和决明子低、中、高剂量组(1,5,10 g.kg-1),连续灌胃给药8周。检测空腹血糖、24 h尿白蛋白量、血肌酐及肌酐清除率,采用HE染色观察肾脏组织病理学变化,采用RT-PCR检测肾脏组织中转化生长因子(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达,采用Western blot检测肾脏Smad3和Smad6的蛋白表达。结果:与对照组相比,糖尿病模型组大鼠空腹血糖、血肌酐、24 h尿白蛋白量均显著升高(P<0.05),肌酐清除率显著下降(P<0.05),肾脏组织中TGF-β1和CTGF的mRNA表达均明显升高(P<0.05),Smad3蛋白表达亦显著升高(P<0.05),而Smad6蛋白表达则显著下降(P<0.05);与糖尿病模型组相比,决明子治疗组中的上述各指标均显著改善(P<0.05),肾脏病理学变化也明显减轻。结论:决明子可显著减轻糖尿病大鼠肾脏纤维化程度,其机制可能与抑制肾脏组织中TGF-β1,CTGF和Smad3,并促进Smad6的表达有关。     

黄芪后处理对大鼠肝纤维化中的影响及TGF-β1/Smad2、p38MAPK 作用

目的：研究黄芪对CCl4 诱导的大鼠肝纤维化肝组织中TGF-β1、Smad2 和p38MAPK 表达的影响,探讨TGF-茁信号通路在黄芪后处理中可能的抗纤维化机制。方法：60 只Wistar 大鼠被随机分成对照组、模型组、黄芪后处理组及鳖甲软肝片组,其中黄芪后处理组又分为小剂量组、常规剂量组和大剂量组,大鼠背部皮下注射CCl4 构建肝纤维化模型,分别用HE 和VG 染色法染色,肝纤维化程度直接在光学显微镜下观测。同时采用SABC 免疫组化方法检测各实验组TGF-β1、Smad2 和p38MAPK 的表达情况。结果：与对照组比较,模型组TGF-β1、Smad2 表达明显增强（P < 0.05）,而p38MAPK 表达显著下降（P <0.05）。与模型组比较,黄芪后处理各组中大鼠肝组织中TGF-β1 表达均有减弱（P < 0.05）,且随着黄芪剂量的增加而减少;随着黄芪剂量增加逐步下调Smad2 的表达（P < 0.05）、上调p38MAPK 的表达（P <0.05）。此外,黄芪组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：黄芪后处理明显影响大鼠肝组织TGF-β1 信号表达,且对CCl4 诱导的大鼠肝纤维化的作用呈剂量依赖性增强,其可能的机制为负性调节TGF-β1,减少Smad2 及增强p38MAPK 的表达。