B细胞激活因子水平ELISA检测方法的建立及临床初评

目的:建立血清B细胞激活因子(Blymphocyte stimulator,BlyS)水平的ELISA检测方法,并初步探讨其临床价值.方法:以商品化的抗人BlyS单克隆抗体、生物素化抗人BlyS多克隆抗体,采用双抗夹心法自行建立BlyS血清水平的ELISA检测方法;并对80例风湿性疾病患者[50例系统性红斑狼疮(SLE)、20例类风湿关节炎(RA)、10例干燥综合征(SS)]、60例自身免疫性肝病患者[35例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、25例自身免疫性肝炎(AIH)]和40例正常人的血清BlyS水平进行检测.结果:成功建立血清BlyS水平的ELISA检测法且重复性较好,80例风湿性疾病患者的血清BlyS水平为(8.23±1.42)ng/ml,60例自身免疫性肝病患者为(3.40±0.79)ng/ml,40例正常人的血清BlyS水平为(3.19±0.88)ng/ml.与正常人相比,风湿性疾病组的BlyS血清水平明显升高(P＜0.01),而自身免疫性肝病组的BlyS血清水平升高则不明显.结论:本研究所建立的BlyS血清水平ELISA检测方法简便、可靠、准确,为后续研究BlyS与自身免疫性疾病尤其是风湿性疾病的关系奠定了基础.     

双抗体夹心ELISA定量检测血清Cap43蛋白方法的建立与评价

目的建立定量检测血清Cap43蛋白表达双抗体夹心ELISA法。并初步探讨血清Cap43蛋白表达水平在肺癌患者与正常人群间有无差异，以及该蛋白表达水平的高低与肺癌组织学分型间的关系。方法建立双抗体夹心ELISA方法对肺癌患者与正常人群血清中Cap43蛋白的含量进行定量检测。结果双抗夹心ELISA包被Ⅰ抗羊抗人NDRGl多克隆抗体（PcAb）、Ⅰ抗兔抗人Cap43PcAb以及辣根酶（HRP）标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为1：750，1：1200，1：350，标准蛋白曲线的回归方程为：y=0．53566＋0．00046x，R2=0．9939，P〈0．0001。应用该方法初步检测结果显示：肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于正常对照组（P〈0．01），且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组（P〈0．01）。该方法的敏感度（SE）为84．51％，特异度（SP）为35．00％。结论建立了一种敏感度高，重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法；Cap43蛋白在肺癌患者血清中呈现高表达，且在肺腺癌组病人血清中表达水平高于肺鳞癌组。     

基于IgY的ELISA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

目的 以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断.方法 制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了特异性IgY和lgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3μg/L;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%、20.8%、14.8%.结论 建立了基于lgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有一定特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断.     

卵巢癌患者血浆TM及EPCR检测的临床意义

目的:检测卵巢癌患者血浆血栓调节蛋白(TM)和血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)的水平,探讨其临床意义.方法:采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测卵巢癌患者35例、卵巢良性肿瘤患者 28 例,健康体检妇女70例血浆TM、EPCR的含量.结果:91.4(32/35)卵巢癌患者血浆TM明显升高,与对照组相比差异有统计学意义...     

不育病人检测血清顶体蛋白酶抗体与精子蛋白 17 抗体的临床研究

目的: 探讨不育病人检测血清顶体蛋白酶抗体( AcrAb) 与精子蛋白 17 抗体( Sp 17 Ab) 的临床价值。 方法: 选取我院 2016－01～ 2018－06 门诊收治的男子不育病人 91 例作为观察组; 选取 2015－01 ～ 2017－06 期间体 检男子正常生育 72 例作为对照组。所有研究对象均于入院后抽取外周静脉血，分离血清，采用酶联免疫吸附法 测定 AcrAb 和 Sp 17 Ab 含量。比较两组血清 AcrAb 和 Sp 17 Ab 含量变化、AcrAb 和 Sp 17 Ab 阳性率、AcrAb 与 Sp 17 Ab 联合诊断效能，及 AcrAb 与 Sp 17 Ab 相关性。结果: 观察组血清 AcrAb 和 Sp 17 Ab 含量高于对照组，且 有统计学差异( P＜0．05) ; 观察组 AcrAb 和 Sp 17 Ab 阳性率高于对照组，且有统计学差异( P＜0．05) ; AcrAb+Sp 17 Ab 联合诊断灵敏度和特异度高于单项指标; AcrAb 和 Sp 17 Ab 呈线性正相关。结论: 不育病人血清 AcrAb 和 Sp 17 Ab 含量明显升高，联合诊断灵敏度和特异度高，且 AcrAb 和 Sp 17 Ab 呈线性正相关。     

检测DR5双抗体夹心 ELISA方法的建立及应用

目的:建立检测DR5双抗体夹心ELISA方法,通过检测慢性乙型肝炎患者血清可溶性DR5水平,探讨其在肝炎发病机理中的作用。方法:采用本室制备的鼠抗DR5的单抗YM366ED作为包被抗体,鼠抗DR5的单抗YM366EC标记HRP,建立检测sDR5的ELISA,并测定52例慢性乙型肝炎和30例正常人血清sDR5浓度。结果:建立了检测人sDR5的夹心ELISA法,方法的变异系数小于5%,回收率85%以上。慢性乙型肝炎患者血清sDR5浓度明显高于正常对照组。结论:成功地建立了一种可用于检测血清sDR5的双抗体夹心ELISA,为判定某些相关疾病患者的病情、疗效及预后提供有用的工具。血中sDR5在慢性乙型肝炎发病过程中可能起着重要作用,检测病人血中sDR5水平可作为慢性乙型肝炎疾病活动性指标。     

精子蛋白17在卵巢癌中的表达及其意义

目的:探讨精子蛋白17在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌组织学分型,肿瘤分化程度及临床分期预后的关系.方法:对48例上皮性卵巢癌手术切除的石蜡包埋组织标本用自制的Sp17单克隆抗体进行免疫组化染色,研究Sp17在卵巢癌组织中的表达,并结合临床资料,探讨Sp17的表达与卵巢癌组织学分型、肿瘤分化程度(分级)及临床分期、预后的关系.结果:Sp17在上皮性卵巢癌的阳性表达率达43.8%(21/48),Sp17的表达与上皮性卵巢癌的组织学类型、肿瘤分化程度及临床分期无相关性,Sp17阳性患者生存时间似较阴性者为长,但无统计学意义.结论:Sp17在上皮性卵巢癌中有较高的表达率,值得进一步研究.     

卵巢肿瘤病人血清sFas含量的检测

①目的　检测血清中sFas含量在卵巢肿瘤诊断中的价值。②方法　应用双抗夹心酶联免疫法 (BA SEIA)检测血清sFas含量。③结果　卵巢癌病人血清sFas含量明显低于良性卵巢肿瘤病人和健康妇女 (t =11.6 9,14 .94 ,P <0 .0 1)。④结论　检测血清sFas含量对卵巢癌的临床诊断有一定价值。     

MLCK定量检测的双抗体夹心ELISA方法建立

目的:建立定量检测人肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的双抗夹心ELISA法.方法:用抗MLCK兔多克隆抗体包被酶标板,1％小牛血清白蛋白(1％BSA)作为封闭液,抗MLCK羊多克隆抗体和HRP-兔抗羊抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并进行了实验条件的优化;同时对新建立方法的灵敏度、精密度进行了评价...     

卵巢癌腹腔化疗前后血清SIL-2R的变化

目的:了解卵巢癌腹腔化疗前后血清可溶性白细胞介素-2受体(SIL-2R)的变化.方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测41例卵巢癌患者在腹腔化疗前后血清SIL-2R水平,并与正常对照组比较.结果:卵巢癌患者在腹腔化疗前血清SIL-2R水平显著高于正常对照组(P<0.001),水平升高与病灶大小呈正相关;治疗后患者血清SIL-2R水平比治疗前明显下降(P<0.001),但仍显著高于对照组(P<0.05),与病情变化密切相关;治疗有效的患者血清SIL-2R水平明显低于无效患者的水平(P<0.05).结论:卵巢癌患者血清SIL-2R的变化与癌肿的大小及消长呈正相关,在腹腔化疗前后检测患者的血清SIL-2R水平,有助于估计病情、疗效及预后.     

Th17细胞的研究

支气管哮喘是以嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞浸润、粘液高分泌性、气道高反应性为特征的慢性气道炎症。Th17细胞及其分泌的IL-17家族在自身免疫疾病的发病机制中发挥着重要作用,尤其是对机体经典的Th1/Th2途径作了修补,且发现其有与经典途径不同的分化途径和功能。近年来大量研究发现,Th17细胞亚群在慢性气道炎症性疾病中发挥着重要作用。1 Th17细胞的相关生物学特征1.1 Th17细胞分化增殖相关的因子TGF-β和IL-6相结合在转录因子RORγt和STAT3的作用下促使原始T细胞分化为Th17细胞,而且TGF-β和IL-6能够诱导RORγt的表达。另外,在只存在TGF-β和IL-6的     

异基因脂肪干细胞对系统性红斑狼疮患者Th17淋巴细胞亚群的调节

目的 体外观察异基因脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对活动期系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者Th17细胞亚群的影响.方法 原代培养人脂肪干细胞,流式细胞仪检测表面标记,进行成脂、成骨诱导.密度梯度离心法分离10 例活动期SLE患者外周血的单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分组与第3代或第8代ADSCs共培养,48 h后流式细胞仪检测各组Th17淋巴细胞比例,ELISA检测培养上清中IL-17的含量.结果 体外成功培养、鉴定脂肪干细胞.与对照组相比,两个与第3代(P3)ADSCs共培养组Th17比例及IL-17浓度下降,而与第8代ADSCs共培养组却出现相反结果;直接共培养组比Transwell隔离共培养组Th17比例及IL-17浓度低(P＜0.05).结论 低代数ADSCs可下调活动期SLE患者外周血Th17细胞比例,抑制其分泌IL-17,而高代数的ADSCs具相反作用.ADSCs对Th17的抑制作用与细胞间接触抑制有关.     

Th17细胞及相关细胞因子在自身免疫病中的研究

免疫系统异常是导致自身免疫病病情发生、进展和预后的关键.CD4+T细胞作为效应T细胞的重要成分,参与免疫应答的各个阶段,在免疫调节中发挥关键作用.传统上将CD4+辅助性T细胞分为Th1和Th2.然而,近2年来辅助性T17细胞(Th17)的重大发现进一步深化和更新了免疫调节理论的认知,现将相关研究综述如下.……     

17-AAG聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新型17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin poly-butylcyanoacrylate nanoparticles,17-AAG-PBCA-NPs)。方法采用界面聚合法制备17-AAG-PBCA-NPs;采用正交实验筛选最优处方;采用纳米粒度仪、透射电镜、扫描电镜对17-AAG-PBCA-NPs进行表征和鉴定;采用动态透析法测定体外释放药物情况;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察17-AAG-PBCA-NPs对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;以荷S180小鼠为模型,考察17-AAG-PBCA-NPs的抗肿瘤活性。结果界面聚合法制备的17-AAG-PBCA-NPs包封率大于90%,粒径为(180.5±12.0)nm,Zata电位为(-28.38±0.81)m V,表面形态规则均匀;17-AAGPBCA-NPs呈时间依赖性地抑制肿瘤细胞株增生,动物实验表明,17-AAG-PBCA-NPs抗肿瘤活性比17-AAG强,毒性比17-AAG低。结论采用界面聚合法可制备得到17-AAG-PBCA-NPs,制备方法简单、重现性好、包封率高,并显示了较好的抗肿瘤活性。     

Th17细胞相关细胞因子的研究进展

2005年,以分泌白细胞介素17(IL-17)为特征的辅助T细胞Th17细胞被认为是一种独特的Th细胞亚群,改变了人们对Th细胞的传统分类认识。Th17细胞参与炎症、自身免疫性疾病、肿瘤等很多疾病的发病过程中,细胞因子在Th17的生物学功能中起到重要作用。Th17的活化需要转化生长因子β、IL-6、IL-23等多种细胞因子参与,活化的Th17细胞进一步促进细胞因子分泌,Th17主要通过分泌IL-17、IL-21、IL-22、IL-26等细胞因子导致炎症和疾病发生。通过学习Th17相关细胞因子有助于进一步理解Th17的分化过程和致病机制。     

细胞因子 IL-17A 与免疫性血小板减少症发病关系的初步研究

目的 通过观察免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血中辅助性 T（Th）细胞相关细胞因子水平的变化,探讨其与 ITP 发病的关系。 方法 应用微量样本多重蛋白定量技术（CBA）检测和比较 35 例慢性 ITP 患者和 30 例健康体检者（正常对照组）外周 血中 IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ 和 IL-17A 的水平。 结果 ITP 患者外周血 IL-17A 水平较正常对照组显著升高,两组 IL-17A 的水平 分别为（6.767±1.066）pg/ml 和（1.679±0.253）pg/ml,比较有统计学差异（P＜0.01）;而患者外周血 IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ 水平与 正常对照组相比均无统计学差异（均 P ＞0.05）。血小板计数≥20×109/L 的患者外周血 IL-17A 水平为（8.217±1.477）pg/ml,血小板 计数＜20×109/L 的患者外周血 IL-17A 水平为（5.238±1.490）pg/ml,两者间比较无统计学差异（P ＞0.05）。 结论 慢性 ITP 患者 外周血 IL-17A 水平异常升高,提示 Th17 细胞和 IL-17A 可能在 ITP 的发生、发展中发挥重要的作用。     

急性胰腺炎患者血清Th17相关因子IL-17、IL-6与TNF-α水平变化及意义

目的：探讨血清Th17相关因子IL-17、IL-6和TNF-α水平在急性胰腺炎患者中的变化及意义。方法：应用ELISA法检测19例重症急性胰腺炎（SAP）、28例轻型急性胰腺炎（MAP）及21例正常对照者血清IL-17、IL-6和TNF-α水平。结果：SAP、MAP两组患者血清中IL-17、IL-6、TNF-α水平显著高于正常对照组,且SAP组高于MAP组,差异有统计学意义（P〈0．01）。血清IL-17水平与IL-6、TNF-α水平呈显著正相关（r=0．51,P〈0．01;r==0．46,P〈0．01）,血清IL-6与TNF-α水平呈显著正相关（r==0．55,P〈0．01）。结论：Th17功能亢进可能促进了急性胰腺炎的发生与恶化。     

Th17与自身免疫病

Th17是最近发现的CD4 效应T细胞的新亚群.初始T细胞在TGF-β和IL-6的共同作用下分化发育成为Th17细胞.在其分化发育过程中,RORγt是Th17细胞的特异性转录因子.分化成熟的Th17可以分泌IL-17,IL-21,IL-22等多种细胞因子,其中IL-17在多种自身免疫疾病和炎性疾病中起关键作用.使用抗IL-17的抗体或抑制Th17细胞的分化,可以有效减轻疾病的症状.Th17细胞的发现为自身免疫性疾病和与其相关的炎性疾病的发病机制及防治对策开辟了新的研究思路和方向.     

过敏性哮喘患者中白细胞介素-17表达水平的变化及临床意义

目的:通过检测外周血白细胞介素(II)-17水平,探讨过敏性哮喘患者与健康人之间以及疾病不同严重程度之间II17表达水平的差异.方法:采用ELISA方法检测过敏性哮喘患者血浆中以及外周血单个核细胞(PB-MCs)培养上清液中IL-17的水平,并分析该促炎细胞因子与疾病不同严重程度之间的相关性.结果:过敏性哮喘患者血浆中...     

细胞因子诱导的人脐血CD4 T细胞Th17极化态的建立

目的建立一个合理的CD4T细胞极化的体外细胞培养方法,研究细胞因子刺激的人脐血CD4T细胞极化时产生IL-17的效应/记忆T细胞（Th17细胞）的表达。方法用TGF-β、抗IL-4、抗IFN-γ、IL-6、IL-1β活化幼稚脐血CD4T细胞,促成Th17细胞表型,IL-23具有维护功能。用流式细胞术分析在Th17极化态和Th0非极化态时CD4T细胞上IL-17和IFN-γ的表达,同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞培养上清液中IL-17和IFN-γ的水平。结果IL-17＋IFN-γ-（Th17）细胞比例在Th17极化态时为（28±2.3）%,非极化态时为（3.2±0.4）%;培养上清液中分泌的IL-17浓度在Th17极化态时为（7350±1530）pg/ml,非极化态时为（218±32）pg/ml,两项指标在Th17极化态时都显著高于非极化态时,差异均有高度统计学意义（P〈0.001）。结论多种细胞因子刺激的CD4T细胞极化时促进了IL-17产物的表达,体外Th17极化态的建立为研究IL-17相关的免疫性疾病提供了一个平台。