体外培养人牙周膜成纤维细胞及其成骨表型特征检测

目的　探讨牙周膜成纤维细胞作为牙周组织工程种子细胞的可行性。方法　采用酶消化法体外培养人牙周膜成纤维细胞 ,以人胎儿皮肤成纤维细胞为对照检测细胞碱性磷酸酶表达及矿化能力。结果　体外培养人牙周膜成纤维细胞与人胎儿皮肤成纤维细胞相比表达更高水平的碱性磷酸酶 (P <0 .0 5 ) ,矿化诱导液连续培养 30d均可观察到矿化结节形成。结论　采用酶消化法可快速简便地获取原代人牙周膜成纤维细胞。体外培养牙周膜成纤维细胞具有成骨样细胞表型特征 ,与人胎儿皮肤成纤维细胞相比更具分化潜能 ,可作为牙周组织工程种子细胞来源     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400 μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200 μmol/L及400 μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。     

糖基化终产物对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨糖基化终产物在糖尿病牙周病形成中的作用。方法：原代培养牙周膜成纤维细胞,将糖基化终产物修饰的人血清白蛋白及未修饰人血清白蛋白与牙周膜成纤维细胞在体外共同培养,MTT法测定细胞增殖,用碱性磷酸酶测定法测定ALP。结果：糖基化终产物修饰的人血清白蛋白能以浓度依赖的方式抑制牙周膜细胞的增殖（p〈0.05）,而未修饰人血清白蛋白可使细胞增殖,但两种白蛋白均不诱导ALP的表达。结论：糖基化终产物可通过抑制牙周膜成纤维细胞的增殖,降低糖尿病病人牙周组织对损伤的修复能力,导致牙周病。     

转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子．晶和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养，对照组采用含小牛血清的DMEM培养液，实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入，通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后，人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖，而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显（P〈0．05）。结论转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

乳铁蛋白对人牙周膜细胞增殖迁移分化的影响

目的：观察乳铁蛋白（lactoferrin,LF）对体外培养的人牙周膜细胞（HPDLCs）增殖、迁移和成骨分化的影响。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,稳定传代后用 MTT 比色法、Transwell 法及划痕试验检测浓度分别为0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白对牙周膜细胞增殖和迁移的影响;矿化条件下,0、10、20μg／ml 的乳铁蛋白作用牙周膜细胞后,茜素红染色法和实时荧光定量 PCR 检测矿化能力及成骨相关基因的表达。结果：10、20μg／ml 乳铁蛋白均能促进 HPDLCs 增殖、迁移（P ＜0．05）。10、20μg／ml 乳铁蛋白组矿化结节数量增多（P ＜0．05）,碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）、骨桥蛋白（OPN）表达量均有升高（P ＜0．05）。结论：乳铁蛋白能够促进人牙周膜细胞增殖、迁移与成骨分化。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

苯妥英钠对人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的实验研究

目的研究苯妥英钠（PHT）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）生物学功能的影响,并探讨其用于促进牙周组织再生的可能性。方法将不同质量浓度的PHT（1、5、20、100、500、2 500 mg/L）加入体外培养的第4代hPDLF,检测其对细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶（ALP）活性的影响;Von Kossa染色法检测PHT（20、100、500 mg/L）对第4代hPDLF矿化结节形成能力的影响;应用ELISA法测定PHT（20、100 mg/L）对第3代hPDLF中骨形态发生蛋白- 2（BMP- 2）表达的影响。结果在20、100 mg/L的质量浓度时,PHT可显著促进hPDLF的增殖及分化（P<0.01）;在质量浓度100 mg/L时,PHT可增强hPDLF的蛋白合成（P<0.05）;同时,PHT在质量浓度100 mg/L可显著促进hPDLF的矿化能力及BMP- 2的表达（P<0.01）。但高质量浓度（2 500 mg/L）的PHT则严重抑制细胞的生物学活性。结论适当质量浓度的PHT对hPDLF的增殖和分化有促进作用,但过高质量浓度的PHT具有细胞毒性,不利于牙周组织的修复和再生。     

贫血小板血浆和根面脱矿对人牙周膜成纤维细胞在病变牙根面附着和增殖的影响

目的：观察贫血小板血浆和根面脱矿单独及联合应用对人牙周膜成纤维细胞在病变牙根面的附着及增殖的影响,探讨PPP和根面脱矿处理在促牙周组织再生中的可能作用。方法：实验分4组,经PPP、EDTA和两者联合处理的病变根片的3组作为实验组,未处理的病变根片作对照组。分别通过细胞计数法、四唑盐比色法[MTT]和扫描电镜检测人牙周膜成纤维细胞在不同处理病变牙根表面的附着、增殖和形态。结果：与未处理组相比,PPP组及根面脱矿组均能促进人牙周膜成纤维细胞对病变根面的附着（P〈0.05）,二者联合处理促细胞附着效果明显增强（P〈0.01）;未处理组中人牙周膜成纤维细胞体外培养48h与培养24h相比,细胞在病变根片上的无增殖（P〈0.05）;单独PPP或脱矿处理组中人牙周膜成纤维细胞体外培养48h与培养24h相比,细胞在病变根片上的附着及增殖增加,但无统计学意义,PPP和根面脱矿联合处理组中细胞在病变根片上的附着及增殖明显增加（P〈0.05）。结论：PPP能牢固地附着于病变根面,PPP和根面脱矿单独和联合处理病变根片能明显加强人牙周膜成纤维细胞的附着和增殖,而PPP和根面脱矿联合处理还有显著的促细胞增值效应。     

TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的 研究转化生长因子β（TGFβ）和重组人骨形成蛋白2（rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性，骨钙素（OC）合成及矿化结节形成的作用。结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖，对ALP活性，OC合成和矿化结节形成无明显影响；rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用。却显著提高其ALP活性，刺激OC合成和矿化结节形成；两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间；先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响；先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用。结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型，TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用。两者可能在促进HPDLFs向成骨细胞表型分化的不同阶段发挥作用。     

辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:评价辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用组织块法进行人牙周膜成纤维细胞的分离培养。在培养液中加入不同浓度的辛伐他汀,分为对照组(0 mol/L)和5个实验组(10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L),检测各组细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性。通过矿化结节茜素红染色和RT-PCR,评价辛伐他汀对细胞成骨能力和成骨相关基因表达的影响。结果:辛伐他汀浓度为10-7mol/L时,细胞增殖能力显著提高(P﹤0.05)。辛伐他汀浓度为10-8、10-7、10-6和10-5mol/L时,细胞碱性磷酸酶活性均有显著增强(P﹤0.05),其中,10-7mol/L组增强作用最明显。茜素红染色显示,10-7mol/L辛伐他汀能促进细胞矿化结节形成;RT-PCR结果表明,辛伐他汀促进细胞碱性磷酸酶和骨形成蛋白-2基因表达呈时间依赖性增高。结论:10-7mol/L的辛伐他汀不仅有利于人牙周膜成纤维细胞增殖,而且促进其成骨分化和相关基因的表达。     

静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响。方法用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性。结果流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)%、(49.89±0.75)%、(55.77±1.57)%,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)%。MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04。结论适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖。     

The biological effects of transforming growth factor-beta on human periodontal ligament fibroblasts]

OBJECTIVE: To evaluate the biological effects of transforming growth factor-beta (TGF-beta) on human periodontal ligament fibroblasts (HPDLFs). METHODS: HPDLFs were primary cultured and examined for the effects of TGF-beta on its proliferation, alkaline phosphatase (ALP) activity, osteocalcin (OC) synthesis and formation of the mineralized nodules. RESULTS: TGF-beta(0.0050-0.1000 mg/L) significantly stimulated the proliferation of HPDLFs. The ALP activity of HPDLFs was elevated evidently by 0.0050 mg/L TGF-beta. TGF-beta (0.0005-0.1000 mg/L) had no effects on OC synthesis and formation of the mineralized nodules of HPDLFs. CONCLUSIONS: The effects of TGF-beta on HPDLFs are dose-dependent. TGF-beta can stimulate HPDLFs to express some of osteoblastic phenotype, and it lacks the abilility to promote maturation of the osteogenic phenotype.     

转化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 研究转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β,ＴＧＦ－β）对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＤＬＦｓ）的生物学作用。方法 原代培养ＨＰＤＬＦｓ,并观察ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的增殖、碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ,ＯＣ）合成及矿化结节形成的作用。结果 ０．００５０～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可明显刺激ＨＰＤＬＦｓ的增殖,０．００５０ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可显著提高ＨＰＤＬＦｓ的ＡＬＰ活性,０．０００５～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ合成ＯＣ和矿化结节的形成无明显影响。结论 ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的作用呈剂量依赖性。ＴＧＦ－     

BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬牙周膜细胞增殖及矿化结节形成能力的影响

目的：联合应用BMP-2、bFGF和Dex诱导牙周膜细胞（PDLCs）,观察其成骨分化能力.方法：体外培养犬PDLCs,将第4代PDLCs进行分组：（1）对照组增加矿化诱导液组（2）bFGF＋Dex组、（3）BMP-2＋bFGF组、（4）加BMP-2＋Dex组、（5）bFGF＋BMP-2＋ Dex组.MTT法观察BMP-2、bFGF和Dex联合应用对犬PDLCs增殖的影响;成骨分化实验观察BMP-2、bFGF、Dex联合应用对犬PDLCs分化的影响.结果：（1）PDLCs细胞呈典型的成纤维细胞样形态：长梭形、纺锤形、三角形等多形性.波形丝蛋白表达阳性,角蛋白表达阴性.（2）MTT增殖实验显示：bFGF＋Dex、BMP-2＋bFGF、BMP-2＋Dex、bFGF＋BMP-2＋Dex组均促进犬PDLCs增殖,但各诱导组间无明显差异.（3）成骨诱导实验检测结果：bFGF＋BMP-2＋Dex组矿化结节染色深、面积较大、细胞密集而集中.结论：三种诱导因子两两结合均能增强犬PDLCs矿化结节形成能力,但三种因子联合应用成骨能力最强（P＜0.05）.     

三七总皂苷对兔BMSCs的成骨分化及TGF-β1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对兔骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化及TGF-β1在基因水平表达变化的影响。方法:体外分离培养兔BMSCs,观察不同浓度PNS(50、100、200 mg/L)对兔BMSCs的影响,采用MTT法检测细胞增殖,茜素红染色观察钙结节形成,qRT-PCR检测TGF-β1表达水平。结果:各浓度PNS培养下的细胞增殖无明显差异(P>0.05);100、200 mg/L PNS组的钙结节数量和TGF-β1的表达水平均高于阴性组(P<0.05)。结论:PNS可促进兔BMSCs的成骨分化并刺激其分泌TGF-β1,但无明显促细胞增殖作用。     

甲状旁腺相关蛋白对鼠胚髁突软骨细胞增殖和分化的调控

目的 探讨甲状旁腺相关蛋白（PTHrP）对鼠胚髁突软骨细胞增殖和分化的影响。方法 在体外分离培养鼠胚髁突软骨细胞的基础上,观察PTHrP对其软骨结节形成、碱性磷酸酶（ALP）活性等的影响。结果 研究发现加入浓度分别为0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L的PTHrP后,0.01 nmol/L组与对照组相比,形成的软骨结节数量在统计学上无显著性差异（P>0.05）,而软骨结节数量从0.1 nmol/L组开始与对照组相比明显增加,统计学上
有显著性差异（P<0.05）。而ALP活性在0.1-10 nmol/L组与对照组相比明显升高,统计学上有显著性差异（P<0.05）。阻断其受体后,实验组和对照组软骨结节形成的数目明显减少（P<0.05）,而对其ALP活性的影响在实验组和对照组之间无显著性差异（P>0.05）。结论 PTHrP通过其受体具有促进髁突软骨细胞增殖和分化的作用,其调控机制与其在生长板软骨细胞及下颌膜内成骨中的作用相似。     

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目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。     

小檗碱对牙髓干细胞MAPK/ERK信号通路及成牙本质向分化的影响研究

目的 探讨小檗碱对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响.方法 采用酶消化法提取DPSCs,将培养鉴定的DPSCs传代培养至第3～5代,用于以下实验.实验分为对照组(正常培养DPSCs)、矿化...