反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒的研究

研究反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的方法。方法以重组丙型肝炎病毒（ｐＣＤ－ＨＣＶ）转染的Ｈ９细胞为对象，通过半定量逆转录聚合酶链反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ检测ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达的变化，观察与ＨＣＶ结构区（包括ＡＵＧ）互补和同源以及随机的硫代磷酸化寡核苷酸（ＰＳ－ＡＳＯＮ、ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ）对ＨＣＶ的抑制作用。结果ＰＳ－ＡＳＯＮ和ＰＳ－ＯＤＮ可有效地进入靶细胞并在体外与靶基因杂交结合，终浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ的ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ对ＨＣＶ均无抑制作用，但ＰＳ－ＡＳＯＮ可明显降低ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达水平，具有药物浓度和时间依赖效应，脂质体修饰可增强ＰＳ－ＡＳＯＮ的反义抑制作用，磷酸钙修饰却无此作用。结论与ＨＣＶ互补的ＰＳ－ＡＳＯＮ是ＨＣＶ的反义寡核苷酸，在翻译水平上具有反义抑制作用。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白基因在减毒伤寒杆菌诱导株中的表达

目的 用含ＰＬｔｅｔＯ启动子的ｐＺＥ１１质粒在减毒伤寒杆菌ＣＶＤ９０８疫苗株中表达恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白。方法 将克隆有恶性疟原虫裂殖子表面蛋白Ｃ末端基因（ＭＳＰ１－４２）的重组ｐＺＥ１１质粒用电穿孔转化法转化入减毒伤寒杆菌ＣＶＤ９０８／ｔｅｔＲ疫苗株中,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹反应和免疫荧光反应检测ＭＳＰ１－４２在ＣＶＤ９０８／ｔｅｔＲ株中的体内外四环素诱导表达。结果 构建了ＣＶＤ０８     

应用PCR—SSCP方法初步分析人微小病毒B19基因变异

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法初步了从华南地区收集的３份畸胎组织标本人微小病毒Ｂ１９分离株，其意泳图谱与国外参数株相同，提示两者衣壳蛋白ＶＰ１编码区的基因结构可能无差异。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

血浆一氧化氮,过氧化脂质和抗氧化物含是与肾功能相关关系的探讨

通过１１８例肾病患者和５０例健康人血浆一氧化氮、过氧化脂质、和抗氧化物：ＰＵ－ＳＯＤ、Ｐ－β－ＣＡＲ、Ｐ－ＶｉｔＥ的含量的变化，结果发现肾功能Ｓｅｒ、ＢＵＮ越高，Ｐ－ＮＯ，Ｐ－ＬＰＯ含量越高，抗氧化物：ＰＵ－ＳＯＤ、Ｐ－β－ＣＡＲ、Ｐ－ＶｉｔＥ含量越低，与正常对照组相比均有显著性差异。     

Doppler超声时间指标评价高血压病、冠心病左室功能

采用Ｄｏｐｐｌｅｒ超声测量ＣＨＤ、ＨＤ、ＨＣＤ－ＣＨＤ及ｓ四组ＡＴ、ＥＴ、ＡＴ／ＥＴ、ＩＣＴ、ＰＥＰ／ＥＴ、ＰＥＰ、ＩＶＲＴ、ＡｃＴＥ、ＡｃＴＥ／ＭＶＯＴ，结果ＣＨＤ、ＨＤ、ＨＣＤ－ＣＨＤ三组ＩＶＲＴ明显升高（Ｐ＜０．０１），ＨＤ、ＣＨＤ与ＨＣＤＣＨＤ之ＩＶＲＴ差异有显著性（Ｐ＜０．０１），ＮＳ、ＣＨＤ、ＨＤ与ＨＣＤ－ＣＨＤ组ＰＥＰ／ＥＴ、ＩＣＴ、ＰＥＰ差异均有显著性（Ｐ＜０．０５），ＨＣＤ－ＣＨＤ组ＰＥＰ／ＥＴ、ＩＣＴ、ＰＥＰ值升高，ＮＳ、ＨＤ与ＣＨＤ、ＨＣＤ－ＣＨＤ、ＡＴ／ＥＴ差异有显著性（Ｐ＜０．０５），ＣＨＤ及ＨＣＤ－ＣＨＤ组ＡＴ／ＥＴ下降，ＨＲ、ＡＴ、ＥＴ、ＡＣＴＥ各组间差异均无显著性（Ｐ＞０．０５），Ｄｏｐｐｌｅｒ超声时间指标评价左室功能具有一定价值。     

PDGF—B基因的膜型表达产物促进血管平滑肌细胞增殖和胶原合成

考察ＰＤＧＦ－Ｂ基因的膜型表达产物对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增生、胶原合成的影响。制备供转导人ＰＤＧＦ－Ｂ基因的重组逆转录病毒，感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，受染ＮＩＨ３Ｔ３细胞经筛选、扩增后，制备细胞膜上表达产物ＰＤＧＦ－ＢＢ以观察其对ＶＳＭＣｓ生长的影响，并以３Ｈ－ＰｒｏＬｉｎｅ掺入率评估该重组蛋白对ＶＳＭＣｓ胶原合成的影响。结果：重组逆转录病毒介导ＰＤＧＦ－Ｂ基因转移并表达出具有生物学活性的重组ＰＤＧＦ－ＢＢ，免疫荧光细胞化学染色证实其表达；该膜型重组蛋白可促进ＶＳＭＣｓ增殖和胶原合成。     

重组人白介素10对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察重组人白介素１０（ｒｈＩＬ－１０）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法 离体培养大鼠胸主动脉 ＶＳＭＣ并分别接受不同浓度ｒｈＩＬ－１０、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）的刺激,采用ＭＴＳ／ＰＥＳ 法确定ＶＳＭＣ的增殖状态并与对照组比较。结果　与对照组相比,ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ均对ＶＳＭＣ增殖具有明显的刺 激作用（Ｐ＜０．０５）。单独应用ｒｈＩＬ－１０对血管平滑肌细胞生长没有影响。在ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ分别刺激下,ｒｈＩＬ－１０均可 抑制ＶＳＭＣ的生长（Ｐ<０．０５）。结论　ｒｈＩＬ－１０可抑制细胞因子和生长因子诱导的ＶＳＭＣ增殖。     

脑出血患者氧化与抗氧化状态的研究

目的探讨脑出血患者氧化与抗氧化系统功能状况及其临床意义。方法检测１３３例脑出血患者和１００例健康对照者血浆一氧化氮（Ｐ－ＮＯ）含量、血浆维生素Ｃ（Ｐ－ＶＣ）含量、血浆维生素Ｅ（Ｐ－ＶＥ）含量、血浆过氧化脂质（Ｐ－ＬＰＯ）含量、血浆超氧化物歧化酶（Ｐ－ＳＯＤ）活性、红细胞超氧化物歧化酶（Ｅ－ＳＯＤ）活性、红细胞过氧化脂质（Ｅ－ＬＰＯ）含量。结果与对照组比较，患者组的Ｐ－ＮＯ、Ｐ－ＬＰＯ、Ｅ－ＬＰＯ平均值均显著升高（Ｐ＜０．００１），Ｐ－ＶＣ、Ｐ－ＶＥ、Ｐ－ＳＯＤ、Ｅ－ＳＯＤ平均值均显著降低（Ｐ＜０．００１），逐步回归分析发现，患者临床神经功能缺失程度积分与Ｐ－ＮＯ、Ｐ－ＶＣ、Ｅ－ＬＰＯ值相关最为密切，而颅内血肿量却与Ｐ－ＮＯ、Ｐ－ＶＥ、Ｅ－ＬＰＯ值相关最为密切。结论脑出血患者体内氧化抗氧化平衡严重失调，且这一病理改变在脑出血后继发性脑损害的形成过程中起着重要的作用。     

抗HSV－1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７～１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＬｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ｇ）、ＩｇＧ＿３，腹水抗体效价在１０￣（－５）～１０￣（－７）之间免疫沉淀。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３株与１２０～１２８Ｋ多肽，２株与６０Ｋ多肽发生特异性反应，具有ＨＳＶ型共同抗原特异性。７株ＭｃＡｂ与ＣＭＶ均不发生特异反应。这些杂交瘤细胞系的建立对于ＨＳＶ的临床早期、快速诊断有重要的应用价值。     

癫痫患者血浆和脑脊液中β-EP、DynA、NT、AVP和SS含量的研究

目的测定癫痫患者血浆和脑脊液中β－ＥＰ、ＤｙｎＡ、ＮＴ、ＡＶＰ和ＳＳ的水平，以探讨这些物质在癫痫患者的变化及临床意义。方法癫痫患者４０例，均符合临床诊断，另选无癫痫者作对照。全部研究对象均于确诊后按要求收集血浆和脑脊液（ＣＳＦ）标本，用放射免疫法测定β－ＥＰ、ＤｙｎＡ、ＮＴ、ＡＶＰ和ＳＳ水平。结果与对照比较，癫痫患者血浆和ＣＳＦ中β－ＥＰ，ＤｙｎＡ和ＮＴ升高（Ｐ＜０．０５），而ＡＶＰ和ＳＳ降低（Ｐ＜０．０１）。β－ＥＰ和ＤｙｎＡ升高与癫痫患者中枢神经系统（ＣＮＳ）损伤程度呈正相关（Ｐ＜０．０５），而ＡＶＰ和ＳＳ降低则与癫痫后智力低下相关（Ｐ＜０．０５）。结论提示癫痫患者血浆和脑脊液中β－Ｅｐ、ＤｙｎＡ、ＮＴ、ＡＶＰ和ＳＳ可以发生改变，测定这些物质对研究癫痫患者的临床有一定参考价值。     

大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶I基因在非肝细胞中的表达

氨甲酰磷酸合成酶Ｉ（ＣＰＳＩ）ｃＤＮＡ全序列基因片段与ｐＳＶ２载体的重组及重组质粒ｐＳＶ２－ＣＰＳｃｆ在７４０２人肝癌细胞、ＣＨＯ细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中的表达结果表明，ｐＳＶ２－ＣＰＳｃｆ转染的以上３株细胞均可稳定、高效地表达ＣＰＳＩ。通过核Ｒｕｎ－ｏｆｆ转录活性的检测和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实，表达的ＣＰＳＩ转录产物结构完整。提示ＣＰＳＩ肝组织特异表达主要与转录改变有关。     

抗HSV—1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７￣１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３，腹水抗体效价在１０＾－５￣１０＾－７之间免疫沉淀。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３     

神经系统疾病患者血清和脑脊液髓鞘碱性蛋白及其抗体的ELISA定量研究

用简易的髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）及其抗体（Ａｎｔｉ－ＭＢＰ）酶联免疫吸附定量测定（ＥＬＩＳＡ）法对６组共３３７例神经系统疾病患者进行检测，其中脊髓压迫症（ＣＭＰ）３６例，多发性硬化（ＭＳ）３３例，脑血管疾病（ＣＶＤ）３４例，中枢神经系统感染性疾病（ＩＤ）３１例，癫痫（ＥＰ）１６１例和其他神经系统疾病（ＯＮＤ）４２例。结果显示：ＣＭＰ、ＭＳ．ＣＶＤ、ＩＤ和ＥＰ５组血清ＭＢＰ均值明显高于ＯＮＤ组（Ｐ＜０．０１），其中又以急性外伤所致脊柱骨折伴截瘫为主（３３例）的ＣＭＰ患者血清ＭＢＰ值最高，与ＭＳ组比较Ｐ＜０．０５，与ＣＶＤ、ＩＤ和ＥＰ组比较Ｐ＜０．０１。ＣＶＤ患者ＣＳＦＭＢＰ均值也明显高于ＯＮＤ组（Ｐ＜０．０５）。本法检测６组血清和ＣＳＦ的Ａｎｔｉ－ＭＢＰ含量差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

恶性疟原虫不同虫株间环子孢子蛋白基因多态性分析

本文采用ＰＣＲ方法扩增了恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白（ＣＳＰ）部分基因，将扩增的基因片断克隆于Ｍ１３测序载体进行了基因序列测定。用ＰＣＧＥＮＥ软件对恶性疟原虫不同虫株ＣＳＰ基因序列进行了一系列比较分析。其结果表明恶性疟原虫虫株间ＣＳＰ基因存在多态性，ＰＦＤ－３／ＹＮ株ＣＳＰ基因序列与Ｔ４、Ｗｅｌｃｏｍｅ、ＮＦ５４、３Ｄ７及７Ｇ８等虫株均有不同程度的差异。     

胃癌耐药细胞株耐药谱的体外实验

观察胃癌细胞与抗肿瘤药作用后对不同药物耐的耐受情况，方法：胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１在体外分别与长春新碱（ＶＣＲ），５氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿霉素（ＡＤＭ）及氨甲喋呤（ＭＴＸ）作用，获得ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，ＳＧＣ７９０１／ＡＤＭ，ＳＧＣ７９０１／５－Ｆｕ及ＳＧＣ７９０１／ＭＴＸ４个耐药细胞株。体外细胞毒性实验观察它们对ＶＣＲ，ＡＤＭ，５－Ｆｕ，ＭＴＸ，顺铂（ＣＤＤＰ）以及丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）的敏     

MVP和P—MVP方案治疗晚期非小细胞肺癌的效果

①目的 探讨ＭＶＰ和Ｐ－ＭＶＰ方案对晚期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的效果及免疫功 能的影响。②方法选择４２例晚期ＮＳＣＬＣ分别进行ＭＶＰ及Ｐ－ＭＶＰ方案各３周期的化疗、不良反应及免疫学指标、ＡgＮＯＲs变化。③结果ＭＶＰ组有效率４０．０％,Ｐ－ＭＶＰ组５４．５％,两组比较差异无显著性（χ＾２＝０．８９８,Ｐ＞０．０５）;ＮＳＣＬＣ病人的ＣＤ３,ＣＤ４,ＣＳ４/ＣＤ８均低于对照组（t＝２．０８２～３．２７     

CR3的Ⅰ结构域的克隆和在CHO细胞中的表达及配体结合特性的研究

研究白细胞整体合素ＣＲ３α亚基的Ⅰ结构域在配体结合中的作用。方法克隆ＣＤ１１ｂ的Ⅰ结构域，用重叠ＰＣＲ的方法将其与信号肽ＤＮＡ连接，克隆到表达载体ＰＥＥ６ＨＣＭＶ．ＧＳ，转化ＣＨＯ－Ｋ１细胞。表达的Ⅰ－结构域经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ｍｏｎｏ－Ｓ柱纯化后，与Ｃ３ｂｉ进行配体结构实验。结果用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得重组的Ⅰ结构域分子量为２９ＫＤ。重组的Ⅰ结构域可以与Ｃ３ｂｉ结合，Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（Ｃ３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的二株ＭｃＡｂ。此二株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＶＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。     

中国人丙型肝炎病毒囊膜蛋白2HVR1 cDNA的序列分析

目的：了解中国ＨＣＶ流行株高变区１（ＨＶＲ１）的特点。方法：对来自山东（ＳＤ）、上海（ＳＨ）两地患者血清ＲＮＡ进行逆转录－巢式ＰＣＲ，扩增ＨＣＶ囊膜蛋白２基因片段，用ＰＣＲ直接测序法对该片段进行序列测定。结果：（１）扩增片段（命名为Ｐ３８８）对应于日本ＨＣＶ－Ｊ株序列核苷酸１４３９￣１８２６位（氨基酸位３７１￣４９８）；（２）中国人ＨＣＶ ＨＶＲ１位于氨基酸位３８４￣４１０，与发表的ＨＣＶⅡ型ＨＶ