K~+对三链DNA形成的影响

用电泳迁移分析方法及DNaseⅠ足迹实验研究了脱氧寡核苷酸与乙肝病毒（HBV）核衣壳启动子（Cp）片段形成三链DNA中的K~＋效应。K~＋对三链DNA形成的抑制作用大小取决于不同的脱氧寡核苷酸。碱基的错配可使K~＋的抑制作用显著增强，提示K~＋的效应强弱可能与三链结构中碱基准积的连续程度有关。因此反应体系中K~＋的存在能提高三链DNA形成的特异性。     

靶序列三链DNA对质粒pBR322的Amp^r基因表达的抑制

利用ＣａＣｌ２法成功地将寡核苷酸导入大肠杆菌ＪＭ１０９细胞。质粒ｐＢＲ３２２转化结果表明,寡革酸片段５’－ＡＧＣＧＧＧＡＡＴＡＡＧＧＧＡＡ－３’在转化前（或后）与靶序列结合均能抑制β－内酰胺酶基因的表达,细菌生长受到抑制。体外聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,该片段能与靶序列形成三链结构。这些结果表明多聚嘌呤寡核苷酸是通过与靶序列形成三链ＤＮＡ来抑制β－内酰胺酶基因的表达。     

端粒DNA形成鸟嘌呤四链体结构

【目的】 在体外观察K^＋、Na^＋对富含端粒重复序列寡核苷酸二级结构的影响。【方法】在K^＋、Na^＋存在下，利用核磁共振光谱仪观察含端粒重复序列的核苷酸d（TTAGGGT）光谱的变化；利用非变性凝胶电泳观察d（ITAGGG）3、d（TTAGGG）4和d（TTAGGG），迁移速度的变化。【结果】在含K^＋或Na^＋缓冲液中，d（TTAGGGT）在化学移位δ11～12区域内出现代表有鸟嘌呤四分体形成的波峰；K^＋比Na^＋具有更强的稳定四链体能力。K^＋、Na^＋均可加速d（TFAGGG）4、d（TTAGGG），在凝胶中迁移速度。【结论】在体外K^＋、Na^＋可诱导含端粒重复序列的核苷酸形成鸟嘌呤四链体结构。     

PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤生长及细胞周期的影响

目的:观察血小板衍生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸(triplex formingoligonucleotide,TFO)对大鼠胶质瘤细胞生长及细胞周期的影响.方法:所有SD大鼠(36只,体质量220～250 g)均在右尾状核区微量灌注1×106个C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ组和Ⅱ组(n=12)在细胞接种后的第8天开始分别原位注射TFO 1.5mg/20μl和3.0 mg/20 μl的生理盐水,以后每隔72 h注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组(n=12)在相同时间原位注射20μl生理盐水.实验3周时处死所有的大鼠,观察肿瘤的生长情况,标本做常规H E染色.流式细胞仪检测肿瘤PDGF-B、PCNA的表达及细胞周期.结果:实验Ⅰ组、Ⅱ组的成瘤抑制率分别为66.1%、91.8%,两者相比有显著差异(P＜0.01).TFO对胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达有明显的抑制作用(P＜0.01);TFO能明显降低胶质瘤细胞G2-M期和S期(DNA合成期)的百分率,阻止细胞由静止期(G0-G1期)进入DNA合成期(S期,P＜0.01).以上作用均存在浓度依赖性.结论:原位应用TFO能抑制PDGF-B表达,阻碍细胞进入S期,使胶质瘤细胞增殖降低,达到抗胶质瘤生长的作用.     

端粒DNA形成鸟嘌呤四链体结构

 【目的】 在体外观察K^＋、Na^＋对富含端粒重复序列寡核苷酸二级结构的影响。【方法】在K^＋、Na^＋存在下，利用核磁共振光谱仪观察含端粒重复序列的核苷酸d（TTAGGGT）光谱的变化；利用非变性凝胶电泳观察d（ITAGGG）3、d（TTAGGG）4和d（TTAGGG），迁移速度的变化。【结果】在含K^＋或Na^＋缓冲液中，d（TTAGGGT）在化学移位δ11～12区域内出现代表有鸟嘌呤四分体形成的波峰；K^＋比Na^＋具有更强的稳定四链体能力。K^＋、Na^＋均可加速d（TFAGGG）4、d（TTAGGG），在凝胶中迁移速度。【结论】在体外K^＋、Na^＋可诱导含端粒重复序列的核苷酸形成鸟嘌呤四链体结构。     

严重烧伤对豚鼠心肌细胞内K^＋浓度的影响

目的：探讨严重烧伤早期心泵功能降低的机理。方法；用自制Ｋ＾＋－ＩＳＭＥ检测正常及３５％体表Ⅲ度烧伤后１，３，８，２４ｈ豚鼠心肌细胞内Ｋ＾＋浓度的变化，结果：严重烧伤早期心肌细胞对Ｋ＾＋浓度降低，结论；烧伤后心肌细胞内Ｋ＾＋浓度降低是静息电位和动作电位幅值降低的直接原因，也是导致心脏收缩及舒张功能降低的主要因素之一。     

~(125)碘标记三链形成寡核苷酸对肝癌细胞中病毒复制和细胞生长的抑制作用

目的 探讨~(125)碘(I)标记三链形成寡核苷酸(TFO)与乙型肝炎病毒(HBV)DNA的特异性结合能力及其对肝癌细胞HepG 2.2.15中病毒复制及细胞生长的抑制作用.方法 合成能与HBV前S基因特异结合的TFO,并以~(125)I标记.将HepG 2.2.15细胞分别与~(125)I-TFO实验组(125I-TFO组)、等量TFO对照组(TFO组)、相同放射性活度的钠~(125)碘(Na~(125)I)组和空白对照组共同培养,荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞培养液中HBV DNA拷贝量变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染后各组细胞的存活率.结果 RT-PCR显示转染48 h后,4组间病毒拷贝数量的差异有统计学意义(P<0.01),~(125)I-TFO组对病毒复制的抑制作用显著强于空白对照组(P<0.01)、~(125)I对照组(P<0.01)和TFO组(P<0.01);TFO组的抑制病毒复制作用显著强于空白对照组(P(0.05).转染24、48、72 h,~(125)I-TFO组对HepG 2.2.15细胞的生长抑制作用显著高于其他3组(P值均<0.01),并随时间的增加~(125)I-TFO对细胞生长的抑制作用呈线性上升趋势.结论 ~(125)I-TF0可有效地抑制肝癌细胞中HBV的复制及肝癌细胞的生长,为今后制备抗HBV、抗HBV相关肝细胞癌的放射性基因治疗药物奠定了基础.     

联合VEGF反义寡核苷酸和PDGF三链形成寡核苷酸抑制大鼠脑胶质瘤生长

目的:观察血小板源生长因子(PDGF) B链基因(PDGF-B)的三链形成寡核苷酸(triplex forming oligonucleotide,TFO)PDGF-TFO和血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AON)VEGF-AON对大鼠脑胶质瘤生长的抑制作用.方法:36只雄性SD大鼠,分为4组,所有大鼠均在立体定向导引下行右尾状核区微量灌注含1×106 C6胶质瘤细胞的生理盐水20 μl.在细胞接种后第8天,实验Ⅰ组6只大鼠原位注射含PDGF-TFO 1.5 mg的 20 μl生理盐水,实验Ⅱ组12只和实验Ⅲ组12只大鼠则分别原位注射含PDGF-TFO 1.5 mg VEGF-AON 0.125 mg和PDGF-TFO 1.5 mg VEGF-AON 0.25 mg的20 μl生理盐水.以后每隔72 h原位注射相同剂量的药物1次,共注射3次.对照组6只大鼠仅在相同时间原位注射20 μl生理盐水.实验3周时处死所有大鼠,观察肿瘤的生长情况,定性和定量观察肿瘤PDGF-B、VEGF和肿瘤核增殖抗原(PCNA)表达.结果:实验Ⅰ组的成瘤抑制率为53.1 %,实验Ⅱ组为81.4 %,实验Ⅲ组为93.1 %,3组比较有明显差异(P<0.01).PDGF-TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B、VEGF、PCNA表达有明显的抑制作用;联合应用PDGF-TFO和VEGF-AON能更好地抑制PDGF-B、VEGF、PCNA表达.结论:联合应用PDGF-TFO和VEGF-AON 比单用PFGF-TFO能更有效地抑制肿瘤生长.     

氯胺酮对大鼠大脑皮层和丘脑突触体Na^＋K^＋—ATP酶活性的影响

目的动态观察氯胺酮对大鼠大脑皮层和丘脑Na+,K+-ATP酶活性的影响.方法SD大鼠32只,随机分为对照组、麻醉组、恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组.对照组腹腔注射生理盐水10ml·kg-1,其余各组均为腹腔注射氯胺酮1100mg·kg-1.对照组腹腔注射生理盐水后10min断头,麻醉组、恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组分别在大鼠翻正反射消失后10min、翻正反射恢复后和完全清醒后断头,取双侧大脑皮层和丘脑匀浆,离心,制备粗制突触体,用分光光度法测Na+,K+-ATP酶活性.结果大鼠氯胺酮100mg·kg-1腹腔注射能明显降低大脑皮层和丘脑Na+,K+-ATP酶活性,分别较对照组降低了32.8%和31.4%(P＜0.05),而在翻正反射恢复后和动物完全清醒后Na+,K+-ATP酶活性恢复(与对照组相比,P＞0.05).结论Na+,K+-ATP酶活性在氯胺酮全麻机理中可能发挥重要作用.     

体外循环中术前补镁对红细胞、血浆及尿液K^＋、Mg^2＋的影响

目的 了解体外循环前补镁对患者红细胞、血浆及尿液K^ 、Mg^2 。方法 采用邻苯二甲酸丁酯法对20例患风湿性心脏病行换瓣术的患者红细胞、血浆及尿液K^ 、Mg^2 浓度进行连续测定。结果 补镁组的血浆及绒细胞K^2 、Mg^2 浓度转机后能够较好维持基本正常；非补镁组的血浆K^ 的浓度及红细胞K^ 、Mg^2 浓度从转机始至停机时段有明显变化，两组尿液中K^ 、Mg^2 每分钟各自的排泄量差异显著。结论 体外循环心内直视术前，在预充液中常规加入超生理浓度的Mg^2 能够较好地维持血浆及红细胞中K^ 、Mg^2 的稳定，并减少从尿中丢失。     

PDGF-B链基因TFO抑制C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因表达及细胞生长

目的：观察PDGF—B链基因三链形成寡核苷酸(triplex—forming oligonucleotide，TFO)对C6胶质瘤细胞PDGF—B链基因表达和细胞生长的作用。探索PDGF-B链基因TFO作为抗肿瘤治疗新药的可能性。方法：应用MTT法观察PDGF—B链基因TFO对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用；应用流式细胞技术观察PDGF-B链基因TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因表达的影响。结果：PDGF—B链基因TFO对C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因的表达和细胞生长有明显抑制作用，而且抑制作用存在浓度依赖性。结论：PDGF-B链基因TFO能够抑制C6胶质瘤细胞PDGF-B链基因的表达和细胞生长，有望成为抑制PDGF—B原癌基因表达的一种全新药物。     

桂竹糖芥强心苷G对Na^＋,K^＋—ATP酶的抑制作用

对照哇巴因观察糖芥强心苷Ｇ对大鼠心肌ＡＴＰ酶活性的影响。结果表明糖芥苷Ｇ体外显著抑制心肌Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶，并呈浓度依赖性，而ＡＴＰ对糖芥苷Ｇ的作用几无影响。     

抗癌药物和DNA链之间相互作用的电化学研究方法

研究药物和DNA的相互作用是药物发现和药品研发过程中最重要的课题之一。近年来,人们对抗癌药物和DNA之间相互作用的电化学研究方法越来越感兴趣。考察DNA或者药物相互作用前后的电化学信号对阐明相互作用机制提供了很好的证据。这种相互作用也可以用来对药物进行定量,或者测定靶向DNA的新药。电化学研究方法为合理的药物设计与理解抗癌药物和DNA之间相互作用的机制提供了新的思路。     

聚合牛血红蛋白对缺血再灌注脑组织Na^＋K^＋—ATPase活性的 …

目的：研究聚合牛血红蛋白在缺血再灌注脑损伤中的治疗作用。方法：采用大鼠全脑缺血再灌注模型,观察缺血前后应用ＰＢＨｂ对脑组织Ｎａ＾＋Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性的影响。     

能与HBV-DNA C启动子结合成三链结构的寡核苷酸的设计与筛选

目的：筛选出能与ＨＢＶ－ＤＮＡＣ启动一链结构的高亲和力寡核苷酸。方法：以体外合成的＾３２Ｐ标记的ＨＢＶ－ＤＮＡＣ启动子区序列（１７３４－１７５４）为靶序列,合成５种有可能与该靶序列形成三链结核的寡核苷酸链（ＴＦＯ）,同时设计对照靶序列和对照ＴＦＯ,用凝胶滞留试验、酶足变等方法对比分析这些ＴＦＯ与靶序列是否形成三链结核及其结合的亲和性、特异性。结果：在３７℃Ｃ、ｐＨ７．４条件下,ＣＴ－ＴＦＯ和ＧＴ－     

长链游离脂肪酸对滋养细胞线粒体三羟基酰基辅酶A脱氢酶基因启动子区甲基化程度的影响

目的 探讨长链游离脂肪酸对胎盘滋养细胞线粒体β氧化循环长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因启动子区甲基化程度影响,以及对甲基化修饰的时间效应.方法 体外培养原代人绒毛滋养细胞及HTR-8/SVneo永久性人滋养细胞,研究组采用长链游离脂肪酸孵育滋养细胞(LC-FFA组),并以短链游离脂肪酸(SC-FFA组)和中链游离脂肪酸(MC-FFA组)作为不同链长游离脂肪酸对照组,空白对照组无脂肪酸(F-FFA组).分别在孵育24、48及72 h收集细胞并提取DNA.在LCHAD基因转录起始位点上游2 000 bp区域内序列预测CpG岛位置,设计甲基化检测位点和引物.采用Sequenom MassArray甲基化DNA定量分析平台检测不同组CpG岛各CpG位点的甲基化程度后进行各甲基化位点和CpG岛的统计学分析.结果 (1)在LCHAD基因转录起始位点上游2 000bp区域内的17个CpG位点中获得11个位点(65％)的甲基化程度,8个为单独位点,3个为复合位点(-984、-960、-899、-853、-811、-796、-774、-727、-615、-595、-579).在不同研究组中每个位点的甲基化变化程度各不同,其中-899位点变化最明显.(2)LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度变化分析:①长、中链游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度影响伴随时间的延长呈现升高趋势:LC-FFA组孵育72 h(0.55±0.08)比孵育48 h(0.35±0.12)及24 h(0.31±0.04)均明显升高(P＜0.05),48 h虽比24 h升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).MC-FFA组孵育72 h(0.44±0.05)比孵育24 h(0.31±0.04)明显升高(P＜0.05).②不同链长游离脂肪酸在不同作用时间影响LCHAD基因启动子区CpG岛甲基化程度比较:LC-FFA组孵育72 h的甲基化程度比MC-FFA、SC-FFA组及F-FFA组的72、48及24 h均明显升高(P＜0.05).(3)作用72 h游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区11个CpG位点甲基化程度影响比较:在LC-FFA组和MC-FFA组-899位点甲基化程度明显高于其他位点(P＜0.05).(4)长链游离脂肪酸对LCHAD基因启动子区-899位点甲基化程度影响伴随时间的延长呈现升高趋势(P＜0.05).LC-FFA组孵育72 h比MC-FFA、SC-FFA组及F-FFA组的72、48及24 h均明显升高(P＜0.05).结论 长链游离脂肪酸比中链和短链游离脂肪酸呈现较大的滋养细胞LCHAD基因启动子区甲基化的修饰作用,并伴随作用时间延长表现出明显的时间依赖效应;甲基化程度改变主要发生在LCHAD基因启动子区-899位点.     

紫外线照射对DNA修复基因RAD24转录的影响

目的：紫外损伤对ＤＮＡ修复基因ＲＡＤ２４转录的影响，方法：以酿酒酵母ＨＹ６８４为实验对象，用波长２５４ｎｍ紫外线分别在０，３７，５０和７０Ｊ／ｍ＾２等强度下照射下不同时间，提取总ＲＮＡ，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测ＲＡＤ２４基因转录水平的变化，结果：３７Ｊ／ｍ＾２及５０Ｊ／ｍ＾２分别照射２０～１２０ｍｉｎ明显提高ＲＡＤ２４基因转录水平。结论；低剂量紫外线照射可提高ＲＡＤ２４基因转录水平，该基因     

三螺旋结构寡核苷酸序列对DHBV基因的连接及封锁抑制作用 …

目的 筛选与鸭乙肝病毒（ＤＨＢＶ）－ＤＮＡ Ｘ／Ｃ区目标基因特异连接的三螺旋结构寡核苷酸（ＴＦＯ）,探讨ＴＦＯ对ＤＨＢＶ－ＤＮＡ的特异连接及抑制作用。方法 将人工合成的ＴＦＯ与目标基因片断和含（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ的重组细胞反应,用电泳转移印迹、ＰＣＲ和鸭肝原代细胞培养等技术观察ＴＦＯ对相应基因的连接以及对细胞内ＤＨＢＶ－ＤＮＡ复制的抑制效应。结果 在所设计的多条ＴＦＯ中,（３）ＴＦＯ和（５）ＴＦＯ在