广西叶下珠抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

用重庆麻鸭乙型肝炎动物模型,观察广西叶下株体内抗鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）的作用。用广西叶下珠治疗１月,检测用药前后血清中的ＤＨＢＶ ＤＮＡ及转氨酶、肝组织病理等。广西叶下珠用药２周、１月能使血清ＤＨＢＶ ＤＮＡ总体水平显著降低（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）,且停药后ＤＮＡ滴度回升不明显。血清转氨酶检查及肝脏常规ＨＥ染色病理检查未发现叶下珠对肝脏有明显的毒性损害。广西叶下珠在体内有抗鸭乙型肝炎病毒     

白背叶根抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的:观察白背叶根体内抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,D-HBV)的作用。方法:采用PCR技术筛选D-HBV阳性3日龄广州麻鸭40只。将麻鸭随机分为空白对照组,白背叶根高、中、低剂量组和拉米夫定组,分别给予相应药物进行干预。用药前、用药第7、14、21天及停药第7天,取各组麻鸭静脉血,采用实时定量荧光PCR技术检测血清D-HBV DNA含量;治疗前后取肝脏组织进行病理组织学观察。结果:拉米夫定组于用药后,血清病毒水平迅速降低,但停药后存在反跳现象。白背叶根高、中剂量组分别于治疗第14、21天其血清病毒含量明显下降,低剂量组治疗期间未见明显的抑制病毒作用。停药后,白背叶根高、中剂量组与空白对照组比较仍表现出一定的病毒抑制作用。白背叶根高剂量组对肝脏炎症的改善作用较拉米夫定组明显。结论:白背叶根有抑制体内D-HBV复制的作用,其作用大小与剂量及用药时间相关;其治疗作用较拉米夫定弱,但作用维持时间长,且用药较为安全。     

FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床价值

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA的应用价值。方法从1000份用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝五项的体格检查血清标本中,抽取288份HBsAg阳性标本及100份全阴标本,进行荧光定量聚合酶链式反应HBV-DNA定量分析。结果经FQ-PCR检测,80份HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性的标本,HBV-DNA阳性率为100%(80/80),平均HBV-DNA拷贝数为2.5×108拷贝/m l;164份HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性的标本,HBV-DNA阳性率为76.2%(125/164),平均HBV-DNA拷贝数为1.5×106拷贝/m l;12份HBsAg单项阳性的标本,HBV-DNA的阳性率为83.3%(10/12),平均HBV-DNA拷贝数为1.6×105拷贝/m l;100份HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均阴性的标本,HBV-DNA的阳性率为2.0%(2/100),平均HBV-DNA拷贝数为4.5×105拷贝/m l。结论FQ-PCR可以检测HBV的感染和复制情况,对准确报告HBV感染、指导其选择治疗方案和观察疗效具有重要的临床意义。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值

目的: 探讨实时荧光定量PCR(F Q-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值。方法: 采用FQ-PCR方法检测196例患者血清中HBV-DNA。结果: 112例HBeAg(+)/HBeAb(-)标本中FQ-PCR均阳性,HBV-DNA拷贝数1.08×107/ml;68例HBeAg(-)/HBeAb(+)标本中,平均拷贝数6.12×105/ml,其阳性率为66.2%;16例HBeAg(-)/HBeAb(-)标本中,平均拷贝数为2.72×104/ml。结论: 实时FQ-PCR可以实现准确定量,是了解HBV在体内复制和判断疗效的有利手段。     

乙型肝炎两对半与HBV-DNA含量的探讨

目的:探讨乙肝两对半与HBV-DNA含量的相关性。方法:458份血清用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定乙肝病毒(HBV)两对半,用FQ-PCR法检测HBV-DNA含量。结果:乙肝两对半模式不同血清型的HBV-DNA阳性率不同,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)最高,其HBV-DNA检出率为95.5%,对数均值为7.4±2.15;HBsAg (+)、抗HBe(+)、抗-HBc(+)的HBV-DNA检出率为39.6%,对数均值为4.8±1.02。而HBsAg(+)、抗-HBc(+)其HBV-DNA检出率为73.8%,对数均值为3.7±0.84。结论:3种血清型的HBV-DNA检出率差异及拷贝数差异均有统计学意义。     

池州地区乙型肝炎病毒B、C基因型分布及临床意义

目的:了解池州地区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)B、C基因型的分布情况及其与临床指标的关系。方法:通过荧光定量PCR法测定116例乙型肝炎患者B、C基因型,并比较B、C基因型各项临床指标的关联性。结果:116例血清标本中,B基因型75例,C基因型39例,B/C混合型2例。不同基因型各临床指标差异无统计学意义(P0.05)。C基因型HBeAg阳性率为53.8%,B基因型为30.7%,差异有统计学意义(χ2=5.82,P0.05)。结论:池州地区HBV-DNA基因型分布以B型为主,C型次之;C基因型与较严重肝脏疾病的发生有关。     

鸭乙型肝炎病毒核酸荧光定量PCR方法的建立及应用

目的：建立鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)荧光定量的方法。方法：根据DHBV DNAS基因区的序列设计扩增所需3条引物，通过偶联反应用AmpliSensor荧光信号标记半巢式引物，经过前期不对称扩增、半巢式扩增及在线检测建立DHBV DNA阳性标准品QPCR的标准曲线，并将70份鸭血清分别用荧光定量PCR方法和地高辛标记的DHBV DNA探针斑点杂交的方法检测，比较结果的相关性。结果：DHBV DNA阳性标准品经过30次循环后，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出有180bp、70bp两个片段，与设计的片段大小相符，扩增产物的浓度与标准品的起始浓度成正比，扩增指数的数值大小与该循环时己合成的扩增产物的量成正比，起始浓度的大小与要合成的一定扩增产物的量所需的循环次数成反比。用荧定量PCR方法和斑点杂交的方法检测血清中DHBV DNA的结果有良好的相关性(r＝0．97，P＜0.01，ν＝58)。结论：荧光定量PCR方法可作为检测DHBV DNA含量的一个重要手段。     

乙型肝炎病毒感染者HBV DNA与血清病毒标志物的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者HBVDNA检出情况及其与血清病毒标志物的关系。方法　采用实时荧光定量PCR(FQ PCR)检测 2 0 0份HBV感染者血清中HBVDNA含量 ,同时用全自动免疫分析仪检测HBV 5项血清标志物。结果　 2 0 0份血清中 ,乙型肝炎病毒标志物不同组合组的HBVDNA阳性率有差异 ,HBsAg、HBeAg和 (或 )HBcAb阳性组阳性率约为 98.1% ,其中 96 %以上HBVDNA≥ 10 4copy/ml;HBsAg、HBcAb和 (或 )HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为 76 .5 % ,但其中 90 %以上HBVDNA≤ 10 4copy/ml;单纯HBV抗体阳性组HBVDNA阳性率约为13.0 % ,但均为HBVDNA≤ 10 3 copy/ml。三组间HBVDNA阳性率及分布均有明显差异 (P <0 .0 5 )。而且HBVDNA含量与疾病严重程度相关。结论　FQ PCR检测HBVDNA含量结合血清病毒标志物的检测结果对乙型肝炎的临床诊断与病情判断有重要意义     

不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型及抗病毒效果的实验研究

目的：探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果。方法：采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病毒效果。结果：不同种鸭DHBV自然感染率不同,樱桃谷鸭为8.75%,湖北麻鸭两个批次分别为17.80%和10.68%;静脉注射和腹腔注射两途径均能致雏鸭感染DHBV,静脉注射感染率80%,腹腔注射感染率65%;鸭感染DHBV后,体内病毒载量维持在106~108拷贝/mL,可持续20天以上;抗病毒药物处理后,在不同DHBV模型中其抗病毒效果变化趋势一致。结论：鸭的种类和人工感染途径可影响DHBV感染率;雏鸭感染DHBV后其体内有持续性的病毒血症;DHBV感染模型是药物抗病毒研究较好模型。     

桂林麻鸭先天性鸭乙肝病毒模型的研究

目的 了解桂林地区幼龄麻鸭携带鸭乙型肝炎病毒（DHBv）的情况并探讨PCR用于DHBV检测的可能性。方法 采用常规聚合酶链反应（PcR）法检测桂林地区麻鸭血清中的DHBV。结果 共检查284份鸭血清，DHBV阳性107份，阳性37．67％。结论 桂林地区幼龄麻鸭自然携带DEIBV率为37．67％，提示其对DHBV易感，是较为理想的动物模型；PCR法检测DHBV敏感性较高，重复性好，可用于DHBV的检测。     

Molecular Characterization of Duck Hepatitis B Virus Isolated from Hubei Brown Ducks

The objective of this study was to characterize the genome structure of duck hepatitis B virus (DHBV) isolated from Hubei brown ducks. The natural carrier rate of DHBV in adult ducks from Hubei area was investigated and the DHBV DNA-positive serum screened out. The complete genome of a DHBV strain was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned into T vector and sequenced. The results showed that the carrier rate of DHBV in Hubei brown ducks was 10 %. This strain (GenBank accession number DQ276978) had a genome of 3024 nucleotides with three overlapping open reading frames encoding the surface, core and polymerase proteins respectively. Comparison of the strain with 17 DHBV strains registered in GenBank revealed a homology from 89.3 % to 93.5 % at the nucleotide level. The sequences of the structural and functional domains of these proteins were highly conserved. The strain was found to share more signature amino acids in the polymerase genes with the "Chinese" DHBV strains than those of the "Western" country strains. This finding was also corroborated by a phylogenetic tree analysis. Therefore, the DQ276978 might belong to a subtype of the Chinese DHBV strains.     

阿的福韦在鸭乙型肝炎模型及2.2.15细胞中抗乙型肝炎病毒的药效研究

目的:观察阿的福韦体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用及体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果.方法:采用鸭乙型肝炎动物模型,用阿的福韦口服治疗10天,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg,并取肝脏样本提取总DNA,作Southern Blot分析.此外,以2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA观察阿的福韦抗HBV效果.结果:阿的福韦各剂量组用药后均能使血清中的DHBVDNA显著降低或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),但停药后有DHBV DNA回升现象;用药前后DHBsAg无明显改变.肝组织Southern Blot分析亦显示用药后肝脏中DHBV DNA有明显降低,停药后DHBV DNA反跳明显.大剂量阿的福韦加入细胞培养12天,对HBsAg抑制率为17.01%,对HBeAg抑制率为26.80%,对HBV DNA抑制率为26.92%.结论:阿的福韦在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,但停药后DHBVDNA有"反跳"现象;体外实验无明显抗HBV病毒作用.     

鸭乙型肝炎动物模型在药学领域的应用进展

鸭乙型肝炎病毒的基因组、复制方式和发病机制与人乙型肝炎病毒相似,且鸭乙肝病毒的天然宿主容易获得、价格低廉、感染成功率高,因此鸭乙型肝炎动物模型已被广泛应用于药物筛选、药理学和病理学研究。在应用于药物筛选时,该模型容易获得,感染成功率高且具有良好的稳定性。在药理学研究中,该模型能够持续维持高水平的病毒DNA复制,并且能够出现明显的肝脏损伤表型,可以反映不同机制药物的药理药效作用。而在病理机制研究中,该模型则具有完整的病毒生命周期,且在感染动物肝脏细胞中可检测到cccDNA,可以帮助科研人员更好的研究人乙型肝炎病毒致病机制。本文对鸭乙型肝炎动物模型在药物筛选、药理和病理研究中的应用进行综述,并对其应用前景进行展望。     

草仙乙肝胶囊对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗作用

［ 目的］ 观察草仙乙肝胶囊（ 主要成份为虎杖、猪苓、川栋子、当归、淫阳藿等） 对鸭血清鸭乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸水平的影响．［ 方法］ 口服给予草仙乙肝胶囊治疗感染鸭乙型肝炎病毒的雏鸭．［ 结果］ 高剂量给草仙乙肝胶囊组鸭乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸给药前后自身比较,给药后５ｄ 和１０ｄ ＯＤ 值均下降,抑制率为５２－４４ ％ ;中剂量给药后５ｄ 抑制率与给药前比有明显差异;低剂量有一定抑制作用,但无统计学差异．［ 结论］ 草仙乙肝胶囊对感染鸭乙肝病毒的雏鸭具有明显的治疗作用,可显著抑制鸭血清鸭乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸水平,具有一定的量效关系     

清肝排毒饮抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的观察清肝排毒饮抗鸭乙型肝炎（DHBV）作用。方法用Dot—BLOT法筛选出DHBsAg强阳性1d龄华南麻鸭。随机分为5组，分别为模型组、拉米夫定（ACV）组和清肝排毒饮大、中、小剂量组。除模型组外，其他各组均灌胃口服治疗10d，于用药前（T0）、用药第5d（T5）、第10d（T10）厦停药后第3d（P3）分别采血，采用斑点杂交方法检测用药前后鸭血清乙肝病毒脱氧核糖核酸（DHBV DNA）的动态变化。结果清肝排毒饮中剂量治疗组第5、10d鸭血清DHBV DNA OD值明显低于培药前，差异有显著性（P〈0．05），但与拉米夫定组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。停药3d后无反跳。结论清肝排毒饮有一定的抑制DHBV DNA复制作用。     

鸭肝损伤模型血清中鸭乙肝病毒cccDNA的动态检测

目的 探讨在不同程度肝损伤的DHBV感染麻鸭外周血中能否检测出DHBVcccDNA.方法 选择持续感染DHBV的2月龄上海麻鸭24只随机分均分为4组,分别以(1)A组:D-氨基半乳糖(D-GalN)2.2 g/kg+脂多糖(LPS)100 μg/kg;(2)B组:D-GalN+LPS+10 ml/kg的CCl4灌胃2次;(3)C组:D-GalN+LPS+15 ml/kg的CCl4灌胃2次;(4)NC组:生理盐水处理作为正常对照组(NC组).在处理后0、24、36和48 h进行血清ALT、DHBV载量和DHBV cccDNA检测,最后处死动物取肝组织评价肝损伤程度,并检测肝组织中的总DHBV DNA和DHBV cccDNA.结果 NC组鸭肝脏无明显病理改变,A组、B组和C组鸭则分别出现点状坏死至大片肝坏死的肝损伤,3组之间的肝损伤程度分级差异有统计学意义(P＜0.01).B组和C组在处理后48 h分别有1只和4只鸭死亡.NC组和A组各检测时点血清中均未检测到DHBV cccDNA;B组和C组在处理后36 h分别有2只和3只鸭血清中检测到DHBV cccDNA,含量在(0.32～1.72)×104拷贝/ml之间,在处理后48 h两组各有1只鸭血清中仍可以检测出DHBV cccDNA.Logistic逐步回归分析显示血清中DHBVcccDNA的检出率与肝损伤程度评分有关(P=0.0029),而与血清DHBV载量、ALT水平以及肝组织中的总HBV DNA和DHBV cccDNA 含量无关.结论 在肝组织发生严重损伤时,血清中可以出现DHBV cccDNA,血清中DHBV cccDNA的检出与肝组织损伤程度显著相关.