TRPM8对前列腺癌细胞PC-3细胞增殖和迁移影响的研究

目的探讨TRPM8对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖和迁移能力的影响。方法PC-3细胞分别转染空载体pcDNA3和目的基因TRPM8,筛选稳定表达细胞株;分别通过免疫荧光和钙成像检测TRPM8蛋白表达、分布以及功能;通过流式细胞术和划痕实验检测TRPM8对PC-3细胞周期和细胞迁移率的影响。结果免疫细胞化学和钙成像提示PC-3-TRPM8细胞表达有功能的TRPM8通道;TRPM8能诱导细胞周期阻滞于G0／G1期,与PC3和PC-3-vector细胞相比,处于G0／G1期的PC-3-TRPM8细胞显著增加（71．89％±3．43％vs54．67％±4．59％、51．48％±3．54％,P〈0．05）,易化饥饿诱导的细胞凋亡（12．56％±1．78％vs4．67％±1．49％、5．28±1．35％,P〈0．05）,并抑制细胞迁移（P〈0．01）。结论TRPM8并不为PC-3细胞存活所必需,相反,高表达的TRPM8能抑制PC-3细胞的增殖和迁移,可能为前列腺癌治疗的一个新靶点。     

Sorafenib对前列腺癌DU145细胞的抑制作用的研究

目的观察索拉非尼（Sorafenib）对雄激素非依赖性前列腺癌Du145细胞的抑制作用。方法用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌DU145细胞24、48和72h后,MTT法检测Sorafenib对DUl45细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Westernblot检测不同浓度Sorafenib处理72h后DU145细胞内ERK和Bcl-2的表达。结果Sorafenib能显著抑制DU145细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性。DUl45细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系（P〈0．01）;Sorafenib处理DU145细胞72h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调（P〈0．01）。结论Sorafenib抑制DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长。     

熊果酸对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

【目的】探讨熊果酸对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响。【方法】常规培养前列腺癌细胞系DU145,采用不同浓度熊果酸干预48 h ,细胞增殖与毒性分析（CCK‐8）法检测DU145细胞增殖;流式细胞术检测DU145细胞的凋亡率;Western blot检测DU145细胞p‐Akt及bcl‐2蛋白表达;实时定量聚合酶链式反应（qRT‐PCR）检测 PTEN mRNA 表达。【结果】细胞增殖抑制试验显示熊果酸呈浓度依赖性抑制DU145细胞生长;0、10、20μmol／L药物处理细胞48 h后其早期凋亡率分别为（2．15±0．24）％、（13．52±1．83）％及（16．69±2．56）％,晚期凋亡率分别为（3．28±0．53）％、（18．47±2．64）％及（23．70±1．99）％,差异均有统计学意义（ P ＜0．05）;与空白对照组相比,熊果酸作用的DU145细胞p‐Akt及bcl‐2蛋白表达水平均降低（均 P ＜0．05）,PTEN mRNA表达水平上升（ P ＜0．05）。【结论】熊果酸能够浓度依赖地抑制DU145细胞增殖,其机制可能是通过抑制PT EN／P13K／Akt信号转导通路来实现的。     

双氢青蒿素诱导前列腺癌DU145细胞凋亡的实验研究

目的:观察双氢青蒿素(dihydroarteannuin,DHA)对前列腺癌DU145细胞作用并对其抗癌机制进行初步探讨.方法:进行前列腺癌DU145细胞培养,MTT法测定不同浓度和时间DHA对DU145细胞的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测DU145细胞凋亡率:Western blot检测不同浓度DHA作用48 h凋亡蛋白caspase-3、survivin的表达情况.结果:MTT法显示与对照组比较,各实验组DHA可显著抑制DUl45细胞增殖(P＜0.01);FCM检测表明DU145细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P＜0.01),且呈时间剂量依赖性;Westem blot显示与对照组相比,各实验组DHA可显著下调DU145细胞survivin的表达(P＜0.01),而caspase-3的表达增加(P＜0.01).结论:DHA可能通过下调survivin的表达,上调caspase-3而诱导DU145细胞凋亡.     

下调胞浆型磷脂酶A2β对前列腺癌细胞侵袭作用的影响

目的探讨降低胞浆型磷脂酶A2β（cPLA2β）的表达对前列腺癌细胞侵袭行为性作用。方法采用小干扰RNA质粒转染技术获得cPLA2p下调的前列腺癌DUl45克隆细胞。应用Western blotting检测cPLA2β在DU145中的表达情况。流式细胞术检测DU145细胞周期变化。克隆形成实验检测DU145细胞增殖能力情况,以及Boyden小室观察细胞侵袭能力的影响。结果质粒转染DUl45获得了cPLA2p下调显著的克隆细胞,与对照组相比cPLA2p蛋白表达水平明显降低（A=0．345＆A=0．924,t=13．457,P〈0．005）。DU145转染前后细胞周期没有变化,细胞增殖能力无影响（t=0．351,P〉0．005）。下调cPLA2β的DU145侵袭能力下降近80％,和对照组相比差异有统计学显著性意义（t=35．145,P〈0．001）。结论cPLA213表达情况与前列腺癌细胞侵袭能力改变有直接关系。     

miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子6的相关性研究

目的探讨miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子(STAT6)的相关性。方法选取前列腺癌DU145细胞,随机分为miR-135a转染组和空白转染组,miR-135a转染组细胞转染miR-135a序列,空白转染组转染空白序列,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,采用Transwell细胞迁移侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-STAT6和STAT6蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-135a表达。结果转染后48h,miR-135a转染组miR-135a相对表达量为(0.932±0.061),明显高于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组培养24、48h的OD值分别为(0.210±0.045)和(0.281±0.052),明显低于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组G0/G1期细胞比例为(60.02±6.39)%,明显高于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组迁移细胞数和侵袭细胞数分别为(116.93±30.02)个和(133.02±28.51)个,明显低于空白转染组(P0.05);miR-135a转染组p-STAT6和STAT6蛋白相对表达量分别为(0.947±0.114)和(0.437±0.077),明显低于空白转染组(P0.05)。结论miR-135a可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与其抑制前列腺癌细胞STAT6表达有关。     

MiR-451a对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的研究miR-451a在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-451a是否通过下调LMP7来影响雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(DU145)细胞的增殖和侵袭能力。方法收集37例前列腺癌组织标本及40例良性前列腺增生组织标本,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组组织中与前列腺癌相关的miR-451a、miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137、LMP7mRNA的表达情况,Pearson相关分析检验miR-451a表达量与LMP7的相关性;免疫印迹试验(Western blot)分别检测两组LMP7的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-451a mimic和miR-NC至离体培养的DU145细胞中,随后,Western blot检测DU145细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶试验验证LMP7是miR-451a的靶基因;紧接着通过转染过表达LMP7的质粒至DU145细胞,检测DU145细胞中相应蛋白的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于前列腺增生组织,miR-451a在前列腺癌组织中的表达降低(P0.01);而miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137的表达在两组之间无显著差异;前列腺癌组织中LMP7mRNA的表达增加(P0.01);MiR-451a与LMP7 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.4708,P0.01)。在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-451a mimic后,DU145细胞中VEGF、E-cadherin、LMP7的表达减少(P0.05),DU145细胞的迁移侵袭能力下降(P0.01);荧光素酶试验结果显示,miR-451a能够降低LMP7-3'-UTR质粒的荧光素活性(P0.05);转染过表达LMP7质粒后,相比于miR-451+空质粒组,DU145细胞中VEGF和E-cadherin表达增加(P0.05),细胞的迁移侵袭能力得到部分恢复(P0.01)。结论在前列腺癌组织中,miR-451a低表达;MiR-451a通过下调LMP7抑制DU145细胞的迁移和侵袭。     

miRNA-143通过抑制KRAS降低前列腺癌细胞的增殖

目的探讨miRNA-143对前列腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过RT-PCR和Western blot方法检测miRNA-143及其靶基因KRAS在前列腺癌组织中的表达;用MTT方法和集落形成实验研究miRNA-143对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖的影响。结果 miRNA-143及其靶基因KRAS在前列腺癌组织中的表达呈负相关;miRNA-143高表达对DU145细胞的增殖具有抑制作用;DU145细胞中miRNA-143高表达抑制KRAS-ERK信号通路的激活及Cyclin D1的表达。结论 miRNA-143通过RAS/MAPK信号通路抑制前列腺癌的增殖,为激素非依赖性前列腺癌治疗提供了分子生物学基础。     

吉非替尼对前列腺癌DU145细胞生长增殖及表皮生长因子受体蛋白表达的影响

目的：观察吉非替尼（Gefitinib）对前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对细胞表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达水平变化的影响。方法：不同浓度的Gefitinib（020μmol／L）分别作用于体外培养的前列腺癌DU145细胞24～120h后,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞周期分布,蛋白免疫印迹（Westernb1ot）检测细胞EGFR蛋白表达水平。结果：Gefitinib可以显著抑制DU145细胞的生长,呈时间一剂量依赖效应,并且细胞生长多停滞于G0／G1期,细胞EGFR蛋白表达分别下降了10．92％（2．5μmol／L）、43．71％（5μmol／L）、53．53％（10μmol／L）和85．98％（20umol／L）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Gefitinib能显著抑制前列腺癌DU145细胞的生长,其机制可能与细胞生长在G0／G1期阻滞及EGFR蛋白表达水平下调等因素有关。     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

低频超声联合微泡影响前列腺癌DU145细胞血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的探讨低频超声联合微泡对前列腺癌DUl45细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法体外培养前列腺癌DUl45细胞,细胞呈对数生长时分为4组进行实验：对照组（细胞悬液1ml）、单纯微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue）、单纯低频超声组（1ml细胞悬液以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30S）、低频超声联合微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue后立即以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30s）。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率,Western印迹法检测细胞VEGF蛋白的表达。采用单因素方差分析比较对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率、凋亡率、VEGF蛋白表达量差异,进一步组间两两比较采用SNK-q检验。结果对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率分别为100％、（96．50±12．49）％、（93．20±5.31）％、（81．30±9．32）％;凋亡率分别为（1．10±0．26）％、（1．78±0．63）％、（5．85±0．45）％、（9．36±0．90）％;VEGF蛋白表达量分别为0．81±0．05、0．79±0．06、0．58±0．04、0．38±0．05。单纯微泡组、单纯低频超声组细胞存活率与对照组比较差异均无统计学意义,低频超声联合微泡组细胞存活率较对照组降低,且差异有统计学意义（q=5．88,P〈0．05）。单纯微泡组细胞凋亡率、VEGF蛋白表达量与对照组比较差异均无统计学意义;单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞凋亡率均高于对照组,VEGF蛋白表达量均低于对照组,且差异均有统计学意义（q=14．09、24．51、8．06、14．89,P均〈0．05）。低频超声联合微泡组细胞凋亡率高于而VEGF蛋白表达量低于单纯低频超声组,且差异亦均有统计学意义（q=10．42、6．83,P均〈0．05）。结论微泡能增强低频超声抑制前列腺癌DUl45细胞增殖及促进凋亡,其机制可能与其下调前列腺癌DUl45细胞VEGF表达有关。     

低频超声联合微泡增强脂质体介导Racl—shRNA质粒转染前列腺癌细胞及对其生物学行为的影响

目的研究低频超声联合微泡增强脂质体介导的Racl-shRNA质粒转染前列腺癌PC3、DUl45细胞,并探索其对前列腺癌细胞凋亡、侵袭能力的影响。方法基础情况下Westernblot检测RWPE-1细胞、PC3细胞和DUl45细胞的Rac1蛋白表达。根据不同处理方式将细胞分为四组：PC3细胞对照组（A组）、超声加微泡联合脂质体转染PC3细胞组（B组）、DUl45细胞对照组（c组）及超声加微泡联合脂质体转染DUl45细胞组（D组）。通过蛋白质体外结合实验技术检测各组Racl蛋白的活性及表达;流式细胞仪检测各组细胞早期凋亡情况;细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力。结果基础情况下前列腺癌PC3、DUl45细胞Racl蛋白表达均较正常前列腺细胞RWPE-1增加,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;低频超声携微泡介导Rac-1shRNA质粒转染细胞后,B组Racl蛋白表达量较A组表达减少,D组表达量较C组减少,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;早期细胞凋亡检测显示,B组高于A组,D组高于C组,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;同期细胞侵袭力实验显示,B组穿膜细胞数少于A组,D组的穿膜细胞数少于C组,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论低频超声联合微泡可促进脂质体介导的Racl-shRNA质粒转染人雄激素非依赖型前列腺癌细胞;通过抑制PC3、DUl45细胞中Racl蛋白表达可以促进癌细胞的早期细胞凋亡,同时可抑制癌细胞的侵袭能力。     

不同辐照模式低频超声对前列腺癌DUl45细胞的影响

目的探讨不同辐照模式低频超声对前列腺癌DUl45细胞的影响。方法对体外培养的人前列腺癌DUl45细胞悬液进行不同模式的低频超声辐照：第A组为对照组,第B组为脉冲波辐照模式,第C组为连续波辐照模式。辐照后即刻用荧光显微镜检测FD500染色阳性率反映细胞膜通透性改变情况;辐照后24h用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,两种模式的超声波处理组FD500染色阳性率均增加;与连续波模式相比,脉冲波模式FD500染色阳性率增加明显,差异有统计学意义（P〈O．01）。脉冲波模式轻微抑制细胞增殖,连续波能明显抑制细胞增殖（P〈0．05）。与对照组相比,两种模式的超声波处理组DUl45细胞凋亡率均增加;与脉冲波模式相比,连续波模式DUl45细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论不同辐照模式低频超声能够影响前列腺癌DUl45细胞的生物学行为。应用于基因转染或载药目的时,选择脉冲波模式增加细胞膜通透性;应用于治疗目的时,选择连续波模式能够抑制肿瘤生长。     

沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE1细胞增殖和凋亡的研究

目的：探讨 Survivin表达降低时,对鼻咽癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法运用 RNA 干扰技术,结合 RT-PCR,Western blot技术,观察干扰 Survivin效果。干扰 Survivn后用 MTT法和 TUNEL法检测鼻咽癌细胞增殖,凋亡的情况。用 Western-blot方法检测凋亡相关蛋白 PARP,Bcl-2和Bax的表达。结果 RT-PCR检测显示 Survivin-siRNA干扰组,Survivin mRNA表达明显下调,其相对表达量为0.26±0.02,抑制率为43.7％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测显示 Survivin-siRNA组蛋白表达下调,其蛋白相对表达量下降了57％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT检测显示 Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用,在24,48和72 h的抑制率分别为21.9％,37.1％和29.6％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Tunel染色结果显示 Survivin-siRNA组细胞凋亡数明显增高。Western blot结果显示Survivin-siRNA组凋亡蛋白PARP（89KD）显著升高,为对照组的3.9倍,抑制凋亡蛋白Bcl-2降低,降低了70％,促进凋亡蛋白Bax升高,为对照组的2.4倍;同时也抑制AKT的磷酸化,磷酸化水平降低了57％,与对照组相比以上结果差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论干扰 Survivin表达,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。Survivin基因可成为鼻咽癌基因治疗的一个潜在靶点。     

miR-30c对前列腺癌的功能调控作用

目的研究mi R-30c在前列腺癌中的功能调控作用,获得其调控前列腺癌侵袭及转移的可靠证据,进而揭示其在前列腺癌中可能的调控机制。方法从mi RNA芯片检测结果中获得前列腺癌相关的差异表达的mi R-30c分子,进一步通过mi R-30c过表达质粒转染前列腺癌细胞,运用Transwell检测细胞侵袭变化,划痕实验检测细胞转移变化。结果 LNCa P/DU145转染质粒后,mi R-30c的表达水平显著高于阴性对照组(LNCa P:倍数=3.87,P<0.001;Du145:倍数=4.32,P<0.001)。Transwell侵袭实验表明,mi R-30c转染组的LNCa P/DU145细胞侵袭的数量显著低于对照组(LNCa P:67 vs.120个/视野,P<0.001;DU145:130 vs.220个/视野,P<0.001)。划痕实验结果发现mi R-30c转染后,LNCa P/DU145细胞实验组转移的数量显著低于对照组(LNCa P:241 vs.520个/视野,P<0.001;DU145:490 vs.660个/视野,P<0.001)。结论 mi R-30c可抑制前列腺癌细胞的侵袭及转移,这说明mi R-30c在前列腺中确实起着抑癌的作用,其可能通过KRAS-MAPK信号通路抑制前列腺癌的侵袭及转移。     

维生素C对静脉铁剂诱导的外周血单个核细胞凋亡的干预作用

目的 观察静脉铁剂对维持性血液透析（MHD）患者外周血单个核细胞（HPBMC）氧化应激及凋亡的影响,并探讨维生素C（维C）对其的干预作用.方法 采用流式细胞术,蛋白印迹方法（Westem blot）和Caspase-3活性检测试剂盒研究不同静脉铁剂诱导体外培养MHD患者HPBMC的细胞凋亡及相关基因Bax,Bcl-2的蛋白表达,凋亡分子Caspase-3的活性,细胞ROS生成量的变化,并观察维C对此的干预作用.结果 流式细胞检测结果表明,蔗糖铁（Is）、右旋糖酐铁（Id）、葡萄糖酸亚铁（Fg）、羧基麦芽糖铁（Fc）均能诱导HPBMC的细胞凋亡[（42.38±2.74）％,（40.51±2.13）％,（41.79±2.82）％,（40.47±1.97）％],4组细胞凋亡率无显著性差异（P＞0.05）.维C干预能降低Id诱导的HPBMC的凋亡率[（29.09±1.29）％∶（40.51±2.13）％,P＜0.05]及细胞ROS阳性率[（53.79±4.11）％∶（68.32±4.57）％,P＜0.05].Western blot 分析和Caspase-3活性检测结果表明,维C干预能降低Id诱导的HPBMC细胞促凋亡基因Bax蛋白的高表达[（2.09±0.21）∶（1.13±0.25）,P＜0.05],增加抗凋亡基因Bcl-2的蛋白表达[（0.46±0.11）∶（0.87±0.16）,P＜0.05],也能抑制凋亡分子Caspase-3的活性[（3.51±0.33）∶（1.87±0.26）,P＜0.05].结论 维c可以一定程度上减轻静脉铁剂诱导的外周血单核细胞氧化应激,抑制细胞凋亡.