双抗原夹心ELISA检测抗HIV的临床诊断价值

目的 分析双抗原夹心ELISA检测抗HIV的临床诊断价值.方法 选取2018年1月～2019年6月我院检验科提供的25份抗HIV血清为观察组,选取同期健康体检的150份血清作为对照组,分别采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)、间接酶联免疫吸附实验(ELISA)及金标免疫层析实验等,对比不同检测方式诊断阳性率.结...     

ELISA检测HIV抗原抗体试剂盒使用说明书的研讨

人类免疫缺陷病毒（HIV）的检测，是作为诊断艾滋病的重要实验室依据，血清学检测HIV抗原抗体由初筛试验及确认试验组成，常使用敏感性高的酶联免疫吸附试验（ELISA）作为筛查方法。在艾滋病抗体的检测活动中，要求严格按照《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）比一和试剂使用说明书操作。虽然检测试剂本身的质量很重要，但同时试剂盒的使用说明书对操作者和检测结果也有较大的影响。[第一段]     

ELISA法对HIV抗体的检测

艾滋病(acpuired immunodeficiency syndrome,AIDS)又称获得性免疫缺陷综合症,是由人类免疫缺陷病毒的总人数已高达6000多万,中国也有100多万艾滋病患者及感染者.     

探讨ELISA法检测HIV抗体的影响因素

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗-人类免疫缺陷病毒(HIV)的影响因素,提高HIV初筛试验的准确性。方法将4584例标本中的7例初筛试验阳性标本送市疾病预防控制中心(CDC)确证实验室进行确证,并对患者、试剂、样本及操作过程进行分析。结果 7例初筛阳性标本经确证试验仅2例为确证试验阳性,认为ELISA法检测抗-HIV抗体的影响因素覆盖了操作中的各个环节,从样本、加样、温育、洗涤到比色,均可能造成试验的误差。结论要提高ELISA法检测抗-HIV的试验的准确度,必须严格按照试剂盒说明书和全国艾滋病检测技术规范来操作,并且重视实验室的质量控制,确保试验的质量。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的　建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果　包被单抗量为20μg/ml,酶标记单抗1∶200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P/N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg/ml,和其他支原体没有交叉反应; 147份临床标本PCR检测阳性率13. 6% (20 /147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12. 2% ( 18 /147 ),两者符合率达95. 9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果包被单抗量为20μg／ml,酶标记单抗1：200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P／N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg／ml,和其他支原体没有交叉反应;147份临床标本PCR检测阳性率13．6％(20／147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12．2％(18／147),两者符合率达95．9％。结论建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性的影响

目的:探究双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测灵敏度及特异性的影响。方法:选取2016年5月~2017年4月我院进行手术和血液透析前抗-HCV检测的患者270例,经血液筛查(荧光定量PCR法)抗-HCV阳性12例,抗-HCV阴性258例,采用双抗原夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和间接ELISA分别对270例患者血清进行抗-HCV检测,比较两种检测方法的特异性、灵敏度。结果:双抗原夹心ELISA法灵敏度、特异性均高于间接ELISA法(P<0.05)。结论:双抗原夹心酶联免疫吸附试验可提高丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性,可作为临床血液标本筛查首选方法。     

双抗体夹心ELISA检测血小板相关抗体的临床应用

用双抗体夹心酶免疫法对４０例原发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者治疗前联合测定了ＰＡＩｇＧ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＡ，并与正常组（３０例）测定值比较，结果表明：三次免疫指标均高于正常测定值，其敏感性达９３％，联合检测可提高ＩＴＰ的阳性率至８９％～１００％，该法特异性强，阳性检出率高，重复性好，快速简便，不需要特殊仪器设备，适于基层单位推广应用。     

溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响

目的:探讨溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响.方法:制备HIV抗体阴性非溶血和配对溶血(Hb 2～7 g/L)血清48份.另制备HIV抗体阴性非溶血和重度溶血(Hb 80 g/L)血清1份、HIV抗体阳性非溶血和重度溶血(Hb 108 g/L)血清1份,用HIV抗体阴性血清对HIV抗体阴性重度溶血血清、HIV抗体阳性非溶血和配对重度溶血血清进行倍比稀释,得到不同溶血程度的样品.测定HIV抗体,检测溶血及不同溶血程度对HIV抗体的影响.结果:48份HIV抗体阴性非溶血和溶血血清比较,差异无统计学意义(t=0.078,P=0.938);对HIV抗体阴性重度溶血倍比稀释血清的A值和Hb浓度做相关性分析,两组间无相关性(r=-0.382,P=0.221);对HIV抗体阳性溶血、非溶血倍比稀释血清的A值进行比较,差异无统计学意义(t=0.236,P=0.817).△A(溶血血清A-非溶血血清A)与Hb浓度作相关性分析,两组间无相关性(r=0.149,P=0.644).结论:溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体无影响.但是如果试剂反应孔包被、封闭的质量差可能引起Hb的非特异吸附而造成假阳性,故日常工作中要尽量避免样品溶血,严格按照全国艾滋病检测技术规范操作.     

定量测定硫酸软骨素的双抗体夹心ELISA的建立

目的建立定量测定硫酸软骨素（CS）的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）,并对其应用价值进行初步评价。方法以CS为抗原分别免疫Balb/c小鼠和日本大耳白兔,制备2种动物的多克隆抗体。用鼠抗体包被微孔板,兔抗体为第2抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔抗体为标记抗体,建立双抗体夹心ELISA,并对线性范围、精密度、回收率和方法学比较进行了评价。结果本研究建立的ELISA线性范围为2～500 mg/L,批内和批间精密度分别为4.48%和5.97%,回收率在99.52%～101.77%之间,与间苯三酚分光光度法测定结果具有良好的相关性（r=0.999 0,P〈0.05）。结论建立的定量测定CS的双抗体夹心ELISA具有敏感性高、重现性好等优点,适合检测应用。     

双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体

目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。     

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测粉尘螨2组变应原方法的建立

尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原（Der1、Der2）。酶联免疫吸附测定（ELISA）是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法．但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组粉尘螨2组Der f 2（rDer f 2）．制备免疫血清，建立一种以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA，以快速检测Der f2．现报告如下。     

定量测定硫酸软骨素的双抗体夹心ELISA的建立

目的建立定量测定硫酸软骨素(CS)的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并对其应用价值进行初步评价。方法以CS为抗原分别免疫Balb/c小鼠和日本大耳白兔,制备2种动物的多克隆抗体。用鼠抗体包被微孔板,兔抗体为第2抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔抗体为标记抗体,建立双抗体夹心ELISA,并对线性范围、精密度、回收率和方法学比较进行了评价。结果本研究建立的ELISA线性范围为2～500 mg/L,批内和批间精密度分别为4.48%和5.97%,回收率在99.52%～101.77%之间,与间苯三酚分光光度法测定结果具有良好的相关性(r=0.999 0,P<0.05)。结论建立的定量测定CS的双抗体夹心ELISA具有敏感性高、重现性好等优点,适合检测应用。     

梅毒抗体双抗原夹心ELISA检测初探

在国内血站系统中梅毒血清学诊断国内主要应用非特异试验如RPR、TRUST[1]等,国外广泛应用的是特异性试验如TPPA[1]、ELISA等.笔者就国产梅毒双抗原ELISA试剂在献血者筛查中的应用作初步探讨.     

双抗原夹心酶联免疫技术检测丙型肝炎病毒抗体

1993年3月，国家卫生部下发文件要求对献血员进行抗HCV抗体的检测，随后有10几家检测HCV抗体的ELISA试剂上市，并进行批批检定，但全是间接ELISA法。由于间接法技术自身的缺陷及各生产厂家的产品存在一定的质量问题，导致了一些误诊和漏检。为此，应从根本上解决试剂本身的质量问题，建立双抗原夹心ELISA技术检测抗HCV抗体可大大提高检测试剂的特异性和敏感性。目前双抗原夹心法大多用于检测抗HIV和Tp抗体。此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，目前已有快速金标试剂采用双抗原夹心法原理，通过免疫层析检测抗HCV抗体。但灵敏度较低，不能用于献血员的筛选。我们通过对基因工程抗原进行改造，以适应标记辣根过氧化物酶，建立双抗原夹心ELISA法检测抗HCV抗体。     

白念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

摘要：目的：建立检测白念珠菌烯醇化酶（enolase, Eno）的双抗体夹心ELISA法,并试用于几种真菌培养上清液的检测。 方法：将抗白念珠菌Eno单抗作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗Eno抗体作为检测抗体,用方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体浓度,建立检测Eno的ELISA法,对方法的精密度、特异性、最低检测限等指标进行评价。用该法检测白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母等不同真菌培养上清中Eno水平。 结果：Eno浓度为20 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间变异系数(CV)分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%;最低检测限为1.25 ng/mL。本法可从白念珠菌37 ℃培养24 h后的上清中检出Eno,Eno含量与白念珠菌菌丝含量呈正相关。本法对近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。 结论：建立的检测白念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA方法有较好的特异性,可用于评价Eno检测在侵袭性白念珠菌感染中的诊断价值。     

人可溶性补体受体1型双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

摘要：目的：建立定量检测人血清可溶性补体受体1型（sCR1）双抗体ELISA夹心法。 方法：用鼠抗人CD35单克隆抗体(mAb)包被反应板,以兔抗人sCR1抗体（PcAb）为夹心抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG为检测抗体,纯化后的人sCR1蛋白为标准品,建立定量检测人血清sCR1双抗体夹心ELISA法,并检测50例体检健康者和32例肝硬化患者血清样本中sCR1水平。 结果：建立的双抗体夹心ELISA法检测人血清sCR1的线性范围为15.6～250 ng/mL。低、高浓度批内变异系数（CV）分别为9.3％、7.1％;批间CV分别为11.2％和9.82％;回收率分别为89.5％和92.5％。50例健康人和32例肝硬化患者血清sCR1水平分别为（33.82±5.88） ng/mL和（152.99±9.51） ng/mL,两者比较有统计学差异（t=70.18, P＜0.001）。 结论：成功建立了检测人血清sCR1的双抗体夹心ELISA法,重复性和准确性较好。初步发现肝硬化患者血清sCR1水平显著升高。     

人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的评价与应用

目的对研制的人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的重复性、稳定性进行评价,并了解其实际应用效果。方法选取中、晚期肝硬化患者50例和健康体检者50例分别作为肝病组和正常对照组,以鼠抗人CD35单克隆抗体、兔抗人sCR1多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG为包被抗体、夹心抗体和检测抗体,以纯化后的重组人sCR1蛋白为标准品,建立人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒,进行试剂盒重复性和稳定性检验,并应用该试剂盒检测两组血清sCR1蛋白水平。结果双抗体夹心ELISA法检测人血清微量sCR1蛋白的线性范围是15.60~250.00ng/mL;血清sCR1蛋白水平对吸光度值的回归方程为Y=112.10 X2+18.21 X+1.694(r2=0.998);重复性检测中,高、低水平标准品检测值的批内相对标准偏差(RSD)分别为6.20%、7.40%,批间RSD分别为6.70%和7.90%;试剂盒稳定性检测中,RSD均不大于0.01;肝病组血清sCR1表达水平显著高于正常对照组(P0.01)。结论人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒线性范围广、重复性好、易于保存,适合于临床和科研检测工作。     

ELISA两种方法检测献血者标本HIV(1+2)抗体比较

全血HIV(1+2)抗体检测是保证输血安全的重要检测项目.由于ELISA间接法受原料所限,难以使灵敏度和特异性同时保持在较好的水平,提高灵敏度,则使检测结果假阳性率升高,造成大量血液浪费.而ELISA双抗原夹心法是直接采用重组基因抗原进行标记,达到对标本HIV抗体(IgM、IgG)直接测定的目的.笔者就两种方法检测全血HIV(1+2)抗体进行比较,现将结果报道如下.     

ELISA双抗原夹心法与TRUS法检测梅毒抗体的比较

梅毒是由梅毒螺旋体 ( Treponema Pallidum,TP)感染引起的性传播性疾病 ,可侵犯全身多种器官 ,产生多种症状和体征 ,危害程度极高。梅毒可通过性传播、胎盘传播 ,也可经血液传播 ,因此 ,做好血液的梅毒安全性检查 ,提高梅毒的检出率对于控制梅毒蔓延极为重要。本站应用 EL ISA双抗原夹心法试剂作为血液梅毒抗体的检测试剂 ,使检出率作者单位 :32 30 0 0　浙江省丽水市中心血站大为提高 ,现以 TPHA确诊试剂为参考 ,将 ELISA双抗原夹心法试剂与 TRUST法试剂检测梅毒及非梅毒血清标本的结果报告如下。材料与方法1　材料1 .1　试剂 :E…