鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶和RND外排泵相关耐药基因的研究

目的分析鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶和RND外排泵基因的携带情况,并进一步探讨外排泵过表达与菌株耐药性形成的关系。方法采用PCR技术扩增分离鲍曼不动杆菌的B类金属酶(blaNDM-1、blaVIM、blaIMP)、D类苯唑西林酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58)以及RND外排泵基因(adeB、adeJ、adeG),再采用qPCR对6株多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)和4株非多重耐药鲍曼不动杆菌(NMDRAB)菌株的adeB、adeJ和adeG水平进行检测。结果 71株MDRAB中blaNDM-1(26.8%,19/71)、blaIMP(88.7%,63/71)和blaOXA-23(84.5%,60/71)的检出率明显高于30株NMDRAB中blaNDM-1(0.0%,0/30)、blaIMP(0.0%,0/30)和blaOXA-23(10.0%,3/30)的检出率,差异均有统计学意义(P0.05)。blaOXA-51的检出率为100.0%,未检测到blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58。71株MDRAB中adeB(98.6%,70/71)和adeG(100.0%,71/71)的检出率显著高于30株NMDRAB中adeB(20.0%,6/30)和adeG(90.0%,27/30)的检出率,差异均有统计学意义(P0.05);adeJ的检出率为100.0%;同时MDRAB菌株的adeB和adeG基因表达量明显高于NMDRAB菌株(P0.05)。结论碳青霉烯酶基因NDM-1、IMP和OXA-23和外排泵adeABC、adeFGH的高表达与鲍曼不动杆菌多重耐药的形成关系密切。     

临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析及常见耐药基因检测

目的了解上海市同仁医院临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性及耐药机制,为广泛耐药鲍曼不动杆菌感染的防治提供依据。方法采用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)对临床分离的28株广泛耐药鲍曼不动杆菌进行分子生物学分型,采用PCR方法检测9种常见β内酰胺酶基因:blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaNDM-1、blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-51和blaOXA-58;膜孔蛋白基因CarO;插入序列ISAba1;以及ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58的连锁检测。结果 28株临床分离的广泛耐药鲍曼不动杆菌大多来自危重患者呼吸道标本,ERIC-PCR基因分型提示为同一来源克隆株;所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51基因,未检测出B类β内酰胺酶基因,以及blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-58等基因;膜孔蛋白基因CarO和插入序列ISAba1检测均为阳性,ISAba1-OXA23、ISAba1-OXA58连锁检测均未扩增到预期条带。结论研究期间临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌为同一克隆株,且携带相同耐药基因,提示存在克隆传播。     

鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及耐药基因型研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药性以及与β-内酰胺酶耐药基因的关系。方法采用K-B纸片扩散法检测20株鲍曼不动杆菌的耐药状况，用聚合酶链反应（PCR）方法检测6种β-内酰胺酶耐药基因（blaTEM、blaVIM、blaOXA-23 、blaSHV、 blaADC、 blaIMP）并加以分析。结果20株鲍曼不动杆菌对头孢菌素类高度耐药，对碳青霉烯类大多敏感。所有菌株均检出blaTEM、blaADC基因，有18株携带blaVIM基因，其余基因均为阴性。结论同时携带blaTEM、blaADC和blaVIM基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药耐药的主要原因。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因及整合子检测与分析

目的了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)碳青霉烯酶耐药基因及整合子基因携带情况。方法收集徐州医科大学附属医院2011至2015年CRAB菌株76株,用PCR技术检测bla_(OXA-23)、bla_(OXA-24)、bla_(OXA-51)、bla_(OXA-58)、bla_(OXA-143)、bla_(OXA-235)、blaVIM、blaIMP碳青霉烯酶基因和Ⅰ类、Ⅱ类整合子基因。结果 76株CRAB中bla_(OXA-51)检出率为100.0%,bla_(OXA-23)检出率为93.4%,blaIMP检出率为86.8%,Ⅰ类整合子检出率为50.0%,未检出其他耐药基因和Ⅱ类整合子基因。结论我院CRAB的耐药基因以bla_(OXA-23)和blaIMP为主,且Ⅰ类整合子较为流行。     

肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(blaTEM、blaPER和blaCARB)、B类β-内酰胺酶(blaIMP和blaVIM)、C类β-内酰胺酶(blaADC和blaDHA)、D类β-内酰胺酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果:临床分离160株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体中鲍曼不动杆菌143株(占90%),包括亚胺培南耐药株119株(占83.2%)和敏感株24株(占16.8%)。所有鲍曼不动杆菌均检出blaOXA-51基因,其中,亚胺培南耐药株中检出blaOXA-23(98.3%)、blaTEM(41.4%)、blaADC(98.3%)和blaDHA(0.7%),blaPER、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58均未检出;敏感株中未检出blaOXA-23。adeJ、macB、abeM和craA基因在143株鲍曼不动杆菌中的携带率均为100%;emrB、emrA和abeS基因携带率均超过80%。adeB基因在亚胺培南耐药株中检出117株(98.3%)。在CCCP干预试验中,携带adeB基因的鲍曼不动杆菌MIC50降低1/2。结论:呼吸内科鲍曼不动杆菌主要携带blaOXA-23和adeB主动外排泵基因,可能与亚胺培南耐药密切相关。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及插入序列ISA ba1研究

目的：检测耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶基因型及其基因周围环境。 方法：对101株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,头孢他啶与2-巯基丙酸协同试验筛选金属酶,多重PCR同时检测6种碳青霉烯酶耐药基因,对部分阳性产物进行测序比对,同时分析碳青霉烯酶基因上游插入序列。 结果：协同试验未检出产金属酶菌株。所有菌株都携带OXA-51-like基因,87株（86.1%）OXA-23-like基因阳性,2株OXA-24-like基因阳性,OXA-58-like基因与金属酶基因全为阴性。85株OXA-23-like基因上游检测到插入序列ISA ba1,OXA-51-like基因上游未检测到ISA ba1。 结论：OXA-23和OXA-51组β-内酰胺酶基因是本组鲍曼不动杆菌最主要的碳青霉烯酶基因型,OXA-23组碳青霉烯酶基因与插入序列 ISA ba1关系密切。     

耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌的碳青霉烯酶、整合酶基因型研究

目的研究碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶、整合酶基因型情况。方法收集93株碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌和16株碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌,采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应(PCR)扩增和测序分析碳青霉烯酶和整合子基因。结果耐药株碳青霉烯酶表型检测阳性率为62.4%,金属酶表型检测均为阴性;PCR结果显示耐药菌中OXA-23、Int1检出率为100%,OXA-51检出率为96.8%,OXA-58检出率为1.1%,未检出OXA-24、VIM、IMP和Int2,敏感株除Int1检出率为37.5%外,其余基因均未检出。结论临床分离的碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌主要携带OXA-23、OXA-51碳青霉烯酶基因型,并且均携带Ⅰ类整合酶基因。     

ICU鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的分析重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌耐药情况,研究其碳青霉烯酶基因型的流行情况。方法收集2016-2017年ICU分离得到的108株鲍曼不动杆菌。采用K-B纸片扩散法进行药物敏感试验。采用PCR法检测7种碳青霉烯酶基因,包括OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP-1、IMP-4和VIM-2。结果 108株鲍曼不动杆菌中碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的检出率从2016年的60.0%(24/40)上升到2017年的82.4%(56/68)。CRAB对多黏菌素B未见耐药(0.0%,0/80),对其他常见的抗菌药物耐药率均在96%左右。而非CRAB的耐药率均小于15%,与CRAB差别明显。碳青霉烯酶基因OXA-51的检出率为100.0%(108/108);OXA-23基因的检出率为63.0%(68/108),其中非CRAB未检出OXA-23基因(0/28),CRAB的OXA-23基因检出率为85.0%(68/80);其他OXA-24、OXA-58、IMP-1、IMP-4和VIM-2基因均未检出。结论 ICU的CRAB检出率上升明显且耐药现象严重;OXA-23基因在CRAB对碳青霉烯类药物耐药机制中起主要作用。     

多重PCR方法检测多耐药鲍曼不动杆菌基因型

目的建立一种适于临床微生物实验室快速检测多耐药鲍曼不动杆菌基因的多重PCR方法。方法筛选临床分离鉴定的多耐药鲍曼不动杆菌105株;用热煮沸法提取DNA,采用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增OXA酶基因(blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like)和整合酶基因(intI1,intI2),扩增产物经凝胶成像系统分析。结果105株多耐药鲍曼不动杆菌中,76株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like intI1基因型,18株是blaOXA-51-like intI1基因型,10株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like基因型,1株是blaOXA-51-like blaOXA-23-like blaOXA-58-like基因型。未检测出携带有blaOXA-24-like和intI2基因的菌株。结论多耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及流行趋势与其携带的OXA酶基因和整合酶基因相关。     

血液病患者鲍曼不动杆菌的耐药性分析及其耐药基因检测

目的了解血液病患者临床分离鲍曼不动杆菌的耐药表型和多种耐药基因的携带情况。方法收集2011年临床分离的非重复鲍曼不动杆菌120株,采用纸片扩散法进行药敏试验,试验结果按照CLSI 2011年版标准判读,采用WHONET 5.6软件进行数据分析;应用聚合酶链反应及测序方法检测10种耐药相关基因（blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1、intI 1和intI 2）。结果鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药率范围为48.3%~94.2%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为51.7%和48.3%;耐药相关基因blaOXA-51-like、blaOXA-23-like、blaTEM、blaampC、armA、ISAba1和intI 1的阳性率分别为100%、60.0%、46.7%、85.8%、75.8%、86.7%和85.0%,而未检出blaOXA-24-like、blaOXA-58-like和intI 2。结论碳青霉烯类抗菌药物对鲍曼不动杆菌仍具有较好的体外抗菌活性,鲍曼不动杆菌多重耐药相关基因的携带率较高,多重耐药现象非常严重,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。     

鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型检测分析

目的了解鲍曼不动杆菌OXA型碳青霉烯酶基因型的存在状况。方法应用聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51和OXA-58基因,对PCR产物进行DNA直接测序,同时采用PCR对ISAba1和ISAba3插入序列进行检测,对PCR产物进行直接测序。除分别对OXA-23和ISAba1进行检测外,在两个基因之间再设计一对引物进行扩增,获得ISAba1与OXA-23之间的全长DNA序列。结果收集温州医科大学附属第一医院住院患者临床分离的200株鲍曼不动杆菌,用PCR方法共检到OXA-23基因阳性菌株155株,阳性率为77.5%,其中与插入序列ISAba1同时阳性143株,阳性率为71.5%,本次试验未检到OXA-24基因阳性菌株;200株鲍曼不动杆菌均携带OXA-51基因,阳性率为100%,其中和OXA-23基因同时阳性155株,阳性率为77.5%;OXA-58基因阳性菌株共检出8株,阳性率为4.0%,插入序列ISAba3阳性共检出12株,阳性率为6.0%,其中有8株ISAba3和OXA-58同时阳性,阳性率为4.0%。结论产OXA-23型碳青霉烯酶是该院鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布

目的 了解耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及整合子分布情况.方法 收集天津医科大学总医院2008年1月至2010年3月期间,103株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌临床标本.用Vitek-2系统鉴定细菌,并进行药敏试验,通过改良Hodge试验、改良三维试验和2-巯基丙酸协同试验初筛碳青霉烯酶,多重PCR同时检测4种OXA型碳青霉烯酶基因、2种金属酶基因及整合酶基因,对整合子可变区进行PCR检测及序列分析.结果 103株鲍曼不动杆菌中,改良Hodge试验检出碳青霉烯酶阳性75株(72.8%),改良三维试验检出产碳青霉烯酶菌株80株(77.7%),未检出产金属酶菌株.PCR检出blaOXA-51-like+bsaOXA-23-like+int11基因84株,blaOxA-51-like+blaOXA-23-like阳性5株,blaOXA-51-like+intll阳性8株,blaOXA-51-like+blaOXA-24-like阳性2株,仅blaOXA-51-like阳性4株,blaOXA-58-like、金属酶基因(IMP-1、VIM-2)及Ⅱ类整合酶基因(intI2)均阴性.89株(96.7%)Ⅰ类整合酶阳性株均扩增出可变区,检出2种耐药基因盒组合形式:aacA4-catB8-aadAl(2 300 bp)81株,aacCl-orfX-orfX-orfX'-aadAla(3 000 bp)8株.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药及多重耐药主要与其携带的OXA-23型碳青霉烯酶和Ⅰ类整合子有关.

Abstract：

Objective To investigate the carbapenemases and integrons in imipenem-resistant Acinetobacter baumannii. Methods One hundred and three Acinetobacter baumannii were collected from Janurary 2008 to March 2010 in Tianjin Medical University General Hospital. The identification of strains and antimicrobial susceptibility test were performed by using Vitek-2 compact automatic system. Isolates of imipenem-resistant A. baumannii were screened for carbapenemases by modified Hodge test, improved threedimensional test and 2-mercaptopropionic acid synergy test. Isolates were then subjected to the multiplex PCR targeting genes encoding for OXA type carbapenemases, metallo-β-lactamases (MBLs) and integrases. The variable regions of integrons were amplificated and sequenced. Results Among the 103 isolates, 75 (72. 8% ) demonstrated positive in the modified Hodge test, 80 (77.7%)were positive in the improved three-dimensional test. No MBLs was found in the 2-mercaptopropionic acid synergy test. Eightyfour isolates were positive for blaOXA-51-like, blaOXA-23-like, and intI1; five were positive for blaOXA-51-like and blaOXA-23-like ;eight were positive for blaOXA-51-like and int11 ;two were positive for blaOXA-51-like and blaOXA-24-like ;four were only found positive for blaOXA-51-like. The blaOXA-58-like, IMP-1, VIM-2 and intI2 genes were all negative. Eighty-nine(96. 7% )of the intI1 positive strains owned the variable region. Two different cassettes arrangements were identified within class 1 integrons:81 isolates harbored aacA4-catB8-aadAI (2 300 bp) and 8 harbored aacCl-orX-orfX-orX'-aadAla (3 000 bp ) . Conclusion The presence of OXA-23 carbapenermase and class Ⅰ integrons are correlated with Acinetobacter baumannii resistant to carbapenems and multi-drug resistance.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌金属β内酰胺酶表型及基因型检测

目的研究华西医院耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌产金属酶的情况。方法采用亚胺培南和亚胺培南加EDTA纸片,筛选出金属酶表型阳性的菌株,再用PCR技术扩增耐药基因blaIMP和blaVIM。结果49株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌中,有30株菌（61．2％）金属酶表型阳性。PCR法检测到10株携带金属酶基因,6株（20％）携带blaIMP,4株（13．3％）携带blaVIM。结论华西医院耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌要产金属酶。其基因型为IMP型和VIM型。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的OXA酶基因研究

目的 研究广东省中山市中医院分离耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)耐药性、苯唑西林(OXA)酶基因及流行特性。方法 收集广东省中山市中医院2012年7月至2013年12月临床分离40株CRAB,采用纸片扩散法(K-B法)药敏试验,改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶;用聚合酶链式反应(PCR)法对β-内酰胺酶基因oxa-23、oxa-24、oxa-51和oxa-58进行扩增、序列分析。结果 40株CRAB对16种药物中,对多黏菌素和米诺环素敏感性最高,耐药率小于或等于5.0%;改良Hodge试验阳性29株(占72.5%);所有菌株均被检测到含有oxa-51基因(占100.0%),oxa-23基因为38株(占95.0%),未检出oxa-24和oxa-58基因。结论 oxa-51及oxa-23基因是广东省中山市中医院流行CRAB的主要基因型。     

从携带多种耐药基因认识鲍曼不动杆菌多重耐药性

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因和耐药性。方法用MIC法检测鲍曼不动杆菌的耐药性,用PCR方法检测各种耐药基因。结果2株菌对亚胺培南耐药,1株中介;所测菌均呈多重耐药性。23株菌均扩增到blaTEM和aacA4基因;22株菌检测到ampC基因,22株菌aacC1、aadA1基因为阳性,2株菌aphA1基因为阳性;2株菌blaPER基因为阳性,3株菌blaOXA-23型基因阳性。结论携带am-pC、blaPER、blaOXA-23、aacA4、aadA1等多种耐药基因是我院鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌耐药特征及分子流行病学研究

目的调查2009年碳青酶烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的耐药基因及分子流行病学特征。方法用PCR筛查碳青霉烯类耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP、VIM、NDM-1和adeABC型外排泵结构基因adeB,并进行测序分析;用基因外重复回文序列PCR(repetitive extragenic palindromic sequence-based PCR,Rep-PCR)分型技术进行分子流行病学监测。结果2009年我院66株CRAB中98.5%的菌株OXA-23基因阳性,95.5%adeB基因阳性,两种基因同时阳性的比率为93.9%,未检出其他耐药基因。66株CRAB可分为A～D 4个基因型,我院流行的优势克隆株为A型,波及10个病房。这些基因型不同于2004年我院CRAB流行株。结论 2009年CRAB通过产生OXA-23酶和adeABC型外排泵等机制共同介导碳青霉烯类耐药,CRAB克隆株水平传播是造成2009年鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药率增加的主要原因。     

多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的检测

目的了解多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因的分布情况。方法收集80株多重耐药鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测多重耐药鲍氏不动杆菌的碳青霉烯酶耐药基因OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、SIM、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 80株多重耐药鲍氏不动杆菌检出耐药基因OXA-23[49（61.3%）]、OXA-51[73（91.3%）]、OXA-58[7（8.8%）]、OXA-24[1（1.3%）]、IMP[17（21.3%）]及VIM[2（2.5%）],未检测出GIM、SIM、SPM基因。结论 IMP、OXA、VIM是多重耐药鲍氏不动杆菌携带的主要基因类型。