肉苁蓉苯乙醇总苷对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的：探讨肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）对转化生长因子β1（TGF-β1）介导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖活化作用及对TGF-β1/Smad信号通路表达的影响。方法：试验分为正常对照组、5 ng/mL TGF-β1刺激的HSC-T6模型组、5 ng/mL TGF-β1+不同终浓度（25、50、75和100 μg/mL）CPhGs给药组,另设只加DMEM培养液的空白组。体外培养HSC-T6细胞,通过四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测细胞的增殖;LDH比色法测定CPhGs的细胞毒性;采用荧光定量PCR（qPCR）检测Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达;采用Western blot法检测Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,TGF-β1模型组显著促进了HSC-T6细胞的增殖,而50~100 μg/mL的CPhGs可以抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖（P<0.05）,且25~100 μg/mL的CPhGs对HSC-T6无明显细胞毒性作用;25~100 μg/mL CPhGs均可抑制Smad2和Smad3 mRNA和蛋白水平的表达,且明显抑制Smad2和Smad3蛋白的磷酸化水平,促进Smad7 mRNA和蛋白的表达,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：CPhGs的抗肝纤维化作用可能与其阻断TGF-β1/Smad通路进而阻断HSC-T6细胞的活化和增殖有关。     

毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB处理后大鼠肝星状细胞的影响

目的：探讨毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB（PDGF-BB）诱导的大鼠肝星状细胞（HSC）活化、迁移、胶原沉积、纤维化作用的影响,并进一步探讨其对ERK1/2、Akt信号通路表达的影响。方法：HSC细胞分为毛蕊花糖苷（1.5、3.0、6.0 mg/L）组[重组大鼠PDGF-BB（rrPDGF-BB）预处理24 h后,不同浓度的毛蕊花糖苷干预],PDGF-BB组（rrPDGF-BB预处理24 h,无毛蕊花糖苷干预）,对照组（无rrPDGF-BB预处理,无毛蕊花糖苷干预）;分别采用划痕实验检测细胞迁移能力,ELISA法检测Ⅰ型胶原（Col-I）含量,Western blot检测纤维化HSC活化标志物α-SMA蛋白、凋亡效应分子caspase-3,及ERK1/2、Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,PDGF-BB组能促进HSC的迁移（P < 0.01）,毛蕊花糖苷（1.5、3.0、6.0 mg/L）组能明显抑制HSC的迁移（P < 0.01）,且毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移有明显的剂量依赖性（r=0.894,P=0.038）;随着受试物浓度的增加,Col-I分泌呈现降低趋势,其中毛蕊花糖苷6 mg/L组抑制胶原产生的作用效果最明显（P < 0.01）;毛蕊花糖苷（1.5,3.0,6.0 mg/L）组能够抑制α-SMA蛋白的表达、激活caspase-3的活性,使ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达明显降低,且测定蛋白的表达在毛蕊花糖苷各剂量组间也呈现一定的剂量-效应关系（0.826 < r < 0.997,P < 0.01）。结论：毛蕊花糖苷可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC的活化、迁移和纤维化作用,其机制可能与毛蕊花糖苷激活caspase-3,阻断ERK1/2、Akt信号通路,抑制HSC中细胞外基质过度沉积及胶原形成有关。     

肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的：研究肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）脂质体对大鼠肝星状细胞（HSCs）增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法：HSCs分为空白对照组和CPhGs脂质体低、中、高浓度（分别为7.36、14.72、29.45 μg/mL）处理组。采用MTT法检测CPhGs脂质体对大鼠肝星状细胞增殖的影响;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡状况,PI染色法检测大鼠肝星状细胞的周期变化;Western blot检测caspase-3、p27蛋白的表达变化。结果：与空白对照组比较,低、中、高3个剂量的CPhGs脂质体作用于HSCs后,均可抑制细胞的增殖（P < 0.05）;3个剂量的CPhGs脂质体均可促使大鼠肝星状细胞发生凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期,上调caspase-3及p27蛋白的表达（P < 0.05）。结论：CPhGs脂质体对体外培养大鼠肝星状细胞有抑制增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期的作用。其机制可能与CPhGs脂质体上调caspase-3和p27蛋白表达有关。     

红花水提物不同有效部位的体外 抗辐射作用及 机制研究

目的：通过对红花水提物中不同有效部位进行抗辐射效应及作用机制的初步探讨,为开发新型安全有效的辐射防护药物提供实验依据。方法：红花药材用蒸馏水60 ℃提取得红花水提物,采用大孔树脂HP-20洗脱分离得到水部位和30%、50%、70%、95%醇部位,采用电子自旋共振波谱仪（ESR）检测红花水提物不同有效部位清除自由基的能力;经红花水提物30%及5%醇部位处理后,利用CCK-8法检测其对⁶⁰Co γ射线照射后人肝L02细胞存活率的影响;流式细胞术研究其对⁶⁰Co γ射线照射后人淋巴细胞AHH-1细胞凋亡、细胞周期及Bcl-2/Bax比率的影响。结果：ESR自由基清除实验显示红花水提物的不同有效部位均具有清除自由基能力,半数抑制浓度IC₅₀值为1.7~79.7 mg/mL。CCK-8法检测结果显示30%及50%醇部位处理辐照后L02细胞的存活率分别为128.3%及130.9%,与照射组比较显著增加（P < 0.01）。流式细胞术结果显示与照射组凋亡率（24.7%±4.4%）比较,红花水提物30%及50%醇部位处理组凋亡率分别为15.3%±1.6%及15.2%±1.9%,明显降低（P < 0.01）。细胞周期实验结果显示与照射组AHH-1细胞G2/M期比例（45.7%±0.7%）比较,红花水提物30%及50%醇部位处理组G2/M期细胞比例分别为（42.3%±0.6%）及（36.4%±0.4%）,差异有统计学意义（P < 0.01）,同时红花水提物30%及50%醇部位能缓解照射引起的Bcl-2/Bax比率下降（P < 0.05）。结论：红花水提物的30%及50%醇洗脱部位对⁶⁰Co γ射线照射的L02、AHH-1细胞具有明显的辐射防护作用,其作用机制可能与清除自由基、改善细胞周期G2/M期阻滞、调控Bcl-2/Bax比率进而抑制细胞凋亡有关,可作为潜在的安全有效的抗辐射药物继续研究。     

红景天苷通过JAK2/STAT3 通路影响宫颈鳞癌C33A细胞的增殖、侵袭和凋亡

目的：观察红景天苷对宫颈鳞癌C33A细胞增殖、侵袭及凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法：将C33A细胞分为4 组：对照组、低剂量组（红景天苷50 μg/ml）、高剂量组（红景天苷150 μg/ml）、抑制剂AG490 组（JAK2/STAT3 信号通路抑制剂AG490 50 μmol/L）,采用MTT 法、EdU 标记实验、Transwell 实验、Rh123 染色和流式细胞术分别检测红景天苷和AG490 对C33A 细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,Western blotting 检测红景天苷和AG490 对C33A 细胞中JAK2/STAT3 通路相关蛋白（p-JAK2、p-STAT3）和凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、caspase-3）表达的影响。结果：与对照组相比,低剂量组C33A细胞的增殖和DNA的合成明显受到抑制（均P<0.05）、侵袭能力明显降低（均P<0.05）、Rh123 荧光强度明显减弱（均P<0.05）、线粒体膜结构受到破坏、细胞凋亡率明显增加（均P<0.05）;p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2 水平显著下降（均P<0.05）、Bax、caspase-3 的表达水平显著升高（P<0.05）;与低剂量组相比,高剂量组、抑制剂组对C33A细胞增殖、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的影响更为显著（P<0.05）;而高剂量组、抑制剂组间无显著差异。结论：红景天苷可以抑制C33A细胞的增殖和侵袭、促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3 信号通路有关。     

维生素E琥珀酸酯对人食管癌TE-1和Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对人食管鳞癌低分化细胞株TE-1以及高分化细胞株Eca-109增殖的抑制作用及诱发凋亡的作用。方法:不同浓度(0、5、10、15、20 μg/mL)VES分别处理TE-1及Eca-109细胞24 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;光镜下观察细胞形态;DAPI染色观察细胞核凋亡形态,Western blot方法检测细胞中凋亡标志蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达情况。结果:与对照组比较,MTT检测结果显示随着VES剂量增加,两种细胞株均出现了不同程度的增殖抑制,在20 μg/mL VES组细胞增殖率均达到最低(TE-1:15.89%±6.22%;Eca-109:13.78%±4.89%)。光镜下细胞形态随着VES剂量增加发生明显改变,TE-1细胞在10 μg/mL VES组开始出现细胞变圆、体积缩小、漂浮死亡等形态;Eca-109细胞在15 μg/mL VES组开始出现细胞变圆、体积缩小、漂浮死亡等形态。DAPI染色结果显示,VES高剂量组(20 μg/mL)两株细胞的细胞核均出现明显的凋亡形态。Western blot显示,随着VES剂量增加,凋亡标记蛋白PARP裂解激活,在20 μg/mL VES处理组达到最大裂解程度。结论:VES对低分化及高分化人食管癌细胞的增殖均有抑制作用并诱导细胞发生凋亡。     

姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响

目的： 研究姜黄素对人永生化表皮HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。方法：通过免疫细胞化学法和免疫印迹检测姜黄素对HaCaT细胞凋亡过程中相关基因表达的影响。结果：免疫细胞化学染色结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达增强。Western blot检测结果显示,经7.5 μg/mL姜黄素处理之后,与细胞凋亡相关的抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白P53、Fas、Bax表达上调。结论：姜黄素诱导HaCaT细胞凋亡过程中伴随着抑凋亡基因bcl-2表达的抑制和促凋亡基因p53、Bax和Fas基因的激活。由此证明姜黄素通过多种凋亡相关基因的调控,激活凋亡信号传导途径,诱使细胞凋亡。     

白藜芦醇对肺癌紫杉醇耐药细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：研究白藜芦醇作用后人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇敏感性的改变,并探讨其作用机制。方法：建立人肺腺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R,用不同浓度白藜芦醇、紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;概率单位法计算半数抑制浓度（IC₅₀）;观察不同浓度白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞IC₅₀的变化;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：白藜芦醇对A549/Taxol-R细胞增殖的抑制率具有浓度和时间的双重依赖性（P均 < 0.05）。白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞的IC₅₀值下降,从（17.50±1.24）μg/mL降低至（4.18±0.62）μg/mL。白藜芦醇和紫杉醇联合干预的A549/Taxol-R细胞凋亡率、坏死率高于单独干预组（P < 0.05）,联合干预组A549/Taxol-R细胞的Bax、Caspase-3的表达较单独干预组上调,而Bcl-2的表达则相对下调（P < 0.05）。结论：白藜芦醇可能通过促进细胞的凋亡来增强人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的敏感性,其机制可能和促进Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达有关。     

宝藿苷-I联合5-FU对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究宝霍苷-I与5-FU联合应用对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响。方法：实验设联合用药组（12.5mg/L宝霍苷-I＋12.5mg/L5-FU）、阴性对照组（0.1%DMSO）、25mg/L宝藿苷-I组和12.5mg/L5-FU组,共4组,每组均设3个复孔,每孔100μl（含Eca-109细胞数为1×10~4个）。作用24、48、72h时,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分别检测各组Eca-109细胞的增殖;并在作用48h后,用流式细胞术检测Eca-109细胞凋亡率;用Western blot技术检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果：宝霍苷-I、5-FU单用及其联合应用在24、48和72h时均可明显抑制Eca-109细胞的增殖,与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P均〈0.05）,联合应用的抑制作用显著优于单独应用（P〈0.05）。宝霍苷-I、5-FU单独及其联合作用48h后,均可诱导Eca-109细胞凋亡,均可下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P均〈0.05）,且联合用药组较单独用药组作用明显（P〈0.05）。结论：宝霍苷-I与5-FU联合应用对Eca-109细胞的增殖抑制和凋亡诱导有协同作用,可能与下调Bcl-2蛋白的表达、上调Bax蛋白的表达有关。     

顺铂联合迷迭香酸抑制Huh7细胞增殖诱导凋亡

目的:探讨含铂抗癌药物顺铂（Cisplatin,CDDP）联合中药单体迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）对人原发性肝癌Huh7细胞系增殖与凋亡的影响。方法:通过CCK-8细胞增殖实验检测并计算CDDP和RA治疗24 h、48 h、72 h后的IC50值,随后设置未经药物处理组（control组）、5 μg/mL CDDP处理组、200 μg/mL RA处理组以及5 μg/mL CDDP联合200 μg/mL RA处理组。采用流式细胞术检测control组、CDDP处理组、RA处理组以及联合用药组的细胞凋亡率分别为（7.28±0.56）%、（18.23±2.53）%、（26.44±1.99）%和（37.27±0.28）%。最后,利用免疫印迹试验(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3以及Procaspase-3凋亡相关蛋白的表达水平。结果:RA可增强CDDP对Huh7细胞增殖的抑制能力并呈现出浓度依赖性（P＜0.05）,在CDDP联合RA处理组中Huh7细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,CDDP联合RA作用后促凋亡蛋白Bax与Cleaved-caspase-3的表达水平增加,而Bcl-2的表达水平下降（P＜0.05）。结论:RA能抑制Huh7细胞增殖并且诱导细胞凋亡,与顺铂联用具有协同作用,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

上海中医药大学附属普陀医院实验中心，上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所，上海200062

背景与目的：细胞凋亡受阻是肿瘤细胞产生耐药的重要因素,从细胞凋亡的研究入手,将为肿瘤的治疗和耐药性的逆转开辟新的途径。本研究观察一种新型萘酰亚胺类衍生物8c对结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞的作用,探讨诱导HCT116/L-OHP耐药细胞凋亡的分子机制。方法：采用CCK-8法检测8c对HCT116/L-OHP细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察8c对HCT116/L-OHP细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR(realtime PCR)检测p53 mRNA、Bax mRNA及Bcl-2 mRNA水平变化;蛋白［质］印迹法(Western blot)检测p-p53、Bax、Bcl-2及细胞色素c(Cyt-c)的蛋白表达水平。结果：8c抑制HCT116/L-OHP细胞增殖的半数抑制浓度(IC₅₀=8.16 μmol/L)低于阳性对照氨奈菲特(IC₅₀=28.37 μmol/L);药物作用后,8c诱导耐药细胞产生凋亡,凋亡通路中p53(Ser15)磷酸化水平上升,但p53 mRNA水平不受影响;Bax蛋白水平及mRNA水平明显上升,Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,使得Bax/Bcl-2比例增加,同时8c又引起细胞色素c的释放。结论：8c通过磷酸化p53 Ser-15位点激活p53,随即激活细胞凋亡通路相关蛋白的表达,这可能是8c抑制结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞增殖的重要机制之一。8c具有良好的抗肿瘤及抗耐药潜力和开发应用前景。     

附子提取物对肺癌A549细胞增殖抑制及放射增敏作用的研究

目的: 观察附子提取物对人肺癌A549细胞增殖及放射敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法: 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度附子提取物作用后细胞增殖情况,并选择IC₂₀(30μg/mL)作为后续实验浓度。集落形成实验检测A549细胞的存活分数,单机多靶模型拟合细胞存活曲线计算平均致死剂量(D₀)及放射增敏比(SER)。将细胞分为对照组、附子组、X射线照射组和附子处理后X射线照射组。对照组给予培养基,附子组给予30μg/mL附子提取物处理24 h,X射线照射组采用10 Gy的X射线照射,附子处理后X射线照射组先采用30μg/mL附子提取物处理24 h后,再给予10 Gy的X射线照射。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果: CCK-8法检测结果显示,小于20μg/mL的附子提取物对A549细胞存活率有增强作用,但随着附子提取物浓度到达30μg/mL,开始对人肺癌A549细胞生长具有抑制作用,且与附子提取物浓度相关。集落形成实验结果提示附子处理后X射线照射组存活曲线起始处肩部稍窄,表明联用附子提取物后,引起细胞死亡所需的放疗剂量逐渐减小,X射线照射组和附子处理后X射线照射组D₀值分别为1.83和1.48 Gy,SER为1.24。流式细胞术检测结果提示附子处理后X射线照射组细胞凋亡率显著增加,高于附子组和X线照射组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,附子组与X射线照射组较对照组细胞Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降。附子处理后X射线照射组较对照组细胞Bax、Bcl-2蛋白含量变化更加显著(P<0.01)。结论: 30μg/mL的附子提取物对人肺癌A549细胞具有增殖抑制作用和放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的研究

目的：探讨白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的最佳条件并筛选敏感细胞。方法：设立阴性对照组、空白调零组及40 μmol/L白杨素、5.0 μg/mL顺铂、40 μmol/L白杨素+5.0 μg/mL顺铂3个处理组,选取人结直肠癌细胞（HCT-116）、人鼻咽癌细胞（CNE1）、人肝癌细胞（HepG2）、人胃癌细胞（BGC-823）分别作用24 h。采用四甲基噻唑蓝（MTT）法测定肿瘤细胞的增殖抑制率,采用Hoechst 33342荧光染色法测定诱导肿瘤细胞的凋亡率,通过抑制率和凋亡率筛选出敏感细胞。采用L₉（3³）正交设计方法,设立3个白杨素水平（10、20、40 μmol/L）,3个顺铂水平（1.3、2.5、5.0 μg/mL）,以及3种作用时间（12、24、36 h）处理敏感细胞,确定白杨素增强顺铂抗肿瘤作用的最佳作用条件。结果：与白杨素或顺铂单独处理组相比,MTT试验结果表明,白杨素联合顺铂作用组对上述4种肿瘤细胞增殖的抑制率均明显增加,差异均具有统计学意义（P均 < 0.01）;Hoechst 33342染色实验发现,白杨素联合顺铂作用组诱导各肿瘤细胞的凋亡率亦均明显增加（P均 < 0.01）。白杨素联合顺铂作用组对人胃癌细胞BGC-823的增殖抑制率为（78.0±2.0）%、诱导细胞的凋亡率为（72.3±6.5）%。在4种细胞中,人胃癌细胞株BGC-823对白杨素联合顺铂抗肿瘤作用最敏感。正交实验的体外模型结果表明,最佳作用条件为白杨素40 μmol/L联合顺铂5.0 μg/mL,作用时间24 h。结论：白杨素能增强顺铂抑制人肿瘤细胞增殖和诱导人肿瘤细胞凋亡的作用。人胃癌细胞BGC-823是白杨素和顺铂联合作用的敏感细胞株。     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌HepG2细胞生长的影响并初探其机制。方法取对数生长期HepG2细胞设空白对照组、LP(5 μg/mL)组、LP(10 μg/mL)组、LP(20 μg/mL)组和顺铂(40 μg/mL)组,每组设10个复孔;各组分别给药干预48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经LP(10 μg/mL、20 μg/mL)或顺铂40 μg/mL干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G₀/G₁期而缩短G₂/M期,提高细胞凋亡率,上调促凋亡Bax mRNA表达并下调抑凋亡Bcl-2 mRNA表达,提高Bax/Bcl-2比值,上调Caspase-3蛋白表达,LP上述作用具有一定的剂量依赖性。结论 LP具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP干预细胞周期分布和调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

目的： 探讨酸性神经磷脂酶 (acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法：常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明 (desipramine,DES)处理组 (12.5 μmol/L DES作用2 h),对照组 (含2％胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组 (用12.5 μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20 μg/mL VES)以及VES处理组 (20 μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果：VES (20 μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制 (P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组 (P均<0.05);细胞形态学显示20 μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为 39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%) (P均<0.05),VES+DES组 (19.47%±4.46%)较VES组明显降低 (P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低 (P均<0.05)。结论：ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。     

冬凌草甲素抑制人肝癌SMMC．7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用及诱导凋亡机制。方法采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌SMMC-7721细胞,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞抑制率,倒置显微镜观察不同浓度组的细胞形态,RT—PCR法检测细胞Survivin、Bcl-2、BaxmRNA的表达,WesternBlot法检测细胞Survivin、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果MTT比色法显示不同浓度的冬凌草甲素可抑制人肝癌SMMC．7721细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性。冬凌草甲素作用48h后细胞表现出特异性凋亡。RT—PCR法和WesternBlot法显示,人肝癌SMMC-7721细胞的BaxmRNA和Bax蛋白随冬凌草甲素浓度增加而表达增加,Bcl-2、SurvivinmRNA和Bcl-2、Survivin蛋白随药物浓度增加而表达下降。结论冬凌草甲素能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,降低Sur—vivin、Bcl-2表达和上调Bax表达可能是诱导细胞发生凋亡的机制。     

Mangiferin Induces Apoptosis by Regulating Bcl-2 and Bax Expression in the CNE2 Nasopharyngeal Carcinoma Cell Line

To investigate the anti-proliferative mechanism of mangiferin in a human nasopharyngeal carcinoma cell line, CNE2 cells were incubated with different concentrations of mangiferin (12.5, 25, 50, 100, 150 and 200 μM) or with PBS as a control for 72 hours. Analyses were made of the cell cycle and apoptosis with measurement of mRNA and protein levels of two apoptosis-related genes, Bcl-2 and Bax. Flow cytometry assays showed mangiferin could inhibit CNE2 cell proliferation via G2/M arrest and induction of early apoptosis. Real time PCR andWestern blotting showed the mRNA and protein level of Bcl-2 to be down-regulated, while those of Bax were up-regulated, when CNE2 cells were treated with mangiferin. This investigation indicated anti-proliferation effects of mangiferin through induction of cell apoptosis regulated by Bcl-2 and Bax expression.     

Exogenous p53 Upregulated Modulator of Apoptosis (PUMA) Decreases Growth of Lung Cancer A549 Cells

Purpose: To investigate the influence of exogenous p53 upregulated modulator of apoptosis (PUMA) expressionon cell proliferation and apoptosis in human non-small cell lung cancer A549 cells and transplanted tumor cellgrowth in nude mice. Materials and Methods: A549 cells were divided into the following groups: control, noncarrier(NC), PUMA (transfected with pCEP4- (HA) 2-PUMA plasmid), DDP (10μg/mL cisplatin treatment)and PUMA+DDP (transfected with pCEP4-(HA)2-PUMA plasmid and 10μg/mL cisplatin treatment). The MTTmethod was used to detect the cell survival rate. Cell apoptosis rates were measured by flow cytometry, andPUMA, Bax and Bcl-2 protein expression levels were measured by Western blotting. Results: Compared to thecontrol group, the PUMA, DDP and PUMA+DDP groups all had significantly decreased A549 cell proliferation(p<0.01), with the largest reduction in the PUMA+DDP group. Conversely, the apoptosis rates of the three groupswere significantly increased (P < 0.01), and the PUMA and DDP treatments were synergistic. Moreover, Baxprotein levels significantly increased (p<0.01), while Bcl-2 protein levels significantly decreased (p<0.01). Finally,both the volume and the weights of transplanted tumors were significantly reduced (p<0.01), and the inhibitionratio of the PUMA+DDP group was significantly higher than in the single DDP or PUMA groups. Conclusions:Exogenous PUMA effectively inhibited lung cancer A549 cell proliferation and transplanted tumor growth byincreasing Bax protein levels and reducing Bcl-2 protein levels.