广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路调控肺癌A549细胞凋亡及自噬

目的 探讨广藿香酮对肺癌A549细胞增殖、凋亡、自噬和JNK/c-Jun信号通路的影响。方法 采用0、10、20、40μmol/L广藿香酮处理肺癌A549细胞，将细胞随机分为4组：0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L广藿香酮处理组，同时将5μmol/L顺铂处理后的肺癌A549细胞作为阳性对照组。EdU染色检测细胞增殖；Hoechst 33258染色检测细胞凋亡；Western blotting检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、p62、JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达。10μmol/L JNK抑制剂SP600125与40μmol/L广藿香酮共处理A549细胞2 h及24 h,检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达。结果 与广藿香酮0μmol/L组比较，广藿香酮20、40μmol/L组EdU阳性细胞数降低，细胞凋亡率升高，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达升高，p62蛋白表达降低，LC3⁺含量升高，p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun比值升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与对...     

镉对NRK肾细胞PKCα表达的影响及PKC抑制剂BisⅠ的生物学作用

目的：探讨不同浓度氯化镉（CdCl2）对NRK细胞内蛋白激酶Cα（PKCα）mRNA及其蛋白质表达的影响,以及PKC抑制剂Bisindolymalei mide I（Bis I）对镉染毒NRK细胞PKCαmRNA及蛋白质表达的生物学作用。方法：应用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度（0、1.25、2.50、5.00、10.00μmol/L）CdCl2对NRK肾细胞处理6h与12h后PKCαmRNA表达的影响,同时用Western blot技术检测CdCl2对NRK肾细胞内PKCα蛋白质表达的影响。用PKC抑制剂Bis I预处理细胞后,用不同浓度CdCl2（0、2.50、5.00μmol/L）进行染毒,再检测PKCαmRNA及蛋白质的表达变化。结果：CdCl2浓度在1.25~10.00μmol/L范围内,可引起NRK肾细胞内PKCαmRNA及蛋白质表达水平升高,并呈时间_剂量_效应关系;PKC抑制剂Bis I能明显抑制镉引起的PKCαmRNA及蛋白质的表达。结论：CdCl2可以诱导NRK肾细胞内PKCαmRNA及蛋白质表达,PKC抑制剂Bis I具有一定程度抑制CdCl2对PKCα的诱作用,因此在抑制CdCl2对生物机体的伤害作用方面具有生物学意义。     

重楼皂苷通过JNK/p53诱导肺癌细胞铁死亡的作用机制研究

目的 分析重楼皂苷对肺癌细胞铁死亡的诱导作用及可能机制。方法 取对数期A549细胞，分为对照组、重楼皂苷组、SP600125组、联合组，对照组常规培养，重楼皂苷组加入重楼皂苷(4 g/L),SP600125组加入SP600125(10μmol/L),联合组加入重楼皂苷(4 g/L)及SP600125(10μmol/L)。MTT实验检测细胞铁死亡抗性；荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)堆积；检测细胞丙二醛(MDA)水平；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p53蛋白表达。结果 与对照组比较，重楼皂苷组铁死亡抗性，SLC7A11、GPX4蛋白表达降低，ROS阳性细胞数增加，细胞内MDA水平、细胞凋亡率、p-JNK/JNK及p53蛋白表达升高(P<0.05),SP600125组铁死亡抗性，SLC7A11、GPX4蛋白表达升高，ROS阳性细胞数减少，细胞内MDA水平、细胞凋亡率、p-JNK/JNK及p53蛋白表达降低(P<0.05);与重楼皂...     

雌二醇对子宫内膜癌细胞AKT通路中细胞因子的影响

通过17β雌二醇（E2）诱导人子宫内膜癌HEC-1A细胞产生不同细胞因子,探讨雌激素在子宫内膜癌发展中的作用。方法:以浓度为1×10-6 mol/L雌二醇（E2组）作用于HEC-1A细胞8h、12 h后,或1×10-6 mol/L雌激素受体抑制剂（ER组）、25×10-6 mol/L AKT抑制剂（AKT组）分别预处理HEC-1A细胞60min,各加入1×10-6 mol/L雌二醇作用8h和12h后;采用荧光定量PCR及ELISA技术,分别检测细胞内VEGF、bFGF、IL-8基因mRNA及细胞培养上清液中蛋白表达情况。Western Blot检测以1×10-6 mol/L雌二醇作用HEC-1A细胞15min后,细胞内AKT蛋白表达情况。结果:E2组的VEGF、bFGF、IL-8 mRNA及蛋白的表达均明显高于对照组（P<0.05）;ER组VEGF、bFGF、IL-8 mRNA和蛋白的表达,与E2组相比较,除了8h的VEGF蛋白和12 h的IL-8 mRNA表达无显著性差异及12 h的VEGF mRNA表达稍增加外,均明显低于E2组（P<0.05）;AKT组VEGF、bFGF、IL-8 mRNA和蛋白的表达,与E2组相比较,除了12 h的IL-8 mRNA表达无显著性差异外,均明显低于E2组（P<0.05）。雌二醇作用HEC-1A细胞15 min后,与对照组比较,细胞内p-AKT蛋白表达明显增强（P<0.05）。结论:雌二醇诱导子宫内膜癌产生细胞因子VEGF、bFGF、IL-8可能是通过激活AKT通路实现的。      

TGF-β及EGF信号对溶血磷脂酸诱导口腔鳞癌细胞增殖的影响

目的：探讨转化生长因子(TGF)及表皮生长因子(EGF)信号对溶血磷脂酸(LPA)诱导口腔鳞癌细胞增殖的影响。方法：口腔鳞癌SAS细胞接种于96孔板中,以含不同浓度(0、1、5和10μmol/L)LPA的无血清DMEM分别处理细胞24和48h后采用CCK-8法检测细胞增殖;免疫印迹检测10μmol/LLPA分别处理细胞0、0.5、2和4h后对TGF-β下游信号分子Smad2的影响;应用不同浓度(10、20和50μg/mL)的TGF-β阻断抗体1D11和100nmol/LEGFR阻断剂AG1478分别预孵育细胞2和4h后,再加入LPA诱导,检测SAS细胞增殖情况。结果：LPA呈剂量效应和时间效应诱导SAS细胞增殖,LPA浓度增加到10μmol/L时SAS细胞数是对照组的近1.7倍(P<0.01),细胞在LPA处理24h后增殖速率较对照组增加22%(P<0.05)。LPA可活化TGF-β,但TGF-β阻断抗体1D11并不能阻断LPA诱导的SAS增殖;相反,EGFR阻断剂AG1478能够抑制LPA诱导的SAS增殖,抑制率达到近77%。结论：LPA诱导的口腔鳞癌SAS细胞的增殖与EGFR活化信号有关,而与LPA诱导的TGF-β活化无关。     

蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨

目的：探讨4种蛋白酶体抑制剂硼替佐米（bortezome,BZ）、环氧甲酮四肽（epoxomycin,Epox）、乳孢素（1actacystin,Lacta）和MG132单独作用或者联合JNK特异性抑制剂SP600125,对肝癌HepG2细胞内BAG3蛋白表达的影响及分子机制。方法：空白对照、100nmol／LBZ、100nmol／LEpox、500nmol／LLacta和2umol／LMG132单独或联合50μmol／LSP600125处理HepG2细胞;实时定量RT-PCR检测蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞内BAG3基因mR—NA表达水平影响,蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂单独或者联合JNK激酶特异性抑制剂对BAG3蛋白表达水平的影响;利用MTT试剂盒检测蛋白酶体抑制剂细胞存活率,Hoechest33258染色检测细胞凋亡率。结果：蛋白酶体抑制剂BZ、Epox、Lacta和MG132均不同程度上调BAG3基因的mRNA和蛋白表达水平,而SP600125显著抑制蛋白酶体抑制剂引起的BAG3表达上调。MTT结果显示,SP600125显著抑制HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性;进一步Hoechst33258染色结果显示,4种蛋白酶体抑制剂联合SP600125作用引起HepG2细胞的凋亡率分别为（49．2±3．2）％、（58．7±3．5）％、（56．8±3．4）％和（53．4±3．3）％,明显高于蛋白酶体抑制剂单独作用组的（7．2±2．8）％、（16．7±3．2）％、（12．3±2．9）％和（11．4±3．0）％,P〈0．05。结论：蛋白酶体抑制剂通过JNK信号通路上调BAG3的表达,抑制JNK活性增加了HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性。     

NS-398逆转结肠癌细胞多药耐药性的作用

目的 观察COX-2选择性抑制剂NS-398对结肠癌耐药细胞HCT-8/Fu多药耐药的逆转作用及其对P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）、多药耐药相关蛋白（multi-drug resistance related protein, MRP）的调控,以初步探讨其作用机制。方法 （1）CCK-8法检测NS-398对HCT-8/Fu的毒性作用及对HCT-8/Fu细胞多药耐药（multi-drug resistance, MDR）的逆转作用;（2）将NS-398、5-Fu、NS-398+5-Fu分别作用于HCT-8/Fu 24 h,酶标仪检测Caspase -3活性、Hoechst33342染色观察药物诱导细胞凋亡情况;（3）0、10、20 μmol/L NS-398分别作用癌细胞24 h后ELISA法检测培养液中PGE2含量;0、20 μmol/L NS-398作用癌细胞24 h后,免疫细胞化学检测癌细胞P-gp、MRP的表达。结果 （1）10、20 μmol/LNS-398作用癌细胞24 h,抑制率分别为6%、8%,与各浓度5-Fu联用后,耐药逆转倍数分别为3.42、7.50,且呈剂量依赖性;（2）20 μmol/LNS-398+320 μg/ml 5-Fu组Caspase-3活性增加百分比为386.11%,较320μg/ml 5-Fu组的179.94%、20 μmol/LNS- 3 9 8 组的1 2 5 . 2 3%明显增高;Hoechst33342染色从形态学上也得出相一致的结论;（3）20 μmol/L NS-398作用24 h后,癌细胞P-gp、MRP表达较0μmol/L NS-398显著减少;同时在10、20 μmol/L NS-398作用24 h,细胞培养上清液中PGE2含量分别为189.50、151.25ng/L,较0 μmol/L NS-398时的340.13 ng/L明显下降。结论 COX-2选择性抑制剂NS-398对结肠癌耐药性有显著逆转作用,并呈剂量依赖性,其逆转机制可能是通过抑制P-gp、MRP的表达及抑制PGE2生成而发挥逆转作用的。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitor, HDACI）对胶质瘤细胞增殖及MKK7表达的影响。方法 体外培养神经胶质瘤细胞株U251,用脂质体转染MKK7-siRNA1、MKK7-siRNA2和对照siRNA,48 h后Western blot检测MKK7表达及JNK/c-Jun活性,BrdU掺入实验检测细胞增殖情况;用0.5 μM组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（trichostatin A, TSA）处理细胞8 h,DMSO作对照,Western blot检测MKK7、p-JNK、JNK、p-c-Jun、c-Jun表达或磷酸化水平;用TSA分别处理细胞8、12、24 h,检测各时间点细胞增殖率;用其他组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括伏立诺他（suberoylanilide hydroxamic acid, SAHA）,丙戊酸（valproic acid, VPA）,M344处理细胞检测MKK7表达及细胞增殖。结果 同对照组相比,沉默MKK7表达抑制了JNK/c-Jun活性和细胞增殖（P=0.008）;TSA处理细胞8 h显著抑制MKK7表达及JNK/c-Jun活性,SAHA、M344、VPA均显著抑制MKK7表达。TSA处理细胞8 h没有抑制细胞增殖,处理12 h显著抑制增殖（P=0.006）, 24 h抑制效应更明显（P=0.002）; SAHA（P=0.001）, M344（P=0.008）或VPA（P=0.002）处理细胞12 h均抑制了细胞增殖。结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂可通过抑制MKK7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖。     

芹菜素诱导胃癌SGC-7901细胞自噬及其对凋亡 的影响

目的：探讨芹菜素（API）是否诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬及其对细胞凋亡的影响。方法：采用不同浓度（0、20、40、60、80 μmol/L）的API处理胃癌SGC-7901细胞24 h,MTT法检测API对细胞生长的抑制情况。分别采用不同浓度（0、20、40、60、80 μmol/L）API处理细胞24 h,及60 μmol/L的API处理不同时间（0、12、24、36、48 h）,Western blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3（LC3）、Beclin-1和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/Akt/mTOR信号通路中关键分子p-Akt、p-mTOR的表达;电子显微镜下观察细胞自噬情况。细胞经自噬抑制剂氯喹（CQ）或3-甲基腺苷（3-MA）预处理后再加入API,Western blot检测聚二磷酸腺苷-核糖体聚合酶（PARP）的表达;流式细胞术流检测细胞凋亡率。结果：API对胃癌SGC-7901细胞生长具有明显抑制作用并呈剂量-效应关系。随着API浓度和作用时间的增加,SGC-7901细胞LC3Ⅱ与Beclin-1蛋白表达均增加,各剂量组与对照组相比较差异均具有统计学意义（P < 0.05）;API处理后的细胞逐渐出现自噬囊泡和自噬溶酶体;p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低。采用自噬抑制剂抑制细胞自噬后,除API组LC3Ⅱ与Beclin-1蛋白表达明显高于对照组外（P < 0.05）,各组蛋白表达无显著差异。API+CQ组和API+3-MA组的PARP蛋白剪切片段表达及凋亡率均高于对照组和API组（P < 0.05）。结论：API可以诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子p-Akt、p-mTOR活性有关;抑制API诱导的自噬能够增强API的凋亡诱导效应,从而增强对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。     

PP2A B56α亚基介导镉诱导的细胞毒性

目的： 探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)B56α亚基在调控CdCl2诱导的细胞毒性中的作用及其机制。方法：利用病毒感染法在人胚肾上皮细胞HEK上构建PP2A B56α表达降低的细胞株模型(HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2),采用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CdCl2诱导的细胞毒性。用不同浓度(0、10、20、40和80 μmol/L)CdCl2联合或不联合c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125染毒细胞不同时间(0、2、6、12和24 h),采用免疫印迹检测B56α亚基、金属硫蛋白(MT)的表达和JNK的磷酸化水平。结果：免疫印迹结果证实细胞株HEK-SHB56α-1和HEK-SHB56α-2构建成功。与对照组比较,PP2A B56α表达抑制导致镉诱导的细胞毒性减小,JNK的磷酸化水平和MT的表达水平均显著增加。用不同剂量CdCl2处理细胞株12 h,发现B56α表达抑制导致JNK磷酸化(p-JNK)分别增加了2.78和1.26倍(P<0.05),MT的表达也分别增加了1.36和1.19倍(P<0.05)。用p-JNK抑制剂SP600125作用时,p-JNK的表达降低了35%~38%(P<0.05),MT的表达下降了13%~35%(P<0.05), CdCl2诱导的细胞毒性显著增加(P<0.05)。此外,用CdCl2处理细胞不同时间点,B56α的表达逐渐降低(P<0.05),而p-JNK和MT的表达水平呈逐渐增加趋势(P<0.05)。结论：PP2A B56α在调控CdCl2诱导的细胞毒性中起着重要作用,其作用机制可能通过介导JNK的去磷酸化调控MT的表达而发挥作用。本研究揭示了PP2A参与重金属应激的关键靶点和信号通路的调控。     

SP600125对人宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨SP600125对人宫颈癌HeLa细胞的增殖周期、凋亡以及侵袭的影响.方法 采用CCK-8法检测不同时间点不同浓度的SP600125作用后HeLa细胞的增殖状态.确定20μmol/L的SP600125用于后续实验.利用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,DAPI染色观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,...     

Role of p38 mitogen-activated kinase and c-Jun terminal kinase in migration response to lysophosphatidic acid and sphingosine-1-phosphate in glioma cells

A potential role for 1-oleoyl-sn-glycero-3-phosphate or lysophosphatidic acid (LPA) and sphingosine-1-phosphate (S1P) in the regulation of malignant diseases has been widely considered. In this study, we found that in transformed astroglial cells, the expression profile of lysophospholipid receptor mRNA and the action modes of LPA and S1P on cell motility were changed: there was a change in the acquisition of the ability of LPA to stimulate cell migration and a change in the migratory response to S1P from stimulation through S1P(1) to inhibition through S1P(2). LPA-induced cell migration was almost completely inhibited by either pertussis toxin, LPA(1) receptor antagonists including Ki16425 (3-(4-[4-([1-(2-chlorophenyl)ethoxy]carbonyl amino)-3-methyl-5-isoxazolyl] benzylsulfonyl)propanoic acid) or an inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) wortmannin. The LPA-induced action was also suppressed, although incompletely, by several specific inhibitors for intracellular signaling pathways including Rac1, Cdc42, p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and c-Jun terminal kinase (JNK), but not extracellular signal-regulated kinase. Nearly complete inhibition of migration response to LPA, however, required simultaneous inhibition of both the p38MAPK and JNK pathways. Inhibition of Rac1 suppressed JNK but not p38MAPK, while the activity of p38MAPK was abolished by a dominant-negative form of Cdc42. These findings suggest that, in glioma cells, the PI3K/Cdc42/p38MAPK and PI3K/Rac1/JNK pathways are equally important for LPA(1) receptor-mediated migration.     

热化疗联合作用抑制人小细胞肺癌细胞增殖的机制

目的 研究热化疗联合作用对肺部肿瘤细胞生长的抑制及其可能的机制。方法 参考临床常用剂量,采用43 ℃加热联合120 μg/L紫杉醇、43 ℃加热联合120 μg/L紫杉醇及20 μmol/L JNK特异抑制剂SP600125以及单纯使用120 μg/L紫杉醇处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照。应用噻唑蓝比色法检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过蛋白免疫印迹法检测JNK磷酸化水平和Caspase 3表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,运用SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果 热化联合组细胞增殖率最低(P<0.05);JNK磷酸化水平在热化联合组中表达明显增高(P<0.05),SP600125可抑制其磷酸化(P<0.05);热化联合组的Caspase 3增高(P<0.05),SP600125使其表达减少(P<0.05);热化联合组细胞凋亡率增加(P<0.05),SP600125组细胞凋亡率减少(P<0.05)。结论 热化疗联合应用可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路,继而通过Caspase 3途径激活细胞凋亡来实现的。     

Protein kinase C alpha-CARMA3 signaling axis links Ras to NF-kappa B for lysophosphatidic acid-induced urokinase plasminogen activator expression in ovarian cancer cells

We reported previously that a signaling pathway consisting of G(i)-Ras-NF-kappaB mediates lysophosphatidic acid (LPA)-induced urokinase plasminogen activator (uPA) upregulation in ovarian cancer cells. However, it is not clear what signaling components link Ras to nuclear factor (NF)-kappaB for this LPA-induced event. In the present study, we found that treatment of protein kinase C (PKC) inhibitors including conventional PKC (cPKC) inhibitor G?6976 abolished LPA-induced uPA upregulation in ovarian cancer cell lines tested, indicating the importance of cPKC activity in this LPA-induced event. Indeed, LPA stimulation led to the activation of PKCalpha and Ras-PKCalpha interaction. Although constitutively active mutants of PKCalpha (a cPKC), PKCtheta (a novel PKC (nPKC)) and PKCzeta (an atypical PKC (aPKC)) were all able to activate NF-kappaB and upregulate uPA expression, only dominant-negative PKCalpha mutant attenuated LPA-induced NF-kappaB activation and uPA upregulation. These results suggest that PKCalpha, rather than PKC isoforms in other PKC classes, participates in LPA-induced NF-kappaB activation and uPA upregulation in ovarian cancer cells. To determine the signaling components downstream of PKCalpha mediating LPA-induced uPA upregulation, we showed that forced expression of dominant-negative CARMA3 or silencing CARMA3, Bcl10 and MALT1 with specific siRNAs diminished these LPA-induced events. Furthermore, we demonstrated that PKCalpha/CARMA3 signaling axis is important in LPA-induced ovarian cancer cell in vitro invasion.     

Lysophosphatidic acid receptor 2/3-mediated IL-8-dependent angiogenesis in cervical cancer cells

The expression of lysophosphatidic acid (LPA)-specific receptors in cervical cancer has not been clearly defined. In this study, we identified LPA1, LPA2 and LPA3 receptors' mRNA in SiHa, HeLa and CaSki cell lines by RT-PCR. These receptors were not associated with tumor cell proliferation in vitro. We then used a xenograph animal model to evaluate the effects of these receptors on in vivo cervical cancer tumorigenicity. When SiHa cells with different receptor expression patterns were seeded on the backs of SCID mice, the resulting knockout of both LPA2 and LPA3 significantly attenuated tumor growth; this decrease in tumor growth was found to be linked with decreased angiogenesis (microvessel density), suggesting that LPA2 and LPA3 are crucial for in vivo tumor growth through an angiogenic mechanism. We further investigated this mechanism of LPA receptor 2/3-mediated angiogenic capability by analyzing angiogenic factors in protein lysates from receptor knockout tumors, by detecting interleukin (IL-8) mRNA expression after treating with siRNA, by evaluating the biological role of LPA-enhanced IL-8 via endothelial cell tube formation, monolayer permeability, migration and cell growth assays, and by IL-8 knockout xenograft mice modeling. We found that the angiogenesis is mediated through IL-8. Finally, we evaluated the regulation pathways involved in LPA-induced IL-8 expression. We found that LPA receptor 2/3-mediated IL-8 expression occurs through Gi/PI3K/AKT, Gi/PKC and IκB/NF-κB signaling. In conclusion, we propose that LPA2 and LPA3 might play an important role in cervical cancer tumor growth through IL-8-dependent angiogenesis.     

抑制JNK信号通路下调A549中LRP表达可增强顺铂化疗敏感性

  目的  探讨在顺铂作用下的A549细胞中JNK信号通路与肺耐药蛋白LRP之间的相互关系。  方法  用SP600125抑制JNK信号通路的活化,CCK-8法检测顺铂药物敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blotting法检测LRP、JNK、P-JNK的表达。  结果  顺铂可活化JNK信号通路,上调LRP的表达;用SP600125抑制JNK信号通路后,LRP的表达下调,增强了顺铂化疗敏感性,促进了细胞凋亡。  结论  在A549细胞中,活化的JNK信号通路上调LRP的表达促进化疗耐药,因此阻断JNK信号通路为肺癌提供新的治疗靶点。      

三氧化二砷对膀胱癌T24细胞Apaf-1基因表达的影响

目的：观察三氧化二砷 (arsenic trioxide,As2O3)对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡蛋白酶活化因子-1 (apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)基因表达的影响。方法：取处于对数生长期的T24细胞,用0.25%胰酶消化成细胞密度为1×105/mL的单细胞悬液,再用含有不同浓度 (0、1、2、4、8 μmol/L)As2O3的培养基作为药物组,并设置空白对照组,置于培养箱中分别培养24、48和72 h后,用二甲基四氮唑蓝 (MTT)法检测As2O3对T24细胞的增殖抑制率;取T24细胞在不同浓度 (0、1、2、4、8 μmol/L)的As2O3培养液中培养72 h后用脱氧核糖核酸原位末端转移酶标记技术 (TUNEL)法检测细胞凋亡,用RT-PCR及Western blotting检测As2O3 对Apaf-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,2、4、8 μmol/L As2O3剂量组能有效抑制T24细胞增殖,且具有剂量-反应关系 (24 h时r=-0.962,P=0.038;48 h时r =-0.959,P=0.041;72 h时r=-0.973,P=0.027)。As2O3于1～8 μmol/L作用72 h时细胞出现典型的凋亡变化,具有剂量-反应关系 (r=0.993,P =0.007);同时Apaf-1 mRNA和蛋白的表达均明显增强,且具有剂量-反应关系 (mRNA：r=0.986,P=0.014;蛋白：r=0.989,P=0.000)。结论：As2O3能够有效抑制膀胱癌T24细胞生长、增殖并诱导其凋亡,机制可能与其上调Apaf-1基因的表达有关。