人蛋白激酶CK2α′亚基cDNA的克隆与测序

目的：构建人蛋白激酶CK2α′亚基cDNA重组表达质粒，研究CK2的结构与功能。方法：采用RT－PCR，定向克隆和DNA测序等一系列分子生物学技术进行本实验。结果：从人白血病细胞（HL－60）中获得了人CK2α′亚基cDNA，使用Nde I/Hind Ⅲ双酶切PCR产物和表达载体pT7-7进行定向克隆，限制性酶切鉴定证明重组获得成功。4个阳性克隆DNA测序结果显示有1个含有正确插入的人CK2α′cDNA，命名为pTCKA′；其余3个克隆均存在碱基突变。结构：成功克隆到人CK2α′亚基cDNA的重组表达质粒。     

小鼠蛋白激酶CK2α亚基的克隆、测序、表达及初步鉴定

背景与目的：蛋白激酶CK2是一种高度保守性的真核细胞中普遍存在的丝／苏氨酸激酶,它的活性在人的许多肿瘤细胞是升高的,可作为一种癌基因起作用。为了深入进行CK2结构与功能的研究,本研究拟构建小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA重组表达质粒,并进行表达和初步鉴定。方法：通过反转录PCR从NIH 3T3小鼠成纤维细胞获得小鼠CK2α亚基编码区cDNA。将Nde I/BamH I双酶切PCR产物连接到同样双酶切并经牛小肠碱性磷酸酶去磷酸化的表达载体pT7-7进行定向克隆。转化感受态大肠杆菌DH5α获得转化子,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选4个阳性克隆进行DNA测序,将序列完全正确的重组质粒转化表达菌BL21（DE3）,挑单克隆小量培养,IPTG诱导表达,Western blot鉴定。结果：转化子的阳性筛选率为100％;限制性酶切分析结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。DNA正反向测序结果表明：从4个阳性克隆中筛选1个PCR过程不产生突变的重组质粒,并将其质粒命名为pTMCKA。重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量42kDa蛋白过度表达,Western blot结果证明过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论：重组小鼠蛋白激酶CK2α亚基的克隆表达获得成功。     

肝癌中蛋白激酶CK2α亚基的克隆及其功能初步研究

目的 克隆肝癌中CK2α基因，并研究其功能。方法 通过逆转录PCR从肝癌组织中获得CK2α亚基基因编码区cDNA。将NdeI／BamHI双酶切PCR产物连接到同样双酶切并经牛小肠碱性磷酸酶去磷酸化的表达载体pT7—7进行定向克隆。转化感受态大肠杆菌DH5获得转化子，琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子，将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选4个阳性克隆进行DNA测序，将序列完全正确的重组质粒转化表达菌BL21(DE3)，挑单克隆小量培养，IPTG诱导表达，Western blot鉴定。结果 转化子的阳性筛选率为l00％，限制性酶分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。DNA正反向测序结果表明：从4个阳性克隆中筛选到1个PCR过程不产生突变的重组质粒，并将其质粒命名为pTMCKA。重组质粒转化表达菌经TPTG诱导后出现一个分子量42Kdα蛋白过度表达，Westen blot结果证明过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论 蛋白激酶CK2α亚基在肝癌中表达，并产生一定的功能。     

米托蒽醌对人蛋白激酶CK2活性的影响

背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,它与人白血病关系密切,而米托蒽醌是一种临床常用的治疗急性白血病的特效药。本实验观察米托蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并将其作用于人早幼粒细胞白血病细胞HL-60,探讨它对HL-60细胞的影响。方法:体外将CK2α′和β亚基重组构成CK2全酶,然后加入不同浓度的米托蒽醌与含有[γ-32P]标记ATP的反应混合液处理,CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[32P]放射活度来检测;然后采用台盼蓝拒染法观察米托蒽醌对HL-60细胞毒性,流式细胞术检测药物对细胞周期影响的情况,流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞凋亡的情况,最后通过使用CK2特异的多肽底物检测药物对细胞内CK2活性的影响。结果:米托蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为0.66μmol/L;进一步分析它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为0.25μmol/L;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为0.66μmol/L。它对HL-60细胞有很强的细胞毒性,并能诱导HL-60细胞发生凋亡,但对细胞内CK2活性无明显影响。结论:米托蒽醌是蛋白激酶CK2的有效抑制剂,它能引起HL-60细胞凋亡,但其凋亡机制可能与胞内CK2活性无关。     

AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

背景与目的：蛋白激酶CK2是一种高度进化保守性的丝／苏氨酸激酶,它的活性在人的多种癌症是上调的。CK2可作为一种癌基因起作用,它的靶向抑制可用于肿瘤的治疗。为了寻找特异性CK2抑制剂,本文观察Tyrphostink和AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用,以探讨其酶动力学机制。方法：利用基因工程克隆,表达和纯化而获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-^32P]ATP或[γ-^32P]GTP的[^32P]放射活度来检测。结果：重组人CK2是一种Ca^2 ,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG1109对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,其IC50为9.7μmol/L,抑制作用稍大于已知的CK2抑制剂5,6－二氯－1－β－呋喃糖苯并咪唑（DRB）和N－（2－氨乙基）－5－氯萘－1－硫胺（A3）。AG1109对重组人CK2的动力学研究表明,它与GTP呈以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论：AG1109是一种很强的重组人CK2抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

CK2α'在肝细胞癌组织中的表达及其对预后的影响

目的 探究CK2α'在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其对肝癌患者预后的影响。方法 收集83例肝癌患者肿瘤组织及癌旁正常组织并制成组织芯片,免疫组织化学法对芯片染色后进行半定量分析,比较CK2α'在肿瘤组织与癌旁组织中的表达差异。χ2检验分析CK2α'的表达与患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier方法分析CK2α'与肝癌预后的关系。结果 CK2α'在83例肝癌组织及癌旁正常组织中的平均阳性表达率分别为47.8%及65.4%,CK2α'在肝癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常组织且差异有统计学意义（P<0.01）;53（74.7%）例肝癌患者癌组织中CK2α'的表达水平显著低于癌旁正常组织;且CK2α'低表达的患者复发率更高、总体生存期更短（P<0.05）。进一步分析发现CK2α'的表达水平与CK19相关（P<0.05）。结论 CK2α'在肝癌组织中表达下调且与患者的预后有关,提示CK2α'可能作为肝癌患者预后判断的生物标志物。     

蛋白激酶CK2β SiRNA对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用

目的:探讨蛋白激酶CK2β特异性小干RNA对肺腺癌细胞系A549生长增殖的影响.方法:构建CK2βsiRNA表达质粒稳定转染A549细胞,RT-PCR、免疫印迹、免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的mRNA和蛋白表达水平,同位素掺入法测定细胞内CK2活性,细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,流式细胞术分析细胞周期.结果:与空白组和阴性对照组相比,稳定转染pGPU6-CSNK2B质粒后.A549细胞中Cl(2B的mRNA水平、胞浆蛋白表达水平以及CK2活性均明显下降(P＜0.05),但各组间细胞核中CK2β的蛋白表达水平无明显差异(P＞0.05);A549细胞生长明显受到抑制,倍增时间增加;A549细胞阻滞于G0/G1期.结论:CK2B siRNA可以下调A549细胞中CK2β表达及其激酶活性,并抑制细胞增殖;本研究为CK2特异性siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础.     

黄芩甙对重组人蛋白激酶 CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

背景与目的：蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝／苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α’基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤细胞内CK2的特异性抑制剂,本研究观察黄芩甙体外对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果,并进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法：利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α’及β亚基并在体外等摩尔混合构成CK2全酶,测定不同条件下CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-^32P]ATP的^32P的放射性活度来检测。结果：黄芩甙能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=2．54μmol／L)。酶动力学分析表明,黄芩甙与ATP呈非竞争性抑制CK2的活性(Ki=7．73μmol／L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=3．07μmo1／L)。结论：黄芩甙是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂。     

蛋白激酶CK2抑制剂对肺癌细胞系放射敏感性的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2抑制剂对肺癌细胞系放射敏感性的影响。方法 通过蛋白印迹法检测蛋白激酶CK2α、β亚基在不同肺癌细胞系中的表达情况。平板克隆形成试验检测CK2激酶抑制剂醌茜素对肺腺癌细胞A549和大细胞肺癌细胞H460对X线的放射敏感性影响。流式细胞术检测醌茜素与X线联合作用对A549、H460细胞凋亡及周期分布影响。组间比较采用方差分析和成组t检验。结果 蛋白激酶CK2α、β亚基在对放射不敏感的A549、H1650、H460细胞中高表达, 而在放射敏感的小细胞肺癌H446细胞中低表达。使用醌茜素预处理的A549、H460细胞存活分数(SF)明显低于未处理组, 25 μmol/L的增敏比(D₀值比)分别为2.771、2.463。醌茜素可引起细胞凋亡增加, 但X线联合醌茜素与单独醌茜素作用相比未增加A549细胞和H460细胞凋亡(X线照射+醌茜素:单独醌茜素, A549细胞P= 0.487和H460细胞P=0.254), 然而X线联合醌茜素与单独X线照射或醌茜素作用相比可明显引起其G₂+M期阻滞(X线照射+醌茜素:单独X线照射, A549细胞P=0.000, H460细胞P=0.0024;X线照射+醌茜素:单独X线照射, A549细胞P=0.000, H460细胞P=0.000)。结论 通过醌茜素抑制蛋白激酶CK2活性可增加NSCLC细胞的放射敏感性。     

人睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因的克隆测序及在原核系统中的表达

目的：扩增及克隆人的MAGE-E1基因并利用大肠杆菌进行表达。方法：从人胶质瘤细胞系BT-325中提取总RNA，用RT-PCR从中扩增出MAGE-E1基因片段。将MAGE-E1基因片段插入载体pGEM-T easy中，经全自动序列分析仪测序正确后，再克隆至表达载体pGEX-4T-2中，构建重组表达载体pGEX-4T-2-MAGE-E1，并转化大肠杆菌进行表达。结果：1mmol／L．异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5h，MAGE-E1蛋白表达即达高峰，SDS-PAGE及凝胶密度扫描分析表明，表达出Mr约41000大小的蛋白，占菌体总蛋白的35％。结论：成功扩增、克隆MAGE-E1基因，并在大肠杆菌中得到稳定高效表达。     

人早幼粒白血病 HL 60细胞中蛋白激酶 CK2 纯化、定位及其天然底物研究

目的：纯化人早幼粒白血病 (human promyelocytic leukemia)HL 60细胞的蛋白激酶 CK2,观察蛋白激酶 CK2在 HL 60细胞胞膜、胞浆和胞核中的活性,并寻找 HL 60 细胞中蛋白激酶 CK2的天然底物。方法：采用二次离子交换纤维素 DE 52柱和 Hp Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化蛋白激酶 CK2;采用蔗糖梯度离心法分离 HL 60细胞的胞膜、胞浆和胞核;蛋白激酶 CK2活性以掺入到 CK2底物上的 [γ 32P]GTP的 32P放射活度来检测;以 [γ 32P]GTP为磷酸供体,以精胺为激活剂,以肝素为抑制剂,用放射自显影的方法检测底物蛋白磷酸化。结果：经 3次层析后,以 [Arg]3 Ala Asp Ser [Asp]5为底物测得蛋白激酶 CK2纯化了 139倍,回收率 11.8％;以去磷酸酪蛋白为底物测得蛋白激酶 CK2在 HL 60细胞的胞浆和胞核中的活力分别为 (354± 47) U/mg蛋白和 (353± 30) U/mg蛋白;以 [Arg]3 Ala Asp Ser [Asp]5为底物测得蛋白激酶 CK2在 HL 60细胞的胞浆和胞核中的活力分别为 (60± 4) U/mg蛋白和 (66± 9) U/mg蛋白, HL 60细胞胞浆中 59 kDa、 54 kDa、 33 kDa、 28 kDa和 22 kDa的蛋白 ,以及胞核中 77 kDa和 51 kDa 的蛋白质可被蛋白激酶 CK2磷酸化。结论： HL 60细胞中有高活性的蛋白激酶 CK2存在;它主要位于 HL 60细胞的胞浆和胞核中;蛋白激酶 CK2的β亚基有自磷酸化作用; HL 60细胞胞浆中 59 kDa、 54 kDa、 33 kDa、 22 kDa的蛋白和胞核中 77 kDa、 51 kDa的蛋白可能是 CK2的天然底物。     

人α1抗胰蛋白酶基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的克隆人α1抗胰蛋白酶(α1-AT)基因并在真核细胞中表达。方法以人α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)基因的总RNA为模板，采用反转录PCR法得到α1-AT的编码区cDNA，构建真核表达载体pcDNA3．1( )-α1-AT，在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系COS-7，经G418压力筛选建立稳定转染人α1-AT的细胞系，用Western印迹检测其在COS-7细胞中的表达。结果获得的人α1-AT cDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致，Western印迹证实稳定转染人α1-AT的COS-7细胞系中有α1-AT的表达。结论构建了人α1抗胰蛋白酶的真核表达载体，并在COS-7细胞中获得稳定表达。     

下调CK2α基因表达抑制肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡

目的:探讨下调CK2α基因表达后对肺腺癌A549细胞的影响.方法:构建pSilencerTM4.1-shCK2α-eGFP慢病毒表达载体,建立稳定干扰CK2α表达的A549细胞株.利用MTT、克隆形成、凋亡实验检测干扰CK2α基因表达后,A549细胞的增殖和凋亡的能力.利用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-xl、Bcl-2的表达.结果:下调CK2α基因表达后肺腺癌A549细胞增殖能力减低,促进细胞凋亡.细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8上调,但Bcl-xl、Bcl-2蛋白明显下调.结论:下调CK2α基因表达后抑制肺腺癌A549细胞增殖、促进凋亡.     

重组pEGFP-Mfn2真核表达载体的构建及转染人乳腺癌细胞系MCF-7

目的:构建Mfn2基因真核表达载体,将此载体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7,并观察高表达Mfn2对MCF-7增殖的影响.方法:1)设计pEGFP-Mfn2质粒,并将其用脂质体转染入人乳腺癌细胞系MCF-7; 2)DNA测序、RT-PCR法、流式细胞术及免疫细胞化学法鉴定以上述载体是否转染成功;3)MTT法检测转染后Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响.结果:1)重组后的pEGFP-N1质粒已成功载入小鼠Mfn2的全长编码基因,DNA序列测定的结果与预期设计基本一致.普通PCR琼脂糖凝胶电泳显示转染后MCF-7细胞中存在外源性Mfn2的表达.2)琼脂糖凝胶电泳检测显示实验组中Mfn2较对照组明显升高,转染Mfn2后MTT法检测转染pEGFP-Mfn2组的MCF-7细胞数明显低于空白对照组与转染pEGFP-N1组,P＜0.05.3)细胞免疫化学显示转染Mfn2后MCF-7细胞数目减少,癌细胞出现核碎裂现象.结论:成功构建了Mfn2基因真核表达载体,并成功转染MCF-7细胞.转染Mfn2后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制.     

α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的亚克隆及DNA链断裂修复研究

目的:建立α-粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化细胞的克隆细胞系,研究其核型和DNA链断裂修复能力.方法:1.5 Gy α-粒子照射的BEP2D细胞传35代后接种裸鼠成瘤,取出瘤细胞进行亚克隆,挑出单个克隆扩大培养,G带显示分析细胞核型,脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂.结果:亚克隆了5个恶性转化细胞系(RP35T-1,-2,-4,-5,-6),核型基本与BEP2D细胞相近,但有着不同的染色体缺失,其中2株细胞(RP35T-2和RP35T-4)多倍体高达40%,明显高于BEP2D细胞.恶性转化细胞RP35T-1和RP35T-4的DNA双链断裂重接修复缺陷.结论:建立了α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的克隆细胞系,DNA链断裂修复缺陷可能是α-粒子致癌的一个重要特点.     

α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的亚克隆及DNA链断裂修复研究

目的:建立α-粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化细胞的克隆细胞系,研究其核型和DNA链断裂修复能力.方法:1.5 Gy α-粒子照射的BEP2D细胞传35代后接种裸鼠成瘤,取出瘤细胞进行亚克隆,挑出单个克隆扩大培养,G带显示分析细胞核型,脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂.结果:亚克隆了5个恶性转化细胞系(RP35T-1,-2,-4,-5,-6),核型基本与BEP2D细胞相近,但有着不同的染色体缺失,其中2株细胞(RP35T-2和RP35T-4)多倍体高达40%,明显高于BEP2D细胞.恶性转化细胞RP35T-1和RP35T-4的DNA双链断裂重接修复缺陷.结论:建立了α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的克隆细胞系,DNA链断裂修复缺陷可能是α-粒子致癌的一个重要特点.     

α-粒子诱发BEP2D细胞恶性转化中DNA修复基因DNA-PK的表达和突变分析

目的: 研究α-粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化中DNA修复基因DNA-PK的结构和表达变化.方法:用Northern blot杂交检测基因转录水平,聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析基因编码序列结构变化.结果:癌变细胞中DNA修复基因Ku70(XRCC-6)的编码碱基发生突变,第1 148～1 153位点由AGGATC突变为GAGTAC,致使编码的氨基酸由RI变为EY;细胞恶性转化过程中,DNA修复基因DNA-PKcs(XRCC-7)的表达发生改变,在恶性转化早期即α-粒子照射后第21代就已被抑制,但发生癌变(第35代)后,部分细胞克隆的该基因表达又重新上调.结论:DNA修复基因DNA-PK的结构和表达的变化,导致细胞DNA修复能力缺陷,基因组不稳定性增加,是α-粒子癌变的分子机制之一.     

人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达细胞克隆SMMC7721-TNF的建立及其部分生物学特性的初步观察

用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721，G418筛选后，随机挑选10个细胞克隆，扩大培养，检测细胞培养液上清中TNFα的水平，将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学特性。Southern Blot证明TNFα基因完整地整合在细胞基因组中，     

重组人干扰素α2a和GFE-1多肽融合基因的克隆、表达及活性测定

目的:构建IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因表达载体,获得高质量生物产品。方法:应用聚合酶链式反应技术(PCR)对干扰素(IFN)α2a3'端酶切位点进行改造,人工合成编码能特异性高效结合肺组织的GFE-1寡核苷酸片段,二者连接后克隆入pGEM3Zf质粒,进行序列分析,将融合蛋白基因克隆入pBV220表达载体,在大肠杆菌中表达,对IFN-α2a-GFE-1表达产物纯化、鉴定及体外活性检测。结果:利用PCR的方法成功地改造了IFN-α2a3'端酶切位点,成功的将GFE-1多肽与IFN-α2a3'端连接,构建了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白的基因克隆载体pGEM3Zf-GFE-1,DNA测序完全正确。构建了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因原核表达载体pBV220-IFN-α2a-GFE-1,经温度诱导在大肠杆菌中有效表达。纯化了IFN-α2a-GFE-1融合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯度大95%,比活性达5.8×109U/mg。结论:IFN-α2a-GFE-1融合蛋白基因的成功克隆、表达、纯化和活性测定,为研制一种具有导向性治疗肺癌、肺纤维化等疾病的有效药品奠定基础。     

人ENO1(Enolase-α)基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备

目的:构建人ENO1(human Enolase-α)基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白的表达,利用纯化后的蛋白制备具有活性的ENO1多克隆抗体.方法:用PCR方法从胃癌MKN45细胞全基因组中扩增出目的基因ENO1,将目的基因和原核表达载体pET30a(+)分别双酶切,回收酶切产物并用T4连接酶连接,获得重组质粒pET30a(+)-ENO1.将重组质粒转入大肠埃希菌菌株BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,利用纯化的ENO1活性蛋白作为抗原免疫家兔,制备抗血清多克隆抗体,并用Western blot检测其特异性.结果:目的基因与原核表达载体经双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符,测序结果表明重组人ENO1基因序列与NCBI(NM_001428.3)公布序列一致.经SDS-PAGE分析,结果显示重组蛋白的分子量约在47kDa,条带单一,无杂带出现,主要以可溶性形式存在.Western blot证实多克隆抗体制备成功.结论:成功表达、纯化了ENO1融合蛋白,制备了具有高特异性的多克隆抗体,为进一步肿瘤疫苗的研制和肿瘤标志物快速诊断的研究奠定基础.