重组人生长激素对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响

目的:观察重组人生长激素( rhGH)对人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响.方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子体外诱导从人外周血中分离的单个核细胞,使其分化为巨噬细胞,并用流式细胞术鉴定;诱导获得细胞分为6组,分别用l mg/L脂多糖和0、1、4、20及50 μg/L的rhCH培养4、8和12h,采用...     

GFP-ICP0融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位

目的 构建GFP—ICP0融合蛋白真核表达载体pEGFP／ICP0，并在巨噬细胞中表达，为研究ICP0对巨噬细胞分泌活性的影响提供实验依据。方法 将ICP0片段亚克隆入载体pEGFP—Cl，构建GFP-ICP0融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP／ICP0转染巨噬细胞，Western blot鉴定表达产物，荧光显微镜观察GFP—ICP0融合蛋白在细胞内的表达与定位。结果 成功构建了GFP—ICP0融合蛋白真核表达载体pEGFP／ICP0，GFP-ICP0融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。结论 pEGFP／ICP0在巨噬细胞中即时高表达GFP-ICP0融合蛋白并定位于细胞核。     

阿司匹林对脂多糖、地塞米松分别诱导巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响

目的本实验旨在观察阿司匹林对脂多糖和地塞米松分别诱导的小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中TNF-α表达的影响.方法小鼠腹腔巨噬细胞培养成功后,分别以脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)为诱导剂进行凋亡的诱导,在出现凋亡的基础上,给予不同剂量的阿司匹林分别分5组给药,放射免疫分析法检测TNF-α表达情况.结果阿司匹林对脂多糖和地塞米松诱导的凋亡中TNF-α的表达均有抑制作用.结论阿司匹林在炎症和非炎症情况下,都可以降低TNF-α水平.     

当归醇沉物及其中性组份体外对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的影响

目的观察当归醇沉物(ESA)及其中性组分(ESA-1)体外对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1的影响.方法L929细胞株细胞毒法测TNF-α;L929细胞增殖法测IL-1.结果ESA、ESA-1与小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)共同培养可显著增强其TNF-α、IL-1的分泌.在5～20μg/mL浓度范围,ESA的这种作用呈剂量依赖性;ESA-1虽有明显的作用,但未表现出剂量依赖.结论当归醇沉物及其中性组分体外可增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1.     

幽门螺杆菌Tipα蛋白对巨噬细胞凋亡的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)肿瘤坏死因子α诱导相关蛋白(Tipα)对巨噬细胞细胞凋亡的影响。方法体外培养巨噬细胞,采用不同浓度的Tipα蛋白与之孵育后,流式细胞术检测检测细胞凋亡情况,比色法检测细胞caspase-9和caspase-3的活化程度。ELISA法检测细胞色素C的释放量。结果巨噬细胞细胞经不同浓度Tipα蛋白刺激后,可显著诱导其凋亡。Caspase-3和Caspase-9的活性也随着Tipα蛋白浓度的增高而增加。此外,细胞色素C的释放水平也与Tipα浓度成正相关。结论 Tipα蛋白可激活Caspase-9和Caspase-3,有可能通过线粒体途径诱导巨噬细胞细胞的凋亡。     

尼古丁对小鼠巨噬细胞凋亡的影响

目的：研究尼古丁对小鼠巨噬细胞（Ｍψ）凋亡的影响。方法：用不同浓度（１０＾－８￣１０＾－２ｍｏｌ／Ｌ）的尼古丁与小鼠腹腔Ｍψ体外共同培养,测定Ｍψ存活率;采用荧光和流式细胞术观察Ｍψ凋亡的发生情况。结果：一定浓度（１０＾－４￣１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ）的尼古丁对Ｍψ凋亡具有抑制作用。结论：尼古丁可能通过抑制Ｍψ凋亡在肺气肿的发病中起重要作用。     

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6对小鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用

【目的】研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）分泌蛋白ESAT-6（early secreted antigenic target of 6 kD）对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机理。【方法】应用流式细胞仪分析稳定表达ESAT-6和经重组ESAT-6蛋白作用的小鼠RAW264.7细胞的凋亡;应用Caspase-3检测试剂盒检测caspase-3活性变化;进一步应用Western blotting分析稳转细胞系ESAT-6表达情况。【结果】RAW-EGFP-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和RAW-EGFP细胞系（P〈0.05）;RAW-flag-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和相应对照细胞系（P〈0.01）。10μg/ml重组ESAT-6可显著诱导RAW264.7细胞凋亡,而5μg/ml重组ESAT-6无明显诱导细胞凋亡效果。稳转细胞系RAW-flag-ESAT-6细胞内flag-ESAT-6浓度大约只有500 ng/ml。【结论】胞内低水平表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6可依赖caspase-3信号通路诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡。     

hDaxx融合蛋白高表达降低活化巨噬细胞分泌IL-1β

目的　研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌IL - 1 β的影响。方法　将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,利用Westernblotting检测表达产物。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS刺激巨噬细胞后 0 .5h、4h、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子IL - 1 β的含量。结果　pEGFP/hDaxx在巨噬细胞内成功表达GFP -hDaxx融合蛋白。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β量明显降低 (在4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论　hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β。     

吸烟对肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的：观察吸烟或不吸烟者肺泡巨噬细胞凋亡的变化。方法：对吸烟或不吸烟者肺泡巨噬细胞进行染色观察及流式细胞仪ＤＮＡ分析。结果：吸烟者肺泡巨噬细胞生存时间延长,吸烟组存活率为（７６．３±１２．５）％,不吸烟组为（５５．４±１１．６）％,两者差异显著（Ｐ＜０．０５）。荧光染色吸烟组凋亡细胞百分率为（３８．６±１１．５）％,不吸烟组凋亡细胞百分率为（５９．４±１２．１）％。流式细胞仪观察凋亡细胞百分率吸烟组为（１１．５±１０．４）％,不吸烟组为（２９．１±８．６）％。吸烟组巨噬细胞凋亡较不吸烟者明显减少。结论：烟雾中某些成分可能通过抑制巨噬细胞凋亡,在肺气肿的发病中起重要作用。     

调心方剂影响兔主动脉内皮细胞分泌IL-6的研究

目的通过对调心方剂参附汤、生脉饮,加减复方丹参汤对主动脉内皮细胞分泌IL-6的影响的研究,试图为中医"心生血"理论提供现代科学依据.方法将家兔主动脉内皮细胞体外培养模型分为自然生长组、生理盐水对照组、参附注射液组、生脉注射液组加减复方丹参注射液组.除自然生长组不加药物外,其余4组分别加入生理盐水及相应药物,并测定其IL-6的含量.结果调心方3组模型其IL-6含量均高于自然生长组和生理盐水组(p＜0.05).结论参附注射液、加减复方丹参注射液等调心方剂均能提高兔主动脉内皮细胞体外模型的IL-6的含量,这一结果为进一步揭示中医"心生血"理论,提供了线索.     

巨噬细胞通过分泌抗菌肽LL-37/hCAP-18调控卵巢癌细胞的增殖

目的 研究巨噬细胞是否通过分泌抗菌肽LL-37/hCAP-18对卵巢癌细胞的生长增殖进行调控。方法 采用Millicell插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和卵巢癌细胞株SKOV3;通过细胞计数法检测巨噬细胞对卵巢癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测共培养上清中的相关细胞因子及LL-37的水平;实时定量反转录聚合酶链反应在mRNA水平检测巨噬细胞和SKOV3细胞中LL-37 mRNA的表达水平;应用LL-37中和抗体抑制LL-37的功能及活性,进而通过MMT细胞增殖实验探讨LL-37对巨噬细胞对卵巢癌细胞增殖的调控。结果 细胞计数法检测结果显示,巨噬细胞与卵巢癌细胞SKOV3共培养后,可促进其增殖;共培养的上清中,LL-37及IL-6水平明显升高;实时定量RT-PCR在mRNA水平共培养中的巨噬细胞其LL-37基因表达升高,且其表达水平随时间的延长而增加;应用LL-37的中和抗体,可明显抑制巨噬细胞对SKOV3细胞的增殖促进作用。结论 在与卵巢癌细胞共培养的环境中,巨噬细胞通过增强抗菌肽LL-37的表达和分泌水平促进卵巢癌细胞的增殖,LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌的发展中扮演重要角色。     

CRP对血管内皮细胞泡沫化及IL-6、MCP-1表达的影响

目的 探讨CRP对血管内皮细胞泡沫化及IL-6、MCP-1表达的影响.方法 不同浓度的CRP(0 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L)与50 mg/L ox-LDL同时作用于人脐静脉内皮细胞,体外培养24h后,采用油红O染色法观察细胞泡沫化情况;采用ELISA方法测定细胞培养上清液中IL-6及MCP-1的浓度.结果 ①随着CRP浓度的增加,人脐静脉内皮细胞内脂滴数量逐渐增多,脂滴逐渐增大,细胞泡沫化程度逐渐加重;②不同浓度CRP(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)和50mg/L ox-LDL共同刺激24h后,人脐静脉内皮细胞产生IL-6浓度分别为 (33.90±2.64)mg/L、(40.77±3.62)mg/L、(42.19±3.82)mg/L和(44.16±0.57)mg/L,与单独 50mg/L ox-LDL培养的对照组(14.41mg/L±3.38mg/L)比较,有显著性差异(P<0.05);③不同浓度CRP(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)和50mg/L ox-LDL共同刺激后,人脐静脉内皮细胞产生MCP-1浓度分别为(23.82±3.44)靏/L、(20.11±4.10)靏/L、(19.25±3.67)靏/L、(24.24±3.34)靏/L,与单独 50mg/L ox-LDL培养的对照组(20.36靏/L5.40靏/L) 比较, 无显著性差异(P>0.05).结论 高脂环境下,CRP可加重血管内皮细胞泡沫化,并通过诱导内皮细胞合成IL-6而促进动脉粥样硬化的发生与发展.     

C反应蛋白对NRK-52E细胞NF-κB信号传导与IL-6mRNA表达的影响

目的:探讨C反应蛋白(CRP)对肾小管上皮细胞NF-κB信号与IL-6 mRNA表达的影响。方法:体外培养的骨小管上皮细胞NRK-52E,分3组:①对照组:设阴性对照(加入PBS)和阳性对照(AngⅡ,1μmol/L);②CRP刺激组(分别加入CRP 5,10,20 mg/L);③干预组:加入10 mg/L CRP,同时加入CRP抗体1μmol/L或SB203580(10μmol/L,p38MAPK的特异性抑制剂)。分别应用ELISA、RT-PCR、Western Blot技术和EMSA方法,检测细胞p38MAPK的磷酸化、NF-κB活性与IL-6分泌与mRNA表达的变化。结果:CRP呈剂量依赖性上调NRK-52E细胞IL-6分泌与mRNA的表达。CRP上调NRK-52E细胞p38MAPK的磷酸化与NF-κB与DNA的结合活性。CRP抗体、SB203580下调CRP对NRK-52E细胞的炎性激活效应。结论:CRP直接诱导NRK-52E细胞NF-κB活化及下游因子IL-6 mRNA与蛋白质的高表达,可能通过p38MAPK的磷酸化途径。     

川崎病患者外周血淋巴细胞凋亡降低及其机理的研究

为探讨外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡在川病（ＫＤ）发病中的作用。以正常儿童ＰＢＭＣ为对照,观察ＫＤ患者ＰＢＭＣ体外经ａｎｔｉ－ＣＤ３刺激培养后的凋亡细胞百分率和片断ＤＮＡ分析;测定ＰＢＭＣ体外ＰＨＡ导培养产生ＩＬ－６水平,并利用流式细胞你和斑点杂交检测外周血淋巴细胞Ｐ＾５３基因表达水平。与正常对照比较,ＫＤ患者ＰＤＭＣ体外培养产生ＩＬ－６水平明显增高,凋亡细胞百分率降低,片断ＤＮＡ出现时间延迟,     

IL-1和IL-6在绝经后骨关节炎患者滑膜上的表达及临床分析

目的 探讨IL-1和IL-6在绝经后骨性关节炎患者滑膜上的表达及临床意义.方法 随机选30例绝经后骨性关节炎患者为观察组,再根据其软骨损伤程度分为轻、中、重3组;以同期在本院行半月板修补或交叉韧带重建的未绝经的20例女性患者为对照组.用HE染色法观察大体标本形态学变化,用酶联免疫法检测滑膜上IL-1、IL-6的含量.结果 对照组与观察组IL-1含量差异有统计学意义（P＜0.01）,观察组不同分级组间差异也具有统计学意义（P＜0.01）.对照组与观察组IL-6含量差异有统计学意义（P＜0.05）,轻度组与中度组中IL-6含量明显高于对照组及重度组.结论 绝经后骨性关节炎患者滑膜中IL-1含量明显高于健康者,可作为区分绝经后骨性关节炎严重程度的标志物,也可以作为评价药物治疗绝经后骨性关节炎疗效的参考指标;绝经后骨性关节炎患者滑膜中IL-6含量早期明显升高,晚期呈下降趋势,IL-6可以作为诊断绝经后骨性关节炎的辅助指标.     

高迁移率族蛋白B1诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度的HMGB1(10、100、1000、10000ng/ml)作用24h,或以10000ng/ml的HMGB1作用不同时间(6、12、24、48h)后,以连接素Ⅴ/放线菌素D双染法,采用流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞凋亡情况。结果经不同浓度的HMGB1刺激24h,其中10000ng/ml组HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的作用最强,为(39.84±5.98)%,与对照组(4.49±1.72)%比较,差异具有显著性(P<0.01)。以10000ng/ml的HMGB1作用巨噬细胞不同时间,其中24h组凋亡率发生最高,为(38.30±6.95)%,显著高于对照组(P<0.01)。结论HMGB1可诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡。     

乌司他丁对大鼠肾脏机械性损伤后肾脏HSP70、IL-6表达的早期影响

目的探讨乌司他丁在大鼠肾脏机械性损伤后对肾脏组织IL-6和HSP70表达的影响及意义。方法66只Wistar大鼠,随机分为非创伤对照组、单纯创伤组、创伤后给予乌司他丁组。采用自由落体生物撞击仪撞击大鼠脊肋角复制创伤动物模型。用组织芯片技术及免疫组织化学方法检测各组创伤后1h、6h、12h、24h、36h肾脏组织中IL-6和HSP70蛋白的表达。结果对照组肾脏组织中IL-6和HSP70蛋白均呈弱阳性表达。与对照组比较,单纯创伤组在创伤后1、6、12、24h点IL-6表达增强(P<0.05),6h点HSP70表达增强(P<0.05)。创伤后注射乌司他丁组各时相点肾组织中IL-6表达明显低于单纯创伤组(P<0.05),HSP70表达在1h、24h、36h点明显高于单纯创伤组(以1h点最为显著,P<0.05)。结论乌司他丁可能通过抑制IL-6的过度表达,上调HSP70的表达,改变两者表达的比例,在创伤早期(以1h点为著)对大鼠肾脏起保护性作用。     

玉葵清对早期2型糖尿病肾细胞因子影响的临床研究

[目的]观察中药玉葵清对2型糖尿病肾病早期细胞因子的干预作用,进一步探讨玉葵清临床治疗早期2型糖尿病肾病可能的作用机理。[方法]选择2型糖尿病肾病尿微量白蛋白期患者72例,随机分为治疗组和对照组,治疗组在对照组常规治疗基础上加用玉葵清颗粒。[结果]治疗前两组IL-6差异无统计学意义（P〉0．05）,治疗后组间IL-6具有统计学意义（P〈0．05）;而IL-1β,TNF-α前后组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。[结论]提示中药玉葵清有抑制IL-6升高的作用。