人参二醇对鱼藤酮、MPP+诱导的PC12细胞损伤的作用

目的观察人参二醇对鱼藤酮、MPP+诱导的大鼠嗜铬细胞瘤损伤的影响。方法以大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞为研究对象,以鱼藤酮（0.3、1、3、10、30μmol/L）或MPP+（0.1、0.3、1、3mmol/L）诱导细胞损伤。设阴性对照组、人参二醇对照组（10、25、50、75、100mg/L）、鱼藤酮（3μmol/L,24h）或MPP+（1mmol/L,48h）组,人参二醇（10、25、50、75、100mg/L）联合鱼藤酮（3滋mol/L）或MPP+（1mmol/L）组。采用MTT法检测细胞增殖活性;PI和Hoechst 33342染色检测细胞坏死和凋亡;并以免疫组织化学测定细胞酪氨酸羟化酶（TH）的表达。结果人参二醇（10、25、50、75、100mg/L）本身不会抑制PC12细胞增殖,其中50、75mg/L人参二醇还可促进细胞增殖;各浓度人参二醇对鱼藤酮诱导的细胞损伤均不具有保护作用;在MPP+处理诱导细胞损伤后,50、75mg/L人参二醇可提高细胞增殖活性,但人参二醇对细胞凋亡和坏死及TH的表达无影响。结论人参二醇（50、75mg/L）对MPP+诱导的PC12细胞损伤有保护作用,其作用机制与促进细胞增殖有关;人参二醇对鱼藤酮诱导的细胞损伤无明显保护作用。     

培补肝肾中药对 MPP+ 诱导 PC12 细胞凋亡的影响

培补肝肾中药由肉苁蓉、枸杞子、何首乌组成，临床实验证明其治疗帕金森病(Parkinson’s disease，PD)有一定疗效。本实验采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium，MPP^ )建立PC12细胞凋亡模型，观察培补肝肾中药对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的影响。     

葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究葛根素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量升高(P<0.001),细胞培养液和细胞内MDA含量增加(P<0.001),SOD活性下降(P<0.001)。葛根素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:葛根素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

黄芪有效成分对H2O2引起PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究黄芪萃取组分对H2O2引起PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以PC12细胞为模型，用H2O2使PC12细胞氧化损伤，加入不同剂量的黄芪萃取组分(25-200μg／m1)。观察不同组分对PC12细胞氧化损伤的保护作用。结果AS，ASP，ASB，ASW和ASE对H2O2引起PC12细胞氧化损伤保护作用的最佳有效浓度分别为50，100，100，200和100μg／ml。结论不同黄芪萃取组分均对PC12细胞氧化损伤有保护作用。     

丙泊酚对百草枯引起的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨不同浓度丙泊酚对百草枯（Paraquat, PQ）导致的PC12细胞损伤的保护作用。方法以PQ损伤PC12细胞作为自由基损伤细胞的模型,将培养的PC12细胞分成4组：正常对照组、DMSO对照组、PQ组、PQ＋丙泊酚组;PQ＋丙泊酚组再分为丙泊酚12.5、25、50μmol/L 3个亚组组。采用CCK-8法分析细胞存活率,测定乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的变化。结果与对照组比较,PQ组细胞存活率明显降低,丙泊酚可使损伤细胞的存活率增加,差异有统计学意义（P〈0.01）,其提高程度呈剂量效应关系。与对照组比较,PQ组LDH的释放量明显增加、SOD活性显著降低、MDA含量显著增加（P〈0.05）;丙泊酚可显著降低损伤细胞LDH的释放、增加损伤细胞SOD的活性、降低MDA含量,且呈剂量效应关系（P〈0.05）。结论丙泊酚通过降低氧化损伤来减轻PQ诱导的PC12细胞毒性。     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用

[目的]观察灵孢多糖(GLPS)对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.[方法]将MPP+或GLPS加入体外培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;以乳酸脱氢酶(LDH)检测法检测培养上清液中LDH水平的改变;通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达.[结果]MPP+处理48 h后,细胞活力降至对照组的52%,经GLPS(100、200、300 μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,分别为65%,75%,79%(P＜0.05).MPP+处理48 h后,上清液中LDH水平较对照组明显提高,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中LDH水平有所下降(P＜0.05),且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP+组.[结论]灵孢多糖对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有保护作用.     

高良姜素对PC12细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨高良姜素对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:用H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤模型,细胞分为正常对照组、模型对照组、高良姜素(低、中、高浓度)组,并给予相应干预措施。采用MTT法检测细胞生长抑制率,采用Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测蛋白表达情况。结果:高良姜素预处理可以减少H_2O_2诱导的PC12细胞氧化应激损伤;高良姜素能明显抑制细胞凋亡,且呈剂量依赖性;高良姜素可以增加PI3K/Akt和Bcl-2家族蛋白比例。结论:高良姜素是通过激活PI3K/Akt信号通路发挥对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。     

硫化氢对化学性缺氧诱导PC12细胞凋亡的影响

【目的】 探讨硫化氢(H2S)对抗二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制&#65377;【方法】 应用化学性缺氧模拟剂CoCl2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率; Hoechst33258 染色检测细胞凋亡的形态学变化; 罗丹明123(Rh123) 染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP); 2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS)水平&#65377;【结果】 CoCl2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加, 同时引起PC12细胞的MMP 明显降低及ROS 生成显著增加&#65377;在600 μmol/L CoCl2处理PC12细胞前,应用100 ~ 400 μmol/L NaHS 预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl2引起PC12细胞的存活率降低; 200 μmol/L&#65380;400 μmol/L NaHS 预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl2 引起PC12 细胞的凋亡率增加并阻断CoCl2 引起的MMP降低及ROS升高&#65377;【结论】 H2S 具有神经细胞保护作用, 能明显地对抗CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关&#65377;     

硫化氢对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用.方法 以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,甲氮甲唑蓝法检测细胞增殖状况;Hoechst荧光染色观察细胞形态和核形态;碘化丙啶染色、流式细胞术检测细胞凋亡.结果 硫化氢可明显减少H2O2诱导的PC12细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数;200和400 μmol/L硫化氢均可降低200和400 μmol/L H2 O2作用24 h后对PC12细胞生长的抑制率,明显抑制200和400 μmol/L H2O2作用24 h后对PC12细胞凋亡的诱导作用.结论 硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用.     

促红细胞生成素对MPP+所致的PC12细胞线粒体氧化损伤的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导PC12细胞变性损伤的保护作用及其机制.方法 以MPP+损伤PC12 细胞作为帕金森病(PD)细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rh123)染色检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)的含量,免疫印迹法检测pAkt蛋白表达.结果 ①500 μmol/L的MPP+可以导致PC12细胞的存活率下降,凋亡率增加,0.1~10 U/mL的EPO可以使PC12细胞的存活率增加,凋亡率降低,并在1 U/mL时达到最大保护效应;②MPP+导致ROS含量增加、ΔΨm降低;EPO可以抑制MPP+所致ROS和ΔΨm水平的变化;③EPO增加了Akt磷酸化水平,PI3K抑制剂LY294002拮抗了EPO的保护作用和对ROS产生的抑制作用.结论 EPO对MPP+损伤PC12细胞具有保护作用,其机制是通过PI3K/Akt通路实现的.     

姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其与iNOS的关系

[目的]观察姜黄素(curcumin,Cur)对MPP 诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并且探讨其与iNOS关系.[方法]采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,间接免疫荧光FCM检测PC12细胞iNOS的表达.[结果]PC12细胞自然凋亡率为(1.5±0.1)%,0.5 mmol·L-1MPP 作用24 h后,PC12细胞凋亡率为(59.5±2.7)%;20μmol·L-1Cur和0.1 mmol·L-1特异性iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对PC12细胞作用24 h后无明显凋亡诱导作用,但分别使0.5 mmol·L-1MPP 处理组细胞凋亡率由(59.5±2.7)%下降到(15.9±5.3)%和(39.7±8.7)%(P＜0.01);PC12细胞经0.5 mmol·L-1MPP 处理24 h后,其iNOS表达率由正常对照的(13.5±1.5)%增加到(71.9±4.0)%(P＜0.01),加入20 μmol·L-1Cur同时处理24 h后,其iNOS蛋白表达率由(71.9±4.0)%下降到(40.0±3.0)%(P＜0.01).[结论]Cur可以抑制MPP 诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与抑制iNOS高表达有关.     

EGb对MPP^＋诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的 观察EGb对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的细胞。方法 MPP^ 诱导PC12细胞凋亡,AO／EB染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞。结果 EGb50、100μg/ml在6h、12h、24h可抑制细胞凋亡,而EGb25μg/ml则无效。结论 EGb在6h、12h、24h时呈剂量依赖性降低细胞凋亡率,提示EGb有可能通过抑制DA能神经元凋亡而相对增加DA含量。     

Mechanisms of MPP+-induced PC12 cell apoptosis via reactive oxygen species

Apoptosis of dopaminergic neurons in the nigrostriatal projection plays a crucial role in the pathogenesis of Parkinson’s disease (PD). Although the detailed mechanisms responsible for dopaminergic neuron loss are still under investigation, oxidative stress is identified as a major contributor for neuronal apoptosis. In the current study, we studied the effects of MPP+, a substrate that mimics oxidative stress, on neuron-like PC12 cells and the underlying mechanisms. PC12 cells were cultured and treated by 100 μmol/L MPP+ for 4, 8, 16, 24 and 48 h, respectively. For drug pretreatment, the PC12 cells were incubated with N-acetyl-l-cysteine (NAC, 5 mmol/L), an antioxidant, SP600125 (20 μmol/L) or PD98059 (100 μmol/L), two pharmacological inhibitors of JNK and ERK1/2, for 1 h before addition of MPP+. Cell apoptosis was measured by flow cytometry. The mRNA expression of Cu2+/Zn2+-SOD, GSH-Px, Bcl-2 and Bax was detected by RT-PCR. The protein expression of p-ERK1/2 and p-JNK was determined by Western blotting. Our results showed that MPP+ exposure could induce substantial PC12 cell apoptosis. The pretreatment of SP600125 or PD98059 could effectively reduce the apoptosis rate by reducing the ratio of Bax/Bcl-2 mRNA levels. MPP+ exposure also induced high level of reactive oxy-gen species (ROS), marked by dramatic increase of Cu2+/Zn2+-SOD and GSH-Px mRNA levels. The elevated ROS was strongly associated with the activation of JNK and ERK1/2 signal pathways after MPP+ exposure, since the pretreatment of NAC significantly reduced the upregulation of p-JNK and p-ERK1/2. Finally, the pretreatment of SP600125, but not PD98059, alleviated the increase of Cu2+/Zn2+-SOD and GSH-Px mRNAs induced by MPP+, suggesting that the activation of the JNK signal pathway, but not the ERK1/2 signal pathway, could, in some degree, antagonize the generation of ROS induced by oxidative stress. In conclusion, our results suggest that JNK and ERK1/2 signal pathways, which are activated via ROS, play a crucial role in neuronal apoptosis ind     

BDNF基因修饰淋巴细胞培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

[目的] 研究脑源性神经营养因子基因( brain- derived neurotrophic factor, BDNF gene)修饰淋巴细胞对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用.[方法] MTT法检测 H2O2和多巴胺( dopamine, DA)对 PC12细胞生长的抑制率, Hoechst染色和 PI染色流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 H2O2和 DA对 PC12细胞凋亡的诱导作用.[结果] BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞的培养上清可降低 H2O2和 DA对 PC12细胞生长的抑制率并能抑制 H2O2和 DA诱导 PC12细胞凋亡.[结论] BDNF基因修饰淋巴细胞的培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用.     

1,5-二咖啡酰奎宁酸对MPP+所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-dicaffeoylquinic acid,1,5-diCQA)对多巴胺能神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病的体外模型,实验分为正常对照组、MPP+组和1,5-diCQA预处理组,根据1,5-diCQA预处理的浓度,将后者又分为10、20、50、100 μmol/L 4组.用MTT法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,RT-PCR法检测细胞突触核蛋白(α-synuclein)的mRNA表达水平,Western blot 检测各组细胞α-synuclein蛋白表达水平.结果 MPP+(250 μmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,ROS生成增多,GSH耗竭;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量-效关系;50 μmol/L的1,5-diCQA预处理可以显著抑制MPP+诱导的α-synuclein转录和翻译水平的增加.结论 1,5-diCQA对MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有浓度依赖性的抑制作用,并抑制α-synuclein的过表达,提示1,5-diCQA对帕金森病细胞模型具有保护作用.     

PC12细胞中氧化应激对神经黑色素合成代谢的影响

目的 研究PC12细胞中氧化应激对神经黑色素(neuromelanin,NM)合成量的影响及其可能机制.方法 将PC12细胞置于含50 μmol/L左旋多巴(L -dopa)的培养液中培养,采用改良的MTT法观察不同浓度(0、10、20、40 mU/mL)的葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GO)对PC12细胞活力的影响,对照组含同等浓度GO但不含 L -dopa,共聚焦显微镜检测GO作用4 h后含 L -dopa不同组之间的活性氧(ROS)水平,采用SP法检测含 L -dopa不同组之间酪氨酸羟化酶(TH)表达量的变化,使用透射电镜观察PC12细胞超微结构变化.结果 随着GO浓度增加,细胞内ROS明显增加,TH表达量逐渐增高,在第20天观察到细胞内出现NM,且随GO浓度增加而增加,对照组中未见NM出现.结论 氧化应激可以促进NM的合成,其机制可能与提高TH活性有关.     

富勒烯-蛋氨酸衍生物对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的 利用有机合成方法制备出一种具有良好水溶性的C60-蛋氨酸衍生物(FMD),并研究其对自由基的清除能力及对过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用.方法 利用亲核加成机制合成了C60-蛋氨酸衍生物,并用FT-IR、1HNMR等手段对该衍生物进行了表征.将不同浓度的FMD加入邻苯三酚-鲁米诺(PA-L)自氧化发光体系和邻菲罗啉发光体系,观察FMD对发光强度的抑制作用;体外培养PC12细胞株,在培养液中预先加入不同浓度的FMD后,以500μmol/L H2O2诱导PC12损伤,通过MTT比色法观察不同浓度FMD作用下PC12的存活情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用单细胞凝胶电泳法测定DNA单链损伤,化学比色法检测胞内外MDA含量和SOD活性,荧光法检测进入胞内FMD的量.结果 化学发光试验表明:其浓度达到1mg/ml时,对超氧阴离子和羟自由基的抑制率分别达到83.6%和90.5%,对两种活性氧的半抑制浓度(IC50)分别为0.195和0.250mg/ml.检测反映自由基损伤的指标MDA和SOD,与正常组相比,损伤组PC12细胞胞内及培养液中MDA含量明显增加,而SOD活性显著降低;FMD可显著降低MDA水平并提高PC12细胞内及培养基中SOD活性.结论 FMD对氧自由基、羟自由基等ROS具有很好的清除作用,并对过氧化氢诱导的PC12损伤具有良好的保护作用.     

维生素E对神经细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨维生素E对FeSO4和H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤模型的保护作用及其可能的机制。方法采用FeSO4和H2O2作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化应激损伤模型。MTT比色法测定细胞活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达及dot blot法测定α7nAchR亚单位水平。结果与FeSO4和H2O2损伤组(0.136±0.015)进行比较,维生素E组(0.178±0.025)和EGCG组(0.181±0.029)均能明显提高PC12细胞的活细胞数量(P<0.01),提高SOD活力(15.29±0.79)U.mL-1对(17.37±0.76)U.mL-1、(17.90±0.44)U.mL-1,P<0.01,有效降低MDA的含量(4.51±0.20)mmol.L-1对(3.39±0.11)mmol.L-1、(3.20±0.15)mmol.L-1,P<0.01,明显上调α7nAChR的表达(0.0910±0.0272)对(0.1895±0.0392)、(0.1956±0.0322),P<0.01。结论维生素E对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用,其作用机制可能与维生素E清除自由基,抑制脂质过氧化过程和保护α7nAchR有关。