肺炎衣原体ELISA抗原检测方法的建立和应用

目的 采用ELISA技术,建立肺炎衣原体抗原检测方法.方法 建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎衣原体.采用常见的呼吸道病原体进行特异检测.对来自本院的560份临床咽拭子样本和肺泡冲洗液样本进行检测.采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价.结果 本方法对流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒无特异性反应.对本院的临床样本检出13份,其中咽拭子4份,肺泡冲洗液9份.结论 本肺炎支原体抗原检测方法可用于肺炎衣原体感染的辅助诊断.     

检测肺炎支原体的实时荧光PCR方法的建立

目的 采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法.方法 对GenBank登录的肺炎支原体的基因序列进行生物信息学分析.针对16s核糖体蛋白基因的保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR方法检测.采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价.采用倍数稀释的方法进行灵敏度的评价.对来自南方医院的522份临床咽拭子样本进行检测.结果 用实时荧光PCR方法检测甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒均无特异性反应.该方法可以检测出稀释浓度约为103/mL的肺炎支原体样本.对本院的临床样本检出39份.结论 实时荧光PCR检测肺炎支原体具有较高的特异性和灵敏度,可用于肺炎支原体感染的诊断.     

肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立

目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.     

儿童呼吸道感染支原体、衣原体和常见呼吸道病毒病原学分析

目的分析本院儿童呼吸道感染支原体、衣原体和常见呼吸道病毒的感染特点,为临床诊治提供参考。方法选取我院儿科收治的486例呼吸道感染患儿为观察对象,检测肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒1、2和3型的感染情况,分析不同年龄段患儿以上病原菌的感染特点。结果 486例呼吸道感染患儿中肺炎支原体感染125例,阳性率为25.72%;肺炎衣原体感染114例,阳性率为23.46%;呼吸道合胞病毒感染120例,阳性率为24.69%;腺病毒感染10例,阳性率为2.06%;甲型流感病毒感染7例,阳性率为1.44%;乙型流感病毒感染2例,阳性率为0.41%;1型副流感病毒感染3例,阳性率为0.62%;2型副流感病毒感染1例,阳性率为0.21%;3型副流感病毒感染33例,阳性率为6.79%。肺炎支原体感染阳性率随患儿年龄增加逐渐升高,比较差异有统计学意义（P〈0.05）肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒感染阳性率随患儿年龄增加逐渐降低,比较差异有统计学意义（P〈0.05）;不同年龄组别患儿腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、1型副流感病毒和2型副流感病毒感染阳性率无明显差别,比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。不同年龄组别患儿3型副流感病毒感染阳性率不同,比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论本院儿科呼吸道感染非细菌性病原菌主要为肺炎支原体、衣原体以及呼吸道合胞病毒。肺炎支原体感染主要见于学龄儿童,肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒感染主要见于婴幼儿。     

实时荧光定量PCR法在急性呼吸道传染病病原筛查中的应用

目的利用实时荧光定量PCR法筛查和鉴定某战区发热伴呼吸道症状病例的呼吸道病毒感染情况,为部队呼吸道传染病疫情的早期预警和防控提供科学依据。方法采集某战区发热伴呼吸道症状病例咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR法对标本进行流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和冠状病毒5类常见呼吸道病毒及其亚型的检测和鉴定,评价该方法在呼吸道病毒检测中的应用价值。结果利用实时荧光定量PCR法在采集的488份咽拭子标本中筛查出了240份甲型流感病毒阳性标本(其中季节性流感H3亚型71份,其它分型未检出)、7份乙型流感病毒阳性标本,未检出副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和冠状病毒。结论实时荧光定量PCR法可以对呼吸道病毒进行快速、特异、准确的筛查和鉴定,科学指导部队对呼吸道传染病疫情进行早期防控和预警预测。     

2009~2010年广州地区儿童呼吸道合胞病毒感染分析

目的 应用实时荧光PCR方法检测呼吸道合胞病毒,分析2009~2010年广州地区儿童感染呼吸道合胞病毒的状况。方法 以呼吸道合胞病毒的N基因序列为参考,设计特异性引物和TaqMan荧光探针,建立实时荧光PCR方法,进行灵敏度和特异性检测。采用实时荧光PCR方法,对2009~2010年两年本院门诊或住院部急性呼吸道感染患儿的21458份咽拭子样本进行了检测。结果 （1）实时荧光PCR方法具有较好的特异性和灵敏度,与其他常见呼吸道病毒无交叉反应。（2）2009年的10477例临床标本中实时荧光PCR方法检测全年的呼吸道合胞病毒阳性率为7.25％,流行高峰在3月份,感染率为20.04%;2010年检测的10981例临床标本中,呼吸道合胞病毒阳性率为9.73％,有两个流行高峰,一个在2月,感染率为29.56％,另一个高峰在12月份,感染率达到22.20％。结论 本研究建立的实时荧光PCR方法具有简便快捷、特异、敏感的特点,适用于临床呼吸道合胞病毒的检测。2009~2010年呼吸道合胞病毒依然是广州地区儿童急性呼吸道感染的主要病原。     

呼吸道九联检试剂在儿童呼吸道感染病原体检测中的临床意义探讨

目的探讨呼吸道九联检试剂在儿童呼吸道感染病原体检测中的临床意义。方法对1 516例儿童呼吸道感染患者的血清标本应用呼吸道九联检试剂(间接免疫荧光法)同时检测九项主要病原体的Ig M抗体,包括嗜肺军团菌、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒。结果病原体感染率为35.5%(537/1 516),其中以肺炎支原体最为多见,其他依次为腺病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒。混合感染率达11.2%(170/1 516)。结论九项呼吸道联检试剂检测快速,操作简便,尤其对儿童急性呼吸道感染准确率高,适用于大型医院儿科患者快速检测。     

614例住院患儿急性呼吸道感染病原学分析

目的:了解急性呼吸道感染(Acute respiratory infection,ARI)患儿非典型病原体及病毒感染情况。方法:选择急性呼吸道感染患儿614例,取其入院第2天的静脉血,采用间接免疫荧光法进行呼吸道病原体IgM检测,包括非典型病原体(肺炎支原体、嗜肺军团菌Ⅰ型、Q热立克次体、肺炎衣原体)和病毒(呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),并对检测标本阳性的病例进行统计分析。结果:在614例患儿送检标本中,171份阳性,阳性率为27.9%,其中肺炎支原体92例(15.0%),嗜肺军团菌Ⅰ型17例(2.8%),Q热立克次体6例(1.0%),肺炎衣原体1例(0.2%);呼吸道合胞病毒17例(2.8%),腺病毒6例(1.0%),乙型流感病毒13例(2.2%),副流感病毒Ⅰ型1例(0.2%),病原体的混合感染18例(2.9%)。结论:引起急性呼吸道感染的病原体以肺炎支原体为主,其次为嗜肺军团菌Ⅰ型、呼吸道合胞病毒,混合感染以肺炎支原体加嗜肺军团菌Ⅰ型为主。     

3227例呼吸道感染患者的病毒及非典型病原体检测分析

目的 探讨北京地区呼吸道感染的病原学流行特点,为临床诊疗提供病原学依据.方法 采用间接免疫荧光法检测人血清中8种呼吸道病原体的IgM抗体,根据不同性别、不同人群、不同年份和不同季节的病原体阳性率进行统计分析.结果 3 227例患者中病原体的阳性率为39.3％,其中甲型流感病毒阳性率最高,其他依次为:嗜肺军团菌、乙型流感病毒、腺病毒、肺炎支原体、副流感病毒、肺炎衣原体和呼吸道合胞病毒;男性与女性患者病原体阳性率结果比较无统计学差异(P＞0.05);不同人群病原体感染阳性率有明显差异,成人组明显高于儿童组,结果比较差异有统计学意义(P＞0.05);成人组的嗜肺军团菌、甲型流感病毒、乙型流感病毒和肺炎衣原体阳性率显著高于儿童组,而肺炎支原体和腺病毒阳性率显著低于儿童组,结果比较差异有统计学意义(P＜0.05);2014年病原体阳性率显著高于2013年阳性率,两年间比较差异有统计学意义(P＜0.05);春季病原体阳性率显著高于夏季、秋季和冬季的阳性率,结果比较差异有统计学意义(P＞0.05).结论 本地区呼吸道感染病原体阳性率在不同的人群、年份和季节性存在差异,在性别间无差异,感染病原体以甲型流感病毒和嗜肺军团菌为主,甲型流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒、肺炎支原体、呼吸道合胞病毒和肺炎衣原体流行有季节性特点,副流感病毒和嗜肺军团菌全年散发,未见明显季节性变化.     

宁夏某医院300例肺炎病例病原谱分析

目的 掌握肺炎病例病原谱构成,为肺炎的临床诊断和防治提供参考。方法 采集2019年1月至2020年12月宁夏医科大学总医院300例住院肺炎病例肺泡灌洗液样本,用实时荧光PCR方法检测流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、副流感病毒、偏肺病毒、博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、肺炎克雷伯菌、百日咳鲍特菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、A组乙型链球菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌,共19种病原体。结果 300份肺泡灌洗液标本检出阳性病例123份,总阳性率41%,病毒感染以冠状病毒、鼻病毒、博卡病毒和腺病毒为主,细菌感染以肺炎支原体、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌为主。各年度病原谱有较大差异,2019年感染病原以肺炎支原体、博卡病毒、冠状病毒和流感嗜血杆菌为主,2020年感染病原以流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌和鼻病毒为主。各年龄组中,细菌感染均高于病毒感染。混合感染病例中,以细菌和病毒合并感染和细菌间混合感染为主,占97.0%以上。结论 该医院肺炎病例感染以细菌为主、病毒为辅,5岁以下婴幼儿和5～15岁儿童肺炎支原体感染严重,是防控的重点人群...     

肺炎支原体抗原酶联免疫检测方法的建立

目的采用ELISA技术,建立肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia)抗原检测方法。方法制备肺炎支原体的多克隆抗体,建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎支原体,对其敏感性和特异性进行检测。结果本方法可以检测毒株的1/212的稀释样品,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)、肺炎衣原体无特异性反应。结论本肺炎支原体抗原检测方法可用于疑似肺炎支原体感染样品的临床诊断和鉴别诊断。     

亳州地区2846例儿童急性呼吸道感染病原体IgM抗体检测结果分析

目的 了解亳州地区儿童急性呼吸道感染病例病原体的分布情况.方法 采用间接免疫荧光法对该院2015年4月至2016年3月诊治的2 846例急性呼吸道感染患儿外周血标本进行腺病毒、流感病毒A、流感病毒B、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌检测,了解患儿病原体的分布情况.结果 2 846例患儿病原体检测阳性1 161例(40.8％),其中检出率最高的前3位病原体分别是肺炎支原体[470例(16.5％)]、流感病毒A[252例(8.9％)]及呼吸道合胞病毒[117例(4.1％)],并有79例混合感染(2.8％).随年龄增加病原体检出率呈下降趋势(x2=20.724,P=0.000 1).婴幼儿感染以呼吸道合胞病毒为主(11.2％),学龄前及学龄儿童以肺炎支原体感染为主(15.2％～25.4％).冬季病原体感染检出率最高(57.7％),夏季最低(22.5％).结论 亳州地区急性呼吸道感染病原体流行病学分布随年龄、季节而不同,婴幼儿感染率高于其他年龄段,肺炎支原体、流感病毒A及呼吸道合胞病毒是亳州地区儿童急性呼吸道感染的主要病原体,秋冬季高发应注意加强预防感染.     

海南西部地区儿童非典型病原体感染病原学分析

目的分析海南西部地区非典型呼吸道病原体在儿童急性呼吸道感染中的分布情况。方法对2012年7月。2013年6月临床诊断为呼吸道感染的患儿1824例,分为婴儿组（〈1岁）、幼儿组（1～3岁）、少儿组（4～14岁）,应用间接免疫荧光法进行9种病原体血清IgM抗体联合检测,对阳性病例进行回顾性分析。结果海南西部地区儿童患者急性呼吸道感染中非典型性病原体抗体阳性率59．21％（1080／1824）,9种病原体血清抗体的阳性率为肺炎支原体抗体43．97％（802／1824）,嗜肺军团菌I型抗体33．99％（620／1824）,乙型流感病毒抗体29．11％（531／1824）、副流感病毒1、2、3型抗体10．58％（193／1824）,甲型流感病毒抗体9．48％（173／1824）,腺病毒抗体9．27％（169／1824）,呼吸道合胞病毒抗体8．77％（160／1824）,肺炎衣原体抗体1．97％（36／1824）,Q热立克次体抗体1．26％（23／1824）、混合感染占33．99％（620／1824）。结论肺炎支原体、嗜肺军团菌I型和乙型流感病毒是海南西部地区儿童呼吸道感染的主要病原体,混合感染是该地区发病一大特点;病原体感染在各年龄组间存在差异。     

河北省社区获得性肺炎住院患者病原学调查

2008年11月至2009年8月,收集河北省11家医院219例社区获得性肺炎住院患者的合格痰标本,采用聚合酶链反应技术检测病原体。125例检出病原体,其中肺炎链球菌检出率最高,占60％（75／125）,病毒感染中甲型流感病毒最常见,占26％（32／125）,混合感染占25％（31／125）。≤30岁和51～70岁两个年龄段肺炎链球菌检出率较高;有基础疾病的患者流感嗜血杆菌检出率高;肺炎支原体多见于肺炎患者预后研究组（PORT）分级Ⅰ、Ⅱ级的轻症患者;有基础疾病者病毒感染率较高,但两者差异无统计学意义（P〉0．05）。说明肺炎链球菌是社区获得性肺炎最常见致病菌,病毒感染在社区获得性肺炎中占据重要位置,其中甲型流感病毒最常见;年龄、基础疾病是影响病原体分布的重要因素。     

泰州市2012年呼吸道综合监测结果分析

目的了解我市呼吸道病原的活动规律,全面掌握我市呼吸道病原的病原谱。方法在呼吸道综合监测监测点采集流感样病例、急性上呼吸道感染病例和住院严重急性呼吸道感染病例的咽拭子,提取核酸,进行荧光定量PCR检测,分析结果结果。结果全年完成流感核酸检测713份,阳性率23．5％,亚型为H3N2和B型,完成呼吸道其他病原核酸检测240份,阳性率35．0％,病原谱分布以鼻病毒、单纯疱疹病毒、肺炎链球菌为主。结论流感病毒、鼻病毒、单纯疱疹病毒、肺炎链球菌是我市呼吸道感染病例的主要病原。     

检测甲型H1N1流感病毒富集方法的初步探索

目的探索甲型H1N1流感病毒的富集方法,提高流感病毒核酸检测的灵敏度。方法分别用ProteinA/G及H1N1特异性血清处理流感病毒样品,根据国家流感中心设计的H1N1亚型检测通用引物,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,扩增产物为527bp,来评价病毒的富集效果。结果两种富集方法均能提高检测灵敏度,用ProteinA/G富集处理后检测灵敏度可达10-6,用H1N1特异性血清沉淀富集处理后灵敏度为10-5。结论初步建立的富集甲型H1N1流感病毒方法,有效提高了流感病毒RT-PCR检测的灵敏度,可用于甲型H1N1流感病毒的检测。     

肺炎支原体肺炎患儿混合感染分析

目的了解肺炎支原体患儿混合感染的病原微生物组成情况。方法选取2009年1月至2012年1月在深圳市宝安区妇幼保健院就诊的300例肺炎支原体患儿作为研究对象,所有研究对象均行血清肺炎支原体抗体检测、痰细菌培养、呼吸道病毒抗原检测及胸片检测,对于有支气管镜检查指征的患儿同时做支气管镜下肺泡灌洗及对肺泡灌洗液做培养。结果在300例肺炎支原体患儿中有156例患儿混合其他病原微生物感染(52.67%),其中混合肺炎衣原体感染者80例,占51.28%(80/156),混合病毒感染者46例,占29.49%(46/156),混合细菌感染者30例,占19.23%(30/156),年幼患儿(≤3岁)以混合病毒感染为主,年长患儿(>3岁)以混合肺炎衣原体感染为主。与肺炎支原体肺炎非混合感染组比较,肺炎支原体混合感染组的热程显著长于肺炎支原体非混合感染组,且发生胸腔积液的概率也显著增加(P<0.05)。影像学方面,肺炎支原体混合感染组较肺炎支原体肺炎非混合感染组更容易出现大片状阴影(P<0.05)。结论肺炎支原体患儿混合感染较为常见,混合感染率占半数以上,肺炎衣原体混合感染率最高,其次为病毒混合感染率,细菌混合感染率最低。年幼儿童以病毒混合感染为主,而年长儿童则以肺炎衣原体混合感染为主。     

呼吸道感染病原体九联检与痰培养联合的临床应用

目的探讨临床中呼吸道感染病原体九联检与痰培养联合检测的应用价值。方法选取广东省普宁市人民医院2013年1月～2013年10月诊断为肺炎的172例患者为研究对象,对其痰标本进行呼吸道感染病原体九联检与痰培养两种检测的方法进行联合检测,分析两种方法的肺炎病原菌检测情况。结果痰培养法分离出其中152例肺炎患者痰标本160株病原菌,以革兰阴性杆菌为主,主要有5种主要病原菌,分别为肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡萄球菌与真菌,构成比分别为25.0％、25．8％、22.5％、10.6％、8．1％;另40例未检测出致病病原菌的肺炎患者血清标本,对其进行九联检法检测,共检测9种病原菌,主要表现为肺炎支原体、嗜肺军团菌1型、肺炎衣原体、Q热立克次体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒甲型、流感病毒乙型、副流感病毒1、2、5型,构成比分别为20.0％、12.5％、12．5％、5.0％、5.0％、5．0％、12．5％、10.0％、17.5％。结论临床中对于肺炎患者采取呼吸道感染病原体九联检与痰培养联合检测能够有效地提高诊断效果,能够全面地对感染病原菌进行分析,敏感度高,对一些不是细菌引起的肺炎避免使用抗生素,给予患者合理的治疗,同时,呼吸道感染病原体九联检查法的操作曲。比较简单、适合在基层医院推广应用．     

季节性流感病毒H1N1实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速定量检测季节性流感病毒H1N1核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。方法选择季节性流感病毒H1N1的保守基因NP基因作为检测靶目标,应用Clustal W软件进行序列同源性比对分析,筛选出季节性流感病毒H1N1特异性的保守序列作为引物候选区域,然后应用Primer Express及PrimerPremier 5.0软件包对候选引物进行进一步配对及筛选,得到最优特异性检测引物。同时,由病毒全长cDNA扩增出NP基因,琼脂糖凝胶电泳检测NP基因的扩增情况并对目的条带进行切胶回收及纯化,对回收后的NP全长基因进行核酸浓度测定,并换算成拷贝数,作为定量标准品。结果应用ABI公司的Power SYBR Green PCR MasterMix及StepOne实时荧光定量PCR仪,该检测系统灵敏度可达102 copies/μL,不同梯度标准品间线性关系(R2)达0.999,斜率为-0.3433,扩增效率为95.572%,所有标准品均在83.2℃出现尖且窄的特异性熔解峰。结论利用该检测系统可以快速定量检测季节性流感病毒H1N1,灵敏度高,可用作基础及临床实验室对季节性流感病毒H1N1感染的辅助诊断方法和临床效果的监测手段,对实验操作者要求相对较低,具有实际的应用价值。