记忆T细胞CD45~+通过RANKL对破骨细胞的影响及调控

目的分析记忆T细胞CD45~+(CD45RO)通过核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)对大鼠破骨细胞的影响及调控,观察其与骨质疏松发病机制相关性,旨在为未来骨质疏松的治疗提供新靶点。方法购入40只24 h内新生Wistar大鼠,使用机械分离法,取大鼠四肢长骨,经消化酶法提取破骨细胞,进行培养,后将大鼠处死经酒精浸泡后分离其股骨、肱骨及胫骨,剔除软组织与软骨骺,处理后,将大鼠随机分为A、B、C、D 4组,分别向内加入RANKL试剂,各组大鼠RANKL浓度分别为0μg/L、50μg/L、100μg/L、150μg/L,对比不同浓度RANKL大鼠模型破骨细胞数量、骨陷窝面积,同时计算破骨细胞所含细胞核数量,即核数目;测定不同RANKL浓度大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)表达及CD45RO表达;并分析CD45RO表达与破骨细胞数量、骨陷窝面积及核数目的相关性。结果随着RANKL浓度增加,大鼠破骨细胞数量增加、骨陷窝面积增加、核数量增加,TRACP-5b、CD45RO表达均升高,但C组与D组比较差异无统计学意义(P> 0. 05),其他各组组间比较差异有统计学意义(P <0. 05)。经双变量Pearson相关性分析检验证实,大鼠CD45RO与破骨细胞数量、骨陷窝面积、核数目均呈正相关(r=0. 958、0. 834、0. 972,P <0. 05)。结论记忆T细胞CD45~+能够产生大量炎性因子,通过对RANKL/RANK/OPG信号传导系统的直接作用,对破骨细胞及成骨细胞产生影响,来促进骨吸收,抑制骨形成,可能参加了骨质疏松的调控,可将其作为未来骨质疏松治疗研究的新靶点。     

lα,25-(OH)_2D_3对体外培养小鼠破骨细胞形成及活性的影响

目的研究1α,25-(OH)_2D_3对体外培养小鼠破骨细胞(osteoclast,OC)分化及骨吸收的直接影响。方法采用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导体外培养C57BL/6J小鼠OC前体分化成OC。RTCA检测细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测OC数量、Western blot检测OC骨吸收功能相关蛋白和转录因子蛋白表达水平、免疫荧光和扫描电镜观察OC骨架和形态、骨细胞培养板分析骨吸收陷窝面积,观察10 nM 1α,25-(OH)_2D_3对OC形成及骨吸收功能的影响。结果 10nmol/L1α,25-(OH)_2D_3对细胞增殖无显著影响,但能显著抑制OC形成,抑制骨吸收功能相关蛋白和转录因子蛋白的表达,阻碍OC骨架肌动蛋白环和伪足小体的形成,减弱OC骨吸收功能。结论1α,25-(OH)_2D_3能抑制体外培养小鼠OC的形成及骨吸收功能,在钙磷代谢紊乱及骨骼疾病中对OC具有直接调控作用。[营养学报,2019,41(6):593-600]     

1α,25-(OH)_2D_3促进骨细胞形成及骨吸收活性（英文）

目的研究1α,25-二羟维生素D_3(1α,25-(OH)_2D_3)对破骨细胞(osteoclast,OC)形成及骨吸收活性的影响。方法在巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-иB ligand,RANKL)诱导破骨细胞前体细胞RAW264.7细胞分化为OC的基础上,添加不同浓度1α,25-(OH)_2D_3(10~(-7),10~(-8)和10~(-9)mol/L),通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定成熟OC的形成,环境扫描电镜观察牛皮质骨片吸收陷窝。结果各浓度1α,25-(OH)_2D_3均可以促进RAW264.7细胞分化为OC,并增强其骨吸收活力。其中,10~(-8)mol/L的1α,25-(OH)_2D_3诱导效果最好,所形成的OC数最多,骨吸收活性最强。结论 1α,25-(OH)_2D_3能促进OC形成,增强骨吸收活性,从而调节骨代谢。     

氟化钠对体外培养破骨细胞的影响

目的 :探讨氟对体外培养破骨细胞的影响。方法 :从新生兔四肢长骨中分离出破骨细胞 ,将其与盖玻片、骨片共同培养 ,于培养 6 h后加入不同浓度 (10 - 7～ 10 - 3mol/L)的氟化钠 (Na F) ,用酶组织化学染色法测定 Na F对破骨细胞的作用 ,用倒置相差显微镜和图像分析处理系统对骨吸收陷窝的数目和面积进行检测。结果 :Na F使抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性的多核细胞 ,即破骨细胞数目减少。染氟 10 - 5m ol/L、 10 - 4mol/L、 10 - 3mol/L 时 ,破骨细胞数目与对照组相比差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,细胞体积缩小 ,胞浆空泡增多 ,其中 10 - 3m ol/L Na F组破骨细胞改变尤为明显。与对照组相比 ,10 - 5mol/L、 10 - 4mol/L、 10 - 3mol/L Na F组骨片上骨吸收陷窝数量和面积均减少 (P<0 .0 5 ) ,而且陷窝周缘也变得模糊。结论 :在本实验浓度和时间范围内 ,Na F可直接损伤破骨细胞并抑制破骨细胞的骨吸收功能。     

Ca~(2+)信号对1α,25-(OH)_2D_3调控破骨细胞形成及骨吸收活性的影响

目的探讨Ca2+信号对1α,25-二羟维生素D3(1α,25-(OH)2D3)调控破骨细胞(osteoclast,OC)形成及骨吸收活性的影响。方法在巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)联合诱导RAW264.7细胞分化为OC的基础上,添加10-8 mol/L 1α,25-(OH)2D3,并设Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N`,N`-四乙酸四乙酸甲酯(BAPTA-AM)干预组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定OC的形成,环境扫描电镜观察牛皮质骨片吸收陷窝。结果添加10-8 mol/L 1α,25-(OH)2D3可显著增加OC数量,促进骨吸收活性。然而,与添加10-8 mol/L 1α,25-(OH)2D3比较,5μmol/L BAPTA-AM干预可显著降低OC数量,抑制骨吸收活性。结论 10-8 mol/L 1α,25-(OH)2D3能够促进OC形成和骨吸收活性,此过程涉及Ca2+信号机制。     

1α,25(OH)_2D_3对大鼠成骨细胞κB受体活化因子配体及骨保护素蛋白表达的影响

目的 研究1α,25-二羟维生素D_3(1α,25(OH)_2D_3)对体外培养3～4 d的SD大鼠成骨细胞(OB)核因子κ B受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)蛋白和mRNA表达的影响.方法 1α,25(OH)_2D_3作用24、48、72 h,分别采用ELISA及FQ-PCR法测定.结果 10、100 nmol/L 1α,25(OH)_2D_3较对照及1 nmol/L显著或极显著促进RANKL蛋白及mRNA表达;1、10 nmol/L 1α,25(OH)_2D_3较对照显著或极显著促进OPG蛋白及mRNA表达,而100 nmol/L则极显著抑制OPG mRNA表达;RANKL mRNA/OPG mRNA及RANKL/OPG显示,1 nmol/L组与对照组差异不显著,10、100 nmol/L组RANKL mRNA/OPG mRNA及RANKL/OPG板显著高于对照组和1 nmol/L组.结论 低浓度1α,25(OH)_2D_3(1 nmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度1α,25(OH)_2D_3(10、100 nmol/L)能通过上调RANKL mRNA/OPG mRNA及RANKL/OPG比例,促进OC的生成及骨吸收功能,增强骨更新.     

异补骨脂素对磷酸三钙颗粒诱导骨溶解抑制作用

目的研究异补骨脂素抑制磷酸三钙(tricalciumphosphate,TCP)磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解作用。方法取36只雄性ICR小鼠,随机分为假手术组、TCP颗粒组和异补骨脂素干预组(isopsoralen,20 mg/kg)。采用TCP颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型,于术后D2颅顶局部注射异补骨脂素,每周3次,2 w后处死动物取颅骨及其骨膜。通过H.E.染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察颅骨表面炎症反应、破骨细胞形成和骨吸收程度,研究异补骨脂素对TCP颗粒诱导骨溶解的影响;应用ELISA法检测颅骨骨膜TNF-α、IL-1β和IL-6水平,观察异补骨脂素对TCP颗粒诱导的炎症因子释放影响;通过检测骨组织中破骨细胞特异性标志物TRAP和组织蛋白酶K(cathepsin K)活性及其m RNA水平的变化,探讨异补骨脂素对破骨细胞功能的影响。结果异补骨脂素可明显抑制TCP颗粒诱导破骨细胞形成和骨溶解;同时显著降低骨组织中TRAP和cathepsin K的活性及m RNA表达,阻断TCP颗粒诱导的炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6释放。结论异补骨脂素能有效抑制TCP颗粒诱导的骨溶解,可作为防治磨损颗粒诱导骨溶解和关节晚期松动的候选药物,减少磨损颗粒所致的骨溶解和关节松动的发生。     

四种小鼠破骨细胞体外诱导培养方法的比较

[目的]比较不同的破骨细胞体外诱导培养方法,为研究外源性因素对骨代谢影响提供方法学基础。[方法]采用骨髓基质细胞和骨髓单核细胞三维共育、骨髓基质细胞培养液转移刺激骨髓单核细胞、重组核因子-κB受体激活物配基（RANKL）诱导骨髓单核细胞和RANKL诱导单核巨噬细胞株RAW264．7四种方法体外诱导破骨细胞。活细胞示踪剂CM-DiI标记RAW264．7后,用激光共聚焦显微镜扫描观察破骨细胞形成过程;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法染色破骨细胞。[结果]四种方法均成功地诱导培养出由多个细胞互相融合的TRAP阳性多核破骨细胞。加入RANKL的方法诱导出的破骨细胞较大,数量也较多,方法简单。正常骨髓基质细胞诱导形成的破骨细胞形态较小,数量也相对较少,过程复杂,但可以用来研究干预因素作用于骨髓基质细胞后对破骨细胞分化的间接影响。在对照组及诱导培养体系中均可观察到一类不互相融合的TRAP阳性细胞,含1～3个核,TRAP染色多集中在胞核周围,此类细胞可能是尚未分化的破骨细胞前体。而互相融合的破骨细胞TRAP染色见于整个胞浆。[结论]各种破骨细胞体外诱导培养方法各有优势,应根据不同的实验目的选用不同的破骨细胞诱导培养方法。     

氟作用下骨代谢信号通路的研究进展

氟作为人体必需的微量元素对骨的影响主要为骨形成与吸收。目前已发现多条信号通路参与骨的代谢,其中骨代谢通路中转化生长因子(TGF)/骨形态发生蛋白(BMP)/Smads、Wnt(wingless-type MMTV integration site family members)/β-连环蛋白(β-catenin)、破骨细胞抑制因子(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)信号通路等研究较为广泛,而氟在其代谢通路中的影响仍需大量的试验研究证实。本文则主要通过对已经试验研究证实的结论做出归纳,简要综述氟对以上三个骨代谢信号通路的影响。     

1α,25(OH)_2D_3对大鼠成骨细胞КB受体活化因子配体及骨保护素蛋白表达的影响

目的研究1α,25-二羟维生素D3(1α,25(OH)2D3)对体外培养3～4d的SD大鼠成骨细胞(OB)核因子κB受体活化因子配体(RANKL)及骨保护素(OPG)蛋白和mRNA表达的影响。方法1α,25(OH)2D3作用24、48、72h,分别采用ELISA及FQ-PCR法测定。结果10、100nmol/L1α,25(OH)2D3较对照及1nmol/L显著或极显著促进RANKL蛋白及mRNA表达;1、10nmol/L1α,25(OH)2D3较对照显著或极显著促进OPG蛋白及mRNA表达,而100nmol/L则极显著抑制OPGmRNA表达;RANKLmRNA/OPGmRNA及RANKL/OPG显示,1nmol/L组与对照组差异不显著,10、100nmol/L组RANKLmRNA/OPGmRNA及RANKL/OPG极显著高于对照组和1nmol/L组。结论低浓度1α,25(OH)2D3(1nmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度1α,25(OH)2D(310、100nmol/L)能通过上调RANKLmRNA/OPGmRNA及RANKL/OPG比例,促进OC的生成及骨吸收功能,增强骨更新。     

人工髋关节翻修术的临床原因分析及假体的选择研究

目的探讨人工髋关节置换术后翻修的临床原因及假体的选择。方法共纳入50例人工髋关节置换术患者,按照距首次行置换术大于或小于5年分为早期组(30例)及晚期组(20例),并按照年龄是否大于50岁分为2组(各25例)。均详细记录患者的病史及行翻修术的原因。结果感染性松动、无菌性松动、假体的磨损、假体周围骨折、关节不稳定均是患者行翻修术的原因,但早期与晚期患者行翻修术的主要原因不同;早期行翻修术的主要原因是感染性松动、假体周围骨折、关节不稳定,而晚期行翻修术的主要原因为无菌性松动、假体的磨损。对于老年患者选择骨水泥型假体较好,而对于更年轻点的患者选择生物型假体较好。结论早期行翻修术与晚期行翻修术的主要原因不同,因根据具体情况治疗。对于老年患者选择骨水泥型假体较好,而对于更年轻点的患者选择生物型假体较好,临床可以根据研究对不同患者选用合适的假体。     

Irradiation effect on osteoclastogenesis stimulated by breast cancer cells

To examine the effects of carbon ion and gamma ray irradiation on cancer-induced osteoclastogenesis, mouse calvaria MC3T3-E1 cells were cultured with conditioned medium from irradiated and non-irradiated MCF7 human breast cancer cells. The authors examined RANKL and OPG mRNA expression in osteoblastic MC3T3-E1 cells following treatment with conditioned MCF7 medium. Co-cultured MC3T3-E1 and bone marrow cells treated with conditioned medium from irradiated MCF7 cells showed decreased numbers of osteoclasts, assessed using TRAP staining. Conditioned medium from control MCF7 cells elevated the RANKL/OPG mRNA ratio in MC3T3-E1 cells; this effect was suppressed by carbon ion irradiation of the MCF7 cells. These data demonstrate that indirect interactions between breast cancer cells and MC3T3-E1 cells induce osteoclastogenesis in vitro through modulation of RANKL expression and that this process is suppressed by carbon ion irradiation.     

Muc-1基因mRNA在肺腺癌过表达的临床意义

目的探讨MUC-1基因的mRNA在肺腺癌过表达的临床意义。方法收集23例配对液氮保存的新鲜肺腺癌组织与其配对的正常肺组织,Trizol方法常规提取这些组织总RNA。在将这些总RNA逆转录成cDNA后,利用实时荧光定量PCR检测MUC-1基因在两种组织中的表达情况。分析MUC-1表达变化与肺腺癌发病之间的关系。结果与相应自身23个正常肺组织相比,MUC-1基因在20个（87％）肺腺癌组织中明显高表达。MUC-1基因在晚期肺腺癌中的表达比早中期肺腺癌中要高（平均2．2倍）。有淋巴结和远处转移肺腺癌中,MUC-1基因要比没有发生转移的肺腺癌组织中表达相应增高（平均2．5倍）。结论MUC-1在肺腺癌中高表达可能参与了肺腺癌的发生发展。     

唑来膦酸对乏氧骨肉瘤细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的研究唑来膦酸在乏氧的环境下对骨肉瘤LM8细胞株缺氧诱导因子1-α（HIF—1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法建立骨肉瘤细胞体外乏氧培养模型,观察唑来膦酸对骨肉瘤LM8细胞HIF-1α和VEGF表达影响。RT-PCR法检测HIF-1α和VEGF mRNA转录水平;免疫组化和ELISA法分别检测HIF-1α和VEGF蛋白表达情况。结果与常氧组相比,单纯乏氧组和唑来膦酸乏氧组的HIF-1α mRNA转录水平无明显改变（P〉0．05）;但在乏氧条件下,唑来膦酸能明显抑制HIF-1α蛋白的表达。而唑来膦酸能剂量依赖性抑制乏氧条件下VEGF mRNA及其蛋白表达水平（P〈0．05）。结论在乏氧条件下唑来膦酸能够抑制骨肉瘤LM8细胞HIF-1α蛋白的表达,从而使VEGF mRNA及其蛋白表达水平明显下降。     

脂多糖经MyD88/NF-κB信号途径抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒复制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)配体脂多糖(LPS)抑制人滋养层细胞Bewo中乙型肝炎病毒( HBV)复制的作用机制,为防治HBV宫内感染提供依据.方法 首先将2μg 1.3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3.1(+)-HBV1.3转染Bewo细胞12h后,以TLR4配体LPS处理3d.尔后用LPS处理Bewo细胞,观察IFN-β、TNF-α表达的动力学、NF-κB拮抗剂二硫代氨基甲酸吡咯烷( PDTC)对LPS诱导Bewo细胞产生细胞因子的作用.采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测HBsAg、HBeAg和HBV DNA水平,并以ELISA和RT-PCR分别检测IFN-β、TNF-α水平及TIR结构域的转接蛋白(TRIF)、髓样分化蛋白(MyD88)表达.结果 与对照组比较,LPS可显著抑制Bewo细胞中HBV复制(P＜0.01),且LPS可显著诱导Bewo细胞产生TNF-α(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性.PDTC可抑制LPS诱导细胞产生TNF-α,显著低于对照组(P＜0.01),但对IFN-β无显著作用(P＞0.05).与对照组比较,LPS可诱导HBV重组质粒转染的Bewo细胞表达MyD88(P＜0.01).结论 通过MyD88/NF-κB信号途径诱导Bewo细胞产生TNF-α,TLR4配体LPS可显著抑制HBV复制.     

骨髓单个核细胞移植后心肌梗死区细胞因子mRNA表达的实验研究

目的观察猪自体骨髓单个核细胞移植后心肌梗死区干细胞因子、基质细胞衍生因子-1、E-选择素、细胞间粘附分子-1、血管细胞粘附因子-1等细胞因子mRNA的表达。方法前降支球囊封堵法建立10头猪急性心肌梗死动物模型，按随机数字表法分为对照组（5头）和移植组（5头）。造模1周后，移植组冠脉内移植自体骨髓单个核细胞，对照组注射1640培养基作为对照。6个月后取梗死区心脏组织观察局部细胞因子的mRNA表达。结果移植组梗死区能检测到基质细胞衍生因子-1、干细胞因子、E-选择素、细胞间粘附分子-1、血管细胞粘附分子-1等细胞因子的mRNA。其表达强度明显高于对照组。结论干细胞移植能促进局部的基质细胞衍生因子-1、干细胞因子、E-选择素、细胞间粘附分子-1和血管细胞粘附分子-1mRNA的表达。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子及基质金属蛋白酶9在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）在卵巢癌组织中的表达意义。方法应用免疫组化sP法对55例上皮性卵巢癌组织、21例良性上皮性卵巢肿瘤组织中EMMPRIN、MMP-9的表达情况,分析卵巢癌组织及良性上皮性卵巢肿瘤组织中EMMPRIN、MMP-9阳性表达率,其与临床病理指征的关系。结果卵巢上皮性癌组织中EMMPRIN及MMP-9阳性表达率[89．1％（49／55）,96．4％（53／55）]高于卵巢良性肿瘤[14．3％（3／21）,23．8％（5／21）,）（2=40．64,45．84,P〈0．01]。上皮性卵巢癌组织中EMMPRIN与MMP9阳性表达呈正相关（rs=0．5535,P〈0．01）。结论EMMPRIN、MMP-9在肿瘤细胞及基质细胞中阳性表达率高,二者参与了卵巢癌的发生、发展,并有促进卵巢癌的浸润和转移作用。