经颅磁刺激对短暂性大脑中动脉闭塞大鼠突触素表达和超微结构改变的影响

目的：研究经颅磁刺激（TMS）对短暂性大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠突触素表达和超微结构改变的影响。方法：TMS组与假刺激组成年大鼠各32只，于MCAO／再灌注（MCAO／R）120min后3周内接受TMS与假刺激处理。在处理不同时间段榆测梗死灶周围突触素（SY38）免疫阳性产物表达，透射电镜下观察刺激21d后缺血侧脑皮质缺血半暗带血管、神经细胞和突触变化。另设正常组6只，假手术组6只，检测脑内SY38免疫阳性产物表达。结果：在刺激1d和3d后，两组SY38免疫阳性物质表达均持续降低，刺激7d后逐渐恢复升高。与假刺激组各对应点相比，TMS组在刺激7d、14d和21d后梗死灶周围SY38免疫阳性物质表达显著增高（P〈0．05）。透射电子显微镜观察提示，刺激21d后TMS组的神经元整体细胞超微结构缺血性损伤好于假刺激组，线粒体肿胀程度较轻，血管周围结构紧密完整，突触界面曲率相对更大，突触间隙变窄，突触后致密物质增厚。结论：长程TMS可以上调脑梗死周围区SY38的表达，减轻缺血周围区毛细血管和神经组织损伤，促进突触超微结构的重建和功能增强，提示TMS有助于促进缺血脑损伤的恢复，促进脑组织神经网络重建和脑可塑性增加是其可能的机制之一。     

糖尿病对脑缺血大鼠细胞间黏附分子-1表达及脑组织和血-脑屏障损害的影响

目的:探讨糖尿病对脑缺血大鼠细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达及脑组织和血-脑屏障(BBB)损害的影响.方法:120只雄性SD大鼠,随机分为糖尿病组、正常对照组、糖尿病伴脑缺血组和脑缺血组,每组30只大鼠.后两组又分为脑缺血1h、3h、6h、12h、24h亚组,每亚组6只大鼠.用链脲佐菌素腹腔注射制作糖尿病大鼠模型,用线栓法制作局灶性脑缺血模型.ICAM-1mRNA的表达水平用逆转录PCR检测,分别用TTC染色法和伊文思蓝注射法检测大鼠脑梗死体积及BBB破坏的程度.结果:脑缺血组各时间点亚组缺血侧脑组织ICAM-1mRNA表达均显著高于正常对照组(均P<0.05);糖尿病伴脑缺血组各时间点亚组ICAM-1mRNA表达均明显高于脑缺血组(均P<0.05).糖尿病伴脑缺血组大鼠脑梗死体积及BBB开放程度均明显大于脑缺血组(均P<0.05).结论:糖尿病使脑缺血大鼠ICAM-1表达上调,并可加重脑组织及BBB损害,提示ICAM-1表达上调可能是糖尿病加重脑缺血损伤的机制之一.     

局灶性脑缺血大鼠脑内MMP-2及MMP-9表达与滋补肝肾中药的干预效应

目的研究滋补肝肾的中药复健片对局灶性脑缺血大鼠脑内明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)表达的影响,试图探讨其治疗缺血性脑卒中的作用机制。方法雄性Wistar大鼠49只随机分为假手术组、模型组(分设1、2、3周组)、给药组(分设1、2、3周组),后两组进行右侧近端大脑中动脉电凝术造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),假手术组不凝闭大脑中动脉,其余操作同后两组。造模成功后第6天起给药组予复健片,剂量为按体重9 g/(kg.d),余两组分别予等量NS,均灌胃给药,1次/d。分别在相应时间点取材后用酶联免疫吸附法检测MCAO大鼠脑内MMP-2、MMP-9的表达。结果模型组在给药1、2、3周后组内比较差异无统计学意义;给药组在治疗2周和3周后均较同组前期比较差异有统计学意义,提示MMP-2、MMP-9活性表达随用药时间延长逐渐增强;给药组在治疗1周后MMP-2、MMP-9活性较同期模型组差异无统计学意义,但2周及3周后表达显著增强,较同期模型组差异有统计学意义。结论复健片治疗缺血性脑卒中的作用机制可能与后期上调MMP-2、MMP-9的表达从而抑制胶质瘢痕形成,以部分解除神经功能重塑的负面因素有关。     

中药对大脑中动脉闭塞模型大鼠脑血管发生的作用

目的研究中药复方复健片对大脑中动脉闭塞（MCAO）模型大鼠脑血管发生的影响，并探讨其治疗缺血性脑卒中的作用机制。方法采用Tamura等方法制造大鼠MCAO模型。将30只大鼠随机分为药物组、MCAO模型组、假手术组。药物组于造模成功后6d按体重10g／kg灌胃给予复健片水溶液。余二组分别灌胃给予同等量NS，1次／d，共2周。观察模型大鼠脑内血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血小板源性生长因子（PDGF）的表达以及微血管密度的变化。结果药物组大鼠脑内VEGF、bFGF、PDGF表达明显增强．微血管密度增高。结论复健片可显著增加MCAO模型大鼠脑内VEGF、bFGF、PDGF的表达．提示其促进血管发生是治疗缺血性脑卒中的作用机制之一。     

大鼠大脑中动脉闭塞后丘脑进展性萎缩

目的了解长期大脑中动脉闭塞(MCAO)后丘脑体积的改变.方法35只大鼠分7组,除正常组和伪手术组外,其余各组用Tamura法闭塞大脑中动脉,用大鼠脑单克隆抗体微管蛋白-2(MAP-2)对各组大脑切片进行免疫组化染色,计算机测量各组大鼠脑切片的丘脑面积.结果正常组0.99±0.01,伪手术对照2周组1.02±0.02,伪手术对照1个月组0.99±0.01.MCAO2周组0.87±0.03,1个月组0.78±0.03,MCAO3个月组0.71士0.04,6个月组0.61±0.05,伪手术组和MCAO组之间在丘脑萎缩方面有显著差异(P＜0.01).结论提示逆行性退行性变在丘脑萎缩方面起重要作用.     

尿激酶溶栓治疗大鼠急性脑梗死的实验研究

目的 :观察尿激酶 (UK)静脉溶栓治疗大鼠急性脑梗死的疗效。方法 :制作改良大鼠自体血栓性大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,在MCAO后 3 0min静脉注入尿激酶 2 0 0 0 0U·kg-1(A组 )、5 0 0 0 0U·kg-1(B组 ) ,MCAO后 12h通过神经功能缺损评分、梗死体积、血管再通率、出血并发症及病理检查等比较研究不同剂量尿激酶溶栓的疗效。结果 :A、B组MCAO后 12h神经功能缺损评分增加、梗死体积减少均较对照组有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,B组较A组梗死体积小 (P <0 0 5 ) ,并发出血率 3组无显著差异。结论 :UK溶栓能显著改善脑梗死大鼠的神经功能缺损程度、使血管完全或部分再通、减少梗死体积 ,MCAO后 3 0min溶栓不增加出血性转换的发生率     

超负荷血糖对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞凋亡的研究

目的:探讨超负荷血糖对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞凋亡及凋亡相关蛋白bax、bcl 2表达的影响。方法:用Wistar大鼠腹内注射链脲佐菌素,建立超负荷糖尿病大鼠模型,之后做大脑中动脉脑缺血再灌注模型。然后对大鼠进行脑梗死体积计算并且采用免疫组织化学方法检测超负荷血糖大鼠和正常大鼠脑缺血3h再灌注2 4hbax、bcl 2的表达,同时采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化,并与假手术正常对照组比较。结果:超负荷血糖组梗死面积明显大于非超负荷血糖组;同时,前者bax的表达明显高于后者而bcl 2的表达则相反;糖尿病脑缺血再灌注损伤组TUNEL阳性细胞数明显高于非糖尿病脑缺血再灌注损伤和假手术对照组。结论:超负荷血糖加重了大鼠脑缺血再灌注损伤,超负荷血糖诱发的bax、bcl 2的表达异常促进了脑细胞的凋亡,可能是其加重脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

大剂量高压氧治疗对脑梗死大鼠组织核因子κB的影响

【摘要】 目的 探讨大剂量高压氧治疗方案对永久性大脑中动脉闭塞大鼠的疗效以及高压氧对大鼠梗死部位周围脑组织核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）影响。 方法 制备雄性Sprague-Dawley大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型,随机分为高压氧组和对照组,每组32只,另设立伪手术组。使用Garcia神经行为学评分方法分别在术后24 h、5 d对大鼠进行神经行为学评分;应用2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chlorid,TTC）方法对脑组织进行染色,观察24 h、5 d时大鼠脑组织梗死容积;取梗死部位周围脑组织,采用凝胶电泳迁移实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）方法检测术后24 h、5 d时的NF-κB脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）结合活性。比较三组间上述指标的差异。 结果 术后24 h高压氧组神经行为学评分高于对照组［（13.33±1.53）vs（10.33±0.58）,P<0.001］。术后24 h高压氧组梗死容积小于对照组［（139.73±33.59）vs（203.02±57.66）,P=0.008］。术后5 d高压氧组梗死部位周围脑组织NF-κB活性低于对照组［（16.01±4.56）vs（50.28±9.13）,P=0.035］。 结论 大剂量高压氧治疗方案在脑梗死后24 h内具有脑保护作用。大剂量高压氧可降低大鼠梗死部位周围脑组织NF-κB DNA结合活性。     

脑缺血再灌流后脑组织一氧化氮水平变化及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨一氧化氮（NO）在局灶性脑缺血再灌流损伤的作用。方法 采用大鼠线栓法大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,观察脑缺血2h再灌流后2,6,18,24及48h NO含量动态变化,同时应用流式细胞仪检测DNA断裂百分率,并分析二者之间的关系。结果 脑缺血2h再灌流后6h NO水平开始升高,随再灌流时间的延长,其升高更明显,再灌注18h后DNA断裂百分率明显升高,其变化趋势与NO相似,结论 上述结果提示,脑缺血再灌流后过量产生的NO与再灌流后神经细胞凋亡的发生有关。     

局部亚低温对大鼠大脑中动脉闭塞后神经元凋亡的影响

目的研究局部亚低温对脑缺血后半胱天冬氨酸酶-3（caspase-3）、细胞凋亡诱导因子（AIF）和微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响。并探讨亚低温脑保护的机制。方法采用改良的Longa法制备永久性大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。低温组于缺血后立即给予贴敷式局部亚低温（33℃）治疗2h。于缺血后2、6、12、24h及3d、1周和2周取脑。进行HE染色，并采用SABC法进行免疫组化染色，检测大鼠脑缺血区caspase-3、AIF和MAP-2的表达。结果脑缺血后2h，脑梗死病灶周围区即出现caspase-3和AIF免疫阳性细胞，24h达高峰。之后开始逐渐减低，但在2周时仍可见少量免疫阳性细胞。caspase-3在缺血中心区和周围区均有表达，而AIF主要表达于脑梗死周围区。与常温组相比，低温组caspase-3和AIF表达显著减低，而MAP-2显著增加。结论亚低温能抑制caspase-3和AIF表达，促进MAP_2表达。并可抑制caspase介导的细胞凋亡，亦可抑制不依赖于caspase的AIF介导的细胞凋亡。     

FADD在脑缺血鼠大脑皮质锥体细胞中表达

目的 :探讨在Fas死亡区内的相关蛋白 (Fas associatedproteinwithdeathdomain ,FADD)在大鼠局灶性缺血损伤中的表达及其与缺血性神经细胞损伤的关系。方法 :用免疫组化法观察大鼠局灶性脑缺血损伤后脑组织中的FADD蛋白免疫反应阳性细胞分布。结果 :脑缺血组大鼠脑内发现FADD的免疫阳性表达细胞以大脑皮质锥体细胞、神经轴突、神经胞体较明显 ,分布于患侧大脑皮质、基底节、海马等部位。结论 :FADD的活化及超量表达可能介导缺血神经细胞信号传导过程 ,并参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理生理过程     

曲克芦丁脑蛋白水解物对大脑中动脉栓塞后大鼠神经血管单元的保护作用

目的 验证曲克芦丁脑蛋白水解物对局灶性脑缺血后神经血管单元的保护作用,探讨其保护作用的 机制。 方法 采用大脑中动脉栓塞（middle c erebral a rtery o cclusion,MCAO）制备大鼠局灶性脑缺血模型。 120只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分成假手术（SHAM）组（n =40）、MCAO组（n =40）以及MCAO+曲 克芦丁治疗组（n =40）。MCAO+曲克芦丁治疗组于术后立即给予曲克芦丁3 ml/kg,1次/日腹腔注射 3 d。采用改良神经功能缺损评分（modified Neurological Severity Score,mNSS）分别评价栓塞后3 d、7 d、 14 d大鼠的行为改变;栓塞后3 d,采用7.0 T高分辨率磁共振的T2及动脉自旋标记（arterial spin label, ASL）序列评价梗死体积及梗死区血流变化;采用尼氏染色评价神经元存活率及形态学变化;采用 免疫荧光染色技术评价各组内皮细胞、星形胶质细胞及紧密连接标记分子表达的变化;采用蛋白质 印迹法评价各组3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine,3-NT）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9, MMP-9）及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的变化。 结果 MCAO后3 d,MCAO组与SHAM组相比,ASL序列显示梗死区域血流显著减少;尼氏染色结果显示 神经元存活率降低,大量空泡形成,核固缩;免疫荧光显示内皮细胞及紧密连接标记分子减少而星 形胶质细胞增多;蛋白质印迹法结果显示iNOS、3-NT、MMP-9增多。而MCAO+曲克芦丁治疗组与MCAO组 相比,梗死区域血流显著增多,神经元存活率升高,内皮细胞、紧密连接标记分子增多,星形胶质细 胞减少,i NOS、3-NT、MMP-9减少。 结论 曲克芦丁脑蛋白水解物可以通过抑制iNOS和MMP-9的表达,减少3-NT的产生,从而对MCAO后 大鼠神经血管单元起到保护作用。