周期型马来丝虫感染期幼虫体外培养发育的观察

马来丝虫感染期幼虫(L_3)体外培养是了解丝虫幼虫在终宿主体内生长发育的重要手段之一,同时为收集代谢产物和蜕皮液以制备抗原和虫苗等进行免疫学研究以及药物筛选开辟新的研究领域。1960和1965年,Taylor、Sawyer等相继报道犬恶丝虫感染期幼虫体外培养可存活30天,并蜕皮进入四期幼虫;1979年Chen和Howeus报道彭亨丝虫L_3体外培养存活20天,1982年Wong等报道犬恶丝虫和彭亨丝虫L_3分别存活31～33天,且均可完成蜕皮。在我国尚未见有类似的报道。1983年5月我们实验室成功地建立了马来丝虫感染期幼虫     

周期型马来丝虫微虫蚴的体外培养

建立丝虫的体外培养系统对丝虫病的防治与监测有着重要的价值。Sawyer和Weinstein(1963)首次报道犬恶丝虫在NCTC_(109)培养液中可发育到一期。1966年Wood和Suitor利用埃及伊蚊细胞的Grece＇s细胞系培养台湾猴丝虫微丝蚴,至第19天发育到第2期幼虫。此后,体外培养受到广泛注意,并取得一定进展。1987年,姜维维用CaCl_2人工脱鞘的马来丝虫微丝蚴在HamF_(12)和RPMI_(1640)含30％小牛血清中最高有20％可发育至腊肠期。陶鸿章(1989)用CaCl_2脱鞘的马来丝虫微丝蚴在含中华按蚊细胞系的TC_(199)培养液中有25.5％发育致腊肠期,并且认为有鞘微丝虫蚴的体外培养,脱鞘是使其发育的先决条件。本文报道未经人工脱鞘及人工脱鞘的微丝蚴在各种培养液及含东乡伊蚊胸肌细胞系的培养液中发育情况。     

马来丝虫感染期幼虫的低温保存及在沙鼠体内发育的观察

丝虫的感染期幼虫(L_3)于液氮内(-196℃)低温保存,对开展丝虫病的免疫学研究和体外培养以及建立动物模型均有着重要的实用价值。1975年Mecall最早报道。但对马来丝虫L_3的冷冻保存国外于1983年才获成功,国内尚未见报道。1985年我们在获得微丝蚴(mf)低温保存成功的基础上进行了L_3冷冻保存的探索,现已取得初步结果,报道如下。材料与方法一.冷冻保护剂及L_3的收集: (一)以6％二甲基亚砜、15％小牛血清的RPMI—1640培养液(PH7.2)作为L_3低温保护剂。     

氯喹、呋喃嘧酮、痢特灵和海群生对体外培养的周期型马来丝虫成虫、感染期幼虫和微丝幼作用的观察

1987年4月,我们用抗疟药氯喹作了体外抗周期型马来丝虫成虫、感染期幼虫和微丝蚴的效果观察,并与呋喃嘧酮、痢特灵和海群生比较,结果报道如下。材料与方法一.虫源(一)周期型马来丝虫成虫和微丝蚴(Mf)的收集:分别用腹腔灌洗法和解剖法从感染马来丝虫沙鼠腹腔内收集 mf 和成虫于消毒离心管,盛 Mf 管加入10倍灭菌 RPMI—1640液(加青、链霉素各500u/ml),1500rpm 离心10分钟,弃去上清液,如此反复3     

周期型马来丝虫微丝蚴在不同基础培养液中存活情况的比较观察

1983年WHO丝虫病专家委员会报道班了氏丝虫微丝蚴能在培养液中进行培养,大部分微丝蚴脱鞘后8天发育为第一期蚴虫(L_1)。1987年2月,我们对马来丝虫微丝蚴(mf)在不同基础培养液中存活情况进行了观察比较,现将结果报道如下: 一、mf的收集: 以生理盐水腹腔灌洗法从感染丝虫的鼠体内获取mf。方法详见贵州省丝虫病防治与科研资料汇编(1955—1966页) 二、培养技术: (一)基础培养液:应用Earle液;Earle加0.5％水解乳旦白(L+E);Hanks液;RPMI—1640;No199。每种培养液取2ml加     

甘草次酸在人细胞色素CYP450中体外代谢研究(英)

甘草根是中医临床常用解毒草药, 其活性成分甘草次酸主要是通过肝脏代谢。本文研究了人肝微粒体以及人源性CYP450s对甘草次酸的体外代谢影响, 以及甘草次酸对几种CYP450酶活性的影响。实验结果表明, 甘草次酸体外主要代谢酶为CYP3A4。体外药代动力学参数K_m, V_max和CL_int分别为18.6 μmol·L⁻¹, 4.4 nmol·mg⁻¹(protein)·min⁻¹和0.237 mL·mg⁻¹(protein)·min⁻¹。体外抑制试验显示, 50 μmol·L⁻¹甘草次酸可以抑制CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4酶的活性, 其抑制率可高达50%以上。     

体外研究人细胞色素P450在雌二醇代谢中的作用(英文)

目的:研究雌二醇在cDNA表达的P450和人肝微粒体中的代谢机制,为在体内研究细胞色素P450活性与肿瘤发生的关系提供依据。方法:用HPLC-ECD法测定雌二醇的代谢产物。通过雌二醇在不同cDNA表达的P450中代谢,13例人肝微粒体中相关性研究,抑制剂对代谢的影响以及微粒体中17β-羟基脱氢化和2-羟基化代谢的催化动力学的研究来推断雌二醇的代谢机理。结果:在cDNA表达的P450中,催化2-羟基化代谢的P450按活性排列依次为CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9。CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8均具有较高的催化17β-羟基脱氢化活性。抑制CYP1A2与抑制CYP3A4对2-羟基化代谢产物生成的影响相似,可认为CYP1A2和CYP3A4在人肝微粒体中催化2-羟基化代谢的作用相近。雌二醇代谢的途径与底物浓度有关,低浓度时(1,10μmol/L)17β-羟基脱氢化为主要代谢途径;高浓度时(100μmol/L),2-羟基化成为主要代谢途径。结论:高底物浓度时,雌二醇主要由CYP1A2和CYP3A4催化代谢为2-羟基化产物。低底物浓度时,主要由CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8催化生成17β-羟基去氢化产物。     

灰色数列预测模型在骨髓基质细胞体外培养中的应用

目的:探讨体外培养骨髓基质细胞(MSCs)传代时及其成骨诱导后碱性磷酸酶(ALP)活性的变化规律。方法:运用灰色GM(1,1)模型,对体外培养MSCs传代时及其成骨诱导后ALP活性进行分析和预测。结果:灰色GM(1,1)模型对体外培养MSCs传代时及其成骨诱导后ALP的活性变化的预测精度高,结果可靠。结论:体外培养的MSCs传代时及其成骨诱导后ALP的活性值的变化可用灰色GM(1,1)模型进行预测。     

体外细胞三维培养技术在药理毒理学研究中的应用

体外细胞三维培养技术能模拟体内细胞之间以及细胞胞外基质间信号转导的微环境,既能保留体内细胞微环境的物质结构基础,又可体现细胞培养的直观性及条件可控性。近年来,体外细胞三维培养技术在药理毒理学研究中有着广泛应用,是外源化合物遗传毒性、肿瘤多细胞耐药、抗肿瘤药物高通量筛选、皮肤毒理学研究以及药物代谢与毒性试验等研究的有力工具。本文就体外细胞三维培养技术在药理毒理学研究中的应用作简要综述。     

端粒酶活性药敏法在体外培养乳腺癌细胞中的应用

目的：探讨乳腺癌细胞体外经抗癌药作用后残留的端粒酶活性作为判断化疗敏感性的可能性。方法：用噻唑兰（MTT）法、双琼脂MTT（DA MTT）法、端粒酶活性（TA）法同时测定31例乳腺癌对5－氟尿嘧呤、环磷酰胺的体外敏感性。结果：TA法灵敏度高于MTT法和DA MTT法，并且测得的抗癌药抑制率大。结论：TA法可以作为一种新的体外判断抗癌药敏感性的方法，对乳腺癌尤其适用。     

重组人5型腺病毒在体外对A549细胞的影响

目的探讨重组人5型腺病毒对A549细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法采用MTT法、细胞迁徙试验、流式细胞术、TUNEL法等方法检测重组人5型腺病毒对A549细胞生物学特性的影响。结果重组人5型腺病毒在体外对A549细胞有显著的生长抑制作用,且具有时间和浓度依赖性;一定质量浓度的重组人5型腺病能显著降低A549细胞迁徙活性,诱导细胞凋亡,阻滞A549细胞于G0/S期。结论重组人5型腺病在肿瘤的临床治疗中有着重要的作用和广阔的前景。     

共刺激阻断剂CTLA-4Ig在体外培养细胞中的表达

目的 鉴定腺病毒介导免疫调节基因CTLA-4lg在体外培养细胞中的表达能力和细胞毒性。方法以小鼠成纤维细胞(NH3T3)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞，观察感染强度为100、200、400时CTLA-4lg重组腺病毒转染靶细胞后不同时相细胞存活百分率；以免疫组化检测CTLA-4lg在细胞中的表达。结果转染后2d、4d，转染组两种细胞存活百分率与对照组相比无显著差异；转染后24 CTLA-4kg在NIH3T3和CHO中的阳性表达率分别为96．1％,94．6％结论重组腺病毒对非包装耙细胞毒性很小，能够介导CTLA-4kg基因时耙细胞的高效转染，并使靶细胞高效表达CTLA-4kg，为介导CTLA-4kg基因转染移植物和抗原提呈细胞提供了一种安全有效的载体。     

睾丸细胞体外培养方法及在生殖毒理研究中的应用

睾丸细胞体外培养方法及在生殖毒理研究中的应用张天宝综述杨在昌孙棉龄审校近年来，国外一些毒理学家先后建立或从基础学科引进了啮齿动物睾丸细胞体外培养方法，试图建立睾丸毒性体外试验系统，现已初步显示出有良好的应用前景，很可能成为今后生殖毒理的重要研究手段。...     

人胎肾上腺线粒体细胞色素P-450体外脱甲基功能(英文)

目的:了解胎肾上腺线粒体代谢外源性化合物的能力和特征,方法:制备亚细胞组分,酶学检测脱甲基反应代谢产物—甲醛的含量,结果:在光谱分析和SDS-PAGE证实线粒体存在P-450的基础上,进一步证明线粒体P-450具有脱甲基功能,其脱甲基作用呈蛋白浓度(1-4 mg)和反应时间(10-30 min)依赖性增加,与底物浓度间有良好的量效关系,并与胎龄呈正比,线粒体中红霉素、苄非他明和氨基比林的脱甲基反应分别为微粒体中的89％,162％和62％。醋竹桃霉素增强肾上腺的红霉素脱甲基反应。结论:胎肾上腺线粒体有较强的脱甲基功能,提示胎儿肾上腺线粒体兼有药物代谢功能。     

紫杉醇在卵巢癌化疗病人中的非线性药物动力学(英文)

目的:探讨紫杉醇在卵巢癌病人体内的药物动力学特点。方法:15名紫杉醇化疗病人3小时内输注剂量分别为135mg/m~2,175mg/m~2和235mg/m~2。输注过程中及输注后24小时采集病人血样。由非房室和房室模型评价药物动力学参数。结果:化疗病人符合二室模型,三组的T_((1/2)β)分别为(5.18±3.49,6.26±2.21和6.99±1.45)h,AUC(14.71±0.76,39.09±13.10和66.52±12.23)mg·h·L~(-1),Cl(14.29±0.74,7.52±2.15和6.25±1.93)L·h~(-1)。结论:紫杉醇具有非线性药物动力学特征,病人的代谢存在个体差异。     

糖类抗原125(CA125)在卵巢癌诊断中的价值

目的 探讨血清糖类抗原125(CA125)的检测,对卵巢癌早期诊断中的价值.方法 应用放射免疫方法对正常对照组与各种妇科疾病患者血清CA125进行检测.结果 卵巢癌比卵巢良性肿瘤阳性率明显高,有显著性差异(P＜0.01),卵巢良性肿瘤与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 CA125测定对卵巢癌与其他妇科疾病的诊断、鉴别诊断价值非常大,结合妇科检查、影像学、病理学等进行综合分析,能起到早期发现及早期治疗的目的.     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在转基因烟草中的表达

实验室构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator，t-PA）植物表达载体并转化人根瘤农杆菌GV3101。该农杆菌以叶盘法转化烟草，建立表达t-PA的转基因烟草体系。通过对转化植株进行Southern blotting，RT-PCR，Western blotting和纤维蛋白琼脂糖平板（fibrin-agarose plate assay，FAPA）法检测，结果显示，在转基因烟草中成功地表达出有活性的人t-PA。     

免疫组化单克隆抗体标记(ABC 法)在淋巴瘤科研中的应用

免疫组织化学技术发展较快,近年来国内外将此法先后运用到临床病理诊断和科研工作中。我们在1982年以来的淋巴瘤科研中,应用双 PAP 法标记 B 细胞性淋巴瘤,收到较好的效果。最近应用单克隆抗体(ABC 法)来标记T 细胞性淋巴瘤也获得成功。ABC 法(Avidin—Biotin—Complexmethod)是应用从蛋清中提取的一种糖蛋白—卵白素(Avidin)和生物素之间的相互作用,卵白素有四个可与生物素(biotin)结合的部位,两者有很强的亲和性;生物素先与抗体或     

Triazolodiazepine在体外对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞的抑制作用(英文)

Triazolodiazepine (Tri)体外对Con A和LPS诱导的小鼠脾细胞增殖以及巯基乙醇硫酸盐激活的腹腔巨噬细胞吞噬功能呈浓度依赖性抑制作用。Tri还明显抑制Con A诱导的脾细胞释放集落刺激因子和巨噬细胞释放白细胞介素-1,结果提示,Tri抑制小鼠脾细胞和巨唾细胞功能可能与其广泛而强大的抗炎作用有关。     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因在烟草基因组中的整合

为了建立转基因植物生产t-PA的新方法，制备了整合有t-PA基因的转基因烟草植株。通过将t-PA cDNA从质粒pGEM-tPA中切下并插入含有CaMV35S及潮霉素筛选 标记的双元载体pCAMBIA1302中，构建成植物表达载体pCA1302NS-tPA，再将重组载体转入农杆菌GV3101中，通过叶盘法转化烟草。对筛选所得的转化植株进行Southern鉴定显示t-PA基因已整合到烟草基因组中。